监测外周血CD34^(+)细胞计数预测普乐沙福联合G-CSF自体干细胞动员的效果

目的探讨外周血CD34阳性(CD34^(+))细胞计数对普乐沙福自体干细胞动员效果的预测价值。方法回顾性分析2021年5月—2023年7月中山大学附属第七医院使用人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合普乐沙福进行自体干细胞动员的13例患者临床资料,分析普乐沙福动员前后外周血CD34^(+)细胞计数的变化及干细胞采集情况。结果共有13例患者纳入研究,包括淋巴瘤10例和多发性骨髓瘤3例。多发性骨髓瘤患者中1例为新诊断,另2例为复发患者;淋巴瘤患者中3例为套细胞淋巴瘤,6例为弥漫大B细胞淋巴瘤(包括1例复发),1例为B细胞淋巴瘤(不能明确类型)。本研究纳入的患者均使用G-CSF动员,在使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数均升高,使用普乐沙福前中位CD34^(+)细胞计数为13.3(2.5~76.1)/μL,使用普乐沙福后中位CD34^(+)细胞计数为73.6(10.4~208.70)/μL,升高4.18(1.99~13.60)倍。13例患者中有2例患者在使用普乐沙福前外周血CD34^(+)细胞计数<5/μL,均动员失败。Spearman相关分析结果显示,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数与使用普乐沙福前CD34^(+)细胞数呈正相关(rs=0.769,P=0.003)。多元线性回归分析显示,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数能较好地预测采集结果(P=0.004)。结论监测外周血CD34^(+)细胞计数可预测普乐沙福自体干细胞动员效果,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数越多,CD34^(+)细胞采集量越大。

中剂量rhG-CSF对正常供者外周血CD34^+细胞动员效果

本研究探讨中等剂量600μg/d粒细胞集落刺激因子(GCSF)对正常供者CD34+细胞的动员效果及动员前后外周血单个核细胞中T细胞亚群的变化。对2002-2004年我科31例健康供者给予rhGCSF600μg/d,在动员的第4天开始采集外周血干细胞(PBSC),并检测动员前后白细胞总数、动员后的有核细胞(NC)数、单个核细胞(MNC)数、CD34+细胞数及粒巨噬细胞集落形成单位(CFUGM),同时观察动员及采集过程中的不良反应。对12例供者GCSF动员前后外周血单个核细胞中T细胞亚群的变化进行了观察。结果显示:600μg/d组与既往使用的300μg/d组相比,rhGCSF动员后的外周血细胞中NC、MNC和CD34+细胞及CFUGM显著增加(P<0.05),受者造血重建时间缩短(P<0.05),动员和采集过程中的不良反应发生率无明显上升(P>0.05),无严重不良反应发生。动员后CD3+细胞在PBMNC中的比例较动员前下降(15.05±3.3)%,(P<0.05)。动员前后CD4+/CD8+淋巴细胞的比值无明显变化(P>0.05)。结论:600μg/d的GCSF对正常供者的动员效果好,受者造血重建快,无严重不良反应发生。动员后PBMNC中CD3+细胞的下降及CD4+/CD8+淋巴细胞比值无明显变化,从而使得移植后急性GVHD的发生率无明显上升。

化疗联合G-CSF动员的骨髓及外周血CD34^+细胞表达粘附分子的变化

探讨化疗联合G CSF动员前、后患者骨髓及外周血CD34+细胞表达CD4 4 ,CD4 9d ,CD6 2L及趋化因子CXCR4的动态变化 ,用免疫荧光直接三色标记和流式细胞术测定G CSF动员前、后骨髓及外周血CD34+细胞的CD4 4 ,CD4 9d ,CD6 2L及趋化因子CXCR4的表达 ,观察输注各表达亚群细胞数与移植后造血重建的关系。结果发现 ,动员后骨髓中CD34+CD4 4 +和CD34+CD4 9d+细胞的百分比较动员前明显降低 ,而外周血中二者的比例则显著升高 ;动员前、后骨髓中CD34+CD6 2L+和CD34+CXCR4 +细胞的变化并不明显 ,而外周血中前者明显增加 ,后者则显著减少。输入CD4 4 +,CD4 9d+,CD6 2L+及CXCR4 +的CD34+细胞的量与移植后血中中性粒细胞和血小板恢复的时间未表明有显著的相关。结论 :G CSF动员可下调骨髓CD34+细胞的CD4 4 ,CD4 9d ,CD6 2L及CXCR4的表达 ,从而进入外周血循环 ,输注这些细胞的临床意义有待累积更多病例的分析。

