Omi/HtrA2对前列腺癌细胞株PED/PEA-15表达及PC-3细胞凋亡的影响

背景与目的:促、抑凋亡因子间的相互作用与肿瘤的发生、发展密切相关。Omi/HtrA2是新近发现的一种凋亡调节因子,PED/PEA-15是一种广泛表达的抗凋亡蛋白。本研究旨在探讨Omi/HtrA2对PED/PEA-15表达和前列腺癌细胞PC-3凋亡的影响。方法:构建Omi/HtrA2的表达载体和siRNA载体,并用脂质体法分别将两载体转染至PC-3细胞中,Westernblot和ELISA法检测Omi/HtrA2对PED/PEA-15表达和细胞凋亡的影响;Caspase-8检测试剂盒检测PED/PEA-15对Caspase-8活性的影响;Westernblot、RT-PCR法检测Omi/HtrA2特异siRNA序列对其转录、翻译的影响,流式细胞仪检测siRNA导致Omi/HtrA2基因沉默后PC-3细胞凋亡的变化。结果:酶切和DNA测序证实Omi/HtrA2的表达载体和siRNA载体构建成功。通过转染Omi/HtrA2表达载体高表达Omi/HtrA2可抑制PED/PEA-15表达,并增加肿瘤细胞的凋亡率;抑制PED/PEA-15的表达可提高Caspase-8活性。siRNA沉默Omi/HtrA2基因后PC-3细胞对顺铂的敏感性降低。结论:Omi/HtrA2可通过抑制抗凋亡蛋白PED/PEA-15表达而在PC-3细胞凋亡中发挥重要作用。

人参单体皂甙Rh_2对体外培养的前列腺癌细胞株PC-3M抑制效应的研究

目的 :探讨人参单体皂甙 Rh2 对体外培养的 PC- 3M细胞株的抗肿瘤效应。方法 :采用 MTT实验及 3 H- Td R掺入实验观察 Rh2 对 PC- 3M细胞生长状态及细胞 DNA合成的影响。结果 :高剂量 Rh2可明显抑制 PC- 3M细胞的生长 ,细胞 DNA合成减慢 ,并呈剂量依赖性。结论 :Rh2 对 PC-

氧化苦参碱调控CDK4/cyclinD1通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的细胞周期调控机制

目的研究氧化苦参碱对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及CDK4/cyclinD1通路调控方面的作用,探讨其对前列腺癌可能产生的作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法观察前列腺癌PC-3细胞增殖情况;荧光染色观察前列腺癌PC-3细胞核形态改变情况;流式细胞仪观察前列腺癌PC-3细胞凋亡率与细胞周期情况;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)观察细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4)、细胞周期蛋白(cyclin)D1基因表达情况;Western印迹观察CDK4、cyclinD1表达情况。结果与对照组相比,8μmol/L氧化苦参碱组作用72 h前列腺癌PC-3细胞的增殖活力最弱。荧光染色发现,氧化苦参碱使前列腺癌PC-3细胞核形态改变,且细胞核皱缩程度随氧化苦参碱浓度增加而加深。与对照组相比,氧化苦参碱组前列腺癌PC-3细胞的凋亡率显著上升且随浓度增加而显著上升(P<0.05);与对照组相比,2、4、8μmol/L氧化苦参碱组G1期比例明显增加,S期、G2的比例显著降低(P<0.05)。PCR法发现,与对照组相比,氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1 mRNA的表达明显下降且随浓度增加而下降,8μmol/L组下降最明显。氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1蛋白表达水平较对照组降低,4μmol/L组降低最为显著(P<0.05)。结论氧化苦参碱抑制前列腺癌PC-3细胞增殖活力,诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡并在细胞增殖周期G1期中阻滞,其中的作用机制可能与CDK4/cyclinD1通路密切相关。

前列腺癌PC-3M细胞株膜结合型唾液酸酶的活性测定与基因表达

目的 :研究前列腺癌 PC- 3M细胞株膜结合型唾液酸酶 ( hm SD)的活性和基因表达。方法 :收集指数生长期的 PC- 3M细胞 ,匀浆后离心取上清 ,与底物共同孵育 ,以 TBA显色反应检测所生成的唾液酸 ,计算唾液酸酶活性 ;应用 RT- PCR方法检测 hm SD的 m RNA表达。结果 :在 PC- 3M细胞株可检测到 hm SD活性及其 RNA的表达。结论 :PC- 3M细胞在基因和蛋白水平有 hm SD的表达。

