卵巢颗粒细胞瘤的影像表现

目的探讨卵巢颗粒细胞瘤(OGCT)的影像表现及临床特征,以提高对该肿瘤的认识及诊断水平。方法回顾性分析4例进行手术治疗且确诊为OGCT的CT、MRI影像学、临床及病理相关资料,并分析病变的影像学特征。结果 4例患者(61岁,73岁,68岁,79岁)共发现4个肿瘤,3例位于左侧卵巢,1例位于右侧卵巢,病变于CT、MRI均表现为囊实性肿块,2例实性部分为主,1例囊实性部分相当,1例囊性部分为主,实性部分于T1WI呈等或稍高信号,T2WI呈稍高信号,DWI病变呈高信号,囊性部分3例T1WI呈低信号、T2WI呈高信号,1例T1WI呈低-稍高不均匀信号、T2WI呈低-高混杂信号,2例T2WI呈“蜂窝状、海绵状”典型改变,2例病变T2*WI见低信号。增强扫描病变实性部分呈中度强化。结论OGCT有一定的影像学特征,若发现卵巢囊实性肿瘤,T2WI呈“蜂窝状、海绵状”典型改变,实性成分于T2WI呈等或稍高信号,并有出血征象时,结合患者临床病史,应考虑到该肿瘤的诊断。

山羊circFDXR的鉴定及其在卵巢颗粒细胞中高效表达的研究

【目的】鉴定山羊环状RNA(circular RNA,circRNA)铁氧还蛋白还原酶(circFDXR)的表达,建立其在山羊原代卵巢颗粒细胞中的高效表达方式。【方法】利用PCR扩增、DNA测序、RNase R酶消化、实时荧光定量PCR鉴定circFDXR的环状性质。通过核质分离、荧光原位杂交(FISH)检测circFDXR亚细胞定位。利用同源重组将circFDXR的线性序列无缝克隆至慢病毒载体pLC5-ciR,转染至293T细胞包装病毒后进行病毒滴度测定,并确定最佳感染复数(MOI),并以最佳MOI感染山羊原代卵巢颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR检测过表达效率,并测序验证circFDXR是否正确环化。【结果】山羊circFDXR主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞质中,耐受RNase R酶的消化。成功构建circFDXR慢病毒过表达载体,浓缩病毒滴度为5.49×10~9 TU/mL,感染山羊卵巢颗粒细胞的最佳MOI为100。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,过表达组circFDXR表达量极显著升高(P<0.01),测序结果显示过表达的circFDXR可以正确环化。【结论】circFDXR主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞质中,相比线性RNA具有更高的稳定性。利用慢病毒包装的circFDXR在山羊原代卵巢颗粒细胞中可以正确环化,本试验结果为进一步研究circFDXR在山羊原代卵巢颗粒细胞中的功能奠定了理论基础。

微RNA-93-5p对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及机制

目的探讨血浆微RNA(miR)-93-5p对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及其可能机制。方法选择2022年1月至2023年1月焦作市人民医院收治的120例育龄期PCOS患者为PCOS组,选择同期在本院体检的18例育龄期健康女性为对照组。收集2组受试者的年龄、体质量和身高,计算体质量指数(BMI)。2组受试者均在自然月经周期的卵泡期或黄体酮诱导的撤退性出血期采集空腹静脉血,采用电化学法测定血清黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、总睾酮(TT)、抗米勒管激素(AMH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)水平,并计算胰岛素抵抗稳态模型(HOMA-IR);采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组受试者血浆中miR-93-5p表达水平。取对数生长期人卵巢颗粒细胞KGN,以每孔3×10^(5)个细胞接种至6孔板中,随机分为miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组、阴性对照(NC)组、空白对照组。miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics;LY294002+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50 mmol·L^(-1) LY294002处理;AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50μmol·L^(-1) AZD5363处理;NC组KGN细胞转染阴性对照质粒;空白对照组KGN细胞不做任何处理。应用qRT-PCR法检测各组KGN细胞中miR-93-5p表达,细胞计数试剂盒-8试验检测各组KGN细胞增殖情况。结果PCOS组与对照组受试者的年龄及FSH、ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05);PCOS组患者的BMI、TT、AMH、LH、FINS、FBG、HOMA-IR显著高于对照组(P<0.05)。PCOS组患者血浆中miR-93-5p相对表达量显著高于对照组(t=-5.549,P<0.001)。miR-93-5p与TT、FINS、HOMA-IR呈中度正相关(r=0.434、0.622、0.586,P<0.001),与FBG和LH呈低度正相关(r=0.398、0.398,P<0.001)。ROC曲线显示,血浆miR-93-5p诊断PCOS的最佳临界值为1.380,曲线下面积为0.906(95%置信区间:0.839~0.973,P<0.001),敏感度为0.858,特异度为0.833,约登指数为0.691。miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞中miR-93-5p相对表达量均显著高于空白对照组和NC组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞的增殖能力显著高于空白对照组和NC组(P<0.05);LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组细胞的增殖能力显著低于miR-93-5p mimics组(P<0.05)。结论PCOS患者血浆miR-93-5p呈过表达,miR-93-5p可能通过基于调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激B信号通路介导PCOS卵巢颗粒细胞增殖来参与PCOS的发生发展,血浆miR-93-5p水平对PCOS有一定的诊断价值。