两步法扩增诱导脐血及动员外周血CD34^+细胞来源树突状细胞的比较

为了比较先扩增、后诱导的两步法从脐血(CB)CD34+细胞和动员外周血(MPB)CD34+细胞诱导所得DC的产量及功能,将免疫磁珠分选获得的CB-CD34+细胞和MPB-CD34+细胞用FL、TPO、SCF、GM-CSF等细胞因子先扩增10天,然后加入GM-CSF、IL-4及TNF-α、CD40Ab、PGE2等细胞因子组合诱导获得DC。采用流式细胞仪检测DC表型,混合淋巴细胞培养检测DC刺激异基因T细胞增殖能力,ELISA法检测DC分泌IL-12能力,Transwell板检测DC在次级淋巴组织趋化因子(SLC)介导下的趋化功能。结果表明①扩增10天时CB组、MPB组细胞中CD14+CD1a-细胞含量无显著差异[(40.48±16.85)%vs(28.07±23.19)%,P>0.05]。但由于CB组细胞扩增倍数显著高于MPB组(388.88±84.63倍vs79.67±10.32倍,P<0.01),CB组CD14+CD1a-细胞扩增倍数显著高于MPB组(189.42±25.02倍vs28.74±23.27倍,P<0.01);②TNF-α/CD40Ab/PGE2条件下与TNF-α条件下相比,CB组和MPB组所得DC均表达更高的CD83[分别为(34.52±11.22)%vs(3.70±2.27)%、(36.69±13.36)%vs(7.34±3.364)%,P均<0.01];③CB组与MPB组在TNF-α/CD40Ab/PGE2诱导条件下所得DC均高水平表达CD83、CD86、HLA-DR、CD11c、CD54、CD40,CB组所得CD83+细胞的扩增倍数显著高于MPB组(198.72±117.53倍vs33.95±6.19倍,P<0.01);④CD40Ab/PGE2/TNF-α条件下CB与MPB来源的DC在刺激异基因T细胞增殖、IL-12的分泌[(16.2±4.31)pg/mlvs(13.5±4.1)pg/ml]以及SLC介导的迁移率[(28.09±7.76)%vs(18.5±3·47)%]上均无显著差别(P均>0.05)。结论在两步法培养体系下,CB-CD34+细胞与MPB-CD34+细胞来源的DC具有相同的功能,而前者产量显著高于后者。

rhG-CSF动员的骨髓和外周血干细胞混合移植物首次采集时供者外周血单核细胞计数反映混合采集物中CD34^＋细胞含量

本研究探讨人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的骨髓和外周血干细胞混合移植健康供者首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量与骨髓/外周血混合采集物中CD34+细胞数量的关系。对70名亲缘健康供者均皮下注射rhG-CSF 5μg/(kg.d),连续5天。第4天和第5天分别采集骨髓和外周血干细胞。首次干细胞采集时用EX2100血细胞分析仪检测供者外周血细胞计数,同时应用流式细胞仪测定骨髓和外周血混合采集物中的CD34+细胞数量。结果表明:rhG-CSF动员的70例供者首次干细胞采集时外周血单核细胞的数量为(1.15±0.60)×109/L;骨髓和外周血采集物中的CD34+细胞总量分别是(5.85±2.93)×107和(1.33±0.77)×108;骨髓和外周血混合采集物的CD34+细胞总量是(1.92±0.86)×108。Pearson和Spearman分析显示首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数(×109/L)与骨髓采集物中CD34+细胞的总量(相关系数:r=0.265,p=0.027)、外周血采集物中CD34+细胞总量(r=0.340,p=0.004)以及混合移植物中CD34+细胞的总量(r=0.398,p=0.001)均存在显著的相关性;多因素分析表明,首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数与骨髓采集物、外周血采集物以及混合移植物中CD34+细胞的总量均呈正相关关系(p值分别为0.027、0.004和0.001)。首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量对混合移植物中CD34+细胞总量预测的敏感性是71%,特异性是70%(p=0.007)。结论:rhG-CSF动员的骨髓和外周血混合移植健康供者首次干细胞采集时外周血单核细胞计数可有效预测输注给受者的CD34+细胞总量即采集效果。

