蟾毒它灵诱导急性早幼粒细胞白血病HL⁃60细胞铁死亡的机制研究

目的探究蟾毒它灵(Bufotalin)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞HL‐60铁死亡的作用及机制。方法用不同浓度(0.1、0.5、1.0、2.0、4.0μg·mL^(-1))蟾毒它灵分别作用于APL细胞HL‐60,使用光学显微镜观察细胞的形态学变化;采用CCK‐8法检测细胞的存活率情况;采用Western blot法检测细胞中铁死亡相关蛋白CD71、xCT、FTH1、GPX4的表达水平;采用谷胱甘肽(GSH/GSSG)检测试剂盒检测细胞内GSH和GSSG的含量变化;采用脂质氧化(MDA)检测试剂盒测定细胞内MDA的含量变化。将0.5μg·mL^(-1)蟾毒它灵、0.1μmol·L^(-1)Fer‐1和0.5μg·mL^(-1)蟾毒它灵+0.1μmol·L^(-1)Fer‐1分别作用于HL‐60细胞,使用光学显微镜观察细胞形态学变化,并用Western blot法检测铁死亡相关蛋白的表达水平。结果不同浓度蟾毒它灵处理HL‐60细胞后,细胞形态呈现出哑铃型、梭形等不规则形状,细胞的存活率降低,且呈时间‐剂量依赖关系。与对照组相比,蟾毒它灵可降低铁死亡相关蛋白GPX4、xCT、FTH1的表达水平和总谷胱甘肽的含量(均P<0.01),升高CD71蛋白的表达水平和MDA含量(均P<0.05)。蟾毒它灵与铁死亡抑制剂Fer‐1联合处理HL‐60细胞后,与对照组比较,HL‐60细胞的生长数量和形态学无明显变化,CD71、xCT、FTH1、GPX4蛋白表达水平的差异也无统计学意义(均P>0.05)。结论蟾毒它灵可抑制APL细胞HL‐60的增殖并诱导铁死亡,其可能通过GPX4介导的抗氧化途径和铁代谢途径实现。

全反式维甲酸联合小剂量阿糖胞苷对急性髓系白血病细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶信号通路的作用机制研究

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对急性髓系白血病细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)信号通路的作用机制。方法:选取人急性髓系白血病细胞HL-60,分为空白对照组(未经任何处理的HL-60细胞)、Ara-C组(加入0.5μmol/LAra-C)、ATRA组(加入2μmol/LATRA)、ATRA+Ara-C组(加入2μmol/LATRA和0.5μmol/LAra-C),继续培养24、48、72h,采用CCK8检测HL-60细胞活力,AnnexinV双染法检测HL-60细胞凋亡,qRT-PCR检测PI3K、AKT-mRNA表达,Westernblot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达,并进行细胞形态学观察。结果:空白对照组HL-60细胞活力高于Ara-C+ATRA组、Ara-C组、ATRA组,Ara-C组、ATRA组HL-60细胞活力高于Ara-C+ATRA组(均P<0.05)。Ara-C+ATRA组HL-60细胞凋亡率高于Ara-C组、ATRA组,Ara-C组、ATRA组HL-60细胞凋亡率高于空白对照组(均P<0.05)。HL-60细胞胞体多呈圆形,可见瘤状突起,胞核多为类圆形,Ara-C组、ATRA组染色质凝聚,颜色变深,部分胞核变小,Ara-C+ATRA组染色质凝聚,颜色变深,可见核固缩、核碎裂。空白对照组HL-60细胞PI3K、AKTmRNA表达高于Ara-C组、ATRA组,Ara-C组、ATRA组HL-60细胞PI3K、AKTmRNA表达高于Ara-C+ATRA组(均P<0.05)。空白对照组HL-60细胞P-PI3K、P-AKT蛋白表达高于Ara-C组、ATRA组,Ara-C组、ATRA组HL-60细胞P-PI3K、P-AKT蛋白表达高于Ara-C+ATRA组(均P<0.05)。结论:Ara-C+ATRA能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活,促进HL-60细胞凋亡。

