miR-152-3p表达下调降低紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇的耐药性

目的探讨miR-152-3p对紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇耐药性的影响及机制。方法①紫杉醇(1.875,3.75,7.5,17和23μmol·L^(-1))与人卵巢癌A2780和A2780T细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率,计算抑制细胞存活半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI)。Western印迹法检测A2780和A2780T细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达。②实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测A2780和A2780T细胞miR-152-3p表达水平。脂质体瞬时转染技术转染miR-152-3p抑制物降低A2780T细胞中miR-152-3p表达(miR-152-3p抑制物组),同时设转染miR-152-3p阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法、划痕实验和流式细胞术分别检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞存活、迁移和凋亡的影响;Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。③用miRDB,Targetscan,miRWalk和Starbase数据库预测miR-152-3p的靶基因,并用Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞磷酸酯酶张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达的变化及RT-qPCR检测A2780和A2780T细胞PTEN mRNA表达水平予以验证。随后,脂质体瞬时转染技术转染PTEN siRNA沉默A2780T细胞中PTEN表达,同时设转染siRNA阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测沉默PTEN表达后A2780T细胞存活率和IC50值,Western印迹法检测P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达。结果①紫杉醇处理后A2780和A2780T细胞存活率均降低(P<0.01),A2780T细胞RI为2.8。与A2780细胞相比,A2780T细胞P-gp,MRP1和ABCG2蛋白高表达(P<0.05,P<0.01)。②与A2780细胞相比,A2780T细胞miR-152-3p明显高表达(P<0.01)。与转染miR-152-3p阴性对照组比较,转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和细胞迁移能力(P<0.05)明显降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。③生物信息学数据库分析结果提示,PTEN是miR-152-3p的一个靶基因;Western印迹法验证显示,转染miR-152-3p抑制物组A2780T细胞PTEN蛋白表达低于转染miR-152-3p阴性对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,A2780T细胞PTEN mRNA表达水平高于A2780细胞(P<0.01)。转染PTEN siRNA沉默PTEN表达后,与转染siRNA阴性对照组相比,A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和IC50值(P<0.01)显著降低,P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论miR-152-3p在A2780T细胞中高表达,其表达下调可抑制A2780T细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,降低A2780T细胞对紫杉醇的耐药性,该作用可能是通过降低其靶基因PTEN表达发挥的。

自噬抑制剂促进紫杉醇耐药卵巢癌细胞对化疗敏感性的研究

目的探讨自噬激活在紫杉醇(paclitaxel,PTX)耐药卵巢癌(ovarian cancer)细胞中的作用及自噬抑制对耐药细胞化疗的影响。方法以卵巢癌细胞系SKOV3和紫杉醇耐药卵巢癌细胞(SKOV3/PTX)为研究对象;利用MTT实验检测细胞活力变化;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;免疫印迹(Western blot,WB)法检测蛋白表达变化;利用脂质体瞬时转染法使细胞表达LC3-GFP-RFP荧光蛋白;利用激光共聚焦显微镜检测细胞荧光蛋白定位及表达。结果相比SKOV3细胞,相同剂量的PTX对SKOV3/PTX细胞的活力抑制能力明显降低,紫杉醇对SKOV3细胞和SKOV3/PTX细胞的半数抑制浓度((inhibitory concentration 50%,IC50)分别为(41.91±2.92)μM和(114.6±17.6)μM。此外,在凋亡水平上,PTX对SKOV3/PTX细胞的诱导凋亡作用显著降低。通过LC3-GFP-RFP过表达和LC3、p62蛋白检测,证明SKOV3/PTX细胞的自噬激活程度增高。采用自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)和3-MA可以阻断细胞自噬,并提高PTX对SKOV3/PTX细胞的活力抑制能力和诱导凋亡作用。结论自噬激活在紫杉醇耐药的卵巢癌细胞中发挥了保护作用,抑制自噬可以增强紫杉醇对耐药细胞的杀伤作用。

