人单链白细胞介素12的原核表达和生物学活性鉴定

目的构建含人单链白细胞介素12(hscIL-12)基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达具有活性的hscIL-12。方法 PCR法从质粒pCA13-hscIL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a(+)-hscIL-12,转入到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌液进行蛋白质印迹分析,经镍柱亲和层析(Ni2+-NTA)纯化,体外增殖实验检测其生物学活性。结果 PCR扩增、双酶切及DNA序列测定证实pET28a(+)载体上成功插入了hscIL-12基因片段。表达产物经SDS-PAGE电泳分析,证明其相对分子质量为70×103;蛋白质印记表明重组蛋白具有hscIL-12抗原活性;表达产物纯化、复性后进行体外生物学活性实验表明,该重组蛋白能刺激外周血单核细胞(PBMC)产生IFN-γ。结论 pET28a(+)-hscIL-12原核表达载体的构建和重组hscIL-12蛋白的制备为进一步研究hscIL-12生物学功能和临床应用奠定了基础。

重组人单链白细胞介素12融合基因(rhscIL-12)的构建和真核表达

克隆人 IL - 1 2 ( h IL - 1 2 ) p40和 p35亚单位 c DNA,构建人单链 IL- 1 2 ( rhsc IL- 1 2 )融合基因 ,并在哺乳动物细胞中进行表达。方法 从经 PDBu刺激的 EBV转化的人 B淋巴母细胞株 NC37中提取 m RNA,经 RT- PCR分别获得 h IL- 1 2 p40和 p35亚单位编码序列的 c DNA,运用重组 PCR技术将两段基因通过一疏水性多肽接头 ( Gly4 Ser) 3 DNA序列进行体外基因重组 ,构建 rhsc IL- 1 2融合基因 ,将其插入 pc DNA3.1 ( + )真核表达载体 ,经脂质体转染 COS7细胞进行表达 ,Western blot进行分析。结果 所克隆的 h IL- 1 2 p40、p35c DNA序列和构建的 rhsc IL - 1 2融合基因 DNA序列均经测序得以证实 ,融合基因可在 COS7中表达其产物 rhsc IL- 1 2融合蛋白 ,其分子量为 70 KD,可与鼠抗人 IL - 1 2 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论 本研究结果为进一步探讨 rhsc IL- 1 2融合蛋白的生物学活性和特性奠定了基础 ,也为 rhsc IL- 1

应用重组PCR技术构建人单链白细胞介素12融合基因

目的构建人单链白细胞介素 12 (hsc IL- 12 )融合基因并在真核细胞中进行表达 ,为进一步研究 hsc IL- 12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法应用重组 PCR技术将 h IL - 12 p40和 p35亚单位两段编码序列的 c DNA通过一疏水性多肽接头 (Gly4Ser) 3碱基序列进行前后拼接 (IL- 12 p40 -多肽接头 - p35 ) ,构建 hsc IL- 12融合基因 ,并进行核苷酸序列测定 ,进一步将 hsc IL - 12融合基因插入 pc DNA3.1真核表达载体中 ,转染 COS- 7细胞表达 hsc IL - 12融合蛋白 ,并行 Western blot分析。结果该融合基因经 DNA序列分析表明 :p40、p35、linker的连接顺序、方向及序列完全正确 ,融合基因可在 COS- 7细胞中表达hsc IL- 12融合蛋白。Western blot显示该融合蛋白分子量为 70 0 0 0 u,可与鼠抗人 IL- 12 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论重组 PCR技术是十分有效。

血清白细胞介素-6、白细胞介素-12、白细胞介素-17水平与胃癌化疗患者预后关系研究

目的:分析血清白细胞介素(IL)-6、IL-12、IL-17水平与胃癌化疗患者预后的关系。方法:收集109例接受化疗干预的胃癌患者临床资料,根据患者的预后情况将其分为预后良好组(n=68)与预后不良组(n=41)。记录并统计患者临床资料,经Pearson相关性分析血清IL-6、IL-12、IL-17水平与胃癌患者化疗预后的关系;经Logistic回归分析探讨影响胃癌化疗预后的影响因素;经受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IL-6、IL-12、IL-17水平对胃癌患者化疗预后的预测价值。结果:预后不良组年龄及血清IL-6、IL-17水平均较预后良好组高,而IL-12水平较预后良好组低(均P<0.05);经Pearson相关性分析显示,血清IL-6、IL-17水平均与胃癌化疗患者不良预后呈正相关,血清IL-12水平与胃癌化疗患者不良预后呈负相关(均P<0.05);经Logistic回归分析显示,血清IL-6、IL-17水平异常升高均为影响胃癌化疗预后的独立危险因素,而血清IL-12水平升高为影响胃癌化疗预后的保护因素(均P<0.05);经ROC曲线分析显示,血清IL-6、IL-12、IL-17水平均对胃癌化疗预后具有较好预测价值,其中以血清IL-17的预测价值相对最好(均P<0.05)。结论:胃癌化疗患者血清IL-6、IL-17水平越高,IL-12水平越低,其不良预后发生风险也相对越高,通过监测上述指标水平有利于早期辅助临床预测患者预后情况。