熊果酸诱导前列腺癌细胞株PC-3凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸(Ursolic acid,UA)对人前列腺癌细胞株PC-3细胞周期、凋亡的影响及其作用机制。方法:人前列腺癌细胞株PC-3以不同浓度的UA作用不同的时间后,分别使用四甲基偶氮唑蓝比色法(4 methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT),免疫组织化学SP法,流式细胞术(Flow cytometry,FCM),Western blot等实验方法检测PC-3细胞的增殖抑制情况,细胞周期和凋亡率的变化,以及细胞内bcl-2、bax2个重要的细胞凋亡相关基因和细胞凋亡相关特殊蛋白cox-2、caspase3表达的变化。结果:UA对PC-3细胞有增殖抑制作用,其作用随着药物浓度和作用时间的增加而增强。24、48h和72h3个时间段UA分别作用于PC-3细胞后的IC50分别为50.87、37.91μmol/L和27.86μmol/L;熊果酸作用后PC-3细胞周期的主要特点是大量细胞累积于G1期,进入S期的细胞减少。UA能够诱导PC-3细胞凋亡,经过24、48h和72h3个时间段UA浓度50μmol/L作用后,细胞凋亡率为6.21%、7.81%和13.31%;细胞内bcl-2和cox-2的表达随着药物浓度增加逐渐减少;bax和caspase3蛋白的表达随着药物浓度增加逐渐增加。结论:UA能够抑制PC-3细胞的增殖,并使细胞大量累积于G1期,进入S期的细胞减少。可能通过使bcl-2和cox-2的表达减少、bax和caspase3蛋白的表达增加来诱导细胞凋亡。

黄连素通过诱导G_(0)/G_(1)或G_(2)/M期阻滞抑制前列腺癌细胞株PC-3的增殖作用分析

目的观察黄连素在体外对前列腺癌细胞株PC-3的抑制及凋亡的诱导,并进一步探讨其作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度黄连素对前列腺癌细胞株PC-3的增殖抑制作用,采用流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡,通过PI染色法结合流式细胞仪检测黄连素对前列腺癌细胞株PC-3细胞周期的影响;蛋白免疫印迹(WB)方法检测黄连素作用于前列腺癌细胞株PC-3后细胞中脂肪酸合成酶(FAS)蛋白的表达。结果黄连素组前列腺癌PC-3细胞株增殖抑制率及凋亡率均高于未加入黄连素组,且随着黄连素浓度的上升,前列腺癌PC-3细胞株增殖抑制率及凋亡率均逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。黄连素孵育24 h组、黄连素孵育48 h组、黄连素孵育72 h组的前列腺癌PC-3细胞株在G_(0)/G_(1)期比例高于对照组,在S期与G_(2)/M期比例低于对照组,且随黄连素孵育时间增加,前列腺癌PC-3细胞株在G_(0)/G_(1)期比例明显增加,在S期与G_(2)/M期比例逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。黄连素不同孵育时间及不同浓度均对前列腺癌PC-3细胞株中FAS蛋白存在影响,且随着孵育时间的延长与浓度的增加,FAS蛋白含量均逐渐减少。结论黄连素可通过诱导细胞G_(2)/M期阻滞和抑制前列腺癌PC-3细胞株中FAS蛋白表达对前列腺癌细胞株PC-3的增殖生长及凋亡起到抑制与促进作用,且与时间、浓度呈依赖性。

