白细胞介素-12家族在缺血性脑卒中发生发展中的作用机制研究

目前研究表明炎症反应和免疫功能异常对缺血性脑卒中的发生发展起重要作用,发现白细胞介素(IL)-12家族参与多种慢性炎症性疾病,对动脉硬化形成起关键作用,其可增强免疫反应和(或)抑制免疫功能。本文对IL-12家族的细胞因子在缺血性脑卒中中的作用现状进行简述,可能为缺血性脑卒中患者的预后判断和治疗方面提供新的参考。

白细胞介素-12促进氧化应激参与干燥综合征肝脏病变

目的:探讨白细胞介素-12(IL-12)对干燥综合征小鼠肝脏病变及氧化应激通路的影响,阐明干燥综合征肝脏病变的可能机制。方法:分别检测NOD、IL-12基因敲除(IL-12KO)NOD和C57BL/6(B6)小鼠的唾液流率、肝功能、肝脏病理、IL-12水平等。取不同浓度IL-12及JAK2、TYK2抑制剂作用于小鼠肝癌细胞。测定各组小鼠血清及细胞培养上清的氧化应激指标。结果:与其他两组小鼠相比,NOD小鼠GOT和GPT显著升高(P<0.05),血清GSH-PX、SOD和CAT降低(P<0.05)。不同浓度IL-12处理后,小鼠肝癌细胞CAT、GSH、GSH-PX和SOD有下降趋势,MDA增加。JAK2/TYK2抑制剂能逆转IL-12对肝癌细胞SOD、GSH和MDA的调节(P<0.05)。结论:IL-12可能通过促进干燥综合征肝脏细胞的氧化应激,进而参与干燥综合征肝脏病变过程。

双氢青蒿素对脑胶质瘤小鼠血清白细胞介素-10和白细胞介素-12表达的影响

目的:探讨双氢青蒿素是否能调节脑胶质瘤小鼠血清中白细胞介素-10(IL-10)与白细胞介素-12(IL-12)的表达及其作用机制,讨论双氢青蒿素潜在的药物价值。方法:应用C6胶质瘤干细胞立体定向法构建脑胶质瘤小鼠模型,并用双氢青蒿素干预,分为对照组、模型组、双氢青蒿素低剂量组和双氢青蒿素高剂量组,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测各组小鼠血清IL-10和IL-12水平。结果:与正常组相比,模型组的血清中IL-10和IL-12的含量均显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,双氢青蒿素低剂量组血清中IL-10和IL-12的水平均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),双氢青蒿素高剂量组小鼠血清中的IL-10和IL-12的水平也明显下降,且下降程度比双氢青蒿素低剂量组的更为突出。结论:双氢青蒿素能降低由立体定向法建立的脑胶质瘤小鼠血清IL-10、IL-12的表达水平,双氢青蒿素可能通过某些信号通路来调控血清中IL-10、IL-12,进而影响脑胶质瘤的免疫反应或炎性反应情况,使得脑胶质瘤的症状减轻。

子痫前期患者血清白细胞介素-12、基质细胞衍生因子-1的表达及其与不良妊娠结局的相关性

目的观察子痫前期患者血清白细胞介素-12(IL-12)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的表达,并分析二者与不良妊娠结局的相关性。方法前瞻性纳入2019年6月至2021年6月南阳市中心医院收治的96例子痫前期患者作为研究对象,所有患者均随访至分娩结束后30 d,根据本次妊娠最终是否发生不良妊娠结局分组,全部患者于入院时检测血清IL-12、SDF-1水平,以点二列分析子痫前期患者血清IL-12、SDF-1水平与不良妊娠结局的相关性。结果96例子痫前期患者中无失访病例,随访至产后30 d,其中发生不良妊娠结局患者25例,占比为26.04%;发生组子痫前期患者血清IL-12、SDF-1水平高于未发生组,差异有统计学意义(P<0.05);经点二列相关性检验,结果显示,子痫前期患者血清IL-12、SDF-1水平与不良妊娠结局呈正相关(r=0.640、0.656,P<0.001);经logistic回归分析,结果显示,高血清IL-12水平、高SDF-1水平是不良妊娠结局的风险因子(OR>1,P<0.05)。结论子痫前期患者血清IL-12、SDF-1水平可能与不良妊娠结局存在一定关系,且高血清IL-12、高SDF-1水平子痫前期患者不良妊娠结局发生风险较高。