PCT和PSPN对急性髓系白血病化疗期间发热性中性粒细胞减少症患者细菌感染的鉴别价值

目的:探讨降钙素原(procalcitonin,PCT)和可溶性白细胞分化抗原14亚型(soluble cell differentiation antigen 14,sCD14,又称presepsin,PSPN)对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)化疗期间发热性中性粒细胞减少症(febrile neutropenia,FN)患者细菌感染的鉴别价值。方法:纳入2018年07月至2022年02月期间在我院接受化疗且出现FN的121例AML患者,分为非细菌感染组化疗期间发生FN且发热原因不明(细菌培养阴性,无临床迹象表明存在感染)与细菌感染组菌血症(血培养阳性)和局部感染(血培养阴性,细菌培养提示局部感染)。通过酶联免疫吸附试验试剂盒检测FN发病第1至3天血浆PCT和PSPN水平。结果:与非细菌感染组相比,细菌感染组患者FN发病第1至3天的PCT和PSPN水平明显更高,差异有统计学意义(P<0.05)。第1、2、3天的PCT水平鉴别FN细菌感染的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.882、0.737、0.715,而PSPN诊断AUC分别为0.799、0.729、0.703。此外,PCT和PSPN联用可进一步提高对FN细菌感染诊断的AUC值(0.892、0.808、0.763)。发病第1天PCT≥2.02 ng/mL或者PSPN≥2.40μg/L,FN细菌感染风险显著增加(P<0.05);校正混杂因素后,当PSPN≥2.91μg/L时,AML患者FN细菌感染风险增加2.177~2.624倍(P<0.05)。Spearman相关性分析显示PCT与细菌性脓毒症患者序贯器官功能衰竭评分(sequential organ failure assessment,SOFA)呈正相关(P<0.001),PSPN值与SOFA评分无显著相关性(P>0.05)。结论:PCT较PSPN在区分FN细菌感染性病因和非感染病因方面准确性更高,其浓度与细菌性脓毒症的严重程度有关;二者联用能进一步提高PCT对FN细菌感染的诊断效能。

姜黄素在急性髓性白血病HL-60细胞中对凋亡调控蛋白Bax、Bak、Mcl-1的影响

为了探讨姜黄素在诱导急性髓性白血病 HL- 6 0细胞凋亡时 ,Bcl- 2基因家族成员是否参与了其调控过程。选用 Bcl- 2基因家族成员 Mcl- 1、Bax、Bak蛋白为研究对象 ,SABC法检测其表达状况 ;用流式细胞术测定 DNA直方图中 Sub- G1 峰值、末端 Td T酶标技术检测 TUNEL 细胞阳性率。发现当 2 5 μmol/ L 姜黄素分别处理 HL- 6 0细胞 2 4h、 36h、 48h后 ,可使 Mcl- 1表达下调 ,Bax和 Bak上调 ,呈时间依赖性。在各处理组 ,Mcl- 1、 Bax、 Bak表达同对照组相比有显著差异 (F值分别为 3.44 3、 8.32 8;P值分别为 0 .0 40、 0 .0 0 1)。结果表明 :Bcl- 2基因家族成员确实参与了姜黄素诱导 HL- 6

雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL-60的生长抑制及凋亡诱导作用

目的 :探讨雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL 6 0细胞的增殖及凋亡的影响。方法 :应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法、荧光染色法、流式细胞仪 (FCM )检测、DNA片段化分析等方法研究雷公藤多甙对HL 6 0细胞的影响。结果 :雷公藤多甙能显著抑制白血病细胞的增殖 ,降低肿瘤细胞的存活率 ,其半数细胞抑制剂量 (IC50 )为5 .0 μg/ml,阻滞细胞周期于G2 /M期 (P <0 .0 5 )。雷公藤多甙实验组在形态学上可见明显凋亡细胞 ,且凋亡细胞百分率显著上升 (P <0 .0 5 ) ,凝胶电泳分析有DNA梯状条带出现。结论 :雷公藤多甙能显著抑制人急性髓性白血病细胞株HL 6