G-CSF动员的外周血与骨髓CD34^+细胞黏附分子的表达

目的 :研究黏附分子在外周血干细胞动员机制中的作用。方法 :应用流式细胞仪检测粒细胞集落刺激因子 G- CSF动员的外周血细胞与骨髓 CD34+细胞表达的黏附分子非常延迟抗原 4 (VL A- 4 )、淋巴细胞功能相关抗原 1(L FA- 1)和 L-选择素 (CD6 2 L)。结果 :G- CSF动员后的外周血 CD34+细胞表达的 VL A- 4、 L FA- 1与骨髓 CD34+细胞相比明显减少 ,CD6 2 L 无明显改变。结论 :黏附分子 VL A- 4及 L FA- 1降低可能是 G- CSF动员造血干细胞进入外周血过程中的一个重要环节。

动员外周血CD34阳性细胞流式细胞术测定中的策略探讨

探索用流式细胞术测定动员外周血中CD34^+细胞的简便有效的方法,以便在干细胞动员中进行有效的动态监测,及时收取干细胞,把握最佳移植效果。将经药物动员的移植供者的外周血用CD34和CD45荧光抗体标记,用红细胞裂解液将红细胞裂解后经流式细胞仪检测。运用恰当的分析窗口、有效的设门分析结合干细胞的生物学特性,确定CD34^+细胞在窗口中的确切位置,统计CD34^+细胞在有核细胞中的比例。结果表明,通过本方法可有效地测定0.05 ％-0.1％的CD34^+细胞的相对含量,在药物动员的第5或6天,多数患者外周血中CD34^+细胞达到峰值,某些患者外周血中CD34^+细胞可超过1％。结论:通过标记中的有效阻断和多参数分析,本方法可对动员外周血中微量的CD34^+细胞进行有效的动态监测,对适时采集干细胞进行移植提供了重要的参考。

肿瘤患者外周血干细胞动员过程中CD_(34)^+细胞的动态变化及意义

为观察肿瘤患者 CD+ 34 细胞数量在动员过程中的动态变化 ,确定采集干 /祖细胞的最佳时机 ,采用环磷酰胺 (CTX)联合粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)对 2 1例肿瘤患者进行造血干 /祖细胞动员。动员过程中 ,每天进行血细胞计数 ,于前期、极期、恢复早期、恢复期计数外周血 CD+ 34 细胞、白细胞 (WBC)、单核细胞 (MNC)、血小板(Plt)。结果显示 ,不同患者出现极期、恢复早期、恢复期的时间差异较大。与前期相比 ,极期 CD+ 34 明显降低(P<0 .0 5 ) ,恢复期则显著增加 (P<0 .0 1)。WBC、MNC、Plt变化均与 CD+ 34 细胞变化呈显著正相关 (r分别为 0 .99、0 .82 7、0 .886 ,P均 <0 .0 1)。提示在 WBC>5 .0× 10 9/ L时采集外周血造血干细胞 (PBSC)较合适 ,MNC>1.5×10 9/ L时采集 PBSC较理想 ,监测 Plt计数变化 。

经粒系集落刺激因子刺激外周血CD34^+细胞动员效果相关因素的考察

目的探讨粒系集落刺激因子(G-CSF)动员健康供者外周血造血干细胞效果的影响因素。方法对24例健康供者皮下注射G-CSF动员造血干细胞,检测外周血T淋巴细胞亚群和血常规数据。结果经G-CSF刺激后,外周血CD3+(%)、CD3+CD4+(%)、白细胞计数、血小板均明显升高(P<0.05);而动员第4天、第5天、第6天骨有核细胞密度、CD34+细胞百分比无明显差别。经相关性分析,性别、年龄、体质量与CD34+细胞百分比呈负相关(P<0.05),白细胞计数呈正相关(P<0.01)。结论在一定范围内男性供者优于女性供者,年龄越小,体质量越轻,白细胞计数越高,经G-CSF动员的外周血造血干细胞CD34+细胞百分比越高。

