期刊文献+
共找到95篇文章
< 1 2 5 >
每页显示 20 50 100
重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性研究 被引量:2
1
作者 谢琪璇 李文星 +4 位作者 潘善培 张春雪 肖銮娟 马丽 史卫卫 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期20-23,共4页
为了研究毕赤酵母表达的重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性,分别用空白培养液,含孕酮或rhZP3的培养液对人精子进行顶体诱发实验,用考马斯亮蓝染色法对顶体状态进行评价;用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理精子,然后再与卵子进... 为了研究毕赤酵母表达的重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性,分别用空白培养液,含孕酮或rhZP3的培养液对人精子进行顶体诱发实验,用考马斯亮蓝染色法对顶体状态进行评价;用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理精子,然后再与卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子在精卵结合中的情况;用抗rhZP3抗血清与阴性血清分别处理卵子,再与精子进行结合实验,观察经过不同处理后的卵子在精卵结合中的情况。rhZP3诱发顶体反应实验结果显示,rhZP3处理组与空白对照组之间差异显著(P<0.01);精卵结合实验结果显示,各实验组和对照组之间存在显著性差异(P<0.01),rhZP3、抗rhZP3抗体均能抑制精卵结合。实验结果表明,rhZP3具有天然人卵透明带蛋白相似的活性。 展开更多
关键词 人卵透明 重组蛋白 生物活性 顶体反应 结合
下载PDF
重组人卵透明带ZP3蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量:12
2
作者 唐键 谢琪璇 +4 位作者 潘善培 肖銮娟 董鲁 张春雪 孙彩军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期758-762,共5页
利用P .pastoris表达人卵透明带ZP3蛋白。设计特定引物从全长hZP3cDNA上扩增含跨膜区序列的人卵透明带ZP3基因片段 ,并在N末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列 ;扩增片段插入表达载体pPIC9K中 ;线性化后的重组质粒转入P .pastoris... 利用P .pastoris表达人卵透明带ZP3蛋白。设计特定引物从全长hZP3cDNA上扩增含跨膜区序列的人卵透明带ZP3基因片段 ,并在N末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列 ;扩增片段插入表达载体pPIC9K中 ;线性化后的重组质粒转入P .pastoris中 ,用高浓度G4 18筛选高拷贝菌株 ,然后甲醇诱导目的蛋白表达。用SDS PAGE和Westernblot分析表达产物。结果发现P .pastoris表达的人ZP3蛋白可以分泌到培养液中 ,并且可溶性好。纯化前后的重组人ZP3蛋白均能与兔抗猪ZP3蛋白抗体发生交叉反应 ,证实表达的目的蛋白具有反应原性。 展开更多
关键词 人卵透明ZP3蛋白 表达 毕赤酵母 表达载体
下载PDF
人卵透明带蛋白ZP3a和ZP3b肽段的免疫原性及其抗血清体外抑制人精子-半透明带结合 被引量:6
3
作者 宋力雯 汪玉宝 +8 位作者 倪崖 何亚萍 洪爱真 Elvira Hinsch Klaus-Dieter Hinsch 周思畅 袁玉英 石其贤 徐万祥 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期682-688,共7页
