瘦素受体蛋白在人卵巢黄素化颗粒细胞的表达

目的 通过检测人卵巢卵泡液中瘦素 (leptin)的浓度及瘦素受体蛋白在人卵巢黄素化颗粒细胞的表达 ,探讨瘦素对人卵巢的作用。方法 体外受精胚胎移植 (IVF -ET)患者经阴道超声引导下取卵时留取卵泡液 ,采用酶联免疫吸附测定 (ELISA)方法检测血清与人卵泡液中瘦素浓度并分离颗粒细胞体外培养 ,采用免疫细胞化学方法检测瘦素受体蛋白的表达。结果 人卵巢黄素化颗粒细胞检测到瘦素受体蛋白的表达 ,即荧光显微镜下观察到颗粒细胞发出黄绿色荧光 ;卵泡液中瘦素浓度平均为 ( 19 2 8± 4 2 2 )ng/ml,与血清中瘦素浓度 ( 2 0 0 2± 3 45 )ng/ml比较差异无显著性(P >0 0 5 )。结论 卵泡液中检测到瘦素的存在 ,并在人卵巢黄素化颗粒细胞上检测到瘦素受体蛋白的表达 ,提示卵巢为瘦素作用的靶器官 ,瘦素可能参与卵巢功能的调节。

丙戊酸钠对人卵巢黄素化颗粒细胞激素分泌及相关甾体合成酶mRNA影响

目的 丙戊酸钠 (VPA)为抗癫痫的有效药物 ,长期应用可引起类似于多囊卵巢综合征 (PCOS)生殖内分泌功能紊乱 ,本研究通过人黄素化卵巢颗粒细胞原代培养体系 ,研究VPA对黄素化颗粒细胞的激素生成及类固醇激素生成急性调节蛋白 (StAR)、胆固醇侧链裂解酶 (P4 5 0scc)和芳香化酶(P4 5 0arom)的mRNA影响。方法 收集体外受精 -胚胎移植 (IVF ET)时的人黄素化颗粒细胞进行体外培养 ,适时给于不同浓度的VPA(0、10 0、2 5 0mg·L-1)处理 ,2d后收集培养液、细胞 ,采用放射免疫方法测定颗粒细胞分泌孕酮及雌二醇的量 ,并以细胞蛋白浓度校正激素含量。采用荧光实时RT PCR (TaqMan assay)方法检测颗粒细胞中StAR、P4 5 0scc和P4 5 0arommRNA表达。结果 VPA刺激人黄素化颗粒细胞的孕酮 (P <0 0 5 )和雌二醇 (P <0 0 1)的分泌 ,且StARmRNA (P <0 0 1)、P4 5 0scc(P <0 0 5 )和P4 5 0arom(P <0 0 1)表达增加。结论 VPA可直接作用于黄素化颗粒细胞 ,通过改变StAR、P4 5 0scc和P4 5 0arommRNA的表达 ,而引起孕酮和雌二醇的分泌变化 ,而临床上长期服用VPA的癫痫妇女出现类似于PCOS患者的生殖内分泌功能紊乱可能与该药物本身作用有密切联系 ,同时提示了非遗传因素即环境因素在PCOS发病中也发挥一定作用。

GnRH-a体外对人卵巢黄素化颗粒细胞雌二醇和孕酮分泌量的影响

目的 :观察促性腺素释放激素激动剂 (GnRH -a)在体外对人卵巢黄素化颗粒细胞雌二醇 (E2 )和孕酮 (P)分泌量的影响。方法 :培养人卵巢黄素化颗粒细胞 ,分别用终浓度为 1.0、10 .0、10 0 .0ng ml的GnRH -a刺激 ,同时设对照组 ,培养时间为 2、4、6d。用放射免疫法检测黄素化颗粒细胞E2 和P的分泌量。结果 :培养 2d ,GnRH -a中、高浓度组E2 和P分泌量分别为 (12 2± 37) %、(12 8± 2 4 ) % ;(143± 32 ) %、(137± 2 9) %对照组为10 0 % ,均显著高于对照组 (P <0 .0 5) ;低浓度组E2 和P分泌量与对照组差异无显著性。随着细胞培养天数的增加 ,GnRH -a中、高浓度组E2 分泌量明显低于对照组 ,高浓度组E2 分泌量与培养天数呈负相关 (r =- 0 .75,P <0 .0 5)。结论 :GnRH