多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞miR-144-3p及其靶基因PTEN的表达及作用研究

目的探讨多囊卵巢综合征患者(polycystic ovary syndrome,PCOS)卵巢颗粒细胞miR-144-3p及其靶基因PTEN的表达及作用。方法选取2020年10月至2022年3月在淮安市妇幼保健院生殖医学科行IVF/ICSI治疗的20例PCOS患者作为研究对象即为PCOS组,选取行IVF/ICSI治疗的输卵管因素或男方因素患者20例作为对照组。收集两组患者颗粒细胞,并分析颗粒细胞miR-144-3p的表达情况。利用Tar-getScan数据库预测miR-144-3p的靶基因,并采用双荧光素酶活性检测验证靶基因。复苏人卵巢颗粒细胞(ovarian granulosa cells,KGN),转染并建立miR-144-3p模拟物组、模拟物阴性对照组、miR-144-3p抑制物组、抑制物阴性对照组、si-PTEN和siRNA-NC组。采用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡情况,RT-PCR及蛋白质印迹技术检测颗粒细胞中miR-144-3p、PTEN mRNA及蛋白的表达情况。结果RT-PCR结果显示P-COS组miR-144-3p表达水平显著低于对照组(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示miR-144-3p mimic组的颗粒细胞凋亡百分比显著低于mimic-NC组(P<0.05),miR-144-3p inhibitor组颗粒细胞凋亡水平显著高于inhibitor-NC组(P<0.05)。生物信息学预测miR-144-3p的靶基因为PTEN,荧光素酶结合实验证实miR-144-3p能特异结合PTEN-3′UTR并下调PTEN基因表达。RT-PCR测定结果显示PCOS组PTEN mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),且与miR-144-3p表达水平呈负相关(r=-0.91,P<0.001)。qRT-PCR及蛋白质印迹检测结果显示与mimic NC组相比,miR-144-3p mimic组中PTEN mRNA及蛋白表达量显著低于mimic NC组(P<0.05)。miR-144-3p inhibitor组PTEN mRNA及蛋白表达量显著高于inhibitor NC组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示si-PTEN组颗粒细胞凋亡水平显著低于siRNA-NC组(P<0.05),而miR-144-3p inhibitor+si-PTEN组的颗粒细胞凋亡比例显著低于miR-144-3p inhibitor组(P<0.05)。结论PCOS患者卵巢颗粒细胞miR-144-3p表达水平显著降低,而PTEN基因表达水平显著增高,进而促进PCOS患者卵巢颗粒细胞凋亡。

