三七中人参三醇苷对脑缺血的保护作用及其机制

目的 :研究三七中人参三醇苷 (PTS)对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及作用机制。方法 :以大鼠永久性大脑中动脉阻塞模型 (MCAO)为基础 ,采用免疫转移印迹 (WesternBlot)的方法 ,观察PTS对大鼠脑缺血的保护作用及 3种脑缺血相关蛋白 (VEGF ,HSP70和转铁蛋白 )表达的影响。结果 :ipPTS 12 .5mg·kg-1× 7d(术前 5d ,术后 2d)可降低MCAO大鼠脑含水量 ,并影响两种脑缺血相关蛋白 (HSP70和转铁蛋白 )的含量 ,但对VEGF表达量在手术后的变化没有明显的影响。结论 :PTS对大鼠局灶性脑缺血有一定的保护作用 ,其机制可能是上调HSP70和下调转铁蛋白 。

三七中人参三醇皂苷活血化瘀作用研究

目的:观察三七中人参三醇皂苷(PTS)的活血化淤作用。方法:实时监测犬脑血流量、脑血管阻力、心率、平均动脉血压,检测大鼠全血血小板聚集,检测大鼠动-静脉旁路血栓形成。结果:PTS注射液可以通过降低脑血管阻力,明显增加脑血流量来改善脑循环,PTS注射液能抑制二磷酸腺苷(ADP)诱导的大鼠血小板聚集和大鼠动-静脉旁路血栓的形成。结论:PTS具有良好的活血化淤功能。

三七中人参三醇皂苷对脑缺血的保护作用

【目的】研究三七中人参三醇皂苷(PTS)对脑缺血的保护作用。【方法】将48只SD大鼠随机分为:假手术组、大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血(MCAO)模型组、PTS低(25mg/kg)、中(50mg/kg)、高(100mg/kg)剂量组和血栓通注射液(0.45mL/kg)组,通过行为学评分、脑含水量、脑梗塞范围和组织病理学检查等指标观察PTS对局灶性脑缺血的保护作用。同样将60只昆明小鼠随机分为:假手术组、不完全全脑缺血模型组、PTS低(25mg/kg)、中(60mg/kg)、高(120mg/kg)剂量组和血栓通注射液(0.45mL/kg)组,通过检测脑指数和脑伊文思蓝含量观察PTS对不完全全脑缺血的保护作用。【结果】对于大鼠,与模型组比较,PTS中、高剂量组均明显降低术后24h大鼠行为学评分,减轻缺血侧脑半球水肿程度(P<0.01);PTS低、中、高剂量组的缺血脑梗塞范围(19.0%±4.5%、16.4%±3.9%、16.4%±3.7%)明显低于模型组(23.5%±3.4%,P<0.05),缺血脑组织的病理改变也得到明显的改善,提示PTS对大鼠局灶性脑缺血有明显的保护作用。对于小鼠,PTS各剂量组的脑指数和脑伊文思蓝含量较模型组显著降低(P<0.05),提示PTS可通过抑制脑血管通透性的增加,从而降低脑指数,减轻脑水肿。【结论】PTS对大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血(MCAO)损伤、小鼠不完全全脑缺血损伤均具有明显的保护作用。