分析大肠杆菌表达的重组人卵透明带-3(r-huZP3)蛋白两个肽段(r-huZP3a22-176及r-huZP3b177-348)的免疫原性,比较两者抗血清体外抑制人精子-半透明带结合的能力。以制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯化的大肠杆菌表达蛋白为抗原, 主动免... 分析大肠杆菌表达的重组人卵透明带-3(r-huZP3)蛋白两个肽段(r-huZP3a22-176及r-huZP3b177-348)的免疫原性,比较两者抗血清体外抑制人精子-半透明带结合的能力。以制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯化的大肠杆菌表达蛋白为抗原, 主动免疫新西兰兔产生抗huZP3a22-176及huZP3b177-348抗血清;通过ELISA测定比较两者的抗体应答水平:以蛋白印迹和免疫组化方法测定两者抗血清同重组表达蛋白、天然人卵ZP以及卵巢组织的反应性;通过竞争性半透明带结合试验 (hemizona assay,HZA)观察两者抗血清体外抑制人精子-ZP结合能力。结果显示:未与大分子蛋白载体耦联的r-huZP3a22-176 和r-huZP3b177-348抗原都在免疫兔中产生了较高的抗体滴度,而且它们的抗血清可识别大肠杆菌表达的各自重组ZP3肽以及人卵细胞表面天然ZP,两者抗血清也都能在体外抑制人精子-ZP结合。由此可见,r-huZP3a22-176及r-huZP3b177-348蛋白具有良好免疫原性,所产生抗血清也都显示出细胞和组织特异性。因此,单一或合并两个huZP3肽段均可作为抗原研制检测不明原因性不孕妇女中是否存在抗自身ZP抗体的诊断试剂盒,另外它们的抗血清也能用于鉴定已知huZP3表位肽段的最小B-细胞表位基序。 展开更多
关键词 人卵透明 重组ZP3 抗血清 卯母细胞:半透明结合试验
下载PDF
猪卵透明带-3β融合蛋白在E.coli中的表达和鉴定 被引量:3
4
作者 徐万祥 邱德义 +4 位作者 王健 谢毅 顾少华 黄燕 赵寿元 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期420-423,共4页
对全长猪卵透明带-3β(pZP3β)cDNA的5端重新测序分析,发现文献报道的该克隆基因5端非编码序列中漏读了两个碱基,继而选择符合pZP3βcDNA阅读框的pWR450-2载体质粒,通过双酶切构建了β-半乳糖苷... 对全长猪卵透明带-3β(pZP3β)cDNA的5端重新测序分析,发现文献报道的该克隆基因5端非编码序列中漏读了两个碱基,继而选择符合pZP3βcDNA阅读框的pWR450-2载体质粒,通过双酶切构建了β-半乳糖苷酶/pZP3β融合蛋白基因的细菌表达质粒。转化宿主菌后用IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明pZP3β融合蛋白在E.coli中获得表达,并在蛋白印迹鉴定中能同兔抗猪ZPIgG呈特异性免疫反应。 展开更多
关键词 透明 pZP3β 融合蛋白 基因表达
下载PDF
人卵透明带蛋白huZP3a^(22~176)和huZP3b^(177~348)肽段在大肠杆菌中的表达及其纯化 被引量:8
5
作者 徐万祥 何亚萍 +6 位作者 洪爱真 季朝能 钱吉 王曙 谢毅 Elvira Hinsch Klaus-Dieter Hinsch 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期143-148,共6页
目的:探索将huZP3a22~348蛋白编码基因拆分成两段,分别表达的可行性,并研究表达产物的免疫原性。方法:用PCR技术, 将去N-端信号肽和C-端跨膜区的huZP322~348蛋白编码基因拆成大小相近的两段, 以完整阅读框的形式分别重组插入热诱导型pBV... 目的:探索将huZP3a22~348蛋白编码基因拆分成两段,分别表达的可行性,并研究表达产物的免疫原性。方法:用PCR技术, 将去N-端信号肽和C-端跨膜区的huZP322~348蛋白编码基因拆成大小相近的两段, 以完整阅读框的形式分别重组插入热诱导型pBV221的多克隆区。结果:大肠杆菌分别特异地表达了可单独或复合应用的huZP3a22~176和huZP3b177~348,在经过抗人ZP3不同抗原区合成肽抗体的蛋白印迹鉴定后, 用改良的制备性PAGE方法分离纯化这两种表达产物。同时用兔抗猪ZP IgGs蛋白印迹试验表明, huZP3a和pZP3b的几个共同线性抗原表位都存在于其肽链的前半区域。结论:通过基因重组技术可获得足够量的huZP3a和huZP3b,这为开展huZP3a和huZP3b的免疫原性以及huZP3诱发人精子顶体胞吐的功能域等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 透明蛋白-3 基因表达 免疫印迹 纯化
下载PDF
猪卵透明带-3β截短型蛋白在原核系统中的表达研究 被引量:3
6
作者 孙奋勇 陈小佳 +5 位作者 朱伟杰 谢秋玲 吴健虹 徐万祥 洪岸 李菁 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期323-327,共5页