子痫前期患者血清白细胞介素-12、胎盘生长因子表达及其与胎盘早剥的关系

目的 观察子痫前期患者血清白细胞介素-12(IL-12)、胎盘生长因子(PLGF)的表达,分析其与胎盘早剥(PA)的关系。方法 选择2018年2月至2020年2月郑州人民医院收治的395例子痫前期患者作为研究对象,入院时测定血清IL-12、PLGF水平,随访至分娩,统计PA发生情况,比较两组一般资料与实验室指标水平,分析血清IL-12、PLGF水平与子痫前期患者PA的关系。结果 本研究395例子痫前期患者中,19例发生PA,PA发生率为4.81%(19/395);发生PA的患者子痫前期程度重于无PA的患者,入院时舒张压水平、血清IL-12水平高于无PA的患者,入院时血清PLGF水平低于无PA的患者(P<0.05);经logistic回归分析检验,结果显示,入院时舒张压、IL-12、PLGF与子痫前期患者发生PA有关(P<0.05);森林图显示,在子痫前期患者PA相关因素中,入院时IL-12水平与PA的关联度最强;绘制受试者工作特征(ROC)曲线发现,入院时血清IL-12、PLGF水平预测子痫前期患者PA风险的曲线下面积(AUC)分别为0.896、0.875,AUC均>0.80,有一定预测价值;绘制决策曲线分析(DCA)曲线,结果显示,最大净受益率为0.048,在阈值0~0.72范围内,入院时血清IL-12、PLGF联合预测子痫前期患者PA的净受益率优于单纯某一指标。结论 子痫前期患者血清IL-12表达越高或血清PLGF表达越低时,PA风险越高,入院时血清IL-12、PLGF水平预测子痫前期患者PA具有一定的价值。

白细胞介素-12 通过抑制STAT3 途径调控非小细胞肺癌细胞生物学行为及免疫逃逸因子分泌的研究

目的探索白细胞介素-12(IL-12)对非小细胞肺癌细胞生物学行为及免疫逃逸因子分泌的影响。方法收集126例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁正常组织,通过实时定量PCR检测IL-12、STAT3 mRNA的表达水平。构建人肺腺癌A549细胞模型,分为空白对照组、腺病毒对照组、IL-12腺病毒组、质粒对照组、STAT3质粒组、IL-12与STAT3共转染组。比较各组细胞增殖及凋亡情况,采用ELISA法检测细胞培养液中IL-2、INF-γ、TNF-α的分泌量,采用Western blot法检测IL-12、STAT3、pSTAT3蛋白表达水平。结果肺癌组织较癌旁组织IL-12 mRNA表达量降低、STAT3 mRNA表达量增高。IL-12腺病毒组较各对照组细胞增殖及活力降低、凋亡增加。STAT3质粒组细胞增殖及凋亡结果则与之相反。IL-12、STAT3共转染组细胞增殖、活力以及凋亡情况介于IL-12腺病毒组与STAT3质粒组之间。此外,IL-12腺病毒组细胞培养液中IL-12、TNF-α、IFN-γ含量明显高于STAT3质粒组,而STAT3质粒组STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著高于在IL-12腺病毒组。结论IL-12对非小细胞肺癌细胞具有抑制增殖、降低活力及诱导凋亡的能力,其作用机制可能通过抑制STAT3途径以及免疫逃逸而实现。

重组人单链白细胞介素12融合基因(rhscIL-12)的构建和真核表达

克隆人 IL - 1 2 ( h IL - 1 2 ) p40和 p35亚单位 c DNA,构建人单链 IL- 1 2 ( rhsc IL- 1 2 )融合基因 ,并在哺乳动物细胞中进行表达。方法 从经 PDBu刺激的 EBV转化的人 B淋巴母细胞株 NC37中提取 m RNA,经 RT- PCR分别获得 h IL- 1 2 p40和 p35亚单位编码序列的 c DNA,运用重组 PCR技术将两段基因通过一疏水性多肽接头 ( Gly4 Ser) 3 DNA序列进行体外基因重组 ,构建 rhsc IL- 1 2融合基因 ,将其插入 pc DNA3.1 ( + )真核表达载体 ,经脂质体转染 COS7细胞进行表达 ,Western blot进行分析。结果 所克隆的 h IL- 1 2 p40、p35c DNA序列和构建的 rhsc IL - 1 2融合基因 DNA序列均经测序得以证实 ,融合基因可在 COS7中表达其产物 rhsc IL- 1 2融合蛋白 ,其分子量为 70 KD,可与鼠抗人 IL - 1 2 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论 本研究结果为进一步探讨 rhsc IL- 1 2融合蛋白的生物学活性和特性奠定了基础 ,也为 rhsc IL- 1