人参二醇、三醇皂苷对人骨髓造血祖细胞增殖作用的研究

目的:探讨人参二醇皂苷(panaxadiol saponin,PDS)和三醇皂苷(panaxtrol saponin,PTS)对骨髓造血祖细胞增殖的作用。方法:从人参总皂苷进一步分离纯化出PDS和PTS,用体外造血祖细胞集落形成技术,观察PDS、PTS对小鼠骨髓红系祖细胞(CFU-E、BFU-E)、粒-单系祖细胞(CFU-GM)和多向祖细胞(CFU-Mix)的刺激增殖作用。结果:不同浓度的PDS(2.5～200μg/ml)可促进造血祖细胞增殖;CFU-E,BFU-E,CFU-GM和CFU-Mix集落产率均显著高于对照组(P<0.05),提高率(％)分别达54.9±6.3、48.8±5.1、27.6±4.2和48.9±3.9。而PTS在同样浓度时,CFU-E、BFU-E产率均显著低于对照组(P<0.05);终浓度为200μg/ml时,CFU-E、BFU-E集落产率为零。在CFU-GM培养中,12.5μg/ml浓度的PTS使集落产率提高(29.7±2.2)％(P<0.05);而100μg/ml和200μg/ml的PTS却出现对CFU-GM的抑制作用,抑制率分别为(48.6±3.9)％和100％。结论:PDS是总皂苷内促进造血的有效成分,而PTS对红系祖细胞具有抑制作用,对粒-单系祖细胞的作用呈剂量依赖关系。

人参茎叶三醇皂苷对心肌缺血大鼠心肌酶及超微结构的影响

目的观察人参茎叶三醇皂苷(panaxatriol saponins,PTS)对心肌缺血大鼠心肌酶及超微结构的影响。方法Wistar大鼠100只,随机分为假手术、模型、生脉注射液、PTS 90,45 mg/kg二个剂量共5组。采用结扎冠状动脉左前降支的方法制备大鼠缺血模型,术前连续7 d腹腔注射给药,术后缺血24 h观察PTS对心肌缺血大鼠血清CK、LDH、AST水平、心肌细胞超微结构的影响。结果与模型组相比,PTS能降低心肌缺血大鼠血清CK、LDH、AST的活性,减轻缺血对心肌细胞超微结构的损伤程度。结论 PTS对心肌缺血大鼠具有保护作用。

西洋参叶20s-原人参三醇组皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察西洋参叶20s-原人参三醇组皂苷(PQTS)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,为新药开发提供依据。方法:50只大鼠随机分为假手术组、再灌注模型组及PQTS 12.5、25.0、50.0 mg.kg-1组(每组10只),PQTS组动物腹腔注射PQTS,假手术组和再灌注模型组注射生理盐水,结扎冠状动脉前降支30 min,松扎再灌注120 min造成心肌缺血再灌注损伤模型,检测各组心肌梗死范围(MIS),血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌型肌酸激酶同功酶(CK-MB)、超氧物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量、血浆前列环素(PGI2)及血栓素A2(TXA2)水平。结果:与再灌注模型组比较,PQTS 25.0和50.0 mg.kg-1组MIS缩小(P<0.01),血清AST、LDH、CK-MB活性及MDA含量降低(P<0.01),SOD及GSH-Px活性升高(P<0.05),血浆TXA2水平下降(P<0.05),PGI2水平及PGI2/TXA2比值增高(P<0.05或P<0.01)。上述指标PQTS 12.5 mg.kg-1组与对照组及再灌注模型组比较差异无显著性。结论:PQTS对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有明显保护作用,可能与其增强抗氧化酶活性、减少自由基对心肌的氧化损伤、纠正血管活性物质平衡失调等机制有关。

人参三醇组皂苷对UVC照射引起的RSa细胞损伤保护作用的研究

目的研究人参三醇组皂苷对短波紫外线(UVC)损伤人胚胎纤维芽细胞(RSa)的保护作用,筛选具有显著抗辐射功能的皂苷单体。方法采用MTT法检测细胞生存率,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,酶生化法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果强度为5 J/m2、10 J/m2、15 J/m2的UVC照射,可造成体外培养的RSa细胞增值率逐级下降、细胞内SOD活性逐级降低;在照射前后给予50μg/ml浓度的人参三醇组皂苷,能够提高细胞增殖活力,增加细胞内SOD的活性,人参皂苷Re可显著改善15 J/m2UVC照射RSa细胞的生存率(P<0.01);流式细胞仪检测结果显示,5 J/m2UVC照射,可引起RSa细胞早期的凋亡,人参三醇组皂苷组的细胞凋亡率明显小于UVC模型组(P<0.01)。结论人参三醇组皂苷对UVC照射引起细胞的损伤,具有一定的保护作用,其机制可能与它的抗氧化、增强细胞生存活力有关,其中人参皂苷Re的抗辐射活性优于其它三醇组皂苷。