目的:制备具有猪卵透明带-3β抗原活性的截短型pZP3β蛋白(tunc-pZP3β),以便对该蛋白的抗原表位区域作深入研究。方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第130个氨基酸到第290个氨基酸的DNA序列。获得的tunc-pZP3β基因片段通过引入其两端的... 目的:制备具有猪卵透明带-3β抗原活性的截短型pZP3β蛋白(tunc-pZP3β),以便对该蛋白的抗原表位区域作深入研究。方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第130个氨基酸到第290个氨基酸的DNA序列。获得的tunc-pZP3β基因片段通过引入其两端的NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点被定向插入pET-3c质粒T7强启动子下游的多克隆区,筛选出重组子,经DNA测序验证正确后,转化表达菌株BL21(DE3)pLysS,再用IPTG对重组菌体进行诱导。结果:SDS-PAGE分析表明tunc-pZP3β在大肠杆菌系统中高水平表达,且在WesternBlot免疫印迹中能被特异性抗体识别。结论:对适当的抗原表位序列进行保留而截去两端一定的氨基酸序列,所获得的截短型蛋白能够实现在大肠杆菌中高效表达,这有利于深入研究该蛋白核心区域的功能。 展开更多
关键词 截短型 透明-3β 人肠杆菌 表达
下载PDF
重组人卵透明带蛋白3的制备及其免疫学活性分析 被引量:2
7
作者 郭焱 曲晓波 金宁一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1119-1121,共3页
目的:纯化制备rhuZP3,并分析其免疫学活性。方法:在含重组质粒pGEX4T-1/huZP3的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达出GST-融合蛋白,蛋白经过一系列的纯化,然后SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。rhuZP3免疫小鼠,ELISA法检测抗血清对rhZP3的抗体反... 目的:纯化制备rhuZP3,并分析其免疫学活性。方法:在含重组质粒pGEX4T-1/huZP3的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达出GST-融合蛋白,蛋白经过一系列的纯化,然后SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。rhuZP3免疫小鼠,ELISA法检测抗血清对rhZP3的抗体反应。结果:表达出了可溶性融合蛋白,纯化后的rhuZP3纯度达95%。而且它在ELISA鉴定实验中能被抗rhuZP3抗体识别。结论:通过原核表达系统制备的rhuZP3及其抗体具有免疫学活性。 展开更多
关键词 人卵透明蛋白3 表达 纯化 活性
下载PDF
猪卵透明带-3β蛋白核心片断在E.coli中的表达 被引量:2
8
作者 谢秋玲 陈小佳 +5 位作者 朱伟杰 张玲 徐万祥 洪岸 李菁 高丝红 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期387-390,共4页
目的:探讨通过基因工程的方法在大肠杆菌中表达猪卵透明带蛋白pZP3b的核心片断。方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第44-306个氨基酸的pZP3β核心片断的DNA序列,克隆入pET-3c载体进而在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)pLysS中表达。结果:表达的... 目的:探讨通过基因工程的方法在大肠杆菌中表达猪卵透明带蛋白pZP3b的核心片断。方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第44-306个氨基酸的pZP3β核心片断的DNA序列,克隆入pET-3c载体进而在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)pLysS中表达。结果:表达的pZP3β核心蛋白占菌体总蛋白的15%,并经Western-blot鉴定为目的蛋白。结论:pZP3β核心片断在大肠杆菌中获得较高的表达,有利于产物的纯化,为后续阐明pZP3β核心区域的性质和相关抗生育研究打下了基础。 展开更多
关键词 透明-3β 核心片断 大肠杆菌 表达
下载PDF
草原兔尾鼠卵透明带3融合蛋白抗原的制备及免疫反应性 被引量:2
9
作者 王焱冰 李轶杰 张富春 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期244-247,251,共5页