血清白细胞介素-12、转化生长因子-β与急性白血病患者化疗效果的关系

目的 观察血清白细胞介素-12(IL-12)、转化生长因子-β(TGF-β)在急性白血病(AL)化疗患者中的水平变化,探讨血清IL-12、TGF-β与AL患者化疗效果的关系。方法 本研究采用前瞻性研究方法,纳入2019年2月至2021年2月在信阳市中心医院接受治疗的175例急性髓系白血病患者,剔除7例,最终纳入168例患者。化疗前采用全自动生化分析仪检测患者血清IL-12、TGF-β水平,给予患者标准诱导方案(柔红霉素联合阿糖胞苷)治疗1个疗程,治疗后评价患者化疗效果,根据化疗效果分为两组(缓解组、未缓解组),比较两组患者性别、年龄、白细胞计数等资料及血清IL-12、TGF-β水平,重点分析血清IL-12、TGF-β与AL患者化疗效果的关系。结果 168例AL患者治疗1个疗程后,完全缓解25例(14.88%),部分缓解90例(53.57%),治疗失败39例(23.21%),复发14例(8.33%);未缓解组血清IL-12水平低于缓解组,血清TGF-β水平高于缓解组(P<0.05);对比两组性别、年龄等资料,差异无统计学意义(P>0.05);点二列相关性分析显示,血清IL-12、TGF-β与AL患者化疗效果相关(P<0.05);logistic回归分析显示,血清IL-12、TGF-β与AL患者化疗效果有关(P<0.05)。结论 血清IL-12、TGF-β与AL患者化疗效果存在相关性。

黄芪对哮喘大鼠模型支气管肺泡灌洗液白细胞介素-4、-12表达的影响

目的研究哮喘大鼠模型支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞介素-4(IL-4)和IL-12水平变化及黄芪对其影响。方法雄性SD大鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组和黄芪组(AM组)。以卵蛋白(OVA)致敏激发法制备大鼠哮喘模型。对BALF进行嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-4-、12水平。结果1.哮喘组BALF细胞总数、EOS绝对值和EOS占细胞总数百分比(EOS%)均高于对照组(P均<0.01),AM组上述指标均低于哮喘组(P均<0.01);2.BALF中IL-4水平哮喘组显著高于对照组(P<0.01),AM组显著低于哮喘组(P<0.01);3.IL-12水平哮喘组显著低于对照组(P<0.01),AM组显著高于哮喘组(P<0.01)。结论IL-4高表达I、L-12低表达参与哮喘的病理生理过程;黄芪下调IL-4、上调IL-12表达水平,可能为其抑制哮喘呼吸道炎症的重要作用机制之一。

支气管哮喘患儿急性发作期血清白细胞介素-25、12的变化及其意义

目的探讨哮喘患儿急性发作期血清IL-25、12水平变化及其在哮喘发病中的作用。方法随机选取于本院就诊的哮喘急性发作期患儿30例作为观察组。男20例,女10例;年龄4～13岁;发作程度:轻度8例,中度17例,重度5例。随机选取同期同年龄组健康体检儿童27例作为健康对照组。男18例,女9例;年龄4～14岁。二组年龄及性别均无统计学差异(Pa>0.05)。分别抽取各组儿童静脉血4mL,离心后留取血清标本置-70℃冰箱保存,采用ELISA法测定二组儿童血清IL-25、12水平。结果哮喘急性发作期患儿血清IL-25水平[(56.75±11.68)ng/L]显著高于健康对照组[(45.77±10.43)ng/L],差异有统计学意义(t=3.726P<0.05);哮喘急性发作期患儿血清IL-12水平[(42.12±12.96)ng/L]显著低于健康对照组[(57.12±14.42)ng/L],差异有统计学意义(t=-4.136P<0.05);血清IL-25水平与IL-12水平呈显著负相关(r=-0.420P<0.01)。结论哮喘患儿急性发作期血清IL-25水平升高和IL-12水平降低与哮喘的发作关系密切。增强IL-2的活性,可为哮喘的治疗提供新的靶点与理论依据。