原人参三醇组皂苷酶解产物对高脂模型小鼠的降血脂作用

通过建立高血脂症小鼠模型来研究原人参三醇组皂苷酶解产物对小鼠降血脂的作用。将雄性小鼠随机分为空白对照组、高脂模型组、阳性对照组、原人参三醇组皂苷组与原人参三醇组皂苷酶解产物低剂量10 mg/(kg BW·d)、中剂量20 mg/(kg BW·d)、高剂量30 mg/(kg BW·d)组,喂养30 d后测定小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量,以及血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果表明,原人参三醇组皂苷酶解产物中剂量组可使高脂血症小鼠血清中TC含量、LDL-C含量显著降低(P<0.05),TG含量极显著降低(P<0.01),HDL-C含量极显著升高(P<0.01)。与原人参三醇组皂苷相比,原人参三醇组皂苷酶解产物,具有明显的降血脂作用。这也为其在降脂医药保健食品上的应用打下坚实的理论基础。

Arthrobacter sp.No.3细菌酶转化三醇类人参皂苷Rg_1生成Rh_1的反应条件

为了提高Arthrobactersp.No.3 GS 0202新细菌所产人参皂苷糖苷酶水解人参三醇类皂苷Rg1生成人参三醇类皂苷Rh1的能力,采用薄层层析法和高效液相色谱法,对该菌的发酵条件及所产糖苷酶的反应条件进行了研究。结果表明,在30℃发酵条件下,人参皂苷酶的诱导物人参茎叶总皂苷存在下,该细菌产生较好。其粗酶的最佳反应条件为人参皂苷Rg1质量浓度0.1 mg/mL,30℃下恒温反应24 h。该菌株所产酶液与人参三醇类皂苷Rg1反应后,检测发现该酶液可将人参三醇类皂苷Rg1转化为人参三醇类皂苷Rh1。高效液相色谱法检测,该酶在最佳反应条件下,能够将20%的Rg1转化为Rh1。

二醇型、三醇型人参皂苷对白菜白斑菌和菜豆菌核菌的影响

为了探讨人参二醇型、三醇型皂苷对白菜白斑菌和菜豆菌核菌的影响,本文采用菌丝生长率法和孢子萌发实验研究人参二醇型、三醇型皂苷对2种病原菌的影响。结果表明:不同质量浓度的人参二醇组皂苷和三醇组皂苷对白菜白斑菌、菜豆菌核菌的影响结果大致相同,在培养初期(24 h)均表现出一定的促进效果,且低质量浓度处理尤其明显;随着培养时间增加,各处理按照质量浓度高低的顺序先后表现出不同程度的抑制作用,并且抑制效果逐渐增强;所有处理中的高质量浓度人参皂苷对病原菌生长的抑制作用最为显著;不同质量浓度的人参二醇组皂苷和三醇组皂苷对2种病原菌孢子或菌核萌发的作用总体上呈低促高抑,且与皂苷质量浓度关系密切。可见,高质量浓度的人参三醇型皂苷有防治白菜白斑菌流行的潜力,而高质量浓度的人参二醇型皂苷有防治菜豆菌核菌流行的潜力。

