姜黄素对人卵巢癌细胞株skov_3生长的影响

目的探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株skov3体外生长的的影响。方法采用MTT法测定姜黄素不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株skov3生长的抑制作用,计算细胞生长抑制率;光镜和电镜下观测细胞形态学及超微结构的改变;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果姜黄素具有诱导人卵巢癌细胞株skov3细胞凋亡的作用,呈剂量和时间依赖性。部分细胞出现凋亡形态学改变。结论姜黄素通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,能显著地抑制卵巢癌细胞sk-ov3的体外生长。

顺铂、5-FU联合应用及联用方式对人卵巢癌细胞株生长的抑制作用

采用细胞培养及 MTT方法检测全量、半量顺铂 (DDP)和 5 - FU及各种联用方式如预处置及同时联合应用对人卵巢癌 3AO细胞株的生长抑制作用。结果 :1DDP和 5 - FU对 3AO细胞生长均有显著的抑制作用 (P均 <0 .0 1) ,且 DDP的杀伤作用呈明显的剂量依赖性 ,半量 DDP的抑制作用较全量者明显减弱 (P<0 .0 1) ,而 5 -FU的剂量依赖性作用不明显。 2 DDP和 5 - FU以各种给药顺序、各种浓度方式联合应用对 3AO细胞均有显著的杀伤作用 (P<0 .0 1) ,尤以预处置组作用最为突出。给予 5 - FU全量预处置 2 4h后再给予 DDP(全量 5 - FU预处置组 ) ,对 3AO细胞的抑制率可达 84.8% ,比单用全量 5 - FU或 DDP效果显著提高 (P<0 .0 5 )。5 - FU半量预处置亦显示相同的作用趋势。5 - FU或 DDP半量预处置均可达到单一药物全量所能达到的细胞抑制率。3全量或半量DDP和 5 - FU同时联合应用亦可达到满意的细胞抑制水平。认为 5 - FU和 DDP联合应用及各种联用方式对人卵巢癌 3AO细胞均有显著的杀伤作用 ,尤以 5 - FU预处置的方式作用效果最为明显。采用预处置的方法联合应用DDP和 5 - FU是提高卵巢癌化疗效果、降低单药剂量及毒副作用的新途径。

佛波酯诱导人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA突变的研究

目的:研究佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA(mtDNA)突变的诱导作用。方法:提取细胞DNA,进行mtDNA突变的分析,比较各组细胞之间mtDNA突变率和突变类型的差异。结果:mtDNA的突变热点依次是CoⅡ基因、ND5基因、Cytb基因和ND4基因,在mtDNA突变的测序中发现多个基因突变,突变类型主要为A→T,T→A,G→A,T→C,A→G,C→T,其中C→T为突变热点。结论:Cytb基因的突变可能会对线粒体的氧化过程产生显著的影响。人卵巢癌细胞株SKOV3株mtDNA编码区的CoⅡ、Cytb、ND4、ND5基因是一个具有高度多态性和突变性的区域,它与卵巢癌的发生、发展有重要关系。

阿司匹林、扑热息痛和尼美舒利对人卵巢癌细胞株SKOV_3的抑制作用

[目的]研究非甾体类药物阿司匹林、扑热息痛和尼美舒利对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用及其相关机制。[方法]利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察阿司匹林、扑热息痛和尼美舒利对人卵巢癌细胞株SKOV3的生长抑制作用;免疫组化法检测COX-2在SKOV3细胞中的表达情况以及3种药物对SKOV3细胞中Ki-67,C-erbB-2表达的影响;透射电镜观察3种药物作用SKOV3细胞后形态变化和凋亡情况;流式细胞术检测3种药物对SKOV3细胞周期的影响。[结果]阿司匹林、扑热息痛和尼美舒利对人卵巢癌细胞株SKOV3具有生长抑制作用,并呈时间-剂量依赖性。免疫组化发现COX-2在SKOV3细胞中呈阳性表达,阿司匹林使SKOV3细胞中C-erbB-2蛋白表达下降,尼美舒利使SKOV3细胞核中Ki-67蛋白表达下降,扑热息痛对C-erbB-2和Ki-67蛋白表达无影响。透射电镜可见阿司匹林、扑热息痛和尼美舒利作用后的SKOV3细胞中有凋亡小体和坏死细胞的形成。流式细胞术发现400μmol/L尼美舒利和10-2mol/L阿司匹林使SKOV3细胞停滞在G0/G1期。[结论]非甾体类药物,特别是COX-2抑制剂尼美舒利可望作为预防性化疗药物应用于卵巢癌的治疗。