卵泡液中白细胞介素2、白细胞介素12、白细胞介素18与体外受精-胚胎移植妊娠结局的相关性

目的探讨卵泡液中细胞因子白细胞介素2(IL-2)、IL-12、IL-18与体外受精-胚胎移植妊娠结局的关系。方法接受体外受精-胚胎移植助孕治疗的妇女117例,其中妊娠妇女59例,未妊娠妇女58例,应用酶联免疫吸附试验检测卵泡液中IL-2、IL-12、IL-18的浓度。结果妊娠组卵泡液中IL-2的浓度为(36.73±18.53)pg/ml、IL-12的浓度为(0.52±0.88)pg/ml、IL-18的浓度为(76.10±69.06)pg/ml;未妊娠组卵泡液中IL-2的浓度为(40.89±22.83)pg/ml、IL-12的浓度为(1.59±1.58)pg/ml、IL-18的浓度为(131.80±162.35)pg/ml。未妊娠组IL-12和IL-18浓度均明显高于妊娠组(P<0.05),未妊娠组IL-2浓度虽较妊娠组升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-12、IL-18在接受体外受精-胚胎移植助孕治疗的非妊娠妇女中明显升高,考虑与体外受精-胚胎移植妊娠结局负相关。

老年慢性支气管哮喘患者血清白细胞介素-12、-18和-35的表达

目的检测老年慢性支气管哮喘患者血清中白细胞介素(IL)-12、-18和-35的水平,探讨其临床意义。方法确诊为支气管哮喘的老年患者62例作为观察组,21例健康成人血清标本作为对照组,检测两组血清中IL-12、IL-18和IL-35的表达水平。结果两组血清中IL-12、IL-18和IL-35的表达差异显著,观察组中IL-12、IL-18和IL-35的表达与病变的不同阶段相关,观察组中IL-12和IL-18具有正相关性,而其他指标间未见明显相关性。结论老年慢性支气管哮喘患者血清中IL-12、IL-18高表达、IL-35低表达与病变的形成和发展阶段有关。

应用重组PCR技术构建人单链白细胞介素12融合基因

目的构建人单链白细胞介素 12 (hsc IL- 12 )融合基因并在真核细胞中进行表达 ,为进一步研究 hsc IL- 12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法应用重组 PCR技术将 h IL - 12 p40和 p35亚单位两段编码序列的 c DNA通过一疏水性多肽接头 (Gly4Ser) 3碱基序列进行前后拼接 (IL- 12 p40 -多肽接头 - p35 ) ,构建 hsc IL- 12融合基因 ,并进行核苷酸序列测定 ,进一步将 hsc IL - 12融合基因插入 pc DNA3.1真核表达载体中 ,转染 COS- 7细胞表达 hsc IL - 12融合蛋白 ,并行 Western blot分析。结果该融合基因经 DNA序列分析表明 :p40、p35、linker的连接顺序、方向及序列完全正确 ,融合基因可在 COS- 7细胞中表达hsc IL- 12融合蛋白。Western blot显示该融合蛋白分子量为 70 0 0 0 u,可与鼠抗人 IL- 12 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论重组 PCR技术是十分有效。

乙型肝炎病毒C基因启动子变异与白细胞介素10与12、肿瘤坏死因子α、γ-干扰素及病毒含量的关系

目的探讨慢性肝病患者乙型肝炎病毒C基因启动子变异(HBV BCP)与血清白细胞介素10(IL-10)、12(IL-12)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)及病毒含量(HBV DNA)的关系。方法采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对176例HBV慢性感染者(慢性乙型病毒性肝炎轻、中、重度,肝炎肝硬化,慢性重型肝炎和原发性肝癌)血清进行检测HBV BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764碱基G→A联合突变;采用双抗体夹心ELISA检测技术,检测患者血清细胞因子(IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ)水平。结果HBVBCP变异阳性组、阴性组间对细胞因子(IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ)及HBV DNA复制水平的影响差异有统计学意义(P<0.05),BCP变异阳性组的血清IL-10(80.96±30.86vs72.11±24.19 mg/L)I、L-12(41.33±15.10vs35.98±14.47 mg/L)、TNF-α(56.04±27.05vs38.01±10.49 mg/L)、IFN-γ(19.81±12.29vs16.55±8.99mg/L)和HBV DNA(108.2478±0.9826vs105.8876±1.4822拷贝/ml)的水平明显高于BCP变异阴性组。结论HBV BCP变异可导致血清IL-10I、L-12、TNF-α、IFN-γ和病毒复制水平增高。

