miR-106b对脂多糖诱导活化的人单核巨噬细胞分泌TNF-α的影响及机制研究

目的研究miR-106b对脂多糖(LPS)诱导活化的人单核巨噬细胞(THP1)分泌TNF-α的影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养人THP1,予LPS刺激剂诱导其活化。重新取THP1细胞,分为LPS组、NC对照组和miR-106b组3组;LPS组,THP1细胞不转染,单用LPS(1μg/ml)刺激24h;NC对照组,每孔细胞中加入NC mimic (与靶基因序列不相符)100nmol转染后,LPS(1μg/ml)刺激24h;miR-106b组,每孔细胞中加入miR-106b mimic 100nmol转染后,LPS(1μg/ml)刺激24h。随后检测各组THP1细胞上清液TNF-α的表达量。利用生物信息学分析系统预测miR-106b可能作用的靶蛋白。采用荧光抗体标记靶蛋白,流式细胞仪检测过表达miR-106b对靶蛋白的影响。结果 LPS可以诱导体外培养的人THP1活化并分泌TNF-α。与LPS组和NC对照组比较,miR-106b组THP1上清液TNF-α表达量明显增多(均P<0.05);NC对照组与LPS组相比无统计学差异(P>0.05)。生物信息学预测miR-106b作用的靶蛋白可能为信号调节蛋白α(SIRPα)。流式细胞检测结果显示,与NC对照组和Lp s组比较,miR-106b组的THP1细胞SIRPα表达量明显下降(均P<0.05)。结论 miR-106b可通过抑制靶基因SIRPα的表达,进而促进人THP1分泌TNF-α,进一步阐明了miRNA对人THP1炎症反应的调控机制,为冠心病的诊断、治疗提供了新的生物学靶点。

维拉帕米对人单核巨噬细胞蛋白质、DNA、RNA合成的影响

目的：观察维拉帕米对人单核巨噬细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质合成过程的影响。方法：维拉帕米与人单核巨噬细胞孵育２４ｈ或４ｄ，测定细胞３Ｈ－ＴｄＲ、３Ｈ－ＵＲ、３Ｈ－Ｌｅｕ掺入人单核巨噬细胞状态及细胞内蛋白质含量。结果：维拉帕米在低浓度时对ＤＮＡ、ＲＮＡ合成有抑制作用，呈浓度依赖性；高浓度时作用明显，对ＲＮＡ作用较ＤＮＡ显著（Ｐ＜０．０５）；对蛋白质合成在高浓度时有抑制作用。维拉帕米与成熟过程中人单核巨噬细胞作用４ｄ，细胞蛋白含量显著降低（Ｐ＜０．０５），并呈浓度依赖性。结论：此作用可能为维拉帕米抑制细胞生长及动脉粥样斑块形成逆转心肌肥厚的机制之一。

miR-155-5p靶向核因子κB抑制蛋白E在人单核巨噬细胞抗新生隐球菌免疫反应中的机制研究

目的分析新生隐球菌(标准株WM148)干预人单核巨噬细胞(THP-1细胞)中miR-155-5p和核因子κB抑制蛋白E(IKBKE)基因的表达变化,验证其靶向关系,并研究其对肿瘤坏死因子细胞(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的调控作用。方法体外培养THP-1细胞,按照数量5∶1将热灭活新生隐球菌加入培养瓶内,分析0h、3h、6h、9h和12h这5个时间点的miR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化;双荧光素酶报告系统验证miR-155-5p和IKBKE3'UTR的靶向关系;分别转染miR-155-5pmimics和IKBKEsiRNA,观察在6hmiR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化。结果新生隐球菌干预THP-1细胞后,miR-155-5p表达增加,6h达到峰值,随后逐渐下降,而IKBKE在6h表达降低,TNF-α和IL-6的表达量随时间逐渐增加;双荧光素酶报告系统中miR-155-5pmimics作用后IKBKE3'UTR活性下降,将IKBKE3'UTR进行突变后,IKBKE3'UTR活性较野生型增加;分别转染miR-155-5pmimics和IKBKEsiRNA后,在6hTNF-α和IL-6的表达量实验组均较对照组明显增加。结论THP-1细胞中miR-155-5p可通过靶向降解IKBKE信使RNA(mRNA)促进TNF-α和IL-6的表达增加,表明其在THP-1细胞抗新生隐球菌中发挥着促炎作用,可作为将来隐球菌性脑膜炎的潜在治疗靶点。