三氧化二砷对前列腺癌细胞株PC-3生长影响的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对雄激素非依赖性人前列腺癌细胞株PC 3生长的影响及其机制。 方法 :通过光学显微镜观察As2 O3 处理前后培养的PC 3细胞生长和形态的变化 ,采用MTT法了解不同浓度As2 O3 作用后PC 3细胞的生长抑制曲线 ,应用流式细胞仪Annexin V FITC/PI双染法分析不同浓度As2 O3 处理的PC 3细胞的凋亡情况。 结果 :As2 O3 作用后 ,PC 3细胞形状变圆 ,体积变小 ,胞质透亮度下降 ,部分细胞脱落悬浮于培养基中。在7.81 2 5、1 5 .6 2 5、31 .2 5 0、6 2 .5 0 0、1 2 5、2 5 0、5 0 0 μmol/LAs2 O3 作用 4 8h和 72h后 ,MTT法检测细胞生长抑制率分别为(0 .0 6± 0 .99)、(1 5 .0 1± 1 .1 2 )、(2 9.2 1± 1 .31 )、(34.32± 1 .1 4 )、(4 0 .5 1± 1 .81 )、(6 9.39± 1 .74 )、(73.1 9± 2 .4 1 ) %和(0 .0 4± 1 .5 1 )、(1 6 .1 9± 1 .0 4 )、(4 3.6 1± 1 .1 2 )、(5 6 .6 6± 1 .2 3)、(73.1 3± 2 .6 1 )、(85 .2 2± 1 .74 )、(91 .4 1± 2 .81 ) %。用流式细胞仪检测经过 0 (对照组 )和 0 .1、1 .0、3.0、5 .0、2 0 .0、5 0 .0 μmol/LAs2 O3 作用 4 8、72h后的PC 3细胞 ,凋亡率分别为 0 .87%、5 .33%、8.94 %、9.6 6 %、1 2 .5 6 %、4 5 .5 9%、6 9.0 9%和 0 .1 3%、1 3.4 9%、

三氧化二砷对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株细胞增殖及细胞周期的影响

目的 了解三氧化二砷对雄激素非依赖性前列腺癌PC 3细胞株细胞增殖及细胞周期的影响。方法 以不同浓度的三氧化二砷作用于PC 3细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法、流式细胞仪、相差显微镜和透射电镜观察细胞增殖状况、细胞周期变化以及细胞形态学的变化。结果 各浓度的三氧化二砷均可抑制PC 3细胞的增殖 ,具有剂量和时间累积效应 (P <0 0 1 )。三氧化二砷可使PC 3细胞生长停滞于G1 期。G1 期细胞数目随三氧化二砷的作用浓度增高而增多。其中3μmol/L、6 μmol/L、1 0 μmol/L的三氧化二砷作用 4 8小时后 ,可见PC 3细胞凋亡 ,分别为 1 1 8%,1 2 7%,2 9 6 %。透射电镜检查 3μmol/L三氧化二砷作用 4 8小时后的PC 3细胞 ,可见明显的凋亡小体。结论 三氧化二砷可抑制PC 3细胞的增殖 ,并具有剂量和时间依赖性 ;抑制细胞增殖与细胞周期阻滞于G1 期有关 ;三氧化二砷并可诱导PC 3细胞凋亡。

白藜芦醇对人前列腺癌细胞株PC-3增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察不同浓度白藜芦醇对人前列腺癌细胞株PC-3增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法培养PC-3细胞并分为实验1、2、3、4组和对照组,实验1、2、3、4组分别加入10、50、100、150μmol/L的白藜芦醇,对照组不加药物。各组给药24 h后,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪测算细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中的凋亡相关蛋白P53、Cleave-Caspase-3、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)。结果对照组及实验1、2、3、4组OD值依次递减,实验1、2、3、4组细胞增殖抑制率依次递增(P均<0.05)。白藜芦醇在处理24h后对PC-3细胞具有显著的细胞毒作用,呈剂量依赖性,IC50值为23.25μmol/L。对照组及实验1、2、3、4组细胞凋亡率依次递增(P均<0.05)。实验1、2、3、4组细胞中P53、PARP(89 k D)相对表达量高于对照组,实验2、3、4组细胞中Cleave-Caspase-3相对表达量高于对照组,实验1、2、3、4组细胞中P53、PARP(89 k D)、Cleave-Caspase-3相对表达量依次增高(P均<0.05)。结论白藜芦醇可抑制PC-3细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用呈剂量依赖性,其机制可能与P53表达上调、Caspase-3被激活、增加PARP的剪切有关。

浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3生长抑制的研究

目的:探讨脂肪酸合成酶(FAS)的抑制剂浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3的生长抑制作用。方法:采用人前列腺癌细胞株PC-3在体外实验中用MTT法观察浅蓝菌素对细胞株的生长抑制作用;流式细胞术(FCM)对细胞株的凋亡及细胞周期的变化进行检测;蛋白免疫印迹(W estern b lotting)法检测浅蓝菌素对PC-3细胞中FAS蛋白水平表达的影响。结果:PC-3细胞在浅蓝菌素的作用下,细胞增殖被明显阻遏,并呈现剂量效应关系,在浓度为2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L的浅蓝菌素作用下,PC-3细胞24h的抑制率分别为(34.78±2.47)%、(46.76±3.18)%、(58.13±3.55)%、(65.31±2.81)%,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪显示,细胞经浅蓝菌素作用后,细胞凋亡增多,PC-3细胞在浅蓝菌素浓度5.0mg/L三个时间组(24h,48h,72h)的细胞凋亡率分别为(28.29±1.88)%、(44.73±2.69)%、(61.25±1.43)%;且G0/G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例减少。蛋白免疫印迹实验中,随着浅蓝菌素作用时间的延长,PC-3细胞中的FAS蛋白水平表达量明显减少,药物作用时间与细胞中蛋白水平表达量呈负相关。结论:浅蓝菌素能抑制PC-3细胞生长,且其呈现时间和浓度依赖性。

爱必妥对前列腺癌PC-3细胞功能学的影响

目的观察不同浓度爱必妥对前列腺癌PC-3细胞的增殖、侵袭及凋亡的作用,并初步探索其可能的作用机制。方法使用不同浓度的(10、20、40、80μg/mL)爱必妥作用于PC-3细胞24 h后,CCK-8检测细胞增殖活力变化;流式检测细胞凋亡变化;transwell检测细胞侵袭能力变化;RT-PCR检测EGFR mRNA表达变化;Western Blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达变化。结果CCK-8结果显示,不同浓度的爱必妥作用24 h后均可以抑制PC-3的细胞增殖活力(P<0.001),且药物抑制作用与浓度呈剂量依赖关系;凋亡检测结果显示,不同浓度的爱必妥均抑制PC-3细胞的侵袭能力(P<0.001),且药物抑制作用与浓度呈剂量依赖关系;凋亡检测结果显示,不同浓度的爱必妥均导致PC-3细胞的总凋亡比例增加(P<0.01),且这种促凋亡能力与与浓度呈剂量依赖关系;Western Blot结果显示,不同浓度的爱必妥均可以抑制Bc1-2蛋白表达(P<0.05),同时促进Bax蛋白表达(P<0.05),且抑制和促进作用与药物浓度呈剂量依赖关系;RT-PCR结果显示,不同浓度的爱必妥均可以抑制EGFR mRNA表达(P<0.05),且抑制作用与药物浓度同样呈剂量依赖关系。结论爱必妥可以抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖和侵袭,促进细胞凋亡,且这种作用可能是通过抑制EGFR信号通路导致细胞凋亡而实现。

RhoA蛋白和cAMP对人前列腺癌细胞株PC-3形态的影响(简报)

小G蛋白RhoA是细胞内信号转导的重要成分,参与对细胞的多种功能活动的调控[1,2,3].溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)与多种细胞的G蛋白偶连受体结合而发挥作用,除刺激细胞增殖外,还通过活化RhoA,诱导细胞骨架改变[4].cAMP是经典的第二信使,其下游激酶PKA可抑制RhoA活性,因此,cAMP在许多细胞活动中对RhoA有拮抗作用[5].本实验采用人前列腺癌细胞株PC-3,以绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)分别和不同RhoA结构(野生型RhoA、RhoA63L和RhoA188A)的cDNA共同转染细胞,在显微镜下(200倍视野)观察记录未转染细胞和转染细胞在LPA和cAMP作用下的形态变化,研究RhoA和cAMP/PKA介导的信号转导在调控癌细胞形态改变中的作用.