矽肺患者血清白细胞介素-12和γ-干扰素水平变化

目的探讨矽肺患者血清白细胞介素-12（IL-12）和γ-干扰素（IFN-γ）水平变化。方法用酶联免疫吸附双抗体夹心法检测45例矽肺患者、34例具有相同接尘史但未患矽肺的井下工人及32例井上健康人血清IL-12和IFN-γ含量。结果与对照组比较，矽肺组患者血清IL-12水平明显增高（P〈0．01），IFN-γ明显降低（P〈0．01）。与接尘工龄低于20年的矽肺患者比较，20～30年和高于30年2组矽肺患者IL-12和IFN-1水平均明显降低，差异具有统计学意叉（P〈0．01和P〈0．05）。随矽肺患者年龄增加，IL-12和IFN-γ水平明显降低（P〈0．01）。Ⅱ和Ⅲ期矽肺患者血清IL-12和IFN-γ水平均高于Ⅰ期，两组比较其差异均具有统计学意义（P〈0．01和P〈0．05）。井下接尘工人IL-12和IFN-γ水平与矽尘接触工龄、年龄均无关（P〉0．05）。结论IL-12和IFN-γ协同参与矽肺发生和发展过程，且与其严重程度有关。血清IL-12和IFN-γ检测可能对矽肺早期诊断、疗效观察及病情监测有一定价值。

白细胞介素-12在日本血吸虫脂肪酸结合蛋白诱导小鼠保护性免疫力中的佐剂作用

目的研究白细胞介素-12(IL-12)对日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Sj14FABP)DNA疫苗的免疫增强效果。方法分别构建pVIVO2-Sj14FABP和pVIVO2-IL12-Sj14FABP疫苗,鉴定构建成功后免疫小鼠。48只雄性BALB/c小鼠随机分为A、B、C和D等4组,分别用0.9%NaCl(对照组)、pVIVO2、pVIVO2-Sj14FABP和pVIVO2-IL12-Sj14FABP肌注免疫1次(100μg/只)。免疫后30d各组小鼠感染40±2条尾蚴,感染后45d剖杀,计数成虫及肝内虫卵;同时用ELISA法检测小鼠血清中IgG抗体水平,用双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经伴刀豆球蛋白A(ConA)和可溶性虫卵抗原(SEA)刺激后培养上清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)含量。结果经PCR和酶切鉴定,成功构建pVIVO2-Sj14FABP和pVIVO2-IL12-Sj14FABP重组质粒;C、D组免疫后分别获得24.1%和39.4%的减虫率、27.2%和32.8%的减卵率;细胞因子检测结果,D组经ConA和SEA诱生的IL-2和IFN-γ水平显著增高(P<0.01),而IL-4水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);免疫后30d小鼠血清IgG水平无明显升高,各实验组间差异也无统计学意义(P>0.05)。结论Sj14FABPDNA疫苗可诱导BALB/c小鼠产生部分抗血吸虫感染保护作用,细胞因子IL-12能够诱导机体免疫反应向Th1型优势分化,并增强血吸虫病DNA疫苗免疫保护性效果。

弥散性毒性甲状腺肿患儿血清白细胞介素-10、12水平变化的意义

目的观察弥散性毒性甲状腺肿(GD)儿童在疾病不同阶段血清IL-10、12水平变化的临床意义。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定GD患儿疾病不同阶段(新发病、治疗未缓解、治疗缓解3个阶段)血清IL-10、12水平。检测游离T3、T4(FT3、FT4),敏感TSH(sTSH),甲状腺微粒体抗体(TMAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺受体抗体(TRAb)、甲状腺刺激抗体(TSI)水平并分析其间的关系。结果IL-10、12在GD新发病组均显著高于未缓解组、缓解组和健康对照组(Pa<0.05)。IL-12与sTSH呈显著负相关(r=-0.309 P<0.05),IL-10与FT4、FT3呈显著正相关(r=0.350,0.334 Pa<0.05)。结论IL-10、12均参与GD的发病,可作为病情监测的指标。