白细胞介素-12家族在缺血性脑卒中发生发展中的作用机制研究

目前研究表明炎症反应和免疫功能异常对缺血性脑卒中的发生发展起重要作用,发现白细胞介素(IL)-12家族参与多种慢性炎症性疾病,对动脉硬化形成起关键作用,其可增强免疫反应和(或)抑制免疫功能。本文对IL-12家族的细胞因子在缺血性脑卒中中的作用现状进行简述,可能为缺血性脑卒中患者的预后判断和治疗方面提供新的参考。

白细胞介素-12促进氧化应激参与干燥综合征肝脏病变

目的:探讨白细胞介素-12(IL-12)对干燥综合征小鼠肝脏病变及氧化应激通路的影响,阐明干燥综合征肝脏病变的可能机制。方法:分别检测NOD、IL-12基因敲除(IL-12KO)NOD和C57BL/6(B6)小鼠的唾液流率、肝功能、肝脏病理、IL-12水平等。取不同浓度IL-12及JAK2、TYK2抑制剂作用于小鼠肝癌细胞。测定各组小鼠血清及细胞培养上清的氧化应激指标。结果:与其他两组小鼠相比,NOD小鼠GOT和GPT显著升高(P<0.05),血清GSH-PX、SOD和CAT降低(P<0.05)。不同浓度IL-12处理后,小鼠肝癌细胞CAT、GSH、GSH-PX和SOD有下降趋势,MDA增加。JAK2/TYK2抑制剂能逆转IL-12对肝癌细胞SOD、GSH和MDA的调节(P<0.05)。结论:IL-12可能通过促进干燥综合征肝脏细胞的氧化应激,进而参与干燥综合征肝脏病变过程。

双氢青蒿素对脑胶质瘤小鼠血清白细胞介素-10和白细胞介素-12表达的影响

目的:探讨双氢青蒿素是否能调节脑胶质瘤小鼠血清中白细胞介素-10(IL-10)与白细胞介素-12(IL-12)的表达及其作用机制,讨论双氢青蒿素潜在的药物价值。方法:应用C6胶质瘤干细胞立体定向法构建脑胶质瘤小鼠模型,并用双氢青蒿素干预,分为对照组、模型组、双氢青蒿素低剂量组和双氢青蒿素高剂量组,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测各组小鼠血清IL-10和IL-12水平。结果:与正常组相比,模型组的血清中IL-10和IL-12的含量均显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,双氢青蒿素低剂量组血清中IL-10和IL-12的水平均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),双氢青蒿素高剂量组小鼠血清中的IL-10和IL-12的水平也明显下降,且下降程度比双氢青蒿素低剂量组的更为突出。结论:双氢青蒿素能降低由立体定向法建立的脑胶质瘤小鼠血清IL-10、IL-12的表达水平,双氢青蒿素可能通过某些信号通路来调控血清中IL-10、IL-12,进而影响脑胶质瘤的免疫反应或炎性反应情况,使得脑胶质瘤的症状减轻。