目的大量制备重组的草原兔尾鼠卵透明带3(Recombinant Lagurus lagurus zona pellucida 3, r-LZP3 )融合蛋白,并检测其免疫反应性。方法经密码子优化的Lzp3基因在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达融合蛋白,表达产物经洗涤、纯... 目的大量制备重组的草原兔尾鼠卵透明带3(Recombinant Lagurus lagurus zona pellucida 3, r-LZP3 )融合蛋白,并检测其免疫反应性。方法经密码子优化的Lzp3基因在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达融合蛋白,表达产物经洗涤、纯化、溶解、复性后,用Western blot、ELISA和抗生育试验鉴定免疫反应性。结果得到纯度达93%的r-LZP3蛋白。Western blot显示表达产物与LZP3小鼠抗血清出现特异性反应条带。ELISA表明免疫小鼠血清中LZP3抗体滴度达1:45000以上。抗生育试验表明r-LZP3蛋白免疫小鼠的避孕率为25%,平均每胎产仔数减少4-5只。结论已获得了大量具有显著免疫活性的r-LZP3蛋白,为控制草原兔尾鼠鼠害的研究提供了重要的抗原。 展开更多
关键词 草原兔尾鼠透明3 融合蛋白 免疫反应性 免疫不育
下载PDF
人卵透明带3蛋白的二级结构和B细胞抗原表位预测 被引量:3
10
作者 周勇 马玲 《新疆医科大学学报》 CAS 2008年第8期955-958,共4页
目的:预测并综合分析人卵透明带3(human zona pellucida 3,hZP3)蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位。方法:以hZP3蛋白的基因序列为材料,采用Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测其结构蛋白的二级结构及蛋白骨架... 目的:预测并综合分析人卵透明带3(human zona pellucida 3,hZP3)蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位。方法:以hZP3蛋白的基因序列为材料,采用Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测其结构蛋白的二级结构及蛋白骨架区的柔韧性,采用Kyte-Doolittle法对蛋白的亲水性进行分析,Emini法预测蛋白的表面可能性,Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原指数。结果:hZP3蛋白含有较多的β折叠和转角结构。该蛋白第27~31、36~46、114~133、140~151、237~240和324~329区段可能是α-螺旋中心;hZP3蛋白分子第52~54、60~67、74~78、100~111、158~169、181~185、190~193、210~218、226~229、311~317、335~349和353~360区段可能是β-折叠中心。hZP3蛋白具有多处抗原指数较高的区段,其中近中部区段和近羧基端的第92~95、132~137、171~178、239~245、252~255、279~286、292~305和319~324区段含有潜在的B细胞优势抗原表位。结论:以蛋白质的二级结构预测作为辅助手段,用抗原指数、亲水性参数和表面可能性参数预测hZP3蛋白的B细胞抗原表位,为实验确定hZP3蛋白的B细胞抗原表位并以此进行免疫避孕研究奠定基础。 展开更多
关键词 人卵透明3蛋白 B细胞抗原表位 二级结构 预测
下载PDF
犬卵透明带3蛋白原核表达和抗血清的制备 被引量:1
11
作者 张贝贝 王颖 +1 位作者 张冀 张富春 《四川动物》 北大核心 2016年第5期697-702,共6页
在研发控制流浪犬卵透明带3(CZP3)免疫不育疫苗的过程中,需要制备特异性的CZP3抗血清进行免疫检测。本研究克隆获得CZP3的c DNA(全长1 281 bp)和除去跨膜区和信号肽的核心片段(CZP3C,984 bp),通过构建原核表达载体p ET28a-CZP3C,转化大... 在研发控制流浪犬卵透明带3(CZP3)免疫不育疫苗的过程中,需要制备特异性的CZP3抗血清进行免疫检测。本研究克隆获得CZP3的c DNA(全长1 281 bp)和除去跨膜区和信号肽的核心片段(CZP3C,984 bp),通过构建原核表达载体p ET28a-CZP3C,转化大肠杆菌BL21(DE3)。在28℃下以0.6 mmol·L^(-1)异丙基硫代β-D-半乳糖苷诱导表达4 h,获得CZP3C融合蛋白。利用CZP3C融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备特异性的抗血清,并对抗血清的特异性和效价进行评价。SDS-PAGE结果表明,融合蛋白以包涵体形式存在。经过镍柱亲和纯化及8 mmol·L^(-1)尿素复性后,获得了高纯度的CZP3C融合蛋白。用0.8μg·μL^(-1)的CZP3C融合蛋白免疫新西兰大白兔,免疫后的兔抗血清用Western blot及间接免疫荧光实验检测,结果证明CZP3C兔抗血清具有较高的特异性,ELISA检测效价为1∶409600。本研究所制备的抗血清能够为流浪犬免疫不育疫苗的研制提供检测材料。 展开更多