由mtDNA清除THP-1细胞构建的人单核/巨噬细胞系Rho0细胞周期、凋亡、吞噬功能、炎症因子表达变化

目的 观察由线粒体DNA(mtDNA)清除人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)构建的人单核/巨噬细胞系Rho0细胞周期、凋亡、吞噬功能、炎症因子表达变化。方法 取THP-1细胞,使用溴化乙锭(EB)清除细胞中mtDNA,构建新的人单核/巨噬细胞Rho0。取Rho0细胞,分别给予1 mg/mL LPS或溶媒刺激24 h(计为Rho0-LPS组、Rho0-溶媒组);另取未经EB处理的THP-1细胞,分别给予1 mg/mL LPS或溶媒刺激24 h(计为Control-LPS组、Control-溶媒组);采用流式细胞术PI染色检测各组细胞周期,流式细胞术Annexin V-FITC/PI法测算各组凋亡细胞数,Red-Zymosan染料吞噬实验评估各组细胞吞噬功能(平均荧光强度)。取Rho0细胞(Rho0组)和取未经EB处理的THP-1细胞(Control组),采用RT-qPCR法检测炎症因子(IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 mRNA)。结果 与Control-溶媒组比较,Rho0-溶媒组G0~G1期、S期、G2/M期比例降低及细胞凋亡数增加和平均荧光强度增强,Control-LPS组细胞凋亡数增加和平均荧光强度增强(P均<0.05);与Rho0-溶媒组比较,Rho0-LPS组G0~G1期比例降低及细胞凋亡数增加(P均<0.05)。与Control组比较,Rho0组IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-10 mRNA表达升高(P均<0.05)。结论 清除mtDNA可导致Rho0细胞周期停滞,促进细胞凋亡,增强细胞吞噬功能及促炎功能。

罗格列酮对人单核巨噬细胞THP-1中胆固醇代谢的影响机制研究

目的:研究罗格列酮(RG)对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的人单核巨噬细胞THP-1源性泡沫细胞中胆固醇代谢的影响机制。方法:将THP-1巨噬细胞分为空白对照组、oxLDL(100 mg.L-1)组和oxLDL(100 mg.L-1)+RG(10μmol.L-1)组,后2组先加oxLDL培养48 h,最后1组再加RG培养48 h,采用高效液相色谱法检测每组细胞内游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测每组细胞中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白(ABC)A1、ABCG1 mRNA及蛋白的表达情况。结果:与空白对照组比较,oxLDL组FC、CE含量明显升高,ABCA1、ABCG1 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.01);与oxLDL组比较,oxLDL+RG组FC、CE含量明显降低,ABCA1、ABCG1 mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论:RG可能通过上调THP-1巨噬细胞ABCA1、ABCG1的表达,减少FC在细胞内的蓄积,促进细胞内胆固醇代谢,进而抑制动脉粥样硬化的形成。

90 K／Mac-2 BP 基因沉默增强 HIV-1感染的单核巨噬细胞凋亡

目的研究人单核巨噬细胞株U937的90K/Mac-2BP基因沉默后其mRNA和蛋白水平的表达及其对HIV-1感染单核巨噬细胞凋亡的影响。方法用人单核巨噬细胞株U937作为细胞模型,用R5嗜性的HIV-1全长感染性质粒包装并获得HIV-1病毒,待HIV-1感染U937细胞5 d后,细胞经PE-Annexin V,PerCP-7-AAD染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用基因沉默技术,将U937细胞中的90K/Mac-2BP基因沉默后,再经HIV-1感染,5 d后检测细胞凋亡情况。结果正常人单核巨噬细胞株U937,经HIV-1感染后细胞凋亡率为(16.27±0.30)%,而90K/Mac-2BP基因沉默后的U937细胞,经HIV-1感染后细胞凋亡率分别增加至(31.26±0.35)%、(25.76±0.30)%、(23.69±0.33)%,具有统计学差异(P<0.05)。结论 90K/Mac-2BP的表达水平能调节HIV-1感染的单核巨噬细胞凋亡。