高温对人前列腺癌细胞株PC-3m和LNCaP生长影响的体外研究

目的 探讨高温对人前列腺癌细胞株PC - 3m和LNCaP生长的影响。方法 用成集落实验和细胞生长曲线分析癌细胞在 43℃和 37℃作用 1h或 2h后的生长抑制率。结果 PC - 3m在 43℃作用 1h和 2h的平均集落形成抑制率分别为(30 .8± 2 .4) %和 (5 6 .6± 14.7) % ;LNCaP分别为 (4 1.3± 12 .6 ) %和 (94.2± 6 .3) % ,差异比较均具有极显著性意义 (分别为P <0 .0 0 5和P <0 .0 0 1)。与细胞生长曲线测定结果一致。结论 高温对人前列腺癌细胞株具有细胞毒性作用 ,温度和作用时间对癌细胞生长的抑制也有重要影响 ;热疗作为治疗前列腺癌的一种辅助疗法 。

Cx43在前列腺癌组织和PC-3细胞株中的表达及其意义

目的探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)在前列腺肿瘤中的生物学意义。方法免疫组化法观察Cx43在正常组织和肿瘤组织以及体外培养的前列腺癌PC-3细胞株中的表达,并采用半定量RT-PCR法检测mRNA水平的变化。结果本实验在mRNA水平上证实PC-3细胞有Cx43 mRNA的表达,在蛋白水平上证实PC-3细胞和前列腺癌组织均有Cx43的表达,但其表达较正常者减弱,蛋白异常定位于胞浆中而非胞膜上。而且Cx43在前列腺癌组织中的表达与前列腺癌病理分级呈负相关。结论Cx43降低可能影响前列腺癌组织及前列腺癌细胞的发生和发展。

重组分泌型人PSP94对前列腺癌细胞株PC-3抑制作用的研究

目的:探讨重组分泌型人PSP94(rsHPSP94)对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3生长的作用和作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测rsHPSP94对PC-3的抑制率。流式细胞仪检测细胞周期分布的变化。结果:rsHPSP94以剂量和时间依赖性抑制PC-3的增殖,流式细胞仪分析表明细胞增殖阻滞在G_1期,并出现凋亡。结论:本实验结果表明rsHPSP94通过使细胞阻滞在G_1期抑制PC-3细胞的增殖。

20(S)-人参皂苷Rg3对前列腺癌PC-3M细胞的诱导凋亡作用

目的研究20(S)-人参皂苷Rg3(SPG-Rg3)对人前列腺癌PC-3M细胞诱导凋亡的作用,并探讨其可能机制。方法采用MTT法观察SPG-Rg3对PC-3M细胞生长的抑制作用,计算IC50;用流式细胞术测定PC-3M细胞周期的变化;AO/EB双染观察SPG-Rg3对PC-3M细胞凋亡的形态学变化;利用免疫细胞化学染色和RT-PCR技术探讨SPG-Rg3对PC-3M细胞的诱导凋亡作用及与其相关基因caspase-8的关系。结果SPG-Rg3可明显抑制PC-3M细胞的生长,IC50为(248.5±0.58)mg.L-1;PC-3M细胞的生长周期中S期细胞数增加,G2/M期细胞数则明显减少,且在G1峰前出现明显的凋亡峰;SPG-Rg3作用后PC-3M细胞呈现明显的凋亡改变,且细胞caspase-8mRNA含量增加、表达明显增强。结论SPG-Rg3能诱导前列腺癌PC-3M细胞发生凋亡,其机制可能与其活化caspase-8作用有关。

槲皮素对前列腺癌PC-3细胞凋亡作用的研究

目的:研究槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞的凋亡作用。方法:体外培养PC-3细胞,给予不同浓度(50、100、150、200、250μmol/L)的槲皮素处理,MTT法检测槲皮素对细胞抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:槲皮素能抑制人前列腺癌PC-3细胞的体外生长,且呈时间与剂量依赖性,浓度由低到高,其24 h的抑制率(%)分别为3.01±1.32、4.84±1.73、20.35±1.30、16.78±1.89、27.25±4.01,48 h的抑制率(%)分别为10.18±1.16、6.22±0.04、24.29±4.19、22.4±4.26、41.42±5.43,当药物浓度>150μmol/L时P<0.05,具有统计学意义;流式细胞术显示PC-3细胞凋亡率随槲皮素浓度升高和作用时间延长而增加(P<0.05),其中浓度150μmol/L和200μmol/L组,24 h的凋亡率(%)分别19.10±0.28、26.55±0.78,48 h的凋亡率(%)分别为27.65±1.06、38.30±5.96;电镜观察到细胞的典型凋亡形态学变化。结论:在适当的条件下,槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖有明显的抑制作用,同时可诱导PC-3细胞凋亡,其具体作用机制有待进一步深入研究。

