人卵巢癌细胞HLA分子与其相关基因表达的研究

目的:探讨人卵巢癌细胞中HLA分子及其相关基因的表达与IFN-γ诱导HLA分子表达的相互关系。方法:采用Westernblot、免疫组化和流式细胞术,检测卵巢癌细胞中HLA分子表达,以RT-PCR技术,分析卵巢癌细胞TAP、LMP和MHC Ⅱ类分子反式激活蛋白(CIITA)基因表达。结果:被检测的11株卵巢癌细胞中,HLA-Ⅰ类分子异常的表达率达为45％。而HLA-I类分子表达的异常与TAP1、TAP2、LMP2和LMP7 4种基因表达的异常有关。卵巢癌细胞或其他肿瘤细胞HLA-Ⅱ类分子的表达与CIITA基因的表达一致。组成性或诱导性表达CIITA基因的肿瘤细胞,经IFN-γ作用后,其HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子的表达增强;而诱导后仍不表达CIITA基因的肿瘤细胞,其HLA分子的表达无增强作用。结论:卵巢癌细胞中TAP和LMP基因表达的缺陷,是引起HLA-I类分子表达异常的重要因素,提示CIITA基因参与了调控肿瘤细胞HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子的表达。

艾迪注射液对SKOV_3人卵巢癌细胞作用的研究

目的探讨艾迪注射液对SKOV3人卵巢癌细胞的抗肿瘤作用。方法应用MTT法和RT-PCR法、ELISA方法分别检测艾迪注射液对SKOV3细胞增殖及SKOV3细胞中VEGF mRNA、VEGF蛋白含量的影响。结果艾迪组SKOV3人卵巢癌细胞增殖受到抑制,48h达高峰,抑制率59.51%;SKOV3细胞中VEGFmRNA含量艾迪组较对照组减少,差异有显著性(P<0.01)。结论艾迪能抑制SKOV3人卵巢癌细胞的增殖,在mRNA、蛋白水平抑制VEGF的表达,进而实现其抗肿瘤作用。

乙酰肝素酶基因表达对人卵巢癌细胞系侵袭转移能力的影响

目的:探讨乙酰肝素酶的基因表达,对卵巢癌细胞转移侵袭能力的影响。方法:用Boyden小室体外侵袭实验比较两株卵巢癌细胞HO-8910和HO8910-PM的体外侵袭能力强弱;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和原位杂交检测细胞乙酰肝素酶mRNA的表达情况;用MTT观察细胞生长能力的变化。结果:MTT检测结果显示卵巢癌细胞HO8910-PM细胞生长速度较快,而HO-8910细胞生长速度较慢。RP-PCR提示及原位杂交结果提示乙酰肝素酶在高转移性HO8910-PM细胞中表达强于转移性HO-8910细胞。Boyden小室体外侵袭实验表明,卵巢癌细胞HO8910-PM体外侵袭力较强,其穿膜细胞数为20.1±0.312,而HO-8910细胞体外侵袭力较弱,其穿膜细胞数为11.3±0.024。两者差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:乙酰肝素酶基因的表达,能促进瘤细胞的生长和转移能力。

叶酸壳寡糖修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒对耐紫杉醇人卵巢癌细胞增殖的影响

目的制备由叶酸壳寡糖修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒(F-CS-PLGA-NPs),考察其体外对人卵巢癌细胞(SKOV-3)和耐紫杉醇卵巢癌细胞(SKOV-3/TAX)的抑制作用。方法采用碳二亚胺法制备叶酸耦联的壳寡糖,以此作为普通纳米粒(PLGA-NPs)的向导材料,采用界面沉积法制备F-CS-PLGA-NPs,噻唑蓝(MTT)法测定对SKOV-3和SKOV-3/TAX体外增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果体外实验结果显示PLGA-NPs和F-CS-PLGA-NPs对SKOV-3/TAX的增殖抑制作用比SKOV-3更不敏感。F-CS-PLGA-NPs对SKOV-3和SKOV-3/TAX的半数抑制浓度(IC50)分别为(23.17±2.45)和(88.81±10.69)nmol·L-1。结论叶酸壳寡糖对PLGA-NPs的修饰可增加其对耐药肿瘤细胞的靶向性,为耐药肿瘤的治疗提供新的思路。