白细胞介素-12临床应用研究进展

白细胞介素-12(IL-12)最初称作自然杀伤细胞刺激因子(NKSF)或细胞毒性淋巴细胞成熟因子(CLMF),是一种异二聚体细胞因子。直接使用重组蛋白IL-12或转基因载体都有显著的抗肿瘤作用,它通过诱发NK,NKT和T细胞增殖活化而介导主动和被动免疫保护反应。除此之外,通过趋化因子IP-10诱生IFN-γ阻止肿瘤血管发生。在动物肿瘤模型中,IL-12对移植瘤、化学诱变瘤及自发肿瘤均有明显治疗作用。IL-12可以刺激抗原特异性免疫反应而促进Th1和CTL的消瘤作用。大量的临床治疗肿瘤试验表明,IL-12在抗肿瘤方面效果明显。治疗中出现的不良反应应引起重视,需要制定合理的治疗方案以降低毒副反应确保临床效果。

哮喘患儿血清白细胞介素-4、12与细胞免疫的相关性

目的探讨不同病期哮喘患儿血清IL-12、IL-4水平、细胞免疫功能及其相互关系。方法随机选择哮喘患儿50例。婴幼儿哮喘13例,儿童哮喘37例。发作期30例,经吸入激素治疗后缓解期患儿20例。健康对照组22例。IL-12、IL-4测定采用酶联免疫双抗体夹心法(ELISA)。采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标试验(APAAP)检测T细胞亚群,采用郭氏法检测红细胞免疫功能。结果1.哮喘患儿发作期、缓解期和对照组IL-12水平分别为(24.44±13.26)、(42.30±12.65)、(44.68±28.28)ng/L,3组比较有显著性差异(F=8.92P<0.01),发作期明显低于其他两组,缓解期与对照组无显著性差异。2.IL-4在发作期、缓解期、对照组阳性率分别为70%、35%、9%,发作期明显高于缓解期(χ2=5.96P<0.05),缓解期仍高于对照组(χ2=4.17P<0.05)。3.哮喘患儿与健康儿童相比,CD3(t=3.18P<0.01)、CD4(t=5.51P<0.01)、CD8(t=10.38P<0.01)均降低,CD4/CD8升高(t=4.28P<0.01),RBC-C3bR降低(t=4.65P<0.01),RBC-IC增高(t=10.22P<0.01)。4.IL-4与IL-12呈显著负相关(r=-0.43P<0.05),与RBC-IC呈显著正相关(r=0.49P<0.05)。结论哮喘患儿存在Th1/Th2类细胞因子失衡和细胞免疫功能紊乱状态,哮喘患儿缓解期IL-12水平恢复至接近健康儿童,IL-4水平仍高于健康儿童。应坚持长期抗感染治疗。

人颗粒溶素活性肽与小鼠白细胞介素-12共表达质粒的构建与真核表达

目的构建能分泌表达相对分子质量为9000的人颗粒溶素活性肽与小鼠白细胞介素-12(mIL-12)的真核共表达质粒,并检测其蛋白表达。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得相对分子质量为9000的颗粒溶素活性肽基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,经双酶切及插入片段序列测定对质粒进行鉴定。同时,将小鼠IL-12亚克隆入pBudCE4.1另一多克隆位点,构建真核共表达质粒pBudCE4.1-S9K/mIL-12。采用RT-PCR、免疫细胞化学与Dot-ELISA法,检测颗粒溶素活性肽在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌。ELISA检测mIL-12的表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实,颗粒溶素活性肽基因插入片段正确;RT-PCR和免疫细胞化学检测表明其可以在细胞中瞬时表达;Dot-ELISA检测表明颗粒溶素可分泌到细胞外。ELISA检测细胞培养上清有mIL-12表达。结论已成功构建真核表达质粒pBudCE4.1-S9K/mIL-12,并能体外表达,为下一步利用颗粒溶素与mIL-12基因治疗肿瘤奠定了基础。