紫杉醇耐药人卵巢癌细胞株中线粒体DNA基因突变的研究

目的:研究紫杉醇耐药的人卵巢癌细胞株SKOV3/Tax和OC3/Tax中线粒体DNA(mtDNA)突变。方法:提取细胞DNA,分析mtDNA突变,比较SKOV3/Tax和OC3/Tax与亲本敏感细胞SKOV3及OC3之间mtDNA突变数量和突变类型的差异。结果:紫杉醇耐药及敏感细胞mtDNA的突变热点依次是ND5基因、Cytb基因、ND4基因、CoⅡ基因及ND1基因;与敏感细胞株相比,耐药细胞株中mtDNA测序中发现更多的基因突变频率,主要表现为A→C,A→G,T→C,A→T,缺失A、C,插入T、C等,其中以缺失A最为明显。结论:人卵巢癌细胞株OC3及SKOV3中mtDNA编码区的ND5基因、Cytb基因、ND4基因和CoⅡ基因是具有高度突变性的区域,其与卵巢癌的发生、发展有重要关系。耐药细胞株中的突变明显高于敏感细胞株,推测突变的增加可能与卵巢癌耐药有关。

佛波酯对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞体外生长的影响

【目的】探讨佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖、形态、细胞周期的影响。【方法】试验设试剂对照组、肿瘤细胞阴性对照组及5种不同浓度的促癌剂实验组。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法分析TPA不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用;光镜下观测细胞形态学的改变;透射电镜观察细胞超微结构的变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡及细胞周期的变化率。【结果】TPA具有抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的作用,呈剂量和时间依赖性。细胞周期发生G1→S期阻滞。【结论】TPA能抑制SKOV3细胞增殖,显著地抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外生长。

姜黄素、佛波酯对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长的影响

目的:通过研究抑癌剂姜黄素(CCM)、促癌剂佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖、细胞形态及细胞周期的影响,探讨肿瘤细胞SKOV3增殖抑制的效应机制。方法:采用MTT法测定CCM、TPA不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率。光镜和电镜下观测细胞形态学及超微结构的改变。流式细胞仪检测细胞周期。结果:TPA具有抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的作用,呈剂量和时间依赖性,细胞生长停滞于G1/S期。部分细胞出现凋亡形态学改变。TPA抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性。细胞周期发生G1→S期阻滞。结论:CCM、TPA通过抑制细胞增殖,细胞周期发生停滞,显著地抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外生长。

CCM、TPA诱导人卵巢癌细胞株skov_3 mtDNA突变的研究

目的研究姜黄素(CCM)、佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株skov3m tDNA突变的诱导作用。方法提取细胞DNA,进行m tDNA突变的分析,检测各组细胞之间m tDNA的突变率和突变类型。结果 CCM、TPA诱导人卵巢癌细胞株skov3m tDNA突变为多基因、多位点的突变,其突变热点依次位于CoⅡ基因、ND5基因、Cytb基因和ND4基因。突变类型主要为A→T、T→A、G→A、T→C、A→G、C→T,C→T最为常见。结论人卵巢癌细胞株skov3株m tDNA编码区的CoⅡ、Cytb、ND4、ND5是一个高度多态性和突变性的区域,它与卵巢癌的发生、发展有重要关系。

姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV-3增殖和凋亡的影响

姜黄素是从姜科黄属植物姜黄根茎中提取的一种植物多酚,具有广泛的药理作用,如抗氧化、抗凝、抗人类免疫缺陷病毒、抗菌、解痉、抗肿瘤、抗突变等作用[1]。因其能抑制多种肿瘤细胞系的生长[2],成为当今的研究热点之一。本实验对姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV-3的体外增殖和凋亡的作用进行研究，现报告如下。

水蛭素联合阿霉素对人卵巢癌细胞株耐药性的实验观察

目的探讨水蛭素联合阿霉素对人卵巢癌细胞生长的影响。方法通过细胞培养后绘制生长曲线,了解联合用药对抑制癌细胞增殖及诱导凋亡的作用。结果水蛭素联合阿霉素具有杀伤人卵巢癌细胞的效果。结论水蛭素有可能作为临床抗癌和抑癌治疗的潜在辅助用药。

PARP-1抑制剂AG014699对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及凋亡的影响

目的探讨PARP-1抑制剂AG014699对人卵巢癌细胞株SKOV3`增殖及凋亡的影响。方法①采用MTT法测定AG014699在不同浓度、不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖作用的影响;②用流式细胞仪测定AG014699在50μmol/L浓度下对人卵巢癌细胞株SKOV3作用24h后对细胞周期及凋亡的影响。结果①MTT测定:在24、48、72h时AG014699在10μmol/L分别测得的OD值与对照组相比,P<0.05,有统计学差异;②流式细胞仪测定:AG014699在50μmol/L浓度下对SKOV3作用24h能明显改变细胞的周期分布,诱导细胞凋亡。结论 AG014699能明显抑制人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖并诱导其凋亡。

去甲斑蝥素对人卵巢癌细胞株AO增殖及细胞周期的影响

目的探讨去甲癍蝥素（NCTD）对人卵巢癌细胞株AO（或3AO）的增殖抑制及周期阻滞的作用。方法通过台盼蓝拒染法观察NCTD对人卵巢癌细胞株AO增殖抑制；流式细胞仪检测人卵巢癌细胞株AO的增殖周期变化。结果NCTD抑制人卵巢癌细胞株AO增殖具有剂量及时间依赖性（P〈0.05）；NCTD使人卵巢癌细胞株AO G2／M期细胞增多，G0／G1期细胞和S期细胞减少。结论去甲斑蝥素能使人卵巢癌细胞株AO产生G2／M期阻滞，从而抑制人卵巢癌细胞株的增殖。

线粒体钙单向转运体调节因子1对人卵巢癌细胞株HO8910、SKOV3生物学行为的影响

目的探究线粒体钙单向转运体调节因子1(MCUR1)对卵巢癌细胞株HO8910、SKOV3生物学行为的影响。方法将人卵巢癌细胞株HO8910、SKOV3分为四组,一组为空细胞组,其余三组分别转染siRNA干扰序列,检测四组的MCUR1表达水平。选取MCUR1表达水平最低的一组和最高的一组进行后续实验。分析干扰MCUR1对细胞增殖能力、细胞凋亡能力及相关蛋白表达的影响。结果两种细胞株中,MCUR1均在siRNA-2组中表达水平最低。HO8910-siRNA组、SKOV3-siRNA组细胞增殖能力与对应NC组无明显差异(P>0.05)。HO8910-siRNA组的细胞凋亡比例为19.99%,高于HO8910-NC组的7.55%,差异具有统计学意义(P<0.05);SKOV3-siRNA组的细胞凋亡比例为21.49%,高于SKOV3-NC组的5.77%,差异具有统计学意义(P<0.05)。蛋白质免疫印迹(WB)实验结果显示,HO8910-siRNA组、SKOV3-siRNA组的P53表达水平高于对应NC组,差异具有统计学意义(P<0.0001)。结论MCUR1可能通过调控P53通路调控细胞凋亡,有望成为卵巢癌诊断和治疗的新靶点。