板蓝根多糖对内毒素诱导人单核/巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的研究板蓝根多糖(IIP)对内毒素诱导的人单核/巨噬细胞中多种炎症因子表达的影响。方法采用体外培养的人单核/巨噬细胞分为空白对照组(Control组)、内毒素(LPS)组、板蓝根多糖+LPS组(IIP+LPS组),以100ng/ml内毒素作为刺激因子,分别加以相应的干预。应用人炎症因子抗体芯片检测各组人单核/巨噬细胞中IL-1β、IL-6、IL-8和金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)等炎症因子表达的变化情况。结果与Control组比较,LPS组中IL-1β、IL-6、IL-8的表达增强,而IIP+LPS组中IL-1β、IL-8、TIMP-2的表达增强。与LPS组比较,IIP+LPS组的IL-1β、IL-6的表达降低,TIMP-2蛋白升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论板蓝根多糖对内毒素诱导的人单核/巨噬细胞多种炎症因子表达有调节作用。

黄芪多糖对内毒素诱导巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β及NO的影响

目的:观察不同浓度黄芪多糖对内毒素(LPS)诱导巨噬细胞产生炎症因子的影响。方法:培养人单核巨噬细胞系U937细胞,体外诱导成熟。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定LPS诱导的U937细胞上清液中炎性因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的含量。采用Griess试剂检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量。结果:与对照组相比,LPS作用于经PMA诱导成熟的U937细胞后,细胞上清液中TNF-α、IL-1β及NO的含量明显增加(P<0.01)。黄芪多糖作用后,TNF-α、IL-1β及NO的含量明显下降,与LPS组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:黄芪多糖能抑制LPS诱导的巨噬细胞产生TNF-α,IL-1β及NO。

黄芪多糖对内毒素诱导人单核/巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的：研究黄芪多糖对内毒素诱导的人单核/巨噬细胞中多种炎症因子表达的影响。方法：采用体外培养的人单核/巨噬细胞,以100ng/ml内毒素作为刺激因子,应用人炎症因子抗体芯片检测1mg/ml黄芪多糖处理后人单核/巨噬细胞中IL-1β、IL-6、IL-8和金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）等多种炎症因子表达的变化情况。结果：黄芪多糖可显著抑制内毒素诱导单核细胞分泌IL-1β和IL-6的活性,同时,促进TIMP-2蛋白表达。结论：黄芪多糖对内毒素诱导的人单核/巨噬细胞多种炎症因子表达有调节作用。

阿托伐他汀对THP-1源性巨噬细胞CD40及MMP-9的抑制作用

目的观察他汀类药物对人单核/巨噬细胞(THP-1细胞)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达是否存在抑制作用及其作用是否与CD40-CD40L信号通路有关,探讨他汀类药物可能的非调脂抗动脉粥样硬化机制。方法先加入不同浓度的阿托伐他汀(1.25μmol/L、2.50μmol/L、5.00μmol/L)作用1h,再向培养的THP-1细胞中加入氧化型低密度脂蛋白(80mg/L)共同孵育24h,分别运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测CD40及MMP-9mRNA,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定培养基的MMP-9浓度。结果阿托伐他汀抑制THP-1细胞CD40和MMP-9mRNA的表达,同时抑制MMP-9蛋白的表达(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论阿托伐他汀能抑制THP-1细胞CD40的表达以及MMP-9的表达和分泌,这种作用可能是他汀类药物减轻动脉粥样斑块炎症,防止斑块破裂的机制之一。

Ang-(1-7)对AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞MMP-9表达的影响

目的探讨血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)人单核/巨噬细胞(THP-1)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响及其机制。方法佛波酯(PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞后分为8组:对照组、Ang-(1-7)组、AngⅡ组、Ang-(1-7)+AngⅡ组、A-799+Ang-(1-7)+AngⅡ组,其中Ang-(1-7)+AngⅡ组根据Ang-(1-7)的浓度又分为10-8mol/LAng-(1-7)+AngⅡ组、10-7mol/LAng-(1-7)+AngⅡ组、10-6mol/LAng-(1-7)+AngⅡ组、10-5mol/LAng-(1-7)+AngⅡ组。用半定量RT-PCR检测细胞MMP-9mRNA表达的情况。结果AngⅡ干预后较对照组MMP-9mRNA显著增加(P<0.05);而Ang-(1-7)呈浓度依赖性减弱AngⅡ诱导的MMP-9mRNA表达(P<0.05);加入A-799后抑制作用明显减低(P<0.05)。结论Ang-(1-7)浓度依赖性地抑制AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞MMP-9mRNA表达,可能通过其特异性受体Mas来发挥作用。