辛伐他汀对大鼠外周血单个核CD34细胞动员作用

目的 观察辛伐他汀 (simvastatin)动员大鼠外周血单个核CD34+ 细胞的作用。方法 应用标准酶法检测血脂水平。采用梯度离心法分离外周血中的单个核细胞 (MNC) ,经过血细胞分析仪计数后应用流式细胞仪计算CD34+ 细胞率。结果 (1)各组间血脂水平及外周血单个核细胞数无明显差别 (P >0 .0 5 )。(2 )给药后第 1周辛伐他汀组外周血单个核细胞CD34+ 率较对照组明显升高 (P <0 .0 5 )。给药后第 2周此差异仍然存在 (P <0 .0 1) ,且较第 1周明显升高 (P <0 .0 5 )。结论 辛伐他汀可升高大鼠外周血单个核细胞中CD34+ 细胞率 ,有一定的干细胞动员作用。

人Delta-like 1蛋白的表达及其对动员外周血CD34^+细胞的扩增作用

构建pET32a(+)-hDll1DSL原核表达载体,表达、纯化hDll1DSL蛋白,观察其对动员外周血CD34+细胞的体外扩增作用。克隆hDll1DSL,构建pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体。转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白。RBP-j报告基因实验及Notch下游分子Hes1检测证实hDll1DSL活性。磁珠分选动员外周血CD34+细胞,加入hDll1DSL或联合SCF、FL、TPO孵育一周,观察体外扩增作用。结果表明:成功克隆hDll1DSL,并构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体。在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hDll1DSL融合蛋白,经镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hDll1DSL融合蛋白。配体活性实验显示,可溶性的Trx-hDll1DSL蛋白可以激活RBP-j报告基因,并且能上调Notch下游分子Hes1的表达,证明其能够激活Notch信号通路。此外,Trx-hDll1DSL融合蛋白与SCF、FL及TPO联用,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用。我们成功构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体,表达、纯化了具有生物学活性的Trx-hDll1DSL融合蛋白,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用,为造血干/祖细胞体外扩增体系的优化研究奠定了基础。

动员的外周血干/祖细胞中P21的表达与CD34^+细胞的相关性

目的 :检测动员的外周血干 /祖细胞中P2 1的表达及与CD34+ 细胞的相关性 ,探讨其在动员过程中的变化及意义。方法 :选取异基因外周血干细胞移植正常供者 9例和自体外周血干细胞移植者 (急性白血病患者 ) 6例 ,运用流式细胞术检测动员的外周血干 /祖细胞中CD34+ 细胞及其亚群 ,用免疫细胞化学的方法检测外周血动员前后P2 1的表达。结果 :动员的外周血干 /祖细胞中P2 1的表达明显高于动员前 ,二者间差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;动员的外周血干 /祖细胞中CD34+ 细胞比例与P2 1的表达率呈正相关 (r=0 .5 5 3)。结论 :外周血干 /祖细胞动员过程中P2 1表达增高 ,可能与其促进祖细胞增殖。

恶性肿瘤患儿自体外周血CD_(34)^+造血干细胞的动员和检测

目的探讨恶性肿瘤患儿经化疗和细胞因子动员后，外周血CD造血干细胞的含量变化及意义。方法恶性肿瘤患儿6例，经化疗和细胞因子动员后，用CD抗体标记，流式细胞仪检测外周血CD细胞18次，对测定结果进行统计学分析。结果6例患儿的CD细胞的百分率为1．78％～9．72％，较正常儿童外周血的含量增加17～97倍，CFU-GM增加19～74倍。三组不同疾病：NHL、ANLL和ALL之间CD细胞含量有显著性差异，P＜0．01。结论恶性肿瘤患儿经动员后，CD造血干细胞及CFU-GM有明显扩增，CD的检测在自体造血干细胞移植中具有重要的意义。