苦参碱联合化疗药物对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖及侵袭力的影响

目的:探究苦参碱联合化疗药物对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖及侵袭力的影响。方法:体外培养人急性髓系白血病HL-60细胞,苦参碱单药组以1.0 g/L苦参碱干预,三氧化二砷单药组以3μmol/L三氧化二砷处理,联合组以终浓度为1.0 g/L的苦参碱+3μmol/L三氧化二砷处理,空白组以等量生理盐水处理。MTT法检测HL-60细胞增殖情况,ranswell小室实验检测HL-60侵袭力,蛋白免疫印迹法检测HL-60细胞MMPs蛋白表达情况。结果:苦参碱单药组、三氧化二砷单药组、联合组24 h PIR分别为(18.54±2.54)%,(29.54±2.62)%,(41.45±3.72)%,48 h PIR分别为(27.46±2.55)%,(38.93±3.76)%,(45.64±3.54)%,3组内HL-60的PIR均随着培养时间的增加而增加,其中联合组24 h、48 h PIR均高于同时间点的苦参碱单药组、三氧化二砷单药组,差异有统计学意义(P<0.05)。空白组、苦参碱单药组、三氧化二砷单药组、联合组侵袭细胞分别为(127.64±23.93)个、(94.24±15.23)个、(81.23±12.21)个、(75.13±10.69)个,相对侵袭指数分别为(100.00±0.00)%、(73.44±0.34)%、(62.47±0.15)%、(58.54±0.36)%;MMP-2蛋白相对表达量分别为(0.91±0.05)、(0.39±0.04)、(0.23±0.04)、(0.14±0.03);MMP-9蛋白相对表达量分别为(0.62±0.05)、(0.31±0.05)、(0.27±0.04)、(0.16±0.02)。与空白组比较,苦参碱单药组、三氧化二砷单药组、联合组侵袭细胞数量显著减少,相对侵袭指数及细胞中MMP-2、MMP-9相对表达量降低,且联合组均低于苦参碱单药组、三氧化二砷单药组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参碱联合三氧化二砷通过下调MMP-2、MMP-9蛋白表达有效抑制人急性髓系白血病HL-60细胞增殖及侵袭。

土贝母苷甲对人HL-60髓性白血病细胞周期与凋亡的影响

目的:研究土贝母苷甲(下称苷甲)对人髓性白血病细胞HL-60的细胞周期及凋亡的影响。方法:采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测苷甲对HL-60细胞生长的影响;形态学方法(荧光显微镜和透射电镜)、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳观察和分析在苷甲作用下HL-60细胞形态、DNA含量的变化和DNA断裂的情况;蛋白印迹免疫法检测细胞凋亡及周期相关基因bcl-2、cyclinB1表达的变化。结果:苷甲显著抑制HL-60细胞的生长,其抑制效果与浓度及时间呈依赖关系。15μmol·L-1苷甲作用24小时可将HL-60细胞阻滞于G2/M期,进而诱导其凋亡,凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征,琼脂糖凝胶电泳可见明显的梯状区带。bcl-2表达无明显变化,cyclinB1表达降低。结论:苷甲对细胞周期起阻滞作用,并诱导其凋亡,其作用机制可能与cyclinB1表达降低有关。