顺铂对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响

目的研究顺铂(cisplatin,CDDP)对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响。方法收集体外受精—胚胎移植(IVF-ET)时的人黄素化颗粒细胞进行体外培养,采用MTT法检测不同浓度的CDDP(0、0.5、1、2.5、5mg.L-1)对人黄素化颗粒细胞生长的抑制作用;采用Hochest33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测bcl-2和bax基因蛋白的表达。结果CDDP浓度≥1mg.L-1可抑制颗粒细胞的生长;1、2.5、5mg.L-1CDPP处理人黄素化颗粒细胞24h后,荧光染色可观察到明显的核浓缩、核碎裂形态。FCM检测bcl-2蛋白表达逐渐减少(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax蛋白表达逐渐增加(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义。结论CD-DP可抑制人黄素化颗粒细胞生长,促进凋亡,其作用机制可能是通过上调bax和下调bcl-2基因表达实现的。

血管紧张素(Ang)Ⅱ、Ang-(1-7)对人卵巢黄素化颗粒细胞的增殖及分泌功能的影响

目的：了解血管紧张素（Ang）Ⅱ、Ang-（1-7）对人卵巢黄素化颗粒细胞的增殖及分泌功能的影响。方法：提取行体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植（IVF/ICSI-ET）患者卵泡液中的颗粒细胞,经过提纯后随机分为实验组与对照组。实验组根据添加的药物分为AngⅡ组与Ang-（1-7）组。分别向AngⅡ组/Ang-（1-7）组的颗粒细胞培养液中加入10-10~10-5 mmol/L浓度的AngⅡ/Ang-（1-7）,对照组的颗粒细胞培养液中不添加药物,各组分别作用24 h、48 h、72 h,用四甲基偶氮唑蓝盐比色法（MTT法）测定颗粒细胞的吸光度（D）值;向AngⅡ组/Ang-（1-7）组的颗粒细胞培养液中分别加入10-6 mmol/L浓度的AngⅡ/Ang-（1-7）,对照组的培养液中不添加药物,收集培养0~24 h、24~48 h、48~72 h的上清液,化学发光分析法（CL）测定黄素化颗粒细胞上清液中雌二醇（E2）、孕酮（P）水平。结果：不同浓度的AngⅡ、Ang-（1-7）分别作用颗粒细胞后,其D值均较对照组低,并随着浓度增加D值逐渐降低;随着时间延长,各组D值逐渐升高。10-6 mmol/L浓度的AngⅡ、Ang-（1-7）分别作用于颗粒细胞后,其上清液中E2的浓度均较对照组高,P浓度与对照组无统计学差异,随着时间延长,各组的E2和P含量逐渐增加。结论：AngⅡ及Ang-（1-7）对人卵巢黄素化颗粒细胞生长起抑制作用,其抑制作用随浓度增加逐渐增强。AngⅡ、Ang-（1-7）能够增强人卵巢黄素化颗粒细胞分泌雌激素的作用,但对孕激素的分泌没有影响。提示AngⅡ、Ang-（1-7）在人卵巢黄素化颗粒细胞的增殖及激素分泌中起一定作用,两者可能参与了人类的卵泡闭锁、优势卵泡发育、成熟以及排卵等生理过程。

人类水通道蛋白在不同径线卵泡的黄素化颗粒细胞中的表达水平

【目的】探讨取卵日不同径线卵泡的黄素化颗粒细胞中各种水通道蛋白(AQPs)的mRNA表达水平。【方法】收集2022年3月25日至2022年9月23日在本中心行体外受精胚胎移植助孕的不孕患者取卵日的卵泡液共48例,根据卵泡径线分为小(<13 mm)、中(13~18 mm)、大(≥18 mm)卵泡群分开收集卵泡液提取颗粒细胞。经RNA定量后纳入22例进行分析,比较3组卵泡群的AQPs mRNA表达水平。根据促排卵方案将患者分为拮抗剂组和激动剂组,分析AQPs的表达差异。【结果】黄素化颗粒细胞中AQP2的mRNA水平随卵泡径线的增加而升高(linear trend P=0.004),其差异在大、小卵泡组间具有统计学差异(P=0.017);该差异在拮抗剂组内具有统计学意义(P=0.0496),在激动剂组中无统计学意义(P=0.108)。【结论】AQP2在黄素化颗粒细胞中的mRNA水平随着卵泡径线的增长而增加,其表达量与促排卵方案有关,提示AQP2在卵泡生长和卵泡液生成过程中可能起到一定作用,且其mRNA表达水平可能受到FSH和LH的调节。