厄贝沙坦对巨噬细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)基因及蛋白表达的影响

目的研究不同浓度厄贝沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人单核/巨噬细胞系(THP-1)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)mRNA和蛋白表达的影响,并探讨其可能的机制。方法 THP-1细胞经0.16μmoL/L佛波酯诱导分化后,将细胞分为3组:对照组、AngⅡ组、厄贝沙坦干预组,干预组分别加入不同浓度厄贝沙坦孵育2 h后,再加入AngⅡ1×10-6moL/L孵育24 h,用荧光定量PCR和细胞酶联免疫法检测(LOX-1)mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,Ang II可明显上调THP1细胞(LOX-1)mRNA和蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度厄贝沙坦均能抑制(LOX-1)蛋白表达(P<0.05),并且随着厄贝沙坦浓度降低,抑制作用减低,即两者呈浓度依赖性。结论厄贝沙坦以浓度依赖方式抑制AngⅡ诱导的THP1细胞(LOX-1)mRNA和蛋白表达,减少巨噬细胞通过(LOX-1)途径的氧化低密度脂蛋白(oxLDL)摄入,影响泡沫细胞的发生、发展,发挥其抗动脉粥样硬化(AS)作用。

细菌脂多糖诱导人单核细胞株对细菌脂蛋白的耐受性及其与肌动蛋白骨架关系

细菌脂多糖(LPS)可诱导宿主对LPS的耐受,但对细菌脂蛋白(BLP)是否存在交叉耐受,目前报道不一。采用人单核细胞株(THP-1),建立小剂量LPS诱导THP-1对LPS耐受的细胞模型;观察细胞肌动蛋白骨架、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度及NF-κB的DNA结合活力的变化情况;探讨BLP交叉耐受及细胞骨架在其中的作用。结果显示,THP-1细胞经小剂量(10ng/ml)LPS、大剂量(100ng/ml)LPS或BLP刺激后,细胞形态严重变形,肌动蛋白重组,细胞周边肌动蛋白丝带消失,出现明显的肌动蛋白收缩团块及伪足,细胞核内NF-κB的DNA结合活性显著升高,培养上清液中炎症因子(TNF-α、IL-1β及IL-6)的释放显著增加;而小剂量LPS预刺激12h后,再用大剂量的LPS或BLP刺激6h,上述指标明显改善;采用细胞骨架肌动蛋白聚集破坏剂鬼笔环肽预处理后的THP-1细胞,可取消由小剂量LPS诱导的自身耐受及对BLP的交叉耐受;可见,细菌LPS、BLP(100ng/ml)可诱导THP-1细胞肌动蛋白骨架的改变,激活NF-κB信号通路,诱导炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6过度释放,激活宿主炎症细胞的炎症反应;而小剂量LPS预刺激后可诱导出THP-1细胞对LPS的自身耐受和对BLP的交叉耐受;细胞骨架肌动蛋白参与了小剂量LPS诱导THP-1细胞对LPS自身耐受和对BLP交叉耐受的形成。

DFMG调节TLR4信号通路对氧化损伤的内皮细胞诱导巨噬细胞增殖的影响

目的 :观察7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀异黄素(DFMG)对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)诱导的THP-1(人单核细胞系)源性巨噬细胞(MΦ)增殖的影响及探索其可能的发生机制。方法 :制备溶血性磷脂酰胆碱(LPC)氧化损伤HUVE-12与MΦ共培养模型,浓度梯度DFMG、TLR4特异性拮抗剂(CLI-095)、TLR4特异性激动剂(LPS)干预LPC氧化损伤HUVE-12与MΦ共培养;MTT法观察MΦ的增殖;western blot检测HUVE-12 TLR4蛋白的表达水平。结果 :LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞增殖,DFMG抑制LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖,上调TLR4表达进一步促进LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖,下调TLR4表达抑制LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖。结论 :DFMG可能通过下调LPC氧化损伤HUVE-12的TLR4蛋白表达水平,抑制炎症反应,从而抑制巨噬细胞增殖。