昆布多糖硫酸酯对急性髓性白血病HL-60细胞株NF-κB表达的实验研究及CD_(11b)在HL-60细胞株的表达

目的 研究昆布多糖硫酸酯 (LAMS)对急性髓性白血病HL - 6 0细胞株NF -κB表达的影响及CD11b在HL - 6 0细胞株的表达。方法 用MTT法测定不同浓度LAMS对HL - 6 0细胞株的增殖抑制作用 ;流式细胞仪分析不同浓度作用下细胞凋亡率 ,免疫组化法测定MMS对HL - 6 0细胞株NP -κB家族P6 5亚单位的作用及CD11b表达。结果 HL - 6 0细胞增殖抑制程度与昆布多糖硫酸酯的浓度呈正相关 ;HL - 6 0细胞凋亡率随药物浓度的增加而升高 ;在LAMS浓度为 0 .75 μg/ml作用下 ,P6 5在 12h表达呈强阳性 ,2 4h几乎不表达 ,而IKbα在 6h表达呈强阳性 ,CD11b不表达。结论 LAMS可以诱导体外HL - 6 0细胞凋亡 ,其中对凋亡的调控作用可能为负调控 ;LAMS能够调控NF -κB的表达 ,其表达有时间差异性。说明LAMS已作用于分子水平 ,且对CD11b在HL - 6 0细胞株的表达无影响。

端粒酶反义RNA对人髓性白血病细胞系HL-60的作用

目的 探讨抗端粒酶在急性白血病治疗中的意义 .方法 用脂质体介导法将 p BBS2 12 - h TR(反义端粒酶 RNA真核表达载体 )导入人髓性白血病细胞系 HL- 6 0中 ,采用TRAP法测定端粒酶活性 ,细胞生长动力学检测 ,电镜 ,DNA片段分析等方法观察其对 HL- 6 0细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响 .结果 端粒酶反义 RNA能显著抑制HL- 6 0细胞的端粒酶活性 ,抑制 HL- 6 0细胞的增殖并促进其凋亡 .结论 以端粒酶反义

PARP抑制剂olaparib对急性髓系白血病细胞HL-60抑制作用研究

目的研究PARP抑制剂olaparib对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞的抑制作用。方法对数生长期HL-60细胞经不同浓度(0、1.25、2.5、5、10μmol/L)olaparib作用不同时间后,CCK-8法检测olaparib对HL-60细胞的增殖抑制作用;Annexin-V/PI双标法检测HL-60细胞凋亡水平,Western blot检测HL-60细胞内相关信号蛋白(PARP-1、Caspase-3)表达变化。结果与对照组相比,经不同浓度(1.25、2.5、5、10μmol/L)olaparib作用48 h后的HL-60细胞出现增殖抑制,并且随着作用时间的延长,抑制率逐渐增加;同时发现olaparib诱导HL-60细胞发生凋亡,并显示出剂量依赖效应;Western blot结果显示,olaparib处理后的HL-60细胞内PARP活性受到抑制,Caspase-3活化。结论PARP抑制剂olaparib对HL-60细胞不仅具有增殖抑制作用,同时可通过激活Caspase-3,抑制PARP活性,诱导HL-60细胞凋亡。

髓性白血病细胞HL60自发超微弱生物光子辐射研究

采用光子计数成像采集系统 (PIAS)对髓性白血病细胞HL60自发的超微弱生物光子辐射进行了初步研究 ,获得了HL60细胞的生物光子强度与培养时间及细胞密度的关系。研究表明 ,HL60细胞的生物光子强度反映了细胞繁殖规律性及新陈代谢状况。为进一步探索肿瘤细胞与抗癌药物作用的生物光子效应 ,我们把TNF - β(肿瘤坏死因子)对悬浮HL60细胞进行处理 ,发现比同性质无TNF - β 药物的对照组有更强的超微弱光子辐射。

