碱性成纤维细胞生长因子对人前脂肪细胞增殖和分化的影响

背景:以前的观点认为碱性成纤维细胞生长因子通过促进移植脂肪内的血管再生来提高脂肪的存活率,但其对脂肪细胞的影响没有明确的定论。目的:观察碱性成纤维细胞生长因子对人前脂肪细胞增殖和诱导分化的影响。设计、时间及地点:细胞学体外培养,对比观察,于2006-03/2007-12在武警医学院完成。材料:获取腹部吸脂术患者的脂肪组织标本10例,男1例,女9例,年龄21～45岁。方法:通过分离、培养和自然纯化过程,获取人前脂肪细胞。实验随机分为碱性成纤维细胞生长因子组和对照组,对照组细胞单纯应用DMEM培养基进行培养传代,碱性成纤维细胞生长因子组使用稀释质量浓度为100ng/L的碱性成纤维细胞生长因子DMEM培养基对细胞生长进行干预。主要观察指标:①倒置相差显微镜观察培养后0,3,6,9,12,15d细胞形态,并进行细胞计数,测定细胞生长曲线。②应用油红O染色,观察细胞内脂肪聚集情况,酶联免疫检测仪上测定吸光度值。结果:接种后第1～15天,可见梭形的前脂肪细胞分裂增殖,局部融合成细胞单层,部分细胞分化,细胞内脂滴聚集增多。已有细胞变为单泡细胞,接近发育成熟。碱性成纤维细胞生长因子组和对照组细胞形态无明显差异,但碱性成纤维细胞生长因子组细胞数比对照组细胞数多44%。油红O染色后人前脂肪细胞内逐渐出现脂滴,呈暗红色,在培养后15d细胞内脂滴浓度达到顶峰。碱性成纤维细胞生长因子组吸光度值比对照组增加300%,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:碱性成纤维细胞生长因子可以促进人前脂肪细胞的增殖及向脂肪细胞分化。

人前脂肪细胞的体外培养

目的建立人前脂肪细胞培养及其在药物诱导下向脂肪细胞分化的细胞模型。方法取成人的腹部纯脂肪颗粒,采用消化法进行人前脂肪细胞的原代培养,并在培养液中加入胰岛素和地塞米松对细胞进行诱导。对培养细胞进行形态学研究,测定生长曲线,并用油红O染色法对前脂肪细胞向脂肪细胞的分化进行定性、定量研究。结果培养出的人前脂肪细胞呈梭形,成分均一,增殖旺盛。经胰岛素和地塞米松诱导后,通过油红O脂肪染色法测定,证明前脂肪细胞已向脂肪细胞分化。结论在成熟的脂肪组织中存在着可以增殖,并可以分化成脂肪细胞的前脂肪细胞,经诱导后可以分化成成熟的脂肪细胞。

人前体脂肪细胞分化过程及肥胖人群脂肪组织中hsa_circ_0017650高表达

目的探讨hsa_circ_0017650在人前体脂肪细胞分化过程以及肥胖人群脂肪组织中的表达变化。方法RT-qPCR测定人前体脂肪细胞分化第0/1/3/5/7/9/12天hsa_circ_0017650的水平变化;油红O染色观察人前体脂肪细胞分化第0/6/12天脂滴形成;RT-qPCR测定人前体脂肪细胞中CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4/ap2)和脂蛋白脂酶(LPL)mRNA水平;根据体质指数(BMI)将125例患者分为肥胖组和对照组,比较2组腹膜后白色脂肪组织hsa_circ_0017650表达差异;Pearson相关性分析hsa_circ_0017650表达水平与肥胖组患者BMI、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)相关性。结果培养第12天时人前体脂肪细胞中C/EBPα、FABP4/ap2和LPL水平均高于第0天(P<0.001);Hsa_circ_0017650表达呈时间依赖性,其中第3天达到峰值(P<0.001)。与对照组相比,肥胖组白色脂肪组织中hsa_circ_0017650水平及BMI、腰臀比、TC、TG、LDL-C水平以及升高(P<0.001);Hsa_circ_0017650与BMI、TG、LDL-C呈正相关(r=0.554、0.569、0.618,P<0.001)。结论Hsa_circ_0017650在人前体脂肪细胞分化过程以及肥胖人群白色脂肪组织中高表达,与患者肥胖密切相关,为肥胖患者的治疗提供靶点。