miR⁃7靶向调控CTSK对贵州黑山羊卵巢颗粒细胞增殖和迁移的影响

【目的】探明miR⁃7与CTSK基因相互作用关系及其对贵州黑山羊卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,为贵州黑山羊优良品种保藏、选育与开发利用提供依据。【方法】采用在线数据库筛选miR⁃7与CTSK基因3′UTR的结合靶点,通过将CTSK基因3′UTR插入双荧光素酶报告系统中进行互作位点检测;采用CCK⁃8和划痕试验检测miR⁃7是否靶向调控CTSK基因影响贵州黑山羊卵巢颗粒细胞的增殖和迁移;过表达miR⁃7后采用RT⁃qPCR检测其对促增殖蛋白PCNA、抗凋亡蛋白BCL2和促凋亡相关蛋白BAX、caspase⁃3、caspase⁃9表达水平的影响。【结果】成功构建CTSK基因3′⁃UTR 2个预测靶点的野生型和突变型双荧光素酶报告载体;双荧光素酶试验结果表明CTSK基因3′UTR区的2个预测靶位点均受miR⁃7调控;CCK⁃8和细胞划痕结果表明,转染miR⁃7试验组的卵巢颗粒细胞增殖和迁移能力均显著高于对照(NC)组;RT⁃qPCR结果表明,上调miR⁃7能极显著上调PCNA和BCL2的表达,抑制BAX、caspase⁃3和caspase⁃9的表达。【结论】miR⁃7可以靶向结合CTSK的3′UTR区2个靶位点并极显著抑制CTSK基因的表达;过表达miR⁃7可以显著促进贵州黑山羊卵巢颗粒细胞增殖和迁移能力,并促进增殖标志基因、抗凋亡基因的表达和抑制促凋亡相关基因的表达。研究结果可为进一步研究miR⁃7靶向调控CTSK表达影响贵州黑山羊繁殖性能的分子机制提供理论依据。

基于氧化应激探讨疏肝补肾法对卵巢早衰大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的:探讨疏肝补肾法对卵巢早衰大鼠颗粒细胞凋亡的作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、柴胡疏肝散合左归饮低剂量组、柴胡疏肝散合左归饮中剂量组、柴胡疏肝散合左归饮高剂量组、雌激素组,每组8只。除正常组外,其余大鼠腹腔注射环磷酰胺连续15 d建立卵巢早衰大鼠模型,同时采用慢性不可预知温和应激方式建立肝郁证模型,连续21 d。造模成功后,柴胡疏肝散合左归饮低、中、高剂量组分别灌服柴胡疏肝散合左归饮混悬液3.39 g·kg^(-1)、6.77 g·kg^(-1)、13.55 g·kg^(-1),雌激素组灌胃戊酸雌二醇(补佳乐)0.105 mg·kg^(-1),正常组和模型组灌胃等体积的灭菌水,连续干预3周。采集阴道脱落细胞监测大鼠动情周期变化,行为学检测肝郁证造模情况,HE染色观察卵巢组织病理学情况,ELISA法检测血清雌二醇(E_(2))、促卵泡激素(FSH)、抗缪勒管激素(AMH)、抑制素B(INHB)含量,TUNEL法检测卵巢颗粒细胞凋亡指数,q-PCR和Western Blot法检测卵巢组织Bcl-2、Bax、活性氧(ROS)、SOD-2 mRNA和蛋白表达量。结果:与正常组相比,模型组大鼠动情周期紊乱,卵巢组织结构不清晰,颗粒细胞层明显变薄,旷场实验移动总距离和蔗糖水消耗率降低(P<0.05,P<0.01),血清FSH水平升高,E_(2)、AMH、INHB水平显著降低(P<0.01),颗粒细胞凋亡指数升高(P<0.01),Bcl-2、SOD-2的mRNA和蛋白表达量降低,Bax的mRNA和蛋白表达量升高,ROS的mRNA表达量升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,各给药组卵巢组织病理形态和行为学实验结果有所改善,血清FSH水平降低,E_(2)、INHB水平升高(P<0.05,P<0.01),Bax、ROS的mRNA表达水平降低,柴胡疏肝散合左归饮中、高剂量组和雌激素组颗粒细胞凋亡指数降低(P<0.01)、Bcl-2蛋白表达水平升高,柴胡疏肝散合左归饮高剂量组和雌激素组Bax蛋白表达降低、SOD-2和Bcl-2的mRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。与柴胡疏肝散合左归饮低剂量组相比,中剂量组INHB水平升高,高剂量组FSH降低、E_(2)升高、SOD-2的蛋白表达升高,中、高剂量组颗粒细胞凋亡指数降低(P<0.05,P<0.01)。与柴胡疏肝散合左归饮中剂量组相比,高剂量组E_(2)水平升高、Bax的mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论:疏肝补肾法可能通过减轻氧化应激而降低颗粒细胞凋亡率,进而改善卵巢功能,且以高剂量组作用最佳。