雷帕霉素对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的探讨雷帕霉素对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响。方法体外培养人HL-60细胞,并将不同浓度(10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L)雷帕霉素(溶于DMSO)作用于HL-60细胞,另设空白对照组和相同体积的DMSO组。然后应用CCK8技术检测各组细胞增殖抑制率,应用荧光显微镜和Td T酶介导的末端缺失原位标记法观察其凋亡情况,应用QPCR、Western blot等方法观察48 h不同组别Bax、Bcl-2基因和蛋白表达情况。结果 CCK-8检测结果显示,不同浓度雷帕霉素处理组细胞生长抑制率明显大于对照组和DMSO组(P<0.05),而且随着浓度的增加,其抑制率也明显增高。随着雷帕霉素浓度的增加,HL-60凋亡细胞逐渐增多,细胞凋亡率分别为(8.4±1.3)%、(14.7±1.9)%、(28.5±2.7)%、(51.6±5.4)%、(52.7±4.8)%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。QPCR和Western blot结果显示,和对照组相比,随着雷帕霉素浓度的增加Bax mRNA和蛋白表达水平逐渐增高,且均远大于对照组(P<0.01);然而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平却随着雷帕霉素浓度的增加逐渐降低,且均远小于对照组(P<0.01)。结论雷帕霉素可以明显抑制HL-60细胞生长,并可能通过促进Bax表达,抑制Bcl-2生成来诱导HL-60细胞凋亡,且上述作用呈剂量依赖性。

c-myc小干扰RNA诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

本研究探讨c-myc小干扰RNA对白血病细胞系HL-60诱导凋亡的作用。将体外合成的siRNA转染HL-60细胞,观察形态学变化,应用MTT法绘制细胞生长曲线,用细胞集落培养观察c-myc siRNA对HL-60细胞增殖的影响;应用DNA片段化分析细胞的凋亡,RT-PCR及Western blot检测c-myc siRNA作用前后c-myc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果表明:c-myc siRNA能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)约为150nmol/L;DNA片段化的检出证实c-myc siRNA能有效诱导HL-60细胞调亡,凋亡率与药物作用时间呈正相关。c-myc siRNA与HL-60细胞作用后c-myc基因和蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论:c-myc siRNA能有效抑制HL-60细胞增殖,降低c-myc基因和蛋白的表达,诱导其凋亡。

miR-186对HL-60细胞增殖、迁移的调控及机制研究

目的 探讨过表达微小RNA-186(miR-186)对人原髓细胞白血病HL-60细胞上皮间质转化(EMT)、增殖、迁移及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路的调控作用。方法 选取体外培养HL-60细胞,按照不同的转染方式分为对照组、mimic NC组、miR-186组、miR-186+抑制剂组、miR-186+激活剂组。采用实时荧光定量聚合酶链反应、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Transwell小室法及蛋白免疫印迹法检测miR-186相对表达水平、增殖率、迁移率、EMT相关因子及其信使RNA(mRNA)相对表达水平并进行比较、分析。结果 与mimic NC组相比,miR-186组HL-60细胞miR-186相对表达水平、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及其mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05),而增殖率、迁移率、磷酸化(p)-PI3K、p-AKT、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(FN)及其mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-186组相比,miR-186+抑制剂组HL-60细胞E-cadherin及其mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05),而增殖率、迁移率、p-PI3K、p-AKT、N-cadherin、Vimentin、FN及其mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与miR-186组相比,miR-186+激活剂组HL-60细胞E-cadherin及其mRNA表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05),而增殖率、迁移率、p-PI3K、p-AKT、N-cadherin、Vimentin、FN及其mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 过表达miR-186通过阻遏PI3K/AKT信号通路抑制HL-60细胞EMT,进而抑制HL-60细胞增殖和迁移。