大黄酸对人前体脂肪细胞增殖与分化的影响

目的:研究大黄酸(rhein,Rh)对人前体脂肪细胞增殖与分化的影响,并进一步探讨其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法测定RH对人前体脂肪细胞增殖的影响;通过形态学观察脂肪细胞的分化程度及形态学变化;并用油红O染色法,检测脂肪细胞内甘油三酯积聚量的变化;应用RT-PCR检测RH干预后分化抑制基因CHOP mRNA的表达。结果:各浓度组RH(0.1、1、2.5、5、10ug/ml)抑制人前体脂肪细胞增殖,作用呈剂量依赖性;RH对脂肪细胞分化的抑制作用亦呈剂量依赖性;1ug/ml的RH使CHOP mRNA表达增加。结论:RH可抑制人前体脂肪细胞增殖与分化,该作用可能与CHOP表达上调有关。

手机辐射对人神经胶质细胞和前脂肪细胞的影响

本研究表明，在连续长时间使用手机的情况下，手机辐射会对人神经胶质细胞和前脂肪细胞产生有害影响。

MiR-484通过靶向MAPK8抑制人前体脂肪细胞的增殖与分化

目的:探讨miRNA-484在肥胖发生中的作用及其临床意义。方法:利用RT-qPCR、CCK-8法、油红O染色及甘油三酯定量检测研究miR-484对人脂肪细胞增殖及成脂分化的作用。运用Targetscan7.2对miR-484的下游靶基因进行预测分析,并使用双荧光素酶实验验证miR-484与靶基因的结合,使用Western blot及RT-qPCR验证miR-484对靶基因的作用。结果:miR-484在人脂肪细胞分化成熟过程中逐渐低表达。过表达miR-484抑制人前体脂肪细胞的增殖及分化,而沉默miR-484与过表达作用相反。生物信息学预测发现MAPK8是miR-484的下游靶基因,且miR-484可抑制其mRNA及蛋白表达,同时过表达MAPK8可部分挽救miR-484对人前体脂肪细胞增殖分化的抑制。结论:miR-484可以通过抑制MAPK8的表达从而抑制人前体脂肪细胞的增殖与成脂分化。

miR-1268重组慢病毒质粒构建及其在人前体脂肪细胞中的表达验证

目的构建miR-1268重组慢病毒质粒,观察其在人前体脂肪细胞HPA中的表达情况。方法从NCBI Gen Bank数据库查找miR-1268的DNA序列,用Primer 5.0软件设计PCR引物,以HPA细胞的DNA为模板进行PCR扩增;克隆慢病毒表达载体,进而包装成空载慢病毒和miR-1268过表达慢病毒;HPA细胞分别感染空载慢病毒和miR-1268过表达慢病毒,荧光定量PCR检测miR-1268表达水平。结果测序结果表明,miR-1268前体序列与Gen Bank上的序列完全相同。与空载慢病毒感染的HPA细胞比较,miR-1268过表达慢病毒感染的HPA细胞miR-1268上调2.5倍。结论成功构建miR-1268重组慢病毒质粒,感染的HPA细胞高表达miR-1268。