褪黑素缓解玉米赤霉烯酮引发的卵巢颗粒细胞氧化应激与雌二醇合成异常

旨在研究玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)对卵巢颗粒细胞的毒性作用以及对雌二醇(Estradiol,E2)合成的影响,为筛选缓解ZEN毒性的药物提供参考.试验利用人颗粒细胞系(KGN)建立ZEN细胞攻毒模型,采用CCK⁃8法检测细胞活力,使用试剂盒检测细胞活性氧及线粒体膜电位水平,利用RT⁃qPCR检测E2合成基因的mRNA表达水平;同时,筛选缓解ZEN毒性的药物并验证其挽救作用.结果显示,添加ZEN(0、30、90μM)后,细胞活力随着ZEN浓度的升高而显著降低(P<0.05),细胞内ROS水平增加并且线粒体膜电位水平显著下降(P<0.05),E2合成基因CYP19A1、CYP11A1、STAR及HSD3B的mRNA表达水平显著下调(P<0.05).与ZEN处理组相比,联合添加褪黑素(Melatonin,MT)可以增加活细胞数量并显著提高细胞活力(P<0.05),同时,E2合成基因CYP19A1、CYP11A1、STAR及HSD3B的mRNA表达水平显著上调(P<0.05),细胞内ROS水平及细胞膜电位水平显著恢复.综上,ZEN导致KGN细胞氧化应激及E2合成紊乱,而MT可部分缓解上述中毒症状,提示MT可用于缓解ZEN毒性.

猪卵泡液外泌体处理卵巢颗粒细胞的SNP/Indel筛选分析

旨在分析卵泡液外泌体对卵巢颗粒细胞基因的影响,了解卵泡液外泌体在卵泡发育过程中的调控机理,为母猪繁殖研究提供理论依据。本研究选取6月龄、健康状态良好且体重相近的二元母猪为材料,屠宰后收集卵巢150枚,利用梯度离心法获取卵泡液外泌体与猪卵巢颗粒细胞(porcine ovarian granulosa cells,POGCs),并在体外将卵泡液外泌体与猪卵巢颗粒细胞共培养。通过RNA-seq技术对猪卵巢颗粒细胞(granulosa cell samples,GC,n=3)和与外泌体共培养的猪卵巢颗粒细胞(granulosa-exosome co-culture samples,GCE,n=3)进行测序。结果显示,在GC和GCE组中平均每个样品获得5.54×10^(7)条clean reads,Q20和Q30质量得分均在92%以上。在GC和GCE组的6个样品中共获得1310979个SNPs突变和104498个InDel突变,其中纯合型SNP/Indel突变数量为170426个,杂合型SNP/Indel突变数量为1245052个,突变杂合子数目明显高于纯合子且SNP的发生率较高。另外,在突变类型中,转换类型共计973003个,颠换类型339974个,转换的类型显著高于颠换类型。经基因注释,突变主要发生在基因3′UTR、5′UTR、内含子区域,其次为外显子和基因间隔区。另外,通过与差异基因对比后,够筛选出1583个候选基因,经GO和KEGG功能富集发现,候选基因主要与细胞周期以及细胞增殖/凋亡过程相关。此外,共发现14个与细胞周期、增殖/凋亡通路相关的关键候选基因,其中11个基因存在互作关系。本研究获得的这些SNP/Indel信息可为后续研究外泌体在母猪生殖上的调控奠定科学基础。