REST/TUBB3轴对卵巢癌紫杉醇化疗耐药性的影响及作用机制

目的 探究PE1沉默转录因子(REST)/微管蛋白β(TUBB)3对卵巢癌紫杉醇耐药性影响及作用机制。方法 免疫组织化学法检测卵巢癌紫杉醇敏感及耐药肿瘤组织中REST、TUBB3表达,Western印迹检测卵巢癌紫杉醇敏感及耐药细胞中REST、TUBB3蛋白表达,定量聚合酶链反应(qPCR)检测卵巢癌组织中REST、TUBB3 mRNA表达。不同浓度紫杉醇作用于SKOV3、OVCAR3和SKOV3/tax、OVCAR3/tax细胞后,分析细胞凋亡与周期变化,CCK8检测细胞活力,Western印迹检测REST、TUBB3蛋白表达。过表达或敲低REST后,qPCR和Western印迹分别检测TUBB3 mRNA和蛋白表达,检测细胞凋亡水平和周期阻滞。染色质免疫沉淀法检测H3-ac、H4-ac、HADC1与TUBB3基因第2个CpG位点的结合。结果 REST在卵巢癌紫杉醇耐药肿瘤组织及细胞系中低表达,TUBB3异常高表达于卵巢癌紫杉醇化疗耐药肿瘤组织及细胞系,两者mRNA表达呈显著负相关(P<0.05)。不同浓度紫杉醇作用下,REST蛋白表达逐渐明显降低,TUBB3蛋白表达逐渐明显升高,SKOV3/tax、OVCAR3/tax细胞凋亡水平和细胞周期阻滞显著低于SKOV3、OVCAR3(P<0.05)。过表达REST后,TUBB3表达明显降低,细胞对紫杉醇敏感性明显提高,细胞凋亡水平和细胞周期阻滞显著提高(P<0.05)。敲低REST后H3-ac、H4-ac与TUBB3基因第2个CpG位点的结合增强,促进TUBB3基因转录。结论 在卵巢癌紫杉醇化疗耐药组织及细胞系中,REST低表达,而TUBB3异常高表达,REST和TUBB3的RE-1序列结合调控其转录,在紫杉醇化疗耐药中发挥负调控作用。

叶酸壳寡糖修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒对耐紫杉醇人卵巢癌细胞增殖的影响

目的制备由叶酸壳寡糖修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒(F-CS-PLGA-NPs),考察其体外对人卵巢癌细胞(SKOV-3)和耐紫杉醇卵巢癌细胞(SKOV-3/TAX)的抑制作用。方法采用碳二亚胺法制备叶酸耦联的壳寡糖,以此作为普通纳米粒(PLGA-NPs)的向导材料,采用界面沉积法制备F-CS-PLGA-NPs,噻唑蓝(MTT)法测定对SKOV-3和SKOV-3/TAX体外增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果体外实验结果显示PLGA-NPs和F-CS-PLGA-NPs对SKOV-3/TAX的增殖抑制作用比SKOV-3更不敏感。F-CS-PLGA-NPs对SKOV-3和SKOV-3/TAX的半数抑制浓度(IC50)分别为(23.17±2.45)和(88.81±10.69)nmol·L-1。结论叶酸壳寡糖对PLGA-NPs的修饰可增加其对耐药肿瘤细胞的靶向性,为耐药肿瘤的治疗提供新的思路。

LAMC3低表达对卵巢癌细胞紫杉醇耐药的影响

目的探讨层粘连蛋白γ3亚基(LAMC3)低表达对卵巢癌细胞紫杉醇耐药的影响。方法采用Western blot检测卵巢癌紫杉醇耐药细胞HeyA8-R(H-R)及其亲本细胞HeyA8(H)中LAMC3的表达水平。通过慢病毒转染H-R细胞构建LAMC3低表达的稳定细胞株H-R-C3 shRNA3及其对照细胞株H-R-C3 Scramble。通过CCK-8法检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC_(50)),通过平板克隆形成实验验证细胞克隆形成能力。通过Western blot实验检测多药耐药、铁死亡、细胞周期、凋亡等关键通路蛋白的表达情况。结果与卵巢癌亲本细胞H和对照细胞H-R-C3 Scramble相比,LAMC3在卵巢癌紫杉醇耐药细胞H-R和H-R-C3 shRNA3中的表达显著降低。敲减LAMC3表达可降低卵巢癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇的耐药性及其平板克隆形成能力。Western blot实验结果显示,在梯度浓度紫杉醇药物处理下,与H-R-C3 Scramble细胞相比,H-R-C3 shRNA3细胞的多耐药蛋白多重耐药1/ATP结合盒亚族B1(MDR1/ABCB1)表达水平降低,铁死亡蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)表达水平升高,周期蛋白p21 Waf1/Cip1、细胞周期蛋白E2(CCNE2)表达水平升高,周期素依赖性激酶2(CDK2)、周期素依赖性激酶4(CDK4)表达水平降低,凋亡过程中剪切产生的亚基蛋白cleaved半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、cleaved半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、cleaved聚ADP-核糖聚合酶(PARP)表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LAMC3低表达可能通过影响多药耐药、细胞周期、细胞凋亡等方式来降低卵巢癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇的耐药性,提示LAMC3有望成为一个应用于卵巢癌耐药治疗的潜在新靶点。