小剂量G-CSF联合GM-CSF动员外周血CD34^+细胞

目的探讨小剂量粒单巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员外周血干细胞的效率。方法20例成人恶性血液病按统计学配对方法等分为2组。非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)患者化疗方案为环磷酰胺2.0 g/d,静脉滴注,第1~2天,足叶乙甙0.2 g/d,静脉滴注,第1~3天;急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者用阿糖胞苷2.0 g/d,静脉滴注,第1~3天,足叶乙甙用法同NHL。当白细胞低于1.0×109/L时研究组10例应用GM-CSF 2.5 μg/d·kg·b.w.联合G-CSF 2.5 μg/d·kg·b.w.;对照组单用G-CSF 5 μg/d·kg·b.w.,全部皮下注射5~6 d。白细胞5.0×109/L以上时应用CS-3000 pluse分离外周血单个核细胞,流式细胞术计数CD34+细胞。结果产品细胞分类计数单个核细胞占95%~99%,在研究组CD34+细胞平均采集9.4(8.4~10.2)×106/kg·b.w.,CFU-GM 42.4(21.9~72.8)×104/kg·b.w.,对照组平均采集CD34+细胞4.8(4.1~8.3)×106/kg·b.w.,CFU-GM 28.1(7.1~60.2)×104/kg·b.w.,2组差异显著(P<0.05)。副作用2组相似。结论恶性血液病患者化疗后应用G-CSF联合GM-CSF动员CD34+细胞的效果优于单用G-CSF。

辛伐他汀对大鼠外周血单个核CD34^+细胞动员作用的研究

目的 观察辛伐他汀动员大鼠外周血单个核CD34+ 细胞的作用。方法 80只Wistar大鼠被随机分成辛伐他汀组和对照组。分别于给药 1、2周后检测血脂水平 ,并用流式细胞仪行萤光激活细胞分类检测外周血单个核细胞中CD34+ 细胞率。结果 (1)各组间血脂水平及外周血单个核细胞数无明显差别 (P >0 .0 5 )。 (2 )无论是给药第 1周后还是第 2周后 ,辛伐他汀组外周血单个核细胞CD34+ 细胞率较对照组明显升高 (P <0 .0 1)。结论 辛伐他汀可动员大鼠外周血单个核细胞中CD34+

新型外周血CD34^+细胞动员剂——抗CD49d单克隆抗体的实验研究

为了探讨外周血干细胞动员的新途径 ,用抗CD4 9d单克隆抗体和rhG CSF及二者联合给小鼠皮下注射 ,动态观察小鼠外周血的白细胞总数和CD34+ 细胞数的变化 ,并将各种动员方法所获得的干细胞分别进行干细胞移植。结果发现 ,给予动员剂后小鼠的外周血白细胞总数和CD34+ 细胞比例明显升高 ,以rhG CSF和抗CD4 9d单克隆抗体联合给药效果最佳。移植后各组小鼠均获造血重建 ,以联合动员组造血恢复速度最快。结论 :抗CD4 9d单克隆抗体能有效动员小鼠外周血干细胞 ,与rhG CSF具有协同作用。

第二次献粒细胞集落刺激因子动员的外周血祖细胞:与CD34+细胞低产出有关的因素

背景 同种移植时，对于重复献粒细胞集落刺激因子(GCSF)动员的外周血干祖细胞(PBPCs)的效率和安全性的资料仍然不多。设计和方法作者调查了67名健康献血者连续两次作PBPCs动员和采集的数据，中位间隔时间为5个月(范围，0．1～47)。第一次动员(FM)和第二次动员(SM)都给予每天7．5μg／kg体重的G—CSF(lenograstim)。结果两次动员的非血液学副作用相似。女性献血者在动员的第5天时，

粒细胞集落刺激因子动员2型糖尿病患者外周血CD34^+细胞的变化

背景:与正常人比较,2型糖尿病患者外周血CD34+细胞含量已有明显下降。目的:分析2型糖尿病患者外周血动员后CD34+细胞比例的变化。方法:将234例2型糖尿病患者按病程分为5组(<1年,1～5年,>5～<10年,10～15年和≥15年),予以粒细胞集落刺激因子动员。动员5d后,使用流式细胞仪检测外周血CD34+细胞的含量,并利用Person简单相关及多元回归方法分析其与病程、血脂、尿酸的关系。结果与结论:糖尿病者外周血动员后CD34+细胞水平与三酰甘油相关(r=-0.202,P=0.002),与载脂蛋白B相关(r=-0.276,P=0.000),与尿酸相关(r=-0.297,P=0.000)。经统计分析发现,糖尿病者外周血动员后CD34+细胞数随糖尿病病程进展而逐渐下降。