L-半胱氨酸对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡和类固醇激素分泌的影响

旨在探讨L-半胱氨酸(L-Cys)对体外培养绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)增殖、凋亡和类固醇分泌的影响。本研究采集1~1.5岁龄体重相近饲养条件相同的30只健康性成熟小尾寒羊母羊新鲜卵巢,从优势卵泡(2~8 mm)中收集GCs,随机分为5组,每组6个重复,各组添加L-Cys浓度分别为0、100、300、500和700μmol·L^(-1),培养48 h后用CCK-8试剂盒进行细胞增殖活力测定,Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测GCs的凋亡情况,采用ELISA检测GCs培养液上清中孕酮和雌二醇的分泌水平并采用实时荧光定量PCR和Western blot分析L-Cys对绵羊颗粒细胞增殖相关基因(PCNA、CCND2、CCNB 1)、凋亡相关基因(BAX、Caspase-3、Bcl-2)和类固醇分泌相关基因的(STAR、3β-HSD、CYP 11A1、CYP 19A1)mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,100、300和500μmol·L^(-1)组的L-Cys均可显著促进绵羊GCs的增殖活力(P<0.05),并显著抑制其凋亡率(P<0.05)。添加300μmol·L^(-1)的L-Cys显著抑制了孕酮(P 4,P<0.05)的分泌。进一步研究发现,300μmol·L^(-1)和500μmol·L^(-1)组的L-Cys可以上调增殖相关基因(PCNA、CCND2、CCNB 1)mRNA表达水平,其中300μmol·L^(-1)组的增殖蛋白(PCNA、CCND2、CCNB1)表达量显著上升(P<0.05);100μmol·L^(-1)和300μmol·L^(-1)组显著下调凋亡相关基因(BAX、Caspase-3)mRNA(P<0.05)及其蛋白表达水平(P<0.05)。添加300μmol·L^(-1)L-Cys显著降低了类固醇相关基因(STAR、3β-HSD)mRNA及蛋白表达水平(P<0.05),添加100μmol·L^(-1)和300μmol·L^(-1)L-Cys显著升高了类固醇相关基因(CYP 11A1、CYP 19A1)mRNA(P<0.05)及其蛋白表达水平(P<0.05)。综上,L-Cys通过上调基因PCNA、CCNB1、CCND2、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达、下调基因BAX、Caspase-3 mRNA及其蛋白表达,促进绵羊GCs增殖,抑制其凋亡;L-Cys通过下调基因STAR、3β-HSD mRNA及其蛋白表达以及上调基因CYP 11A1 mRNA及其蛋白表达抑制P 4的分泌。

TGFA过表达对水牛卵巢颗粒细胞功能的影响

本试验旨在探索转化生长因子α(Transforming Growth Factor alpha,TGF-α)的编码基因TGFA对水牛卵巢颗粒细胞(BGCs)增殖、凋亡和类固醇激素分泌能力的影响,为进一步探明TGFA在调控水牛卵泡发育中的作用提供理论支持。构建TGFA过表达载体,采用脂质体将其转染至BGCs,CCK-8、EdU、流式细胞术、ELISA等技术分别检测细胞活力、增殖、凋亡和类固醇激素分泌情况,同时运用qRT-PCR和WesternBlot检测相关基因和蛋白的表达变化。结果表明,TGFA过表达后BGCs活力显著提高,EdU阳性细胞率显著升高,增殖相关基因PCNA和CyclinD1的表达量显著上调。同时,细胞凋亡率显著降低,促凋亡基因CASPASE 3、BAX和P53的表达量显著降低,促凋亡蛋白CASPASE3的表达量显著下调;雌激素(Estradiol,E2)和孕酮(Progesterone,也称黄体酮,缩写:PROG)的分泌量显著降低,类固醇激素合成相关基因3-βHSD和CYP19A1的表达量显著下调,其蛋白表达量也显著降低。综上,TGFA过表达促进BGCs增殖,抑制细胞凋亡和类固醇激素分泌,从而调节水牛卵泡发育。