广西莪术中提取姜黄素及联合顺铂诱导人卵巢癌细胞凋亡的研究

目的:利用表面活性剂提高广西莪术中姜黄素提取的含量,并观察姜黄素联合顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法:适量表面活性剂润湿后,醇提法提取姜黄素,用高效液相色谱法测定得到提取率。再取对数生长期的SKOV3细胞接种,分别给以25,50,100μmol/L姜黄素和联合用药组以25,50,100μmol/L姜黄素与10μmol/L顺铂联用,培养48h用MTT法测定吸光度,计算细胞生长抑制率;并设正常对照组、50μmol/L姜黄素组、10μmol/L顺铂组和50μmol/L姜黄素与10μmol/L顺铂联合用药组做细胞AO/EB染色,观察细胞凋亡情况。结果:每10g莪术原料加入10mL 1%十二烷基硫酸钠(SDS)润湿30min,80%乙醇回流提取2次,每次1.5h得到最大收益;MTT结果与荧光染色观察均表明姜黄素联合顺铂可协同诱导SKOV3细胞凋亡。结论:SDS对莪术中姜黄素的提取率有较大影响,从广西莪术中提取的姜黄素联合顺铂可协同诱导SKOV3细胞凋亡。

福安泰-03对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭能力的影响

应用噻唑蓝法检测从赤魟中分离到的福安泰-03(Fuantai-03,FAT-03)对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM生长的影响;人工重组基底膜检测FAT-03对细胞侵袭能力的影响;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测FAT-03对HO-8910PM细胞分泌MMP-9能力的影响。结果显示,FAT-03(20.0、40.0、60.0μg/ml)作用HO-8910PM细胞24h,对细胞生长的抑制率小于10%,对细胞与纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和Matrigel粘附的抑制率分别为15.1%、28.0%(P<0.05)、54.1%(P<0.01)和14.7%、34.3%(P<0.05)、40.5%(P<0.01),对细胞迁移的抑制率分别为16.4%、33.8%(P<0.05)和42.6%(P<0.01)。此外,FAT-03显著减少HO8910-PM细胞分泌MMP-9的量,并降低其活性。这些实验事实提示FAT-03能明显抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力。

42℃温热联合顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3毒性的影响

目的探讨42℃温热联合化疗药物顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV-3作用的规律及其机制。方法应用四氮唑蓝快速比色法测定42℃热疗组、单纯化疗组以及以不同序贯方式结合的热化疗组对人卵巢癌细胞SKOV-3的生长抑制率;流式细胞仪测定各组细胞周期的变化;金氏公式分析相互作用指数,评价温热化疗两因素联合的作用。结果 42℃单纯热疗和单纯化疗均对卵巢癌癌细胞有抑制和杀伤作用;42℃热疗与化疗药物以不同方式联合,抑制作用均强于单纯化疗组和单纯热疗组(P<0.05),尤以热化疗同时作用组效果最佳(P<0.001);细胞周期分析发现:42℃热疗降低了S期细胞所占比例;与单纯化疗组相比,先化疗后热疗组、先热疗后化疗组和热化疗同时组的S期细胞所占比例减少,G1期细胞增多,其中热化疗同时组增减的幅度最大。结论 42℃温热可以明显增强化疗药顺铂的毒性,结合方式上以热化疗同时进行最佳,其作用机制可能与干扰细胞周期有关。

姜黄素对人卵巢癌细胞株skov_3生长的影响

目的探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株skov3体外生长的的影响。方法采用MTT法测定姜黄素不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株skov3生长的抑制作用,计算细胞生长抑制率;光镜和电镜下观测细胞形态学及超微结构的改变;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果姜黄素具有诱导人卵巢癌细胞株skov3细胞凋亡的作用,呈剂量和时间依赖性。部分细胞出现凋亡形态学改变。结论姜黄素通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,能显著地抑制卵巢癌细胞sk-ov3的体外生长。