circDIDO1通过miR-141/Keap-Nrf2/HO-1通路对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨环状非编码RNA(circ)DIDO1通过微小RNA(miR)-141/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)通路探讨对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖、侵袭和迁移的影响。方法 qRT-PCR检测卵巢癌组织及细胞系(SKOV3、OVCAR3和A2780)及IOSE80细胞中miR-141、circDIDO1、Keap1、Nrf2、HO-1 mRNA表达水平;取SKOV3细胞,设置分组为对照组、DIDO1过表达(Exo-circDIDO1)组(转染Exo-circDIDO1)、过表达阴性对照(Exo-vector)组(转染Exo-vector)、Exo-circDIDO1+miR-141模拟物(miR-141mimics)组(共转染Exo-circDIDO1、miR-141mimics)、Exo-circDIDO1+模拟物阴性对照(mimicsNC)组(共转染Exo-circDIDO1、mimicsNC)。48h后,CCK-8及Transwell实验检测细胞迁移、侵袭及增殖变化;qRT-PCR检测及Westernblot检测各组细胞miR-141、circDIDO1、Keap1、Nrf2、HO-1表达;双荧光素酶验证miR-141分别与circDIDO1、Keap1靶向关系。结果 与IOSE80细胞及正常组织相比,SKOV3、OVCAR3和A2780细胞及癌组织中circDIDO1、Keap1 mRNA表达显著降低,miR-141、Nrf2、HO-1 mRNA表达显著增加(P<0.05),以SKOV3细胞中变化最为显著。miR-141分别与Keap1、circDIDO1均为靶向关系。与对照组、Exo-vector组相比,Exo-circDIDO1组circDIDO1、Keap1蛋白及mRNA表达显著增加,细胞增殖率及细胞侵袭、迁移数、miR-141、Nrf2、HO-1蛋白及mRNA显著下降(P<0.05),miR-141 mimics逆转了Exo-circDIDO1对SKOV3细胞恶性行为的抑制作用。结论 过表达circDIDO1可通过调控miR-141/Keap-Nrf2/HO-1通路阻止人卵巢癌细胞株SKOV3增殖、侵袭和迁移。

莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞株JAK2/STAT3信号通路影响的研究

目的观察莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞株体外生长的影响及对SKOV3细胞株JAK2/STAT3信号通路基因表达的影响,探讨莪术醇治疗卵巢癌的分子机制。方法不同浓度莪术醇作用于人卵巢癌细胞株SKOV3,MTT法检测SKOV3细胞的增殖抑制率,实时荧光定量-PCR法检测SKOV3细胞中JAK2、STAT3基因表达水平。结果莪术醇对卵巢癌SKOV3细胞有明显的增殖抑制作用,其强度随药物作用时间及浓度的增加而增强,呈时间-剂量依赖性。实时荧光定量-PCR法检测证实莪术醇作用后SKOV3细胞中JAK2、STAT3基因表达受到明显抑制。结论莪术醇能明显抑制SKOV3细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过降调节JAK2、STAT3基因的表达来实现的。

福安泰-03对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭能力的影响

应用噻唑蓝法检测从赤魟中分离到的福安泰-03(Fuantai-03,FAT-03)对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM生长的影响;人工重组基底膜检测FAT-03对细胞侵袭能力的影响;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测FAT-03对HO-8910PM细胞分泌MMP-9能力的影响。结果显示,FAT-03(20.0、40.0、60.0μg/ml)作用HO-8910PM细胞24h,对细胞生长的抑制率小于10%,对细胞与纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和Matrigel粘附的抑制率分别为15.1%、28.0%(P<0.05)、54.1%(P<0.01)和14.7%、34.3%(P<0.05)、40.5%(P<0.01),对细胞迁移的抑制率分别为16.4%、33.8%(P<0.05)和42.6%(P<0.01)。此外,FAT-03显著减少HO8910-PM细胞分泌MMP-9的量,并降低其活性。这些实验事实提示FAT-03能明显抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力。