吡格列酮对人脂肪细胞中脂联素及其受体mRNA表达的影响

目的:探讨噻唑烷二酮类药物吡格列酮对人脂肪细胞中脂联素及其受体mRNA表达的影响。方法:取外科手术患者腹网膜脂肪组织,进行人前体脂肪细胞的原代培养并诱导其分化。适时用不同浓度的吡格列酮进行药物干预,取分化第10d的脂肪细胞用于实验,分设对照组和药物干预组,提取RNA后以RT-PCR方法检测脂联素及其受体的mRNA的表达,比较其差异。结果:吡格列酮药物干预组人脂肪细胞中脂联素及其受体的mRNA的表达量高于不加药物的对照组。结论:噻唑烷二酮类药物吡格列酮能增加人脂肪细胞中脂联素及其受体的mRNA的表达。

Leptin对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达的调控

目的:观察leptin对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达的调节作用。方法:体外培养人前体脂肪细胞,在诱导人前体脂肪细胞分化成熟的基础上,应用100ng/ml人重组leptin分别干预成熟脂肪细胞6、24h,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测成熟脂肪细胞中NYGGF4基因mRNA的表达水平。结果:100ng/ml leptin干预人成熟脂肪细胞6h后,NYGGF4基因mRNA的相对表达量为0.000476±0.000178,显著低于对照组0.00114±0.000275,P<0.05;干预24h NYGGF4基因mRNA的相对表达量为0.000835±0.000211,也显著低于对照组0.001419±0.000193,P<0.05。结论:leptin能显著下调成熟脂肪细胞中NYGGF4基因的表达。

NYGGF4基因在人前体脂肪细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子α对其调控的研究

目的观察人前体脂肪细胞诱导分化过程中NYGGF4基因mRNA表达水平的变化，探讨重组肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα，TNFα）对成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达水平的调节作用。方法体外培养人内脏来源的原代前体脂肪细胞（human preadipocytes—visceral，HPA—v），在诱导HPA-v分化成熟的基础上，应用不同浓度重组TNFα干预成熟脂肪细胞16h，或以10ng／mL TNFα分别干预不同时间，采用实时荧光定量逆转录PCR技术检测的NYGGF4 mRNA表达水平。结果（1）HPA—v诱导分化至第17d，具备成熟脂肪细胞特征；（2）NYGGF4基因低表达于人前体脂肪细胞中，随脂肪细胞分化成熟其表达水平逐渐升高；（3）随TNFα干预浓度增高及干预时间延长，人成熟脂肪细胞中NYGGF4 mRNA水平呈现逐渐升高的趋势。结论NYGGF4基因具随脂肪细胞分化成熟表达逐渐上调的特征，TNFα能显著上调成熟脂肪细胞中NYGGF4基因的表达，其效应具有剂量依赖和时间反应性。

STEAP4抗体干预对人前体脂肪细胞内活性氧、线粒体膜电位的影响

目的探讨STEAP4抗体干预对人前体脂肪细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位的影响。方法应用锥虫蓝活性试验对细胞活性进行检测,并进一步确定STEAP4抗体原液按1:250的比例稀释。体外培养人前体脂肪细胞,应用质量浓度为0.5g.L-1的STEAP4抗体,按1:250的比例稀释后(即质量浓度为0.125g.L-1)干预人前体脂肪细胞。应用激光共聚焦显微镜拍照,定性、定量分析ROS、线粒体膜电位变化。结果 STEAP4抗体按1:250比例稀释作用于人前体脂肪细胞后,可显著降低细胞活性;人前体脂肪细胞在STEAP4抗体按1:250稀释浓度干预下,细胞内ROS水平显著增加、线粒体膜电位水平显著降低,差异均有统计学意义(Pa<0.05)。结论 STEAP4抗体按1:250比例稀释后,作用于人前体脂肪细胞后可显著提高ROS水平、降低其线粒体膜电位,推测STEAP4基因影响胰岛素敏感性的机制可能涉及线粒体功能变化。

