人单核细胞株巨细胞病毒编码miR-US25-1-3p过表达后蛋白质组学变化分析

目的分析人单核细胞株(THP-1)过表达人巨细胞病毒(HCMV)编码miR-US25-1-3p后蛋白质表达谱变化及价值。方法采用脂质体将hcmv-miR-US25-1-3p模拟物转染THP-1细胞构建hcmv-miR-US25-1-3p过表达细胞株,RT-qPCR验证转染效果;采用串联质谱标签标记联合液相色谱-串联质谱对hcmv-miR-US25-1-3p过表达后THP-1细胞蛋白质组学进行定量分析,生物信息学分析差异表达蛋白质生理病理功能;westernblot验证重要差异蛋白表达变化。结果与对照相比,THP-1细胞过表达hcmV-miR-US25-1-3p后65种蛋白质呈现差异表达,其中17种上调,48种下调。GO、COG和KEGG注释及功能预测结果显示,差异表达蛋白主要参与炎症反应信号通路、代谢过程、细胞及遗传信息功能,与肿瘤、病毒性心肌炎、非酒精性脂肪肝、原发性免疫缺陷病、类风湿关节炎、多种病原体感染、阿尔茨海默病、亨廷顿病等多种疾病相关。48种下调蛋白质中,文献调研和生物信息学分析发现,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)参与抗病毒及炎症反应,上述蛋白质下调表达经western blot验证。结论HCMV编码的hcmv-miR-US25-1-3p能够影响宿主蛋白表达谱,并可能通过抑制TRAIL和RANTES表达,促进病毒潜伏、免于宿主细胞杀伤。

miR-146b对人单核细胞株THP-1细胞COX2表达的影响及可能机制

目的探讨微小RNA-146b(miR-146b)对人单核细胞株(THP-1)细胞p38分裂素原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。方法血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激THP-1建立细胞模型,慢病毒感染pre-miR-146b-3p或anti-miR-146b-3p进入THP-1细胞中,检测p38MAPK与环氧化酶2(COX2)表达的变化。转入p38MAPK siRNA,检测p38MAPK与COX2表达的变化。结果 AngⅡ刺激THP-1细胞p38MAPK与COX2表达升高,pre-miR-146b-3p可以放大这种增高效应,当转染p38MAPK siRNA后,能逆转pre-miR-146b-3p升高COX2的趋势(P<0.01)。结论在AngⅡ刺激的THP-1细胞中,miR-146b可能通过p38MAPK调控COX2表达水平,在心血管疾病的诊治中发挥重要作用。

干扰素诱导人单核细胞株U937分化化学发光测定和NBT还原率检测

本文通过化学发光技术(CL)和NBT还原试验来观察干扰素和维甲类衍生物诱导人单核细胞株U937功能成熟现象发现(1)γ-干扰素使CL和NBT还原率上升,在一定范围内(10~3～10～4u/ml)CL值和NBT还原率随浓度的上升而上升,当浓度10~5u/ml时反而有所下降。(2)γ-干扰素诱导作用大于α-干扰素。(3)γ-干扰素和维甲酸衍生物联合诱导U937无协同作用。

乌索酸诱导人单核细胞白血病细胞株THP-1分化的研究

乌索酸是一种常见的五环三萜类化合物,本文考察了其对原单核白血病细胞株THP-1的分化诱导作用。乌索酸作用72h后,通过显微镜形态观察,部分THP-1细胞贴壁生长,形态具有向巨噬细胞分化的特征。结晶紫染色结果显示细胞贴壁程度呈剂量依赖型增长。利用流式细胞分析技术分化标志物,发现CD11b和CD14阳性细胞百分比均有显著上调。Western blotting结果表明乌索酸能上调分化相关蛋白C/EBPα的p42亚基并且下调分化负调控因子c-myc的蛋白水平,且对二者的表达调控作用具有浓度和时间相关性。因此,乌索酸能够诱导THP-1细胞向单核/巨噬细胞方向分化。其作用机制可能是上调C/EBPα的p42亚基,进而下调c-myc,从而达到分化诱导作用。