毛兰素对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制

目的 探究毛兰素(ERI)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制。方法 通过皮下注射脱氢表雄酮构建PCOS大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为PCOS组,ERI低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg)和ERI高剂量+维替泊芬组(40 mg/kg ERI+10 mg/kg维替泊芬),每组10只;另取10只正常大鼠作为正常组。各给药组大鼠灌胃相应剂量的ERI和/或腹腔注射维替泊芬,PCOS组和正常组大鼠灌胃等体积的1%二甲基亚砜,每日1次,连续6周。给药结束后,检测各组大鼠体重和空腹血糖(FPG),血清中雌二醇(E2)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平,观察卵巢组织形态学变化,分析卵巢组织细胞凋亡情况,检测卵巢组织中凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)]和HippoYAP信号通路相关蛋白[大肿瘤抑制激酶1(LATS1)、磷酸化LATS1(p-LATS1)、Yes相关蛋白(YAP)、磷酸化YAP(p-YAP)、转录共激活子因子PDZ结合基序(TAZ)]表达水平。结果 与PCOS组比较,ERI低、中、高剂量组大鼠卵巢多囊特征减轻,闭锁卵泡数量减少,颗粒细胞层增厚,体重、FPG水平、T水平、LH水平、LH/FSH、囊性卵泡数量、细胞凋亡指数和Bax、Caspase-3、p-LATS1、pYAP蛋白表达水平均显著降低或减少(P<0.05),黄体数量、E2水平和Bcl-2、LATS1、YAP、TAZ蛋白表达水平均显著升高或增多(P<0.05)。与ERI高剂量组比较,ERI高剂量+维替泊芬组大鼠的上述指标变化均被抑制(P<0.05)。结论 ERI能促进PCOS大鼠卵巢颗粒细胞增殖,调节性激素水平,其作用机制可能与抑制Hippo-YAP信号通路有关。

卵巢颗粒细胞瘤8例临床病理观察并文献复习

目的:探讨卵巢颗粒细胞瘤的临床病理特征、诊断、鉴别诊断及预后。方法:收集本院2013-2023年诊断为卵巢颗粒细胞瘤的病例8例。分析其临床病理学特征及免疫组化表型,并复习相关文献。结果:8例平均年龄54岁,均手术治疗,除1例8年后复发死亡外,其余均存活。肿瘤平均大小10.38cm,呈囊性、多房囊性或实性。镜下肿瘤呈弥漫、实性排列,也可见假乳头状、岛状、巢团状、被富于细胞的纤维间质分隔。免疫组化显示肿瘤细胞α-Inhibin、Vimentin、CD99阳性,EMA、CK7阴性。结论:卵巢颗粒细胞瘤是低度恶性肿瘤,镜下表现方式多样,免疫组化染色及基因检测可协助诊断。手术治疗是主要方式,存在远期复发可能,需要定期随诊。

基于卵巢颗粒细胞功能探讨调周法治疗卵巢储备功能减退的临床研究

目的:基于卵巢颗粒细胞功能探讨中医药调周法对卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者体内抗穆勒氏管激素(anti-mullerian hormone,AMH)水平的影响及临床疗效。方法:对60例DOR肾虚证患者给予中医药调周法治疗,观察治疗前后患者血清性激素各项水平[AMH、雌二醇(estradiol,E_(2))、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)]和临床疗效。结果:治疗前后E_(2)、LH、FSH水平比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后AMH水平较治疗前升高(P<0.05),中医证候积分较治疗前减少(P<0.05),总有效率为86.7%(52/60);治疗期间均无明显不良反应。结论:中药调周法通过提高AMH、FSH水平来提升DOR肾虚证患者卵巢储备功能,调整月经周期,增加月经量,改善临床症状。

成年型卵巢颗粒细胞瘤腹腔复发转移一例病例报道并文献复习

卵巢颗粒细胞瘤(granulosa cell tumor of ovary,GCT)是一类来源于性索细胞间质的肿瘤,约占所有卵巢恶性肿瘤的5%[1]。GCT好发于围绝经期和绝经后妇女,根据其病理分型分为幼年型(juvenile granulosa cell tumor,JCCT)和成年型颗粒细胞瘤(adult granulosa cell tumor,AGCT),其中后者约占GCT的95%。成年型卵巢颗粒细胞瘤虽为低度恶性,具有生长缓慢的特点,但其具有较高的复发及转移率,复发率约为6%~50%[2],从而影响患者生存时间。因此,早期诊断、综合治疗及密切随诊对于提高患者的生存率和生活质量至关重要。本文通过回顾性总结我院手术治疗的一例成年型颗粒细胞瘤腹腔多发转移患者的基本资料及国内外文献研究,分析其临床特点、综合治疗方式及预后情况,以期为此类患者的治疗及随访提供系统的见解。