西洋参叶20s-原人参三醇组皂苷对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响

目的:观察西洋参叶20s-原人参三醇组皂苷(PQTS)对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响。方法:Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,PQTS 12.5,25.0和50.0 mg·kg^(-1)剂量组,阳性药盐酸氟桂利嗪(FHI,2.0 mg·kg^(-1))组。各组大鼠腹腔注射给药,每天1次,连续3 d。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h,再灌注24 h。24 h后对大鼠神经功能进行评分,TTC染色法观察脑梗死体积,干湿重法测定脑含水量,分光光度法测定髓过氧化物酶(MPO)活性,伊文思兰(EB)法测定血脑屏障的损伤程度,QPCR检测白介素^(-1)β(IL^(-1)β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达,Western blot法检测脑组织中NF-κBp65蛋白的表达。结果:与模型组比较,PQTS 12.5,25.0和50.0 mg·kg^(-1)剂量组及盐酸氟桂利嗪组均能明显改善大鼠脑缺血再灌注损伤后神经缺陷症状,明显减小脑梗死体积,降低脑组织含水量、MPO活性和EB含量,显著抑制脑组织中IL^(-1)β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平,同时减少NF-κBp65的蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论:PQTS对大鼠脑缺血再灌注损伤有显著的保护作用,其作用机制可能与抑制炎症因子的产生有关。

红参中原人参三醇型皂苷组在肠道菌群中体外转化及对肠道菌群的作用

采用高分离度快速液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(RRLC-Q-TOF MS)和超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用技术(UPLC-QQQ MS)对红参中原人参三醇型皂苷组在人肠道菌群中体外代谢转化产物进行定性定量分析,并应用16S rDNA高通量测序技术分析原人参三醇型皂苷组对人肠道菌群多样性的影响。RRLC-Q-TOF MS采用Supelco Ascentis Express C18色谱柱(50 mm×3.0 mm×2.7μm),UPLC-QQQ-MS/MS采用Thermo Syncronis-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm×1.7μm),均以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,质谱分析均采用电喷雾负离子模式采集。原人参三醇型皂苷组中的人参皂苷Re、Rg1在人肠道菌群孵育后,RRLC-Q-TOF MS通过对照品比对及高分辨质谱数据解析分析转化产物为Rg2、Rh1、F1和PPT。UPLC-QQQ MS定量分析代谢产物的转化率,在代谢转化第60 h时,产物Rg2、Rh1、F1、PPT的生成率为6%、12%、11%和56%。应用Illumina Hiseq 2500平台对粪便样本肠道菌群进行基因测序,与空白组粪便比较,原人参三醇型皂苷组在门水平上显著增加Firmicutes相对丰度,显著降低Bacteroidetes、Proteobacteria相对丰度;在属水平上Prevotella9、Faecalibacterium、Dialister相对丰度显著增加,显著降低Escherichia-Shigella、Dorea、Lachnoclostridium相对丰度。该研究为基于肠道菌群对原人参三醇型皂苷药效物质基础的确定和药效作用靶点提供依据。

大孔吸附树脂和丙酮沉淀分离纯化西洋参中人参二醇类和三醇类皂苷

目的:建立从西洋参中提取分离纯化人参二醇类和三醇类皂苷的方法。方法:用大孔吸附树脂从西洋参提取物中富集西洋参总皂苷,再利用丙酮沉淀分离得到人参二醇类和三醇类皂苷。结果:得到含量大于85%的人参二醇类皂苷(收率4.0%),含量大于60%的人参三醇类皂苷(收率1.0%)。结论:此法较好地分离了人参二醇类和三醇类皂苷,该方法简单、实用,适合于工业化大生产。

原人参三醇组皂苷和人参皂苷-Re对MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的:探讨原人参三醇组皂苷(protopanaxatriol group,PPT)和人参皂苷-Re对1-甲基-4-苯基-吡啶阳离子(1-methyl-4-phenylpyridiniumion,MPP+)诱导的人多巴胺能神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法:用不同浓度的PPT和人参皂苷-Re预处理细胞,以及不同体积分数的PPT和人参皂苷-Re含药血清预处理细胞,采用噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞活力,计算细胞存活率,比较各组间的差异。结果:5μmol.L-1和10μmol.L-1的PPT和人参皂苷-Re均可以显著增加细胞存活率(与模型组比较,P<0.05),体积分数10%的PPT和人参皂苷-Re含药血清能显著增加细胞存活率(与模型组比较,P<0.001)。结论:PPT和人参皂苷-Re对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤有显著的保护作用,具有潜在的抗帕金森病作用。