氧化低密度脂蛋白致损人单核细胞白血病细胞株源性巨噬细胞Notch信号的表达

目的研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)致损人单核细胞白血病细胞株(THP1)源巨噬细胞Notch信号的表达,探讨Notch信号各成分对动脉粥样硬化(AS)发病的可能作用。方法用不同浓度的ox-LDL刺激THP1源巨噬细胞,在不同时间分别应用实时定量聚合酶链式反应及蛋白免疫印迹检测Notch信号通路受体配体的差异表达。结果与对照组比较,加入ox-LDL后,THP1源巨噬细胞四种受体中Notch1表达明显升高(P<0.05),五种配体中DlL4和Jagged1表达明显升高(P<0.05);Notch1、DlL4和Jagged1升高的作用在ox-LDL浓度为50 mg/L 6 h点作用最强。结论 ox-LDL致损THP1源巨噬细胞参与AS的发生与Notch1,DlL4和Jagged1高表达有关。

90 K／Mac-2 BP 基因沉默增强 HIV-1感染的单核巨噬细胞凋亡

目的研究人单核巨噬细胞株U937的90K/Mac-2BP基因沉默后其mRNA和蛋白水平的表达及其对HIV-1感染单核巨噬细胞凋亡的影响。方法用人单核巨噬细胞株U937作为细胞模型,用R5嗜性的HIV-1全长感染性质粒包装并获得HIV-1病毒,待HIV-1感染U937细胞5 d后,细胞经PE-Annexin V,PerCP-7-AAD染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用基因沉默技术,将U937细胞中的90K/Mac-2BP基因沉默后,再经HIV-1感染,5 d后检测细胞凋亡情况。结果正常人单核巨噬细胞株U937,经HIV-1感染后细胞凋亡率为(16.27±0.30)%,而90K/Mac-2BP基因沉默后的U937细胞,经HIV-1感染后细胞凋亡率分别增加至(31.26±0.35)%、(25.76±0.30)%、(23.69±0.33)%,具有统计学差异(P<0.05)。结论 90K/Mac-2BP的表达水平能调节HIV-1感染的单核巨噬细胞凋亡。

抑制HO-1表达对GLU和AGEs刺激下THP-1细胞氧化应激的影响研究

目的探讨抑制血红素加氧酶1(HO-1)表达对高糖(GLU)和糖基化终产物(AGEs)刺激下人单核细胞株(THP-1)氧化应激的影响。方法将THP-1细胞分为三组培养,包括对照组、GLU+AGEs组(含15 mmol/L的GLU和100 g/m L的AGEs的培养液)、Zn PP(锌原卟啉)+GLU+AGEs组(先予20 mol/L Zn PP预处理30 min后再以15 mmol/L的GLU和100 g/m L的AGEs刺激),检测各组肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛(MDA)和细胞活性氧(ROS)水平以及HO-1 mRNA和蛋白表达。结果 GLU+AGEs组ROS、MDA和TNF-α水平分别为(101.28±8.67)MFI、(3.17±0.58)nmol/m L和(40.28±10.67)pg/m L,明显高于对照组(P<0.05);Zn PP+GLU+AGEs组ROS、MDA和TNF-α水平分别为(122.47±9.11)MFI、(3.84±0.78)nmol/m L和(132.27±11.09)pg/m L,明显高于GLU+AGEs组和对照组(P<0.05);GLU+AGEs组和Zn PP+GLU+AGEs组HO-1 mRNA表达量明显高于对照组(P<0.05),其中Zn PP+GLU+AGEs组HO-1 mRNA表达量低于GLU+AGEs组(P<0.05);GLU+AGEs组和Zn PP+GLU+AGEs组HO-1蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05),其中Zn PP+GLU+AGEs组HO-1蛋白表达量低于GLU+AGEs组(P<0.05)。结论高糖和AGEs可引起THP-1细胞氧化损伤和HO-1表达增高,而抑制HO-1表达可进一步加剧高糖和AGEs引起的细胞氧化损伤。

普罗布考对实验性大鼠急性痛风性关节炎的防治

目的探讨普罗布考防治痛风性关节炎的可行性及机制。方法于大鼠单侧踝关节腔内注射尿酸钠晶体建立急性痛风性关节炎模型,观察普罗布考干预后关节炎症、肿胀指数及关节液白细胞计数和白细胞介素1β的变化。用尿酸盐晶体刺激人单核细胞,普罗布考干预18h后检测培养液中白细胞介素1β的浓度。结果普罗布考各剂量组关节炎症肿胀指数下降幅度由低剂量向高剂量依次增加,与模型组比较,72h时中高剂量组下降程度较明显(P<0.05),关节液白细胞计数和白细胞介素1β的含量均有不同程度的下降。普罗布考中高剂量组关节液白细胞计数较模型组下降明显(P<0.01,P<0.001),普罗布考高剂量组白细胞介素1β较模型组下降明显(P<0.05)。普罗布考各剂量组对单核细胞分泌白细胞介素1β无抑制作用。结论中高剂量的普罗布考可以有效的控制大鼠急性痛风性关节炎的发作,其疗效具有一定的剂量依赖性,但其不是通过直接抑制单核细胞摄取尿酸盐晶体分泌白细胞介素1β来起作用。