名词解释

Th1和Th2细胞亚群（Th Cells Subsets） 根据分泌细胞因子的不同将Th细胞分为Th0、Th1和Th2细胞。Th0细胞是Th前体细胞,Th1细胞产生IL-2、IFN-γ和TNF-β;Th2细胞分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13。Th1和Th2细胞功能的差异与所分泌的细胞因子不同有关。Th1细胞促进细胞免疫应答,Th2

李斯特菌溶血素诱导THP-1细胞产生IL-1β的分子机制的研究

目的探讨李斯特菌溶血素LLO诱导THP-1细胞产生IL-1β的分子机制。方法将THP-1细胞随机分为Syk处理组、未处理组及阴性对照组。Western blot检测不同LM菌株感染巨噬细胞不同时相点Syk的磷酸化水平;免疫荧光法观察细胞内炎症复合体的关键蛋白组分ASC-speck的形成情况;实时荧光定量PCR法检测白细胞介素(IL)-1β表达。结果 WT和△hly∶∶hly菌株感染THP-1细胞0 min、15 min、30 min时,Syk磷酸化水平均较△hly明显升高;Syk处理组胞内ASC-speck阳性的细胞百分比明显低于未处理组(P<0.01),△hly菌株感染组的ASC-speck阳性细胞百分比也明显低于WT、hly菌株感染组(P<0.01);Syk处理组产生的IL-1β明显低于未处理组,并且△hly菌株感染THP-1细胞产生的IL-1β较WT和△hly∶∶hly LM感染组明显降低(P<0.05)。结论 Syk介导的信号通路参与调控LM感染过程中LLO介导的炎症复合体的形成。

二氧化硅刺激U937细胞介导VEGF-C生成对人淋巴内皮细胞管状结构形成的影响

[背景]课题组前期动物实验研究表明,二氧化硅(SiO2)诱导的矽肺大鼠早期肺组织中出现大量淋巴管生成,其对于清除肺内粉尘,缓解矽肺发病进程具有重要意义,但淋巴管生成的具体分子机制尚未明确。[目的]探究SiO2介导人单核巨噬细胞株U937产生血管内皮生长因子C(VEGF-C)对人淋巴内皮细胞(HLECs)管状结构形成的影响及作用机制。[方法]采用不同质量浓度(后称:浓度)(0、25、50、100、200 mg·L^-1)SiO2刺激U937细胞不同时间(12、24、48 h)。Western blotting检测U937细胞中VEGF-C蛋白水平,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF-C蛋白水平。选择VEGF-C蛋白表达水平最高的SiO2刺激浓度和时间,收集其细胞培养上清液作为条件培养基(CM)。HLECs分为阴性对照组、CM对照组、CM处理组、VEGF-C处理组。CM处理组采用SiO2刺激后的CM处理,VEGF-C处理组采用含质量浓度5000 ng·L^-1的人VEGF-C重组蛋白培养基处理,CM对照组采用未经SiO2刺激的细胞培养上清液处理,阴性对照组为常规培养。HLECs增殖能力实验,CM处理组采用体积分数为10%、50%和100%的CM处理细胞,培养24、48、72 h;迁移能力和管状结构形成能力实验均采用100%CM处理细胞,分别培养12 h和6 h。通过MTS法检测HLECs增殖能力,划痕实验和基质胶管形成实验检测细胞迁移和管状结构形成能力。[结果]与0 mg·L^-1组相比,SiO2浓度为50 mg·L^-1,刺激时间为24 h时,VEGF-C蛋白水平在U937细胞和细胞培养上清液中均最高[分别为(1.12±0.08)和(5464.00±231.21)ng·L^-1]。随着作用时间(24、48、72 h)的延长,CM浓度越大,HLECs的增殖能力越强,72 h时100%CM处理组的细胞增殖能力最强(2.00±0.13),与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);72 h时VEGF-C处理组HLECs的增殖能力增强(1.67±0.10),与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。CM处理组和VEGF-C处理组中HLECs迁移面积比[(53.64±4.74)%、(56.82±5.72)%]增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。CM处理组和VEGF-C处理组中HLECs的管腔数量(7.20±1.30、8.20±1.64)和管分枝数量(32.60±5.13、38.20±8.70)增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]SiO2可能通过介导人单核巨噬细胞株U937产生VEGF-C,从而促进HLECs的增殖、迁移及管状结构形成。