c-myc反义寡脱氧核苷酸诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

为研究c myc硫代反义寡脱氧核苷酸对白血病细胞系HL 60诱导细胞凋亡的作用 ,将人工合成的长度分别为 18mer和 15mer的硫代反义寡脱氧核苷酸 (AspoⅠ和AspoⅡ )转染HL 60细胞 ,用流式细胞术检测c Myc蛋白及DNA倍体分析 ,RT PCR检测c mycmRNA水平 ,电镜观察凋亡细胞的超微结构 ,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA降解片段。研究结果发现 ,经AspoⅠ 5 μmol L和 10 μmol L作用后c Myc蛋白分别降低 2 3.8%和 4 5 .4 % ,经AspoⅡ 10 μmol L作用后下降38.4 % ,RT PCR显示AspoⅠ和AspoⅡ组c mycmRNA表达明显减少。DNA倍体分析AspoⅠ 10μmol L作用 4 8和 72小时细胞凋亡率分别为 2 3.97%和 5 2 .6% ;AspoⅡ 10 μmol L作用 4 8和 72小时后细胞凋亡率分别为 2 8.8%和 4 5 .19% ;而空白对照和正义寡脱氧核苷酸组均未出现凋亡细胞。电镜观察两个反义寡脱氧核苷酸 10 μmol L作用后均出现细胞固缩 ,染色质边集 ,胞浆浓缩等凋亡细胞的改变。反义寡脱氧核苷酸 10 μmol L作用 4 8小时后均出现典型的DNA降解片段。本研究结果说明 ,c myc反义寡脱氧核苷酸是高特异性的基因药物 ,对HL 60细胞抑制c mycmRNA的表达 ,减少c Myc蛋白合成 ,并诱导HL

T淋巴细胞占比及DD/Fib与急性髓系白血病患者临床病理指标和预后的关系

目的探讨T淋巴细胞占比及DD/Fib与急性髓系白血病患者临床病理指标和预后的关系。方法选取190例AML患者作为研究组,同时选取80例同期体检的健康人员作为对照组,比较2组患者的T淋巴细胞占比及DD/Fib等差异。结果除CD8^(+)外,研究组的CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均低于对照组,而DD/Fib则显著高于对照组(P<0.05)。研究组中完全缓解组、未缓解组及难治复发组CD8^(+)指标比较无差异(P>0.05),而CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)逐渐降低,DD/Fib则逐渐升高(P<0.05)。死亡组CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均低于生存组,而DD/Fib则显著高于生存组(P<0.05);髓外浸润、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)及DD/Fib均为影响AML患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论随着AML病情进展,其T淋巴细胞亚群逐渐受到抑制,且高凝及纤溶亢进状态愈发明显,同时可在一定程度上反映患者的预后情况,且发现髓外浸润、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)及DD/Fib均为影响AML患者预后不良的独立危险因素。

沉默HMGA2基因表达逆转急性髓细胞白血病耐药细胞株HL-60/DNR对柔红霉素耐药性的研究

目的分析HMGA2基因对急性髓细胞白血病(AML)耐药细胞株HL-60/DNR对柔红霉素(DNR)耐药性的影响及机制。方法荧光定量PCR和western blot检测HMGA2的表达。通过转染HMGA2 siRNA(si-HMGA2)沉默HMGA2。CCK8实验检测DNR对HL-60/DNR细胞的抑制率。β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒检测β-半乳糖苷酶活性。结果与野生型HL-60相比,HL-60/DNR中HMGA2 mRNA和蛋白的表达水平明显提高。DNR对cell组和si-NC组HL-60/DNR细胞的抑制率无明显差异。与si-NC组相比,DNR对si-HMGA2组HL-60/DNR细胞的抑制率显著提高。DNR对cell组、si-NC组和si-HMGA2组HL-60/DNR细胞的IC50分别为4.46μg/mL、4.67μg/mL和0.98μg/mL。cell组和si-NC组的β-半乳糖苷酶活性无明显差异;与si-NC组相比,si-HMGA2组HL-60/DNR细胞的β-半乳糖苷酶活性显著提高。结论HMGA2在耐药细胞HL-60/DNR中高表达,沉默HMGA2可以逆转HL-60/DNR的DNR耐药性并加速细胞的衰老。