子痫前期患者血清白细胞介素-12、基质细胞衍生因子-1的表达及其与不良妊娠结局的相关性

目的观察子痫前期患者血清白细胞介素-12(IL-12)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的表达,并分析二者与不良妊娠结局的相关性。方法前瞻性纳入2019年6月至2021年6月南阳市中心医院收治的96例子痫前期患者作为研究对象,所有患者均随访至分娩结束后30 d,根据本次妊娠最终是否发生不良妊娠结局分组,全部患者于入院时检测血清IL-12、SDF-1水平,以点二列分析子痫前期患者血清IL-12、SDF-1水平与不良妊娠结局的相关性。结果96例子痫前期患者中无失访病例,随访至产后30 d,其中发生不良妊娠结局患者25例,占比为26.04%;发生组子痫前期患者血清IL-12、SDF-1水平高于未发生组,差异有统计学意义(P<0.05);经点二列相关性检验,结果显示,子痫前期患者血清IL-12、SDF-1水平与不良妊娠结局呈正相关(r=0.640、0.656,P<0.001);经logistic回归分析,结果显示,高血清IL-12水平、高SDF-1水平是不良妊娠结局的风险因子(OR>1,P<0.05)。结论子痫前期患者血清IL-12、SDF-1水平可能与不良妊娠结局存在一定关系,且高血清IL-12、高SDF-1水平子痫前期患者不良妊娠结局发生风险较高。

子痫前期患者血清白细胞介素-12、胎盘生长因子表达及其与胎盘早剥的关系

目的 观察子痫前期患者血清白细胞介素-12(IL-12)、胎盘生长因子(PLGF)的表达,分析其与胎盘早剥(PA)的关系。方法 选择2018年2月至2020年2月郑州人民医院收治的395例子痫前期患者作为研究对象,入院时测定血清IL-12、PLGF水平,随访至分娩,统计PA发生情况,比较两组一般资料与实验室指标水平,分析血清IL-12、PLGF水平与子痫前期患者PA的关系。结果 本研究395例子痫前期患者中,19例发生PA,PA发生率为4.81%(19/395);发生PA的患者子痫前期程度重于无PA的患者,入院时舒张压水平、血清IL-12水平高于无PA的患者,入院时血清PLGF水平低于无PA的患者(P<0.05);经logistic回归分析检验,结果显示,入院时舒张压、IL-12、PLGF与子痫前期患者发生PA有关(P<0.05);森林图显示,在子痫前期患者PA相关因素中,入院时IL-12水平与PA的关联度最强;绘制受试者工作特征(ROC)曲线发现,入院时血清IL-12、PLGF水平预测子痫前期患者PA风险的曲线下面积(AUC)分别为0.896、0.875,AUC均>0.80,有一定预测价值;绘制决策曲线分析(DCA)曲线,结果显示,最大净受益率为0.048,在阈值0~0.72范围内,入院时血清IL-12、PLGF联合预测子痫前期患者PA的净受益率优于单纯某一指标。结论 子痫前期患者血清IL-12表达越高或血清PLGF表达越低时,PA风险越高,入院时血清IL-12、PLGF水平预测子痫前期患者PA具有一定的价值。

白细胞介素-12 通过抑制STAT3 途径调控非小细胞肺癌细胞生物学行为及免疫逃逸因子分泌的研究

目的探索白细胞介素-12(IL-12)对非小细胞肺癌细胞生物学行为及免疫逃逸因子分泌的影响。方法收集126例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁正常组织,通过实时定量PCR检测IL-12、STAT3 mRNA的表达水平。构建人肺腺癌A549细胞模型,分为空白对照组、腺病毒对照组、IL-12腺病毒组、质粒对照组、STAT3质粒组、IL-12与STAT3共转染组。比较各组细胞增殖及凋亡情况,采用ELISA法检测细胞培养液中IL-2、INF-γ、TNF-α的分泌量,采用Western blot法检测IL-12、STAT3、pSTAT3蛋白表达水平。结果肺癌组织较癌旁组织IL-12 mRNA表达量降低、STAT3 mRNA表达量增高。IL-12腺病毒组较各对照组细胞增殖及活力降低、凋亡增加。STAT3质粒组细胞增殖及凋亡结果则与之相反。IL-12、STAT3共转染组细胞增殖、活力以及凋亡情况介于IL-12腺病毒组与STAT3质粒组之间。此外,IL-12腺病毒组细胞培养液中IL-12、TNF-α、IFN-γ含量明显高于STAT3质粒组,而STAT3质粒组STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著高于在IL-12腺病毒组。结论IL-12对非小细胞肺癌细胞具有抑制增殖、降低活力及诱导凋亡的能力,其作用机制可能通过抑制STAT3途径以及免疫逃逸而实现。