缺氧对内毒素耐受的THP-1细胞免疫功能的影响

目的观察缺氧对发生内毒素耐受(endotoxin tolerance,ET)的人单核巨噬细胞(human mononuclear macrophages,THP-1)免疫功能的影响并探讨其可能机制。方法THP-1细胞接受革兰氏阴性菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)一次打击后分为四组。空白组:去除干预因素后继续培养,缺氧组:在空白组基础上予以氯化钴(CoCl_(2))处理,对照组:在空白组基础上予以LPS二次打击以形成ET,实验组:在空白组基础上给与缺氧及LPS二次打击。收集各组细胞总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time-polymerase chain reaction,qPCR)检测白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、CD80、CD40、胶原结构巨噬细胞受体(macrophage receptor with collagenous structure,MARCO)及缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)。收集各组细胞上清液,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子IL-1β、IL-12、IL-10及TGF-β1表达;蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞因子CD80、CD40、MARCO及HIF-1_(α)蛋白表达。结果qPCR结果显示,与对照组相比,实验组IL-1β、IL-12、CD80及CD40转录上调(P<0.05);但IL-10、TGF-β1及MARCO的转录下调(P<0.05)。ELISA结果显示,与对照组相比,实验组IL-1β及IL-12分泌增加、IL-10及TGF-β1减少(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,实验组CD80及CD40蛋白表达增加、MARCO蛋白表达减少(P<0.05)。与空白组和缺氧组相比,实验组及对照组的HIF-1_(α)基因转录及蛋白表达均增加(P<0.05);但与对照组相比,实验组HIF-1_(α)基因转录及蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论缺氧可破坏LPS诱导的THP-1细胞ET状态,从而加重炎症反应,该现象可能未通过影响HIF-1_(α)而实现。

卵巢癌细胞株SKOV3对THP-1细胞TLR信号通路的作用

卵巢癌是目前死亡率最高的妇科生殖道肿瘤,Toll样受体在组织损伤修复、组织损伤诱导炎症及肿瘤进展中发挥重要作用,其中单核-巨噬细胞中的TLR在炎症与肿瘤间发挥桥梁作用。本研究利用THP-1和卵巢癌细胞系SK-OV-3共培养体系及抗TLR1、TLR2、TLR6抗体中和实验,荧光定量PCR法检测细胞中促炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)mRNA表达水平;利用western blot检测MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB和P-NF-κB的表达水平。结果显示THP-1与SK-OV-3共培养组较单独培养组,TLR信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK及P-NF-κB表达上调,IL-1β、IL-8及TNF-α促炎症细胞因子的mRNA表达水平显著增加(Fold=4.27,Fold=4.92,Fold=3.08,P<0.05),而IL-6 mRNA表达水平无显著改变。抗体中和实验显示,anti-TLR1/anti-TLR2/anti-TLR6处理组THP-1中促炎症细胞因子IL-1β(Fold=0.43,Fold=0.38,Fold=0.44)、IL-8(Fold=0.43,Fold=0.48,Fold=0.42)、TNF-a(Fold=0.23,Fold=0.21,Fold=0.23)mRNA表达水平较未加单抗共培养组显著下调,差异有统计学意义(P<0.05);IL-6 mRNA表达水平则无显著改变。anti-TLR1/anti-TLR2/anti-TLR6处理组TLR信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB、P-NF-κB表达水平较未加单抗共培养组下调。以上结果提示卵巢癌生长微环境中,TLR1/TLR2/TLR6介导的信号通路活化可诱导THP-1中促炎症细胞因子表达上调,在卵巢癌的发生、发展中发挥一定作用。