表皮生长因子对卵巢黄素化颗粒细胞cyclin D1和P21表达的影响

目的探讨表皮生长因子(EGF)对颗粒细胞细胞周期的影响及其在颗粒细胞增殖、分化机制中的作用。方法选取IVF-ET助孕方式治疗患者的卵巢黄素化颗粒细胞为研究对象,分离纯化后分为对照组和实验组,对照组为正常培养的颗粒细胞,不添加EGF;实验组为添加10 ng·mL^-1EGF培养24 h的颗粒细胞。利用CCK-8试剂盒在450 nm波长条件下用酶标仪检测细胞增殖状况以观察EGF作用的最佳浓度;利用流式细胞仪检测EGF对颗粒细胞周期的影响;利用RT PCR技术检测EGF对颗粒细胞cyclin D1和P21 mRNA相对表达的影响;利用Western blot技术检测EGF对颗粒细胞cyclin D1和P21相对蛋白表达水平的影响。结果采用本研究所建立的方法可以获得生长活力好、细胞纯度高以及较稳定的人卵巢黄素化颗粒细胞;CCK-8结果显示EGF最佳作用浓度为10 ng·mL^-1;细胞周期结果显示,EGF使人卵巢黄素化颗粒细胞周期表现为G0/G1期的比例减少,S+G2/M期的比例增高(P均<0.05);RT PCR结果显示,与对照组相比EGF作用后cyclin D1基因相对表达量升高,P21基因相对表达量下降(P均<0.01);Western blot结果显示,与对照组相比EGF作用后,颗粒细胞cyclin D1蛋白相对表达量升高,P21蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。结论添加10 ng·mL^-1浓度的EGF培养人卵巢颗粒细胞可通过对细胞周期调控因子cyclin D1和P21mRNA及蛋白表达水平的影响,促进颗粒细胞增殖。

罗格列酮对体外培养的PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素抵抗的影响

目的:探讨罗格列酮改善PCOS卵巢局部胰岛素抵抗的作用。方法:收集行IVF-ET治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后黄素化颗粒细胞行体外培养,分别用不同浓度罗格列酮(0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10000nmol/L)处理细胞48h,采用RT-PCR和Westernblotting分别检测卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2mRNA的表达及蛋白含量。结果:①基础状态下,PCOS组IRS-1mRNA表达及蛋白含量较对照组显著增加;IRS-2mRNA表达及蛋白含量较对照组显著降低(P<0.05);②不同浓度罗格列酮作用后,PCOS组IRS-1mRNA及蛋白表达显著降低,IRS-2mRNA及蛋白表达显著增加,并呈剂量依赖性,而正常对照组无变化。结论:PCOS患者卵巢局部存在胰岛素抵抗,其原因可能与IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白表达异常有关;罗格列酮可通过提高黄素化颗粒细胞IRS-2的表达,降低IRS-1的表达,改善PCOS患者卵巢局部胰岛素抵抗。

体外受精-胚胎移植妇女卵巢黄素化颗粒细胞白细胞介素-1β的表达及意义

目的 探讨白细胞介素 -1β( IL -1β)在体外受精 -胚胎移植 ( IVF-ET)患者卵巢黄素化颗粒细胞表面的表达及与生殖内分泌的关系。 方法 3 6名 IVF-ET妇女 ,在采用长周期促超排卵方案 ,注射人绒毛膜促性腺激素 ( h CG) 1 0 0 0 0 IU后 3 4～ 3 6h超声引导下经阴道取卵时留取卵泡液 ,离心后分离黄素化颗粒细胞 ,应用流式细胞计 ( FCM)检测细胞表面 IL-1 β的表达 ,用酶联免疫吸附法 ( EL ISA)检测卵泡液中 IL-1 β浓度 ,用放射免疫法检测卵泡液和血清中激素浓度。 结果 行 IVF-ET激素刺激周期妇女的卵泡液中可检测到 IL -1β,血清 IL -1β浓度类似 L H的变化规律。黄素化颗粒细胞表面有 IL -1β表达。h CG注射日血清 IL-1 β浓度与雌二醇 ( E2 )浓度呈正相关 ( r=0 .92 ,P<0 .0 0 1 ) ,与孕酮 ( P)呈负相关 ( r=-0 .3 4,P<0 .0 5)。 结论 本研究在人黄素化颗粒细胞表面检测到 IL -1β蛋白表达 ,说明卵泡液中 IL -1β不仅来源于血液 ,而且也由黄素化颗粒细胞分泌。提示 IL-1 β可能通过自或旁分泌方式参与生殖内分泌活动。