外源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药的机制及相关信号转导通路的初步探讨

目的探讨外源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药的机制及相关信号转导通路。方法在原工作基础上,以两种人卵巢癌细胞系A2780(不分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇敏感)和SKOV-3(高分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇耐药)为研究模型,观察外源性IL-8是否影响卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并对其作用的机制和可能的信号转导通路进行研究。结果①体外经IL-8处理的A2780细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性均明显降低即产生部分耐药(耐药倍数分别为6.07和7.23),其耐药程度均低于IL-8高表达的SKOV-3细胞(耐药倍数分别为8.22和9.03)。②IL-8可以剂量依赖的方式上调A2780和SKOV-3细胞的耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达。③MEK1/2抑制剂和PI3K抑制剂均能阻断IL-8诱导的卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生的耐药。结论IL-8-很可能通过上调耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达而致卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药。IL-8的上述作用是由Ras/Raf/MEK/MAPK和PI3K/Akt信号通路介导的。

米非司酮对人耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及其对紫杉醇敏感性的影响

背景与目的:米非司酮是有效的孕酮受体拮抗剂。研究发现,米非司酮对体内外卵巢癌细胞均具有生长抑制作用,但机制尚不清楚。本研究旨在探讨米非司酮对人耐药卵巢癌细胞A2780/T增殖、凋亡及其对紫杉醇敏感性的影响,为临床应用米非司酮治疗耐药性卵巢癌提供实验依据。方法:体外培养人卵巢癌耐药细胞A2780/T,采用CCK-8法检测单用米非司酮及合用紫杉醇时对A2780/T细胞增殖的影响,分析米非司酮与紫杉醇在抑制耐药卵巢癌细胞增殖中的相互作用。采用流式细胞术分析米非司酮及米非司酮联合紫杉醇对A2780/T细胞凋亡的影响。结果:实验所选各种浓度(0.625～20μg/mL)米非司酮对A2780/T和A2780细胞均有一定程度的生长抑制作用,并呈浓度依赖性。当紫杉醇浓度为1.25或2.5μg/mL,合用米非司酮浓度为20、10、5、2.5、1.25或0.625μg/mL时,能显著抑制A2780/T细胞的增殖,并显示两种药物的协同作用(q>1.15)。当紫杉醇浓度为0.625或5μg/mL时,仅表现为两种药物的相加作用(0.85<q<1.15)。米非司酮可诱导A2780/T细胞凋亡。当米非司酮浓度为1.25、2.5和5μg/mL时,细胞凋亡率分别为(15.50±1.48)%、(26.28±0.76)%和(45.13±0.91)%。当以上3种浓度米非司酮与2.5μg/mL紫杉醇联合作用时,显示了两种药物在诱导A2780/T细胞凋亡作用上的协同效应。结论:米非司酮能够显著抑制人卵巢癌细胞A2780/T和A2780增殖,诱导A2780/T细胞凋亡,并能增强A2780/T细胞对紫杉醇的敏感性。