Ad-ING4对人前列腺癌细胞PC-3体内外抑癌效应的研究

背景与目的:腺病毒作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗。ING4是生长抑制因子家族中的一个成员,是一种潜在的抑癌基因。本研究旨在探讨腺病毒介导的人ING4基因(Ad-ING4)对人前列腺癌细胞PC-3的体内外抑癌效应及其分子机制。方法:将扩增的Ad-ING4重组腺病毒感染PC-3细胞,用RT-PCR法检测ING4在PC-3细胞中的转录;MTT法检测ING4基因对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因的表达对PC-3细胞中的bcl-2、bax、p53和caspase-3凋亡相关基因表达的影响。用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,15d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和CD34蛋白的表达。结果:腺病毒介导的人ING4基因在PC-3细胞中成功转录,明显抑制PC-3细胞增殖,上调p53、bax、caspase-3基因表达和下调bcl-2基因表达,并诱导细胞凋亡。Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠PC-3移植瘤的生长,瘤重的抑制率达37%,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调Bcl-2和CD34蛋白的表达水平。结论:腺病毒介导的ING4基因在体内外均可明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长,诱导其凋亡,其机制可能是上调P53、Bax、Caspase-3蛋白和下调Bcl-2蛋白表达水平。

乌贼墨肽聚糖对前列腺癌PC-3、DU-145细胞作用机制研究

目的:研究乌贼墨肽聚糖对前列腺癌PC-3和DU-145细胞凋亡的影响,以及细胞凋亡的机制。方法:用HE染色观察肽聚糖作用后细胞形态变化,流式细胞术检测细胞早期凋亡率,免疫组化检测肽聚糖作用前后细胞中COX-2和VEGF蛋白阳性表达情况,原位杂交检测肽聚糖作用前后细胞中Bcl-2 mRNA和Caspase-3 mRNA表达的变化。免疫印迹检测肽聚糖作用前后细胞中COX-2、VEGF、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达情况。结果:肽聚糖作用后的细胞出现凋亡的形态学改变,流式细胞术检测后发现,早期凋亡细胞随着作用时间和药物质量浓度的增加而增加,两种细胞中的COX-2和VEGF蛋白表达量下降,Bcl-2 mRNA的表达量减少,而Caspase-3 mRNA表达量增加。免疫印迹结果显示,COX-2、VEGF和Bcl-2蛋白表达量下降,Caspase-3蛋白表达量增加。结论:乌贼墨肽聚糖可以诱导前列腺癌PC-3和DU-145细胞的凋亡,机制可能是下调COX-2、VEGF蛋白和Bcl-2 mRNA的表达;上调Caspase-3 mRNA的表达。

靶向ADAM17基因siRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖能力的影响

目的:探讨靶向抑制ADAM17基因对雄激素非信赖性前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法:应用ADAM17 siRNA转染PC-3细胞后,通过RT-PCR、Western印迹方法分别检测ADAM17 mRNA和蛋白表达变化;MTT、BrdU掺入法检测下调ADAM17对PC-3细胞的增殖和DNA合成能力的影响;流式细胞术检测ADAM17 siR-NA对PC-3细胞细胞周期的影响;Western印迹检测下调ADAM17对PC-3细胞增殖相关基因表达的影响。结果:两对ADAM17 siRNAs均可有效地降低PC-3细胞ADAM17 mRNA和蛋白的表达;MTT结果显示与对照组(0.80±0.51)相比,两对ADAM17 siRNAs均可显著抑制细胞的生长(0.43±0.57、0.44±0.64,P均<0.05);Br-dU掺入实验显示与对照组(0.79±0.72)相比,ADAM17 siRNAs均能显著下调DNA的合成能力(0.48±0.43、0.54±0.59,P<0.05);流式细胞术结果显示,与对照组(41.38±1.53)%相比,ADAM17 siRNAs可显著增加G1期细胞数量[(61.83±2.41)%、(59.78±1.92)%,P均<0.05]、降低S期细胞数量[从(33.51±1.47)%减少到(23.64±2.56)%、(25.24±1.86)%,P均<0.05],同时伴随着cyclin D1蛋白的表达下降而p21蛋白的表达升高。结论:ADAM17 siRNA可以通过下调cyclin D1、上调p21的表达而抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,ADAM17可能成为前列腺癌基因治疗的靶点。