关键词 透明3 原核表达 融合蛋白 抗血清
下载PDF
草原兔尾鼠卵透明带3蛋白的免疫原性及其抗血清对体外精卵结合的影响
12
作者 张爱莲 庄淑珍 +1 位作者 刘菲 张富春 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期244-247,共4页
目的:大肠杆菌表达的重组草原兔尾鼠透明带3(Recombinant Luguruszone pellucida3,r-LZP3)蛋白的免疫原性直接影响抗体的滴度,通过对r-LZP3免疫原性的分析,获得特异性的抗血清,并探讨r-LZP3和抗血清对体外精卵结合的影响。方法:在大肠... 目的:大肠杆菌表达的重组草原兔尾鼠透明带3(Recombinant Luguruszone pellucida3,r-LZP3)蛋白的免疫原性直接影响抗体的滴度,通过对r-LZP3免疫原性的分析,获得特异性的抗血清,并探讨r-LZP3和抗血清对体外精卵结合的影响。方法:在大肠杆菌中以包涵体形式表达r-LZP3,经过变性、复性及纯化后作为抗原,用LZP3DNA疫苗初免小鼠后,再用r-LZP3进行免疫加强,产生特异性的LZP3抗血清;通过EL1SA测定抗体应答的水平;蛋白印迹、间接免疫荧光和免疫组化方法检测抗血清同r-LZP3、鼠卵母细胞表面天然ZP的反应性;精卵结合实验观察r-LZP3、抗血清体外对鼠精卵结合能力的影响。结果:用LZP3DNA疫苗免疫制备的抗血清在免疫鼠中产生了较高的抗体滴度,并且可以识别大肠杆菌表达的r-LZP3以及鼠卵细胞表面天然的ZP,抗血清和r-LZP3也都能在体外抑制鼠的精卵结合。结论:大肠杆菌表达的r-LZP3有较好的免疫原性,r-LZP3和抗血清能够在体外阻止鼠的精卵结合。 展开更多
关键词 草原兔尾鼠透明3 免疫原性 抗血清 母细胞 结合
下载PDF
用猪卵透明带55KDa糖蛋白抗原(ZP3)免疫恒河猴的初步研究 被引量:10
13
作者 潘善培 谢琪璇 +4 位作者 陈海玲 刘学高 陈乾生 马昭林 梁兴林 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 1995年第1期90-97,共8页
用猪卵透明带55KDa糖蛋白抗原(ZP3)和胞壁酰肢二肽佐剂(MDP)免疫3只雌性恒河猴,研究猪ZP3免疫的抗生育作用及其对卵巢正常结构与功能的影响,评价用恒河猴作卵透明带生育调节疫苗研究动物模型的合适性。实验观察持... 用猪卵透明带55KDa糖蛋白抗原(ZP3)和胞壁酰肢二肽佐剂(MDP)免疫3只雌性恒河猴,研究猪ZP3免疫的抗生育作用及其对卵巢正常结构与功能的影响,评价用恒河猴作卵透明带生育调节疫苗研究动物模型的合适性。实验观察持续440天,三只免疫猴中,两只产生高滴度抗ZP3抗体并导致不孕(免疫组怀孕率为33%,对照组为80%).血清E_2和P测定结果表明,抗体滴度高的两只猴E_2和P的水平极低,且不呈周期性变化,组织学观察表明两只不孕猴的卵巢缺乏生长卵泡和成熟卵泡,揭示ZP3免疫阻断了卵泡的发育,这些结果与用猪ZP3免疫其它灵长类动物报导的相似,它进一步证实ZP3免疫的抗生育作用,并支持用恒河猴作动物模型,研究用合成肽段或基因重组产物作免疫原的卵透明带生育调节疫苗。 展开更多
关键词 透明 生殖免疫 恒河猴 蛋白抗原 免疫
全文增补中
重组人卵透明带蛋白3融合蛋白表达载体的构建及表达
14
作者 印璞 郭焱 于庭 《中国实验诊断学》 2007年第4期522-524,共3页
关键词 融合蛋白 透明蛋白 表达载体 免疫性不孕症 重组 基因工程技术 人卵透明 特异性受体
下载PDF
人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较
15
作者 周文燊 熊波 +4 位作者 李文星 谢琪璇 肖銮娟 张春雪 潘善培 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期117-122,共6页
目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区... 目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区会影响重组蛋白泌出胞外而使表达量降低,潜在酶切位点存在会导致重组蛋白被不完全降解,而多聚组氨酸纯化标签设计位置对表达也有一定影响。结论:从表达量和产物完整性综合考虑,以突变型成熟肽为佳,含跨膜区的蛋白则应选用pPICZaA质粒,以便富集得到完整的表达蛋白。 展开更多