GnRHa对体外培养的卵巢黄素化颗粒细胞分泌功能的影响

目的:研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对体外培养的卵巢黄素化颗粒细胞分泌功能的影响。方法:对16例接受体外受精患者卵泡液中分离的卵巢黄素化颗粒细胞进行体外培养,利用免疫组化法检测颗粒细胞的卵泡刺激素受体(FSHR)蛋白表达鉴定颗粒细胞的纯度,检测加入GnRHa(实验组)体外培养颗粒细胞分泌雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)、表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)的水平并与未加GnRHa(对照组)比较。结果:从卵泡液中分离培养的卵巢黄素化颗粒细胞,75%以上呈FSHR蛋白阳性表达;100ng/L的GnRHa对体外培养颗粒细胞作用24h后上清液中每1000个细胞中E2含量为(0.83±0.46)ng/L,明显低于对照组的(2.60±1.53)ng/L(P<0.05);P,T,IGF-1和EGF的含量与对照组差别无统计学意义。结论:GnRHa减弱了颗粒细胞分泌E2的功能,推测GnRHa对卵泡发育和卵母细胞可能有负面影响。

黄体生成素对多囊卵巢综合征患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物1和2 mRNAs及蛋白质表达的影响

目的探讨黄体生成素(LH)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2 mRNAs及蛋白质表达的影响,其及在卵巢局部胰岛素抵抗中的作用。方法收集行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不育患者(对照组)促排卵后黄素化颗粒细胞行体外培养,分别用不同浓度LH(0、20、200、2,000 mIU/ml)处理细胞48 h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western-blot)检测黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2 mRNAs及蛋白质的表达。结果(1)与对照组比较,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA及蛋白质表达显著增加(P<0.05),IRS-2 mRNA及蛋白质表达显著降低(P<0.05);(2)不同浓度LH作用后,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA及蛋白质的表达显著增加,IRS-2 mRNA及蛋白质的表达变化不明显;对照组则均无显著变化。结论PCOS异常增高的LH可能通过增加黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA及蛋白质的表达参与了患者卵巢局部选择性胰岛素抵抗的发生。

瘦素对多囊卵巢综合征患者卵巢黄素化颗粒细胞雌激素分泌的影响

目的探讨不同浓度瘦素在促卵泡激素(FSH)的参与下对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄素化颗粒细胞雌二醇(E2)的影响。方法 20例行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的不孕症患者,分成PCOS组和对照组各10例。采用卵泡刺激长方案促排卵,体外培养得黄素化颗粒细胞,然后在不同浓度瘦素(0 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、100 ng/ml、1 000 ng/ml)、卵泡刺激素(FSH)(5 mIU/ml)及雄烯二酮(1μmol/ml)联合作用下继续进行培养24 h,收集培养液,用放射免疫法测定颗粒细胞产生E2的浓度。结果加入不同浓度瘦素(10 ng/ml、20 ng/ml、100 ng/ml、1 000 ng/ml)后PCOS组和对照组卵巢颗粒细胞E2的分泌均受到明显抑制;随瘦素浓度的增加E2水平逐渐降低(P<0.05)。结论瘦素能抑制PCOS卵巢黄素化颗粒细胞雌激素的分泌,其抑制作用随瘦素浓度的增加而增强。

肝素结合表皮生长因子在人黄素化颗粒细胞中的表达

目的:研究人黄素化颗粒细胞中肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)的表达特点。方法:收集体外受精-胚胎移植过程中的人黄素化颗粒细胞进行体外培养;应用RT-PCR法和免疫细胞化学法分别检测HB-EGF的mRNA和蛋白表达;应用实时RT-PCR法检测HB-EGFmRNA量的变化。结果:人黄素化颗粒细胞中存在HB-EGF的mRNA和蛋白表达。培养基中加入重组HB-EGF后,HB-EGFmRNA的表达量迅速上升,2h内达高峰,然后回落,于12h内降至处理前水平。结论:人黄素化颗粒细胞中存在HB-EGF的表达;人黄素化颗粒细胞中的HB-EGF可能是瞬时早期反应基因。

人黄素化颗粒细胞中EGF受体家族的表达

研究人黄素化颗粒细中表皮生长因子(EGF)受体家族成员的表达。收集体外受精-胚胎移植过程中的人黄素化颗粒细胞进行体外培养,应用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测EGF受体家族的mRNA和蛋白表达。人黄素化颗粒细胞中EGF受体家族的4个成员HER1～HER4均有mRNA表达。但HER4的mRNA表达量较低,而且位于细胞核。