circRAF1调节人卵巢颗粒细胞的增殖与凋亡

目的探讨circRAF1在早发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)中的表达及对人卵巢颗粒细胞(GCs)系(KGN细胞)增殖、凋亡的影响。方法RT-qPCR检测正常卵巢储备功能的患者(n=50)和POI患者(n=50)卵巢GCs及血清中circRAF1的表达,并分析其与卵巢储备功能指标的相关性;构建针对circRAF1的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染至KGN细胞;利用CCK-8、EdU实验检测细胞增殖,JC-1、Tunel实验检测细胞凋亡;RT-qPCR和WB检测细胞增殖与凋亡相关基因(FSHR、PCNA、Bcl-2、Casp-9、Bax)的表达。结果circRAF1在POI患者GCs及血清中表达下降,circRAF1的表达与血清中基础E2和AMH水平呈正相关(P<0.001),而与血清中基础FSH、LH水平呈负相关(P<0.001),同时,circRAF1的表达与AFC呈正相关(P<0.001)。干扰circRAF1的表达可抑制KGN细胞的增殖,促进其凋亡。结论POI患者GCs及血清中的circRAF1表达下调,且与卵巢储备功能下降有关;干扰circRAF1可以抑制GCs增殖,促进其凋亡。

氧化修饰高密度脂蛋白激活活性氧启动p38信号促使大鼠卵巢颗粒细胞凋亡

背景:多囊卵巢综合征患者体内高密度脂蛋白发生了部分氧化修饰,而氧化修饰高密度脂蛋白与排卵障碍的关系及其机制尚不清楚。目的:探讨氧化修饰高密度脂蛋白对卵巢颗粒细胞凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:构建多囊卵巢综合征大鼠模型,取心脏血并分离血清,进一步分离高密度脂蛋白,采用高密度脂蛋白炎症指数、丙二醛水平和脂蛋白琼脂糖凝胶电泳法检验其氧化程度。分离正常大鼠卵巢颗粒细胞,分别给予模型大鼠血清分离的高密度脂蛋白和氧化修饰高密度脂蛋白处理,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,H2DCF-DA染色检测活性氧生成水平,Western blot检测p38信号活性。卵巢颗粒细胞分别给予活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)和四甲基哌啶(Tempol)和p38抑制剂SB203580预处理后,再给予氧化修饰高密度脂蛋白处理,然后检测细胞凋亡、活性氧生成和p38信号活性。结果与结论:多囊卵巢综合征模型大鼠血清中高密度脂蛋白部分发生氧化修饰。模型大鼠血清分离的高密度脂蛋白和氧化修饰高密度脂蛋白抑制卵巢颗粒细胞活力和促进细胞凋亡(均P<0.05),二者能促进大鼠卵巢颗粒细胞活性氧生成和提高p38活性(均P<0.05)。NAC、Tempol和SB203580均能逆转氧化修饰高密度脂蛋白诱导的卵巢颗粒细胞凋亡(均P<0.05);Tempol、NAC能抑制氧化修饰高密度脂蛋白诱导的p38活性(均P<0.05);SB203580对活性氧的生成没有调节作用(P>0.05)。结果表明:多囊卵巢综合征能促使高密度脂蛋白发生部分氧化修饰,氧化修饰高密度脂蛋白能通过激活活性氧-p38信号通路促使大鼠卵巢颗粒细胞凋亡。

多囊卵巢综合征病理机制中的颗粒细胞自噬

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期女性最常见的生殖内分泌紊乱性疾病之一,病理机制尚未阐明。自噬参与卵泡发育的各个阶段,其中卵泡颗粒细胞自噬相对活跃。通过维持颗粒细胞自噬的稳态支持卵巢功能、调控卵泡发育,最终影响胚胎质量及妊娠结局。自噬相关基因和蛋白的异常表达可激活不同的自噬通路,抑制卵泡颗粒细胞发育、干扰内分泌稳态,参与PCOS的病理过程,并影响其预后。综述参与颗粒细胞自噬的关键分子及其在PCOS发生发展中的作用,以期为研究PCOS发生机制及探索临床治疗提供参考。