关键词 重组人卵透明ZP3蛋白 表达 跨膜区 酶切位点突变 组氨酸纯化标签
下载PDF
草兔卵透明带3(ZP3)基因的克隆及序列分析 被引量:6
16
作者 张浩 韩崇选 +2 位作者 郑雪莉 吴景龙 隋丹丹 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期63-68,共6页
根据GenBank中欧洲兔ZP3mRNA序列设计特异性引物,以草兔卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术首次克隆得到草兔ZP3cDNA编码区,命名为hZP3(GenBank登录号:KC447289)。生物信息学分析表明:扩增出的hZP3基因编码序列长1 260bp,编码419个氨基... 根据GenBank中欧洲兔ZP3mRNA序列设计特异性引物,以草兔卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术首次克隆得到草兔ZP3cDNA编码区,命名为hZP3(GenBank登录号:KC447289)。生物信息学分析表明:扩增出的hZP3基因编码序列长1 260bp,编码419个氨基酸,包含一个完整的开放阅读框(ORF)。与欧洲兔ZP3基因核苷酸一致性高达96%。预测的ZP3蛋白具有ZP家族典型特征。系统进化树显示其与欧洲兔亲缘关系最近,其次是啮齿目动物,符合物种进化规律。hZP3基因编码区的成功克隆,为进一步利用该基因通过免疫不育手段防治森林草兔危害提供了基础。 展开更多
关键词 草兔 透明3(ZP3) 克隆 序列分析
下载PDF
卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α的构建及其在体外的表达 被引量:6
17
作者 刘红军 潘善培 +2 位作者 谢琪璇 肖銮娟 董鲁 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2003年第1期79-85,共7页
 目的:构建pVAX1-pZP3α,探讨其在体外的表达,研制卵透明带DNA避孕疫苗.方法:利用基因工程的方法构建卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α,用脂质体法转染Hela细胞并采用RT-PCR和Westernblot检测卵透明带抗原pZP3α的体外表达.结果:构建...  目的:构建pVAX1-pZP3α,探讨其在体外的表达,研制卵透明带DNA避孕疫苗.方法:利用基因工程的方法构建卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α,用脂质体法转染Hela细胞并采用RT-PCR和Westernblot检测卵透明带抗原pZP3α的体外表达.结果:构建了卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α,并在体外表达系统检测到卵透明带抗原pZP3αmRNA和pZP3α的表达.结论:正确构建了卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α. 展开更多
关键词 pVAX1-pZP3α 透明 DNA疫苗 避孕疫苗 基因工程 基因表达 抗原免疫
下载PDF
草原兔尾鼠卵透明带3基因重组腺病毒载体的构建及表达 被引量:3
18
作者 陈邦党 张富春 +2 位作者 孙美玉 李轶杰 马正海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期707-710,共4页
目的:探索制备免疫不育疫苗的新途径,获得草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)重组腺病毒减毒活疫苗。方法:将LZP3基因亚克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV上,采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带LZP3基因的重组腺病毒载体。获得的重组... 目的:探索制备免疫不育疫苗的新途径,获得草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)重组腺病毒减毒活疫苗。方法:将LZP3基因亚克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV上,采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带LZP3基因的重组腺病毒载体。