小鼠单链白细胞介素-12重组卡介苗的构建与表达

目的:构建携带小鼠白细胞介素-12基因的重组卡介苗(Bacille calmette-guerin,BCG),并鉴定该重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。方法:以分子生物学方法构建携带小鼠IL-12基因和分支杆菌复制子OriM的真核穿梭共表达质粒pBM12,以电转化的方式将pBM12质粒转入BCG构建重组BCG,抽提质粒进行PCR鉴定重组菌;将重组菌感染巨噬细胞,通过RT-PCR了解重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。结果:电转化方式可将pBM12导入BCG,抽提质粒鉴定出与mIL-12基因相符的目的条带。以该重组BCG感染小鼠巨噬细胞,96h后用RT-PCR法也扩增出1632bp左右的基因条带。结论:成功构建含pBM12的重组BCG。该重组BCG能向小鼠巨噬细胞递呈携带基因。

血清白细胞介素-12、转化生长因子-β与急性白血病患者化疗效果的关系

目的 观察血清白细胞介素-12(IL-12)、转化生长因子-β(TGF-β)在急性白血病(AL)化疗患者中的水平变化,探讨血清IL-12、TGF-β与AL患者化疗效果的关系。方法 本研究采用前瞻性研究方法,纳入2019年2月至2021年2月在信阳市中心医院接受治疗的175例急性髓系白血病患者,剔除7例,最终纳入168例患者。化疗前采用全自动生化分析仪检测患者血清IL-12、TGF-β水平,给予患者标准诱导方案(柔红霉素联合阿糖胞苷)治疗1个疗程,治疗后评价患者化疗效果,根据化疗效果分为两组(缓解组、未缓解组),比较两组患者性别、年龄、白细胞计数等资料及血清IL-12、TGF-β水平,重点分析血清IL-12、TGF-β与AL患者化疗效果的关系。结果 168例AL患者治疗1个疗程后,完全缓解25例(14.88%),部分缓解90例(53.57%),治疗失败39例(23.21%),复发14例(8.33%);未缓解组血清IL-12水平低于缓解组,血清TGF-β水平高于缓解组(P<0.05);对比两组性别、年龄等资料,差异无统计学意义(P>0.05);点二列相关性分析显示,血清IL-12、TGF-β与AL患者化疗效果相关(P<0.05);logistic回归分析显示,血清IL-12、TGF-β与AL患者化疗效果有关(P<0.05)。结论 血清IL-12、TGF-β与AL患者化疗效果存在相关性。

重组人单链白细胞介素12融合基因的构建、真核表达及生物学活性测定

目的 探讨用生物学技术获取具有生物学活性的重组人白细胞介素 12 (rhIL 12 )的方法。方法 从经佛波醇酯 (PDBu)刺激的EB病毒转化的人B淋巴母细胞株NC 37中提取mRNA ,经逆转录 聚合酶链反应分别获得hIL 12p40和p35亚单位编码序列的cDNA ,运用重组聚合酶链反应技术 ,将两段基因通过多肽接头 (Gly4Ser) 3 DNA序列连接后进行基因重组 ,构建了重组人单链IL 12融合基因 (rh scIL 12 )。进一步将rhscIL 12融合基因插入pcDNA3 .1(+ )真核表达载体中 ,构建rhscIL 12真核表达载体 [pcDNA3 .1(+ ) rhscIL 12 ],转染COS 7细胞。结果 经G418筛选获COS rhscIL 12融合蛋白稳定表达株。Westernblot显示该融合蛋白相对分子质量为 70× 10 3,可与鼠抗人IL 12p40 p70单克隆抗体特异性结合。生物学活性测定表明 ,rhscIL 12融合蛋白具有促进外周血淋巴细胞增殖、增强NK细胞活性及提高IFN γ产生等功能。结论 用rhscIL 12融合基因构建的表达载体表达的rhscIL 12融合蛋白具有很高的生物学活性 ,为rhscIL 12的基因治疗奠定了基础。

伴与不伴躯体化症状青少年抑郁障碍病人白细胞介素水平研究

目的:检测青少年抑郁障碍病人血清白细胞介素(IL)水平,并分析其与躯体化症状的相关性。方法:选择2020年12月至2021年12月在合肥市第四人民医院治疗的13~18岁的青少年抑郁障碍病人93例,根据是否伴功能性躯体化症状(functional somatic symptoms,FSS),分为伴FSS组(40例)与不伴FSS组(53例)。同时选取32名正常青少年人群作为对照组。采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、儿童躯体化量表(CSI)对疾病抑郁障碍现状进行评估。采用酶联免疫吸附试验法检测被试儿童血清IL-13及IL-12/23p40因子水平。结果:伴FSS青少年抑郁组IL-13因子水平显著高于不伴FSS组和对照组(P<0.05),不伴FSS组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);伴FSS组IL-12/23p40因子水平显著高于不伴FSS组(P<0.05),两者与对照组差异均无统计学意义(P>0.05)。IL-13水平与CSI总分及分因子分均呈正相关关系(r=0.360、0.286、0.366、0.310、0.336,P<0.01);IL-12/23p40水平与CSI总分及分因子分均呈正相关关系(r=0.333、0.360、0.275、0.280、0.313,P<0.01)。结论:伴躯体化症状的青少年抑郁病人的血清IL-13水平异常,且与躯体化症状呈正相关。