卵巢癌细胞株SKOV3对THP-1细胞TLR信号通路的作用

卵巢癌是目前死亡率最高的妇科生殖道肿瘤,Toll样受体在组织损伤修复、组织损伤诱导炎症及肿瘤进展中发挥重要作用,其中单核-巨噬细胞中的TLR在炎症与肿瘤间发挥桥梁作用。本研究利用THP-1和卵巢癌细胞系SK-OV-3共培养体系及抗TLR1、TLR2、TLR6抗体中和实验,荧光定量PCR法检测细胞中促炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)mRNA表达水平;利用western blot检测MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB和P-NF-κB的表达水平。结果显示THP-1与SK-OV-3共培养组较单独培养组,TLR信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK及P-NF-κB表达上调,IL-1β、IL-8及TNF-α促炎症细胞因子的mRNA表达水平显著增加(Fold=4.27,Fold=4.92,Fold=3.08,P<0.05),而IL-6 mRNA表达水平无显著改变。抗体中和实验显示,anti-TLR1/anti-TLR2/anti-TLR6处理组THP-1中促炎症细胞因子IL-1β(Fold=0.43,Fold=0.38,Fold=0.44)、IL-8(Fold=0.43,Fold=0.48,Fold=0.42)、TNF-a(Fold=0.23,Fold=0.21,Fold=0.23)mRNA表达水平较未加单抗共培养组显著下调,差异有统计学意义(P<0.05);IL-6 mRNA表达水平则无显著改变。anti-TLR1/anti-TLR2/anti-TLR6处理组TLR信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB、P-NF-κB表达水平较未加单抗共培养组下调。以上结果提示卵巢癌生长微环境中,TLR1/TLR2/TLR6介导的信号通路活化可诱导THP-1中促炎症细胞因子表达上调,在卵巢癌的发生、发展中发挥一定作用。

回阳生肌方不同拆方对巨噬细胞表型转化的调节作用

目的观察回阳生肌方的拆方(益气温阳方、活血通络方)对巨噬细胞表型转化的影响。方法人单核细胞株(THP-1)细胞用佛波醇酯类多克隆刺激剂(PMA)刺激成巨噬细胞后,加入脂多糖(LPS)、γ-干扰素(INF-γ)刺激48 h,转化为M1型巨噬细胞。洛伐他汀(40.50 mg/L)作为阳性对照药物;采用CCK-8方法观察益气温阳方、活血通络方对巨噬细胞活性的影响;以中性红法检测其对巨噬细胞吞噬功能的影响。M1型巨噬细胞加入洛伐他汀、益气温阳方、活血通络方24 h后,PCR法检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)mRNA、精氨酸酶1(Arg-1)mRNA的表达;CBA法检测上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-10(IL-10)和生长因子(VEGF)的含量;ELISA法检测上清液中转化生长因子β(TGF-β)的含量。结果益气温阳方在浓度4、0.8、0.16 mg/L时、活血通络方在浓度32、6.4、1.28 mg/L时对巨噬细胞增殖无影响,但可促进巨噬细胞对中性红的吞噬,分别作为益气温阳方、活血通络方的高、中、低浓度。加入LPS、INF-γ后,M1型巨噬细胞标志物i NOS mRNA显著升高,而加入洛伐他汀、益气温阳方及活血通络方后显著降低(P<0.01);M2型巨噬细胞标志物Arg-1 mRNA表达相对于正常组显著降低,而洛伐他汀、益气温阳方和活血通络方都明显促进Arg-1 mRNA表达(P<0.01),但益气温阳方、活血通络方与洛伐他汀相比,Arg-1 mRNA表达显著降低。以上药物作用M1型巨噬细胞细胞24 h后,TNF-α、IL-6、IL-1含量显著降低,VEGF、TGF-β含量显著升高,益气温阳方高浓度使IL-10含量显著升高(P<0.05)。与洛伐他汀相比,活血通络方和益气温阳方高浓度组VEGF、TGF-β差异有统计学意义(P<0.05)。结论益气温阳方和活血通络方均在一定程度上抑制M1型巨噬细胞标志物i NOS mRNA表达和诱导M2型巨噬细胞标志物Arg-1 mRNA的表达,并且可抑制M1型巨噬细胞因子的分泌,促进M2型巨噬细胞因子的分泌。