血根碱通过下调TGF-β1/Smad通路抑制紫杉醇耐药卵巢癌细胞生长

培养紫杉醇耐药卵巢癌细胞A2780/Taxol,分为对照组与血根碱组,对照组不加血根碱,血根碱组应用不同浓度血根碱(0.67μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L)处理,应用MTT法、克隆形成、流式细胞检测和Western blot等实验方法检测血根碱对A2780/Taxol细胞增殖、凋亡、周期的影响及Bax、TGF-β1、Smad3蛋白的表达情况。结果显示,2.0μmol/L浓度的血根碱可显著抑制A2780/Taxol细胞增殖,与对照组相比,Bax表达显著上调,TGF-β1和Smad3蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。血根碱通过下调TGF-β1/Smad通路,促进细胞凋亡而抑制紫杉A2780/Taxol细胞生长。

紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX基因表达谱的变化

目的比较紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX及敏感细胞SKOV3基因表达谱的差异,筛查获得性紫杉醇卵巢癌耐药的相关基因。方法取对数生长期SKOV3、SKOV3/TAX细胞,抽提细胞总RNA,合成双链cDNA,生物素标记,用高通量Affymetrix人类基因组U133A基因芯片检测其基因谱。结果与SKOV3相比,SKOV3/TAX有111条基因表达发生变化(45条基因表达上调,66条基因表达下调)。结论SKOV3/TAX的部分基因表达发生变化,与卵巢癌化疗耐药有关。

miR-21转染对卵巢癌细胞株A2780/Taxol紫杉醇耐药性的影响及机制探讨

目的探讨microRNA-21(miR-21)在卵巢癌化疗耐药中的作用及机制。方法荧光定量RT-PCR法检测miR-21在人卵巢癌细胞株A2780及A2780/Taxol的表达水平,合成miR-21的干扰序列,以脂质体为载体转染A2780/Taxol细胞;MTT法检测细胞转染前后对紫杉醇的耐药性;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测磷酸酶基因(PTEN)、BAX及Bcl-2蛋白。结果 miR-21表达下调后,A2780/Taxol对紫杉醇的IC50值明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞内PTEN、BAX蛋白表达水平增加,Bcl-2表达降低。结论 miR-21在人卵巢癌耐药株中呈高表达,其可能是介导人卵巢癌耐药的主要因素之一,具体机制可能是降低PTEN、BAX及升高Bcl-2来介导肿瘤细胞耐药。

米非司酮抑制卵巢癌细胞紫杉醇耐药性产生的研究

目的探讨米非司酮抑制紫杉醇诱导卵巢癌细胞株A2780、skov3耐药性的产生。方法紫杉醇诱导A2780、skov3过程中同时应用不同浓度的米非司酮,采用免疫组化法观察诱导后各细胞亚株中P糖蛋白(P-glyco-protein,P-gp)表达情况;检测各组细胞生长曲线;MTT法检测各细胞亚株的IC50;以罗丹明123(Rohdamin 123,Rh123)作为荧光探针应用流式细胞仪观察各细胞亚株胞内罗丹明含量;Western Blot法检测各细胞亚株中P-gp含量。结果诱导过程中应用米非司酮,使诱导后的A2780、skov3细胞株中P-gp表达水平下降。结论米非司酮可以抑制卵巢癌紫杉醇耐药性的产生。

耐紫杉醇卵巢癌细胞株中凋亡途径相关基因的差异表达

目的:探讨耐紫杉醇卵巢癌细胞株SKOV3/TAXOL中凋亡途径相关基因的表达差异。方法:运用real-ti me-RT-PCR技术,检测耐紫杉醇卵巢癌细胞株SKOV3/TAXOL和敏感细胞株SKOV3中凋亡途径相关基因TRADD、DFFA、MADD和TGM2的表达量,并对结果进行对比分析。结果:4个基因在SKOV3/TAXOL中的表达量均高于SKOV3,其中TRADD、DF-FA、MADD、TGM2分别高2.25、3 333、3.5×105和2 865倍。结论:凋亡相关基因TRADD、DFFA、MADD和TGM2在SK-OV3/TAXOL细胞株中表达都升高,说明卵巢癌细胞对紫杉醇耐药可能在一定程度上与细胞凋亡功能异常相关。