黄芪对哮喘大鼠模型支气管肺泡灌洗液白细胞介素-4、-12表达的影响

目的研究哮喘大鼠模型支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞介素-4(IL-4)和IL-12水平变化及黄芪对其影响。方法雄性SD大鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组和黄芪组(AM组)。以卵蛋白(OVA)致敏激发法制备大鼠哮喘模型。对BALF进行嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-4-、12水平。结果1.哮喘组BALF细胞总数、EOS绝对值和EOS占细胞总数百分比(EOS%)均高于对照组(P均<0.01),AM组上述指标均低于哮喘组(P均<0.01);2.BALF中IL-4水平哮喘组显著高于对照组(P<0.01),AM组显著低于哮喘组(P<0.01);3.IL-12水平哮喘组显著低于对照组(P<0.01),AM组显著高于哮喘组(P<0.01)。结论IL-4高表达I、L-12低表达参与哮喘的病理生理过程;黄芪下调IL-4、上调IL-12表达水平,可能为其抑制哮喘呼吸道炎症的重要作用机制之一。

过敏性紫癜病儿树突细胞分泌白细胞介素-12水平与T_H1/T_H2的变化

目的观察过敏性紫癜(HSP)病儿外周血树突细胞(DC)产生IL12的变化,并探讨其对TH1/TH2平衡的影响及在HSP发病机制中的意义。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测60例HSP病儿(HSP组)及21例健康儿童(对照组)血浆干扰素γ(IFNγ)、白细胞介素4(IL4)、白细胞介素12(IL12)水平。并对其中22例HSP病儿及21例健康儿童外周血单个核细胞(PBMC)进行体外培养以诱生出DC,用ELISA法检测培养上清液中IL12水平,同时应用间接免疫荧光法检测CD1a+细胞表达率。结果①HSP组血浆IFNγ水平低于对照组(30.59±11.27pg/mLvs43.38±19.19pg/mL,P<0.01),IL4水平高于对照组(45.08±9.19pg/mLvs32.95±7.10pg/mL,P<0.01),IFNγ/IL4比值低于对照组(0.70±0.28vs1.33±0.57,P<0.01),IL12水平低于对照组(153.95±91.88pg/mLvs323.06±162.34pg/mL,P<0.01);HSP组和对照组各自血浆中IL12水平与IFNγ水平呈正相关(P<0.01,0.05),与IL4水平无相关性(P>0.05),与IFNγ/IL4比值呈正相关(P<0.01)。②HSP组培养上清液IL12水平低于对照组(357.06±153.56pg/mLvs489.80±213.45pg/mL,P<0.05),且与血浆IL12水平呈正相关(P<0.01)。③HSP组CD1a+细胞表达率低于对照组(27.42±10.75)%vs(35.68±12.18)%,(P<0.05),与培养上清液和血浆IL12水平皆呈正相关(P<0.01)。结论HSP病儿存在TH1/TH2平衡失调,TH1功能的下降与血浆IL12水平低下呈正相关,而后者又与DC数量减少和/或功能低下关系密切,表明HSP病儿外周血DC数量减少和/或功能低下间接导致了TH1/TH2平衡的失调。