转化生长因子-β对人卵巢癌细胞系SK-OV-3活性氧簇表达的影响及其机制

目的观察转化生长因子-β(TGF-β)对人卵巢癌细胞系SK-OV-3活性氧簇(ROS)表达的影响,并探讨其可能机制。方法取对数生长期SK-OV-3细胞,随机分为两组,观察组用2 mL培养液+2μL无血清DMEM配制的5μg/mL TGF-β培养(最终浓度为5 ng/mL),对照组直接加2 mL培养液。流式细胞仪检测细胞内总的活性氧簇(ROS)产生及线粒体来源的ROS,实时荧光定量PCR检测细胞上皮细胞-间充质转化(EMT)变化各指标、线粒体呼吸链复合体Ⅲ组分mRNA。结果观察组及对照组总ROS产生量分别为3 159±42.92、1 062±24.41,两组比较,P<0.05。观察组及对照组细胞内线粒体来源ROS产生量分别为1 254±29.04、1 039±17.32,两组比较,P<0.05。观察组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZEB1分别是对照组的0.200 0、6.739 8、4.487 9、1.639 5倍,P均<0.05。观察组CYC1、TTC19、UQCRC1、UQCRC2、UQCR10、UQCRB、UQCRFS1、UQCRH、UQCRQ mRNA表达水平较对照组改变倍数分别为0.89、1.04、1.09、0.87、1.17、1.18、0.92、1.09、1.07倍,P均>0.05。观察组CYC1、TTC19、UQCRC1、UQCRC2、UQCRFS1蛋白水平较对照组改变倍数分别为1.01、0.97、1.07、0.99、1.03倍,P均>0.05。结论TGF-β诱导细胞内总的ROS表达增加,但过量ROS并非来源于线粒体,机制可能是通过调控细胞内氧化-抗氧化平衡系统的关键酶从而改变细胞内的ROS水平。

重组腺病毒Ad-IL-12感染淋巴细胞对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响

目的探讨重组腺病毒Ad-IL-12感染人外周血淋巴细胞后对人卵巢癌细胞SKOV3周期、增殖和凋亡的影响。方法采用重组人IL-12腺病毒(Ad-IL-12)感染人外周血淋巴细胞,感染48 h后与人卵巢癌细胞SKOV3共培养(SKOV3/Ad-IL-12),同时设未感染组(SKOV3)和Ad-GFP空载感染组(SKOV3/Ad-GFP)作为对照。RT-PCR检测IL-12双亚基P35和P40的mRNA表达,ELISA检测细胞培养上清中IL-12 P70蛋白的分泌,CCK8法检测卵巢癌细胞增殖,流式细胞术分析卵巢癌细胞周期和凋亡,RT-PCR和Western blot检测抗凋亡蛋白BCL-2、survivin的表达。结果重组腺病毒Ad-IL-12可成功感染人外周血淋巴细胞,分泌较高水平的IL-12 P70蛋白;淋巴细胞过表达IL-12可抑制SKOV3细胞的增殖;与未感染组和空载组相比,SKOV3/Ad-IL-12组G1期细胞显著增加,凋亡率显著升高(P<0.05),SKOV3细胞中抗凋亡蛋白BCL-2和survivin显著下调(P<0.05)。结论人IL-12基因重组腺病毒可以成功感染人外周血淋巴细胞,分泌IL-12 P70蛋白,并可以通过阻滞细胞周期进程和促进细胞凋亡抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖。

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡及对线粒体的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)诱导人卵巢癌细胞凋亡中是否发生线粒体系统和Bcl-2蛋白表达的改变,探讨As2O3诱导凋亡的可能引发机制。方法采用光镜、电镜和流式细胞术等技术,观察细胞凋亡、线粒体超微结构改变及检测线粒体跨膜电位(Δψm)。结果As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,具有剂量依赖性和细胞株类型差异性;不同浓度As2O3均可诱导SKOV3、3AO细胞Δψm的降低,且随浓度升高,下降愈明显;电镜观察到As2O3作用SKOV3、3AO72h后,线粒体明显肿胀,内嵴消失,基质电子密度降低。免疫荧光染色显示As2O3能抑制SKOV3、3AO细胞的Bcl-2蛋白表达。结论线粒体Δψm的下降和Bcl-2蛋白表达的抑制,是As2O3诱导细胞凋亡的重要环节。

Genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖和促进凋亡的作用及机制探讨

目的 研究genistein对人卵巢癌细胞系 3AO抑制增殖和促进凋亡的作用 ,探讨其抗癌作用的机制。方法 应用MTT法检测genistein对 3AO的生长抑制作用 ,电镜观察凋亡细胞及凋亡小体 ,FCM分析细胞周期及凋亡率 ,免疫细胞化学法检测细胞增殖凋亡调控相关蛋白的表达。结果 genistein可明显抑制 3AO的增殖 ,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性。FCM分析发现 genistein阻断 3AO细胞生长于细胞周期的G2 /M期 ,且 2 4～ 72h可见明显亚G1峰。电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。免疫细胞化学结果显示 ,2 0 μmol/L的genistein作用 4 8h后 ,PCNA、bcl 2及CyclinB1蛋白表达降低 ,而p2 1WAF1/CIP1和bax及CyclinB1蛋白表达增加。结论 genistein对卵巢癌细胞系 3AO的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用 ,其阻断细胞的生长主要在细胞周期的G2 /M期 ,且这种生长抑制作用与 p2 1WAF1/CIP1蛋白水平表达增加及PCNAcylinB1蛋白表达降低有关 ,且可通过下调bcl 2蛋白表达 ,上调bax蛋白表达诱导卵巢癌细胞凋亡。

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡对端粒酶活性的影响

目的探讨As2O3诱导细胞凋亡时对其端粒酶活性的影响及其作用机制。方法采用光镜、电镜,PCR-ELISA,RT-PCR等技术,检测细胞凋亡,端粒酶活性及其催化亚单位的表达。结果As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,但存在作用浓度,细胞株类型差异性;端粒酶活性随药物作用时间和浓度的增加而明显减弱,同时伴随hTERT mRNA表达水平的下降。结论端粒酶活性和hTERT mRNA表达在As2O3诱导SKOV3、3AO细胞凋亡过程中共同发挥作用,两者有密切关系,是诱导细胞凋亡的分子机制之一。

人卵巢癌细胞微观形态的AFM观察

目的:探讨原子力显微镜(AFM)在人卵巢癌细胞微观形貌表征方面的应用。方法:应用原子力显微镜分别观察培养的高低转移的人卵巢癌细胞及其周围纤连蛋白原纤维和经过紫杉醇药物处理后的细胞的微观形态,进一步对正常的卵巢癌细胞组织和经过紫杉醇药物处理后的卵巢癌细胞组织经过超声波处理后组织的微观结构进行AFM成像观察。结果:高转移特性的卵巢癌细胞周围的纤维少而短;而低转移特性的卵巢癌细胞周围的纤维多且长。经过紫杉醇药物处理后的细胞的形态发生了变化,结构呈现不规则状,且与基底没有纤维连接。结论:不同类型的卵巢癌细胞受其生物功能的影响在基底上的形态不同。药物处理后的癌细胞微观组织发生了变化,与其核溶,核碎和核解的生理变化过程相符。正常的卵巢癌细胞组织结构之间的黏附力较小,故超声波处理后呈现分散的分布。经过紫杉醇药物处理后的卵巢癌细胞组织结构之间的黏附力较大,超声波处理后分布在基底上的结构较紧凑。