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼联合山奈酚诱导卵巢癌细胞凋亡的协同机制

目的:探讨厄洛替尼和山奈酚对表皮生长因子受体酪氨酸激酶(EGFR-TPK)的抑制作用,并阐明二者对卵巢癌细胞生长的协同抑制作用机制。方法:培养人卵巢癌SKOV-3细胞,将细胞分为空白组、山奈酚组和厄洛替尼组,将不同浓度山奈酚与厄洛替尼加入到EGFR-TPK和人卵巢癌SKOV-3细胞中,ELISA法检测EGFR-TPK的活性,采用Transwell小室法检测各组SKOV-3细胞侵袭转移能力,采用酶标仪检测各组SKOV-3细胞凋亡蛋白caspase-3活性,MTT法检测各组SKOV-3细胞的生长抑制率及山奈酚联合厄洛替尼对SKOV-3细胞的生长抑制作用。结果:山奈酚和厄洛替尼对EGFR-TPK的半数抑制浓度(IC50)分别为(2.33±0.32)g·L-1和(1.75±0.18)g·L-1,二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,山奈酚和厄洛替尼组穿膜细胞数减少(P<0.05或P<0.01),SKOV-3细胞中凋亡蛋白caspase-3活性明显增加(P<0.05或P<0.01)。随着山奈酚和厄洛替尼浓度增加,SKOV-3细胞生长抑制率不断增加,与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:山奈酚联合厄洛替尼对人卵巢癌SKOV-3细胞具有协同抑制作用,并对SKOV-3细胞转移起到抑制作用。

卵巢癌细胞中乳源免疫调节肽受体的筛选、鉴定及其功能的初步研究

目的利用乳源免疫调节肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)进行受体的筛选、鉴定及其功能的初步研究。方法在激光共聚焦显微镜下,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记PGPIPN,作用于SK-OV3,观察其细胞定位;培养SKOV3细胞,从中提取PGPIPN的受体或作用位点蛋白;PGPIPN作为亲和层析的配基,通过NHS-activated亲和层析柱进行分离和纯化受体;真空冷冻干燥仪浓缩蛋白;SDS-PAGE初步验证筛选结果;经电喷雾质谱法及生物信息学对条带蛋白进行测序和分析;荧光标记肽与受体的结合试验,验证受体和PGPIPN的结合性;利用MTT法将一定浓度的PGPIPN和不同浓度的受体与卵巢癌细胞共孵育,观察对细胞增殖/凋亡可能产生的影响。结果在激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光标记肽结合于SKOV3的胞膜上;通过提取膜蛋白和亲和层析法成功筛选了特异性结合的受体;通过电喷雾质谱法初步确定性质相似、功能相关蛋白,可能为ATP合酶、basigin等;荧光标记肽与受体的结合试验验证了受体的特异性;MTT结果显示:在不加受体时,PGPIPN能抑制SKOV3增殖,当PG-PIPN、受体与卵巢癌细胞共孵育时,PGPIPN抑制SKOV3增殖明显减弱(P<0.05,P<0.01)。结论PGPIPN能抑制SKOV3的增殖并诱导细胞凋亡的作用位点位于细胞膜上,其抗癌作用可能通过胞膜结合蛋白而启动信号转导通路,为进一步探讨其抗癌机制奠定了基础。

EGCG棕榈酸酯对人卵巢癌HO-8910细胞株的体外抑制活性实验研究

利用药理学实验,研究比较了脂溶性的单取代EGCG棕榈酸酯、水溶性的绿茶多酚和脂溶性茶多酚对人卵巢癌HO-8910细胞株的体外抑制活性。实验结果表明,单取代的EGCG棕榈酸酯的活性比脂溶性茶多酚强,而与水溶性的绿茶多酚相当,有望作为抑制肿瘤细胞的有效活性组分,在新型抗肿瘤药物开发中存在着潜在的应用前景。