人参三醇组皂苷对大鼠急性坐骨神经损伤修复相关蛋白表达的影响

研究人参三醇组皂苷(PTS)对大鼠坐骨神经急性损伤蛋白表达的影响。建立大鼠坐骨神经挤压损伤模型,随机分为PTS组,模型对照组及空白对照组,每组各10只大鼠;各组均经腹腔注射给药,PTS组损伤后注射PTS;模型对照组,损伤后注射同剂量生理盐水;空白对照组,不损伤坐骨神经,注射同剂量生理盐水。坐骨神经损伤术后30d,免疫荧光化学染色检测PTS对损伤侧坐骨神经神经丝蛋白(NF-M)、微管相关蛋白-2(MAP-2)、生长相关蛋白(GAP-43)表达的影响,观察PTS对损伤侧神经的影响。大鼠损伤侧坐骨神经NF-M、MAP-2、GAP-43平均光密度表达(9.66±0.99、12.43±1.44、0.344±0.040)与模型对照组(8.21±1.25、11.90±1.14、0.278±0.042)比较有极显著性差异(P<0.01)。PTS可促进坐骨神经损伤大鼠NF-M,MAP-2,GAP-43的表达。

人参茎叶三醇组皂苷酶解产物对三氯化铝/D-半乳糖诱导的阿尔茨海默症小鼠治疗作用的研究

目的:观察人参茎叶三醇组皂苷酶解产物对阿尔茨海默症(AD)小鼠的治疗作用。方法:采用三氯化铝联合D-半乳糖给药诱导小鼠AD模型,利用跳台实验测定小鼠学习记忆能力的变化,采用ELISA方法检测小鼠海马中AChE、GSH-Px、P-Tau、ACH水平,采用免疫组化法观察小鼠海马中Tau、CDK5、MAP2、NF-κBp65、Aβ蛋白的表达。结果:人参茎叶三醇组皂苷酶解产物可提高三氯化铝/半乳糖诱导AD小鼠的学习记忆能力,降低AD小鼠海马中AChE、P-Tau水平,提高GSH-Px、ACH水平,抑制AD小鼠海马内Tau、CDK5、NF-κBp65、Aβ蛋白的表达,同时促进MAP2蛋白的表达。结论:人参茎叶三醇组皂苷酶解产物对三氯化铝/D-半乳糖诱导的AD模型小鼠具有治疗作用,其通过抑制Aβ蛋白的沉积及Tau蛋白过度磷酸化、提高GSH-Px活性、减少炎症因子NF-κBp65的表达来改善AD小鼠症状。

基于HPLC-ESI-MS^n的杂多酸化学转化原人参三醇型皂苷Re,20(S)-Rf研究

采用高效液相色谱-电喷雾-多级串联质谱技术(HPLC-ESI-MSn)定性分析Keggin型杂多酸(12-磷钨酸)化学转化原人参三醇型皂苷Re和20(S)-Rf的产物结构。在负离子模式下,结合化合物的保留时间、碎片离子的质荷比、中性丢失以及人参皂苷同分异构体的极性差异,分析鉴定了Re的8种主要转化产物为20(S)-Rf2、20(R)-Rf2、20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、25-OH-Rg6、25-OH-Rg4、Rg6和Rg4;20(S)-Rf的7种主要转化产物为20(R)-Rf、20(S)-Rf3、20(R)-Rf3、25-OH-Rg8、25-OH-Rg9、Rg8和Rg9。并通过化学转化方法获得了苷元结构3β,12β,25-三羟基-达玛烷-20(21/22)-烯(3β,12β,25-trihydroxy-dammar-20(22)-ene)。12-磷钨酸显示出良好的Re和20(S)-Rf转化率,在90min和4h内的转化率接近100%。该方法可以快速有效地鉴定人参皂苷结构并区分其同分异构体,能够为杂多酸等固体酸催化剂应用于皂苷类中药有效成分的化学转化研究奠定基础。