顺铂、5-FU联合应用及联用方式对人卵巢癌细胞株生长的抑制作用

采用细胞培养及 MTT方法检测全量、半量顺铂 (DDP)和 5 - FU及各种联用方式如预处置及同时联合应用对人卵巢癌 3AO细胞株的生长抑制作用。结果 :1DDP和 5 - FU对 3AO细胞生长均有显著的抑制作用 (P均 <0 .0 1) ,且 DDP的杀伤作用呈明显的剂量依赖性 ,半量 DDP的抑制作用较全量者明显减弱 (P<0 .0 1) ,而 5 -FU的剂量依赖性作用不明显。 2 DDP和 5 - FU以各种给药顺序、各种浓度方式联合应用对 3AO细胞均有显著的杀伤作用 (P<0 .0 1) ,尤以预处置组作用最为突出。给予 5 - FU全量预处置 2 4h后再给予 DDP(全量 5 - FU预处置组 ) ,对 3AO细胞的抑制率可达 84.8% ,比单用全量 5 - FU或 DDP效果显著提高 (P<0 .0 5 )。5 - FU半量预处置亦显示相同的作用趋势。5 - FU或 DDP半量预处置均可达到单一药物全量所能达到的细胞抑制率。3全量或半量DDP和 5 - FU同时联合应用亦可达到满意的细胞抑制水平。认为 5 - FU和 DDP联合应用及各种联用方式对人卵巢癌 3AO细胞均有显著的杀伤作用 ,尤以 5 - FU预处置的方式作用效果最为明显。采用预处置的方法联合应用DDP和 5 - FU是提高卵巢癌化疗效果、降低单药剂量及毒副作用的新途径。

佛波酯诱导人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA突变的研究

目的:研究佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA(mtDNA)突变的诱导作用。方法:提取细胞DNA,进行mtDNA突变的分析,比较各组细胞之间mtDNA突变率和突变类型的差异。结果:mtDNA的突变热点依次是CoⅡ基因、ND5基因、Cytb基因和ND4基因,在mtDNA突变的测序中发现多个基因突变,突变类型主要为A→T,T→A,G→A,T→C,A→G,C→T,其中C→T为突变热点。结论:Cytb基因的突变可能会对线粒体的氧化过程产生显著的影响。人卵巢癌细胞株SKOV3株mtDNA编码区的CoⅡ、Cytb、ND4、ND5基因是一个具有高度多态性和突变性的区域,它与卵巢癌的发生、发展有重要关系。

Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡及其机制的研究

目的:以人卵巢癌细胞SKOV3为研究对象,探讨Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡的机制。方法:通过MTT法检测S1作用下卵巢癌细胞的生存率;S1 10μmol/L作用不同时间,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测凋亡相关蛋白Mcl-1的变化。结果:与对照组相比S1能明显抑制SKOV3的生存率;流式细胞术结果显示,S1引起SKOV3细胞凋亡明显升高;蛋白水平检测S1作用8 h能明显抑制SKOV3细胞Mcl-1蛋白表达。结论:S1可能通过抑制Mcl-1蛋白诱导人卵巢癌细胞凋亡。

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞周期的影响

目的:观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将1×10-7mol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)和1×10-6mol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486分别单用或合用处理HO-8910细胞,采用流式细胞术测定细胞周期,核素掺入半定量RT-PCR检测细胞周期蛋白激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果:Dex诱导HO-8910细胞发生G0/G1期停滞,并使p21/WAF1 mRNA表达上调;RU486可逆转Dex引起的p21/WAF1表达的变化。结论:p21/WAF1的表达上调可能参与糖皮质激素引起的HO-8910细胞G0/G1期停滞作用。

As_2O_3诱导人卵巢癌细胞株HO8910凋亡和端粒酶活性的关系

目的探讨As2O3诱导HO8910细胞凋亡和端粒酶活性变化的关系。方法用不同浓度的As2O3溶液作用卵巢癌细胞株HO8910,于不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;FCM检测细胞凋亡率;TRAP-银染法观察端粒酶活性的变化。结果As2O3溶液对HO8910有生长抑制和诱导凋亡的作用,与药物浓度和作用时间相关。不同浓度As2O3作用HO8910细胞,其端粒酶活性在24h无明显改变,随着作用时间的延长,端粒酶活性逐渐下降,随着药物浓度的升高端粒酶活性也呈不断下降趋势,以致消失。结论As2O3可以诱导卵巢癌细胞株HO8910发生凋亡,其机制可能不是通过端粒酶活性下降直接调控的,但端粒酶调控与凋亡调控有一定相关性。