STEAP4基因在人前体脂肪细胞诱导分化过程中的表达

目的观察人肥胖相关全长新基因STEAP4在人前体脂肪细胞诱导分化过程中不同时段表达水平的变化,探讨STEAP4基因与脂肪细胞分化、脂质积聚的关系。方法体外培养人前体脂肪细胞,待细胞生长融合后以1-甲基-3-异丁基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素及罗格列酮联合诱导方案,在体外诱导其分化为成熟脂肪细胞。在前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化过程中观察细胞形态及脂质积聚变化;采用实时荧光定量RT-PCR技术检测诱导分化不同时段(前体,第0、4、6、8、11、14、17天)脂肪细胞中STEAP4基因mRNA的表达水平。结果STEAP4基因高表达于人前体脂肪细胞;加入脂肪细胞分化诱导剂后(第4天)表达略有上调,其后随脂肪细胞分化成熟该基因表达量呈逐渐下降趋势;至脂肪细胞完全分化成熟(第14-17天)表达量最低。STEAP4基因表达水平除在诱导分化前至第4天、第14-17天差异无统计学意义外,余各时间点的表达水平差异均有统计学意义(Pa<0.05)。结论STEAP4基因随脂肪细胞分化成熟表达逐渐下调,可促进脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚,与肥胖的发生有关。

人类肥胖相关新基因LYRM1在人前体脂肪细胞分化过程中的表达变化

【目的】观察LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化过程中表达水平的变化。【方法】体外培养人前体脂肪细胞,采用RT-PCR及Western-Blot技术检测LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化不同阶段(前体脂肪细胞;0、2、6、12 d)核酸及蛋白水平的表达变化。【结果】LYRM1基因在分化第2 d(Day2)时核酸及蛋白表达水平均明显上调,与各时段的表达水平差异有显著性(P<0.01),其余各组之间差异无显著性(P>0.05)。【结论】初步揭示了LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化过程中的表达变化趋势。

TNFα对人脂肪细胞STEAP4基因表达的调控

目的人STEAP4基因是一个参与胰岛素敏感性调节的肥胖相关差异表达基因,本研究旨在探讨胰岛素抵抗相关脂源性细胞因子TNFα对人成熟脂肪细胞中STEAP4基因的调节作用。方法体外培养人前体脂肪细胞,在诱导人前体脂肪细胞分化成熟的基础上,应用不同浓度(0、5、10、25、50ng/mL)人重组TNFα干预成熟脂肪细胞24h,采用实时荧光定量RT-PCR技术、Western blot技术检测干预后人成熟脂肪细胞STEAP4基因在核酸和蛋白表达水平的变化。结果不同浓度TNFα(5、10、25、50ng/mL)干预24h能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4基因的mRNA表达,与未干预对照组差异有显著性(P<0.05);50ng/mLTNFα干预时STEAP4基因在人成熟脂肪细胞中的mRNA表达水平最高。与基因表达结果相一致,不同浓度TNFα(5、10、25、50ng/mL)干预24h能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4蛋白的表达,与未干预对照组差异有显著性(P<0.05);干预浓度提高到25ng/mL时干预效果最为明显。结论TNFα能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4基因核酸和蛋白的表达。

rVisfatin干预人脂肪细胞的功能研究

取外科手术病人腹部网膜脂肪组织,进行人前体脂肪细胞的原代培养并于培养24h后诱导其分化。适时用不同浓度(1ng/ml、50ng/ml)的rVisfatin进行干预,48h检测人前体脂肪细胞的增殖,脂肪细胞的分化程度;检测脂联素mRNA的表达。结果:1ng/mlrVisfatin使人前体脂肪细胞MTT值增加14.3%(P<0.05),50ng/ml增加17.5%(P<0.05),经rVisfatin干预的人脂肪细胞胞浆中,脂肪的堆积多于对照组;rVisfatin干预组人脂肪细胞脂联素mRNA的表达量高于不加rVisfatin的对照组,1ng/ml组使脂联素的mRNA表达量增加31%,50ng/ml组增加55%。结论:rVisfatin能促进人前体脂肪细胞的增殖和分化;脂联素mRNA的表达。