获得的重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞,包装成病毒颗粒。PCR鉴定重组腺病毒,继而用鉴定正确的重组腺病毒感染HeLa细胞,并以RT-PCR、Western blot检测LZP3的转录和表达。结果:成功构建了携带LZP3基因的重组腺病毒pAd-LZP3载体,其转染293细胞后包装出重组病毒,PCR证实LZP3基因已整合至腺病毒基因组中,病毒的滴度可达1.2×1010pfu/L。RT-PCR和Western blot检测表明RAd-LZP3感染的HeLa细胞中LZP3基因能够有效转录和表达。结论:制备的RAd-LZP3可成功表达LZP3基因,为后续开展RAd-LZP3免疫动物的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 草原兔尾鼠 透明3 表达 重组腺病毒
下载PDF
分子佐剂C3d增强草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗的免疫应答 被引量:10
19
作者 王焱冰 李轶杰 张富春 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2006年第4期297-303,共7页
为增强免疫不育的效果,探讨分子佐剂C3d对草原兔尾鼠透明带3(LaguruslagurusZonaPellucida3,LZP3)基因免疫的调节作用。构建了含3个拷贝C3d的lzp3基因真核细胞表达质粒pcDNA3-LZP3-C3d3(pcD-LC),以不含C3d的质粒pcDNA3-LZP3(pcD-L)为对... 为增强免疫不育的效果,探讨分子佐剂C3d对草原兔尾鼠透明带3(LaguruslagurusZonaPellucida3,LZP3)基因免疫的调节作用。构建了含3个拷贝C3d的lzp3基因真核细胞表达质粒pcDNA3-LZP3-C3d3(pcD-LC),以不含C3d的质粒pcDNA3-LZP3(pcD-L)为对照,体外转染HeLa细胞,RT-PCR和Westernblot分别检测到lzp3mRNA和蛋白的表达。对NIH雌性小鼠肌肉进行基因免疫注射,ELISA结果表明pcD-LC免疫诱导的特异性抗LZP3-IgG水平明显高于pcD-L对照组(P<0.05),且有长期免疫应答效应;MTT结果显示pcD-LC能够诱导淋巴细胞增殖活性的提高。抗生育实验表明pcD-LC免疫组显著降低窝产仔数(P<0.05),且卵巢切片正常。研究结果证实C3d能够增强lzp3DNA疫苗的特异性免疫应答并达到抗生育效果,为DNA疫苗控制草原兔尾鼠的深入研究提供了基础。 展开更多
关键词 草原兔尾鼠透明3 DNA 疫苗 分子佐剂C3d 免疫应答 抗生育
下载PDF
犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗免疫有效降低小鼠生育能力 被引量:3
20
作者 王颖 张贝贝 +3 位作者 张冀 罗娇娇 阿地拉.艾皮热 张富春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1331-1335,共5页
目的构建以犬卵透明带3(CZP3)为靶抗原的DNA避孕疫苗,并对其免疫效果及抗生育能力进行初步评价。方法提取犬卵巢总RNA,反转录PCR扩增CZP3基因,利用Prot Scale、TMHMM、Signal P、Inter Pro Scan、PREDICT PROTEIN、同源模建等生物信息... 目的构建以犬卵透明带3(CZP3)为靶抗原的DNA避孕疫苗,并对其免疫效果及抗生育能力进行初步评价。方法提取犬卵巢总RNA,反转录PCR扩增CZP3基因,利用Prot Scale、TMHMM、Signal P、Inter Pro Scan、PREDICT PROTEIN、同源模建等生物信息学方法对CZP3基因进行分析,构建携带目标抗原CZP3的DNA疫苗pc DNA-CZP3,进行小鼠免疫实验,对DNA疫苗的免疫效果、抗生育水平进行综合评价。结果 CZP3基因序列共编码426个氨基酸,其在N端和C端各有1个疏水区,N端前22个氨基酸为信号肽,C端有1个由细胞外到细胞内的跨膜螺旋。CZP3有8个B细胞表位。DNA避孕疫苗pc DNA3-CZP3能够诱导小鼠产生较高的抗体水平,免疫组小鼠平均产仔数显著低于空白对照组和阴性对照组。结论成功构建能显著降低小鼠生育能力的犬避孕DNA疫苗pc DNA3-CZP3。 展开更多
关键词 透明3(CZP3) 序列分析 DNA疫苗 免疫避孕
下载PDF
上一页 1 2 5 下一页 到第
使用帮助 返回顶部