人参茎叶中原二醇型、原三醇型人参皂苷抗疲劳作用试验

为了探讨二醇型人参茎叶总皂苷(PPD-Gsls)和三醇型人参茎叶总皂苷(PPT-Gsls)对小鼠的抗疲劳作用,将小鼠(雄性)随机分为空白对照组、阳性对照组、PPD-Gsls和PPT-Gsls低剂量组10 mg/kg·bw·d、PPD-Gsls和PPT-Gsls中剂量组20 mg/kg·bw·d、PPD-Gsls和PPT-Gsls高剂量组40 mg/kg·bw·d,通过负重游泳试验进行抗疲劳作用研究,分别测定小鼠的体重、力竭游泳时间、肌糖原、肝糖原、乳酸脱氢酶(LDH)、血乳酸(LD)等指标,分析PPD-Gsls和PPT-Gsls抗疲劳的功效。结果显示:PPD-Gsls和PPT-Gsls可延长小鼠的力竭游泳时间、提高肌糖原和肝糖原含量、降低血清中LD含量及提高LDH活力。表明PPD-Gsls和PPT-Gsls均具有抗疲劳作用。

人参三醇组皂苷质量标准的初步研究

本研究的目的是为了建立人参三醇组皂苷质量标准的评价方法。对人参三醇组皂苷进行性状鉴别以及薄层色谱鉴别;采用高效液相色谱法测定人参皂苷Re、人参皂苷Rg_(2)、人参皂苷Rh_(1)以及PPT的含量并建立人参三醇组皂苷的指纹图谱。色谱柱为Diamonsil C18(250mm×4.6 mm,5μm)流动相为乙腈-水(梯度洗脱)检测波长为203nm柱温为30℃体积流量为1.0 mL/min进样量为10μL。人参三醇组皂苷是淡黄色或黄色粉末,气微,味苦;人参三醇组皂苷薄层色谱图斑点清晰在与对照品(人参皂苷Re、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rf、人参皂苷Rh;及PPT)色谱相应位置上分别显示相同颜色的斑点;人参皂苷Re、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rh;及PPT分别在进样量为0.66~6.6μg(r=0.999 7)、0.7~7.0μg(r=0.999 7)、0.26~2.6μg(r=0.999 7)及0.36~3.6μg(r=0.999 5)范围内与各自峰面积呈较好的线性关系;精密度、稳定性以及重复性实验结果较好(RSD <5%);平均加样回收率分别为104.95%、103.20%、99.24%和101.85%,RSD分别为4.59%、0.73%、1.29%和2.05%(n=6);通过10批样品建立了指纹图谱,共有峰有17个,其中指认出4个有效成分峰,分别为人参皂苷Re、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rh;以及PPT。聚类分析把10批样品分为4类,分别对应不同的制备方法。本研究建立的性状鉴别、薄层鉴别以及含量测定方法操作简单、准确性好、分离度好,可用于控制人参三醇组皂苷的质量,其指纹图谱可用于表征人参三醇组皂苷的特征图谱。

Box-Behnken Design-响应面法优化碱水解人参茎叶三醇皂苷制备人参皂苷Rg_(2)工艺研究

目的:利用Box-Behnken Design-响应面法优选制备人参皂苷Rg_(2)的最佳工艺参数。方法:以碱解反应的碱度、温度、时间作为考察因素,人参茎叶三醇皂苷中人参皂苷Rg_(2)含量作为评价指标,运用Design-Expert 8.0.5b软件对工艺参数进行优化并获得最佳工艺参数。结果:经优化得到碱水解人参茎叶三醇皂苷制备人参皂苷Rg_(2)的最佳工艺参数:反应碱度7.4%、反应温度187℃、反应时间5 h。验证试验表明,在此工艺参数下可将人参皂苷Rg_(2)含量提高至9.84%,且工艺稳定。结论:经过优化的工艺可有效提高人参茎叶三醇皂苷中人参皂苷Rg_(2)含量。