支气管哮喘患儿急性发作期血清白细胞介素-25、12的变化及其意义

目的探讨哮喘患儿急性发作期血清IL-25、12水平变化及其在哮喘发病中的作用。方法随机选取于本院就诊的哮喘急性发作期患儿30例作为观察组。男20例,女10例;年龄4～13岁;发作程度:轻度8例,中度17例,重度5例。随机选取同期同年龄组健康体检儿童27例作为健康对照组。男18例,女9例;年龄4～14岁。二组年龄及性别均无统计学差异(Pa>0.05)。分别抽取各组儿童静脉血4mL,离心后留取血清标本置-70℃冰箱保存,采用ELISA法测定二组儿童血清IL-25、12水平。结果哮喘急性发作期患儿血清IL-25水平[(56.75±11.68)ng/L]显著高于健康对照组[(45.77±10.43)ng/L],差异有统计学意义(t=3.726P<0.05);哮喘急性发作期患儿血清IL-12水平[(42.12±12.96)ng/L]显著低于健康对照组[(57.12±14.42)ng/L],差异有统计学意义(t=-4.136P<0.05);血清IL-25水平与IL-12水平呈显著负相关(r=-0.420P<0.01)。结论哮喘患儿急性发作期血清IL-25水平升高和IL-12水平降低与哮喘的发作关系密切。增强IL-2的活性,可为哮喘的治疗提供新的靶点与理论依据。

卵泡液中白细胞介素2、白细胞介素12、白细胞介素18与体外受精-胚胎移植妊娠结局的相关性

目的探讨卵泡液中细胞因子白细胞介素2(IL-2)、IL-12、IL-18与体外受精-胚胎移植妊娠结局的关系。方法接受体外受精-胚胎移植助孕治疗的妇女117例,其中妊娠妇女59例,未妊娠妇女58例,应用酶联免疫吸附试验检测卵泡液中IL-2、IL-12、IL-18的浓度。结果妊娠组卵泡液中IL-2的浓度为(36.73±18.53)pg/ml、IL-12的浓度为(0.52±0.88)pg/ml、IL-18的浓度为(76.10±69.06)pg/ml;未妊娠组卵泡液中IL-2的浓度为(40.89±22.83)pg/ml、IL-12的浓度为(1.59±1.58)pg/ml、IL-18的浓度为(131.80±162.35)pg/ml。未妊娠组IL-12和IL-18浓度均明显高于妊娠组(P<0.05),未妊娠组IL-2浓度虽较妊娠组升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-12、IL-18在接受体外受精-胚胎移植助孕治疗的非妊娠妇女中明显升高,考虑与体外受精-胚胎移植妊娠结局负相关。

携带鼠白细胞介素-12基因重组腺病毒载体的构建及其对致瘤性的影响

目的 :构建携带鼠白细胞介素 - 1 2基因腺病毒载体 ( Ad CMVIL- 1 2 )并观察其影响 B1 6黑色素瘤致瘤性的效果。方法 :将鼠 IL- 1 2基因构建进含有 CMV启动子的双顺反子重组腺病毒载体内 ,分离纯化后 ,转染 2 93细胞 ,48h后提取细胞总 RNA,进行 RT- PCR、琼脂糖凝胶电泳 ,选取特异性片段 TA克隆、测序 ;将 B1 6黑色素瘤细胞与 Ad CMVIL- 1 2在 37℃、5 %CO2 培养箱中孵育2 h后注射到 C57/ BL6小鼠右侧腹股沟皮下 ( MOI=1 0 0 ) ,观察 Ad CMVIL- 1 2对 B1 6黑色素瘤致瘤性的抑制作用。结果 :测序结果证明 Ad CMVIL- 1 2构建成功 ,实验组未见肿瘤生长 ,抑瘤率达1 0 0 %。结论 :成功地构建 Ad CMVIL- 1 2 ,并具有明显的抑制肿瘤生长的作用。

白细胞介素—12和白细胞介素—18质粒对HBcAg DNA疫苗诱导小鼠（H—2^d）体液免疫应答的影响

目的:观察编码鼠白细胞介素(IL)-12和IL-18的真核表达载体犤pcDNA3.1/IL-12(以下简称IL-12质粒)和pcDNA3.1/IL-18(以下简称IL-18质粒)犦对HBcAgDNA疫苗(pJW4303/HBc)诱导Balb/c(H-2d)小鼠免疫应答的影响。方法:肌肉注射接种IL-12质粒、IL-18质粒和HBcAgDNA疫苗,ELISA法检测小鼠血清抗HBcIgG亚类(IgG1、IgG2a)水平。结果:免疫6周后,联合注射IL-12、IL-18和IL-12+IL-18组小鼠血清的抗HBc终点滴度均明显高于单纯注射HBcAgDNA疫苗组小鼠(P<0.05),抗HBcIgG亚类以IgG2a占优。结论:IL-12、IL-18以及IL-12+IL-18联合HBcAgDNA疫苗注射能够提高小鼠血清中抗HBc水平。