Y-box结合蛋白1通过沉默信息调节因子1 mRNA稳定性调节抑制人颗粒细胞凋亡在早发性卵巢功能不全中的作用与机制

目的:探讨Y-box结合蛋白1(YBX1)调节沉默信息调节因子1(SIRT1)对颗粒细胞增殖和凋亡的影响,研究YBX1和SIRT1在早发性卵巢功能不全(POI)患者及卵巢功能正常患者间表达水平差异及临床意义。方法:留取2022年6月至2023年7月于江苏大学第四附属医院生殖医学中心进行体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)助孕的POI患者(POI组)及卵巢储备功能正常患者(对照组)的颗粒细胞和血清,利用免疫印迹(WB)检测YBX1蛋白表达水平;利用实时荧光定量核酸扩增法(RT-qPCR)检测YBX1及SIRT1 mRNA表达水平,并分析血清中其与卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、抗苗勒管激素(AMH)、窦卵泡数(AFC)的相关性;利用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)、细胞计数试剂8(CCK8)检测细胞增殖、原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;RT-qPCR检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达情况;RNA免疫沉淀(RIP)实验检测YBX1与SIRT1的相互作用。结果:与对照组患者相比,POI组患者颗粒细胞和血清中YBX1蛋白及SIRT1 mRNA的表达降低(P<0.05);血清中YBX1、SIRT1 mRNA表达与FSH、LH负相关(r<0,P<0.05),与E_(2)、AMH、AFC正相关(r>0,P<0.05);在颗粒细胞中上调YBX1后SIRT1蛋白表达量、SIRT1 mRNA的稳定性、EdU阳性率、细胞活性、PCNA mRNA表达量、Bcl2/BAX比值均增加(P<0.05),Caspase-3 mRNA表达量、TUNEL阳性率均降低(P<0.05)。结论:YBX1和SIRT1在POI患者中表达水平显著下调,且其表达水平与临床卵巢功能指标相关;YBX1结合SIRT1 mRNA增强其稳定性,可能促进颗粒细胞增殖,抑制细胞凋亡,提示YBX1和SIRT1有望成为POI诊疗的新靶点。

复发性卵巢颗粒细胞瘤的治疗选择及预后

目的探讨复发性卵巢颗粒细胞瘤(ovarian granulosa cell tumor,OGCT)的临床特征,分析其预后影响因素,评估治疗方案。方法回顾性研究38例复发性OGCT患者的临床特征、复发后治疗方法及生存情况。结果38例复发性OGCT患者的中位复发时间为62.5个月(12~308个月),复发后中位生存时间为33个月(9~106个月)。复发性OGCT患者的1年生存率92%,3年生存率71.9%,5年生存率55.5%。单因素分析显示,复发病灶数目、复发后手术治疗是复发性OGCT患者生存预后的影响因素(P>0.05),多因素生存分析结果显示,复发后手术治疗是复发性OGCT患者生存预后的影响因素(P<0.05)。对27例接受手术治疗的复发性患者单因素分析显示,手术残留病灶是复发性OGCT患者术后再次复发的独立危险因素(P<0.05)。结论复发性OGCT的化疗敏感性较低,手术是复发性OGCT最主要的治疗方法,尽可能完整切除可以降低再次复发风险,提高生存率。

多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗的相关信号通路

胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)与多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的发生发展有关,而与IR相关的胰岛素信号通路异常会引起卵巢局部代谢紊乱,进而影响卵泡发育及卵子质量。PCOS卵巢颗粒细胞中胰岛素作用的经典通路,包括磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路和丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路;与炎症相关的通路包括Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路等;氧化应激相关通路包括核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)途径和GTP酶免疫相关蛋白7(GTPase of immunity-associated protein 7,GIMAP7)/音猬因子(sonic hedgehog,SHH)途径;与脂质代谢相关的通路如激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)通路等。明确PCOS患者卵巢颗粒细胞中IR相关信号转导通路,增进PCOS病理生理机制的认识,进一步为PCOS的治疗提供新思路。