补肾化瘀方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达的影响

目的通过观察补肾化瘀方对大鼠卵巢颗粒细胞上卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)蛋白的表达,探讨中药对多囊卵巢综合征(PCOS)卵巢局部的影响及作用机制。方法应用补肾化瘀方作用于以丙酸睾酮联合HCG诱导PCOS大鼠模型,采用免疫组化法,检测PCOS大鼠颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达。结果与正常组相比,模型组大鼠卵巢体质量增加,呈多囊性改变,卵泡颗粒细胞减少而膜细胞层增加,补肾化瘀方组卵巢形态接近正常组,补肾化瘀方能明显提高PCOS大鼠颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达,补肾化瘀方各剂量组与模型组和妈富隆阳性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或0.01),而中剂量组与正常对照组比较,差异均无统计学意义。结论补肾化瘀方能提高PCOS大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达,可能与补肾化瘀方具有促进卵泡发育和排出的作用机制有关。

重组人卵泡刺激素作用下卵泡黄素化颗粒细胞M-CSF及受体表达的临床差异

目的:比较使用重组人卵泡刺激素(rFSH)后,患者卵泡黄素化颗粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)及其受体(M-CSFR)mRNA表达的差异,以探讨M-CSF及其受体对卵巢反应性的影响。方法:接受体外受精治疗的96例多囊卵巢综合征(PCOS)患者和157例非PCOS患者,根据其使用r-FSH后反应性不同分为四组:即PCOS快、慢反应组和非PCOS快、慢反应组。收集成熟卵泡穿刺后黄素化颗粒细胞,采用SYBR Green荧光定量RT-PCR法检测颗粒细胞M-CSF、M-CSFR和管家基因GAPDH的mRNA表达,通过比较阈值法(CT值目的基因-CT值管家基因)进行基因相对定量。双独立样本t检验比较组间基因表达差异,并对差异有统计学意义的指标行Spearman相关分析检验。结果:各组患者r-FSH使用量无统计学差异(P>0.05)。PCOS患者整体与非PCOS患者整体比较,M-CSF和M-CSFR的mRNA定量均无统计学差异(P>0.05)。分组比较后,各组间M-CSF mRNA定量无统计学差异(P>0.05)。而PCOS慢反应组M-CSFR mRNA定量低于快反应组患者,差异有统计学意义(P=0.006)。对PCOS组颗粒细胞M-CSFR mRNA定量和r-FSH使用天数的Spearman相关分析提示,两者相关性有统计学意义(P=0.023),相关系数0.511。结论:PCOS卵巢慢反应患者对促排卵药物反应迟缓可能与其颗粒细胞M-CSFR表达减少有关。M-CSF及其受体参与影响卵巢对r-FSH的反应性。

补肾化瘀方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450表达的影响

目的观察补肾化瘀方对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞CYP450蛋白表达的影响。方法运用补肾化瘀方对PCOS模型大鼠进行干预后,采用免疫组化法观察卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达。结果模型组与正常组比较,卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达在表达面积及表达强度上均低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01);补肾化瘀方中、高、低剂量组及妈富隆组用药后,卵巢颗粒细胞的CYP450的蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);其中补肾化瘀方中剂量对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达效果最佳。结论补肾化瘀方能增强PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达,调节卵巢内分泌失调,改善PCOS高雄血症,逆转卵泡的发育异常,使排卵成功。

雌孕激素对人卵巢颗粒细胞瘦素受体表达的影响

目的通过人卵巢黄素化颗粒细胞体外培养,观察雌、孕激素对其瘦素受体蛋白表达的调控作用。方法行体外受精-胚胎移植患者经阴道超声引导下取卵时留取卵泡液,分离颗粒细胞体外培养,培养至第3天加入不同浓度的17-β雌二醇或孕酮,继续培养2d,采用免疫细胞化学方法将颗粒细胞进行荧光标记,经流式细胞式检测其瘦素受体蛋白表达阳性细胞百分率。结果流式细胞仪检测发现所检测各浓度17-β雌二醇、孕酮均能增强颗粒细胞瘦素受体蛋白的表达,17-β雌二醇作用高峰浓度为1μg/ml,孕酮作用高峰浓度为1ng/ml。结论雌孕激素在体外可增强人卵巢黄素化颗粒细胞瘦素受体蛋白的表达,提示瘦素可能参与卵巢功能的调节,为深入研究瘦素在卵巢中的作用提供理论依据。

绝经期巨大卵巢颗粒细胞-卵泡膜细胞瘤伴黄素化

病历资料 患者,女,68岁,下腹坠痛10个月余,曾到当地反复就诊给予消炎、止痛治疗有所缓解。近1个月症状加重,同时伴有腹胀、恶心、尿频尿急、里急后重、大便难解、食欲减退、体重减轻、睡眠差,2007年10月22日入保山仁济医院。