雷帕霉素对急性髓系白血病细胞系HL-60和HL-60/VCR生长的抑制作用

为了探讨mTOR抑制剂雷帕霉素对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia;AML)细胞的增殖和药物敏感性的影响。以AML细胞株HL-60和多药耐药HL-60/VCR细胞系为研究对象,采用MTT法测定生长曲线和流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测P糖蛋白(P-glycoprotein,Pgp)的表达。结果显示:与空白对照组细胞比较,雷帕霉素能抑制HL-60和HL-60/VCR细胞生长增殖(p<0.05),且随着浓度升高,增殖抑制率逐渐增高,24-72小时的细胞增殖抑制率随着时间的延长而有所增高(p<0.05),同时可阻滞细胞从G1期到S期的细胞周期转换。雷帕霉素抑制HL-60/VCR细胞的Pgp蛋白的表达。与柔红霉素单独应用相比,雷帕霉素50nmol/L、100nmol/L与柔红霉素联合应用使HL-60和HL-60/VCR细胞增殖抑制率明显增高(p<0.05),尤其是当先加雷帕霉素,而24小时后再加柔红霉素时。结论:mTOR抑制剂雷帕霉素对HL-60和多药耐药的HL-60/VCR细胞的生长均有抑制作用,除伴G0/G1期阻滞外,还增加细胞对柔红霉素的敏感性,这为临床难治性AML治疗提供新的治疗手段。

NME3蛋白在急性髓系白血病细胞株HL-60和患者骨髓表达趋势研究

为了验证HL-60细胞向粒、单两系分化前后非转移细胞蛋白3(NME3)的表达差异,并探讨该蛋白对急性髓系白血病的诊断价值,采用全反式维甲酸(ATRA)和甾体类新药NSC67657分别诱导急性髓系白血病HL-60细胞向粒系和单核系分化,通过细胞化学染色判断细胞分化方向,通过细胞表面分化抗原(CD11b/CD14)检测判断细胞分化程度,通过磷脂酰丝氨酸外翻排除细胞凋亡,建立细胞分化模型,应用RT-PCR和Western blot方法验证NME3基因和蛋白在细胞分化前后的差异表达情况。收集26例临床确诊的各种类型髓系白血病患者及5例正常人骨髓样本,比较分析NME3蛋白在不同样本组中的表达趋势。结果表明:ATRA(2μmol/L,5 d)和NSC67657(10μmol/L,5 d)可分别诱导HL-60细胞向粒系和单核系分化,其分化程度达到90%以上且不伴随凋亡发生,NME3基因与蛋白表达在细胞两系分化后明显下降。对患者骨髓有核细胞分析发现,NME3蛋白在急性髓系白血病患者骨髓样本中表达较慢性髓系白血病患者组及正常对照组明显升高。结论:NME3蛋白在HL-60细胞分化后表达下调,与其在患者样本中的表达趋势相符,提示该蛋白可能作为急性髓系白血病潜在的分子标志物。

siRNA沉默人类急性髓细胞白血病HL-60细胞HDAC1基因表达的实验研究

目的探讨siRNA沉默人类急性髓细胞白血病HL-60细胞HDAC1基因表达后对细胞增殖、凋亡以及组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响。方法 LipofectamineTM2000为载体将HDAC1特异性siRNA转染入HL-60细胞后,RT-PCR检测HL-60细胞HDAC1mRNA表达,MTS法绘制细胞生长曲线,流式细胞术分析细胞凋亡,Western Blot检测HDAC1的表达及其对凋亡相关蛋白及组蛋白甲基化、乙酰化表达的影响。结果 HDAC1siRNA转染HL-60细胞后可沉默该基因表达;抑制HL-60细胞增殖,呈量效和时效关系;诱导HL-60细胞凋亡,经0,30,60,120nmol/L HDAC1siRNA处理24h后,细胞凋亡率分别为(1.43±0.19)%,(14.4±3.1)%,(57.7±4.2)%,(68.7±1.6)%;与空白对照组(1.43±0.19)%比较,差别具有统计学意义(P<0.05);且HDAC1基因沉默后,可下调Bcl-2,Procaspase-9,Procaspase-3,c-Myc的表达;上调组蛋白H3,H3K9,H3K14,H3K27乙酰化水平,下调H3K9甲基化水平,对H4乙酰化无明显影响。结论沉默HDAC1基因表达后可能通过上调与基因转录激活有关的组蛋白H3,H3K14,H3K9,H3K27乙酰化水平,下调与基因转录抑制有关H3K9甲基化水平,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。