紫杉醇耐药卵巢癌细胞系的建立及耐药机制研究

目的建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株,探讨其耐药机制。方法采用梯度浓度递增法诱导建立对紫杉醇(Paclitaxel,TAX)耐药的人卵巢癌细胞耐药株SKOV3/TAX,MTT法检测SKOV3/TAX对SKOV3的耐药指数(resistance index,RI),Western Blot法检测耐药细胞中凋亡及耐药相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的表达情况,探讨其耐药机制。结果成功建立人卵巢癌耐紫杉醇细胞株SKOV3/TAX,耐药指数高达88.46;与SKOV3相比,紫杉醇耐药细胞株形态较不规则,细胞扁平,且贴壁较牢;Western Blot及免疫荧光实验均证实SKOV3/TAX中PARP水平明显下调,且加用TAX后PARP的剪切带较亲本细胞明显减少甚至缺失。结论紫杉醇耐药卵巢癌细胞中PARP蛋白表达明显下调,该下调很可能参与了卵巢癌对紫杉醇的耐药调控。

紫杉醇耐药人卵巢癌细胞株中线粒体DNA基因突变的研究

目的:研究紫杉醇耐药的人卵巢癌细胞株SKOV3/Tax和OC3/Tax中线粒体DNA(mtDNA)突变。方法:提取细胞DNA,分析mtDNA突变,比较SKOV3/Tax和OC3/Tax与亲本敏感细胞SKOV3及OC3之间mtDNA突变数量和突变类型的差异。结果:紫杉醇耐药及敏感细胞mtDNA的突变热点依次是ND5基因、Cytb基因、ND4基因、CoⅡ基因及ND1基因;与敏感细胞株相比,耐药细胞株中mtDNA测序中发现更多的基因突变频率,主要表现为A→C,A→G,T→C,A→T,缺失A、C,插入T、C等,其中以缺失A最为明显。结论:人卵巢癌细胞株OC3及SKOV3中mtDNA编码区的ND5基因、Cytb基因、ND4基因和CoⅡ基因是具有高度突变性的区域,其与卵巢癌的发生、发展有重要关系。耐药细胞株中的突变明显高于敏感细胞株,推测突变的增加可能与卵巢癌耐药有关。

紫杉醇耐药的卵巢癌细胞中PKC-α与P-gp的表达

目的:探讨PKC-α与P-gp在紫杉醇诱导的卵巢癌耐药细胞系A2780/Taxol中的表达.方法:免疫细胞化学SP法及免疫荧光双标检测PKC-α与P-gp在耐药细胞A2780/Taxol及其亲本细胞中的表达;WesternBlot检测并半定量分析PKC激动剂佛波脂(PMA)和抑制剂十字孢碱(SP)作用后P-gp在两种细胞上的表达水平.结果:免疫细胞化学结果表明在A2780/Taxol中,P-gp与PKC表达均呈阳性,而在亲本细胞中,P-gp不表达,PKC呈阳性表达.在A2780/Taxol中PKC-α与P-gp有共表达.SP及PMA作用后,A2780/Taxol细胞P-gp表达无明显差别.结论:卵巢癌对紫杉醇耐药的产生与PKC-α和P-gp有关.

DHA逆转卵巢癌细胞A2780/T紫杉醇耐药的机制研究

目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)对卵巢癌耐药细胞的耐药逆转作用及其机制。方法:利用MTT评估细胞对紫杉醇耐药性的改变,罗单明实验验证细胞的药物外排能力,流式细胞仪检测细胞周期的分布,实时定量PCR及蛋白质印迹检测多药耐药蛋白1(MDR1)的mRNA水平、耐药相关蛋白及通路蛋白的蛋白水平。结果:DHA作用48 h后A2780/T对紫杉醇的半数抑制率(IC50)下降(P<0.05),且罗丹明在胞内的含量增加,呈剂量依赖性(P<0.05)。同时紫杉醇与DHA联合使用可以改变细胞周期的分布,GO/G1期的细胞百分比上升(P<0.05),P-糖蛋白(P-gp)及其他MDR相关蛋白的表达下降,NF-κB及磷酸化p38 MAPK表达下降,而p38 MAPK未见明显变化。结论:DHA可以通过改变细胞周期分布,抑制P-gp及MDR相关蛋白的功能和表达,逆转卵巢癌耐药细胞的耐药性,同时该机制还可能与抑制NF-κB通路、抑制p38 MAPK的磷酸化有关。

紫杉醇对顺铂耐药卵巢癌细胞的影响

目的研究抗癌药物诱导顺铂耐药细胞的调亡的规律,为卵巢癌的化疗提供理论依据。方法紫杉醇作用于体外培养的顺铂耐药的卵巢癌细胞COC1细胞系通过HE染色、电子显微镜、流式细胞术等方法进行检测和观察。结果经紫杉醇处理的卵巢癌COC1细胞出现典型的细胞调亡特征。紫杉醇诱导细胞调亡在一定范围内具有剂量依赖性,最高达到39%,但是浓度加大〉50nmol/ml,调亡率下降。结论紫杉醇能有下得诱导顺铂耐药的肿瘤细胞的调亡。

PAK5和MDRI／P-gP在卵巢癌细胞紫杉醇耐药中的表达和临床意义

卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，其病死率居女性生殖系统肿瘤首位，由于大多数卵巢癌发病隐匿，且缺乏准确有效的早期诊断方法。目前手术联合化疗的综合治疗在一定程度上延长了晚期卵巢癌患者的生存时间；但多数患者在18～24个月后复发，其5年生存率〈30％。肿瘤细胞减灭术加以铂类和紫杉醇为基础的联合化疗已成为当前卵巢癌的标准治疗手段。

BKM120对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的抑制作用

目的研究BKM120对卵巢癌A2780细胞和紫杉醇耐药卵巢癌A2780/Taxol细胞的抑制作用。方法采用MTT法检测A2780和A2780/Taxol细胞存活情况,设溶剂对照组和实验(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)组(BKM120浓度分别为0,0.1,0.3,1.0,3.0,10.0,30.0,100.0μmol/L)。PI单染检测细胞周期的分布情况;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡情况,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白表达水平,设阳性对照组[顺铂(DDP)组,10μmol/L]、溶剂对照组和实验A,B,C,D组(BKM120浓度分别为0,0.3,1.0,3.0,10.0μmol/L)。结果与溶剂对照组比较,实验(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)组A2780和A2780/Taxol细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01或P<0.05);BKM120对A2780和A2780/Taxol细胞半数抑制浓度分别为(2.25±0.13)μmol/L和(4.17±0.43)μmol/L。与溶剂对照组比较,实验C,D组G2期A2780和A2780/Taxol细胞显著增多(P<0.01或P<0.05);DDP组和实验A,B,C,D组A2780和A2780/Taxol凋亡细胞显著增多(P<0.01或P<0.05);实验C组、D组A2780和A2780/Taxol细胞Bcl-2、Pro-caspase 3、P-gp蛋白表达水平和PAkt/Akt显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论BKM120可降低紫杉醇耐药卵巢癌A2780/Taxol细胞的存活率,其机制可能与抑制A2780和A2780/Taxol细胞的增殖,下调P-Akt及P-gp蛋白表达水平诱导细胞凋亡有关。

蛋白激酶C激活剂及抑制剂对紫杉醇耐药的卵巢癌细胞中P-糖蛋白表达及功能的影响

目的:探讨PKC(protein kinase C)激活剂及抑制剂对紫杉醇诱导的卵巢癌耐药细胞系A2780/Taxol中P-gp(P-glyco-protein)的表达及功能的影响。方法:免疫细胞化学SP法检测P-gp和PKC-α在耐药细胞A2780/Taxol及其亲本细胞中的表达;Western Blot检测PKC激动剂佛波脂(PMA)和抑制剂十字孢碱(SP)作用后P-gp在2种细胞上的表达水平;以罗丹明123(Rohdamin123,R123)作为荧光探针用流式细胞仪检测PMA及SP对细胞膜P-gp功能的影响。结果:P-gp在耐药细胞A2780/Taxol中呈阳性表达,在亲本细胞中不表达;PMA处理细胞,细胞内R123的平均荧光强度明显减低,Pgp的功能增强而表达量无明显变化;SP处理细胞,细胞内R123的平均荧光强度明显增加,Pgp的功能减弱而表达也无明显减少。结论:PKC通过对P-gp功能的调节而参与卵巢癌紫杉醇耐药的形成。