转化人参二醇类皂苷为C-K的特异人参皂苷糖苷酶的纯化及性质

研究了真菌sp.g848p发酵产生的把人参二醇类皂苷PPD转化为人参皂苷C-K的特异的人参皂苷糖苷酶,及该酶的分离提纯。该酶经DEAE-Cellulose离子交换柱分离、聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,其酶的分子质量约为74 ku。这种特异的人参皂苷糖苷酶能水解人参二醇类皂PPD生成稀有人参皂苷C-K,该酶最适反应时间为24 h,最适反应温度为45℃,最适pH为5.0。

人参二醇类皂苷的生物转化动态及人参稀有皂苷C-K或F2的制备

为了低成本有效制备人参稀有皂苷C-K或F2,将A.nigerg.848菌酶用于转化含有人参皂苷(质量分数)分别为49.6%Rb1,25.9%Rd,19.3%Rc和5.23%Rb2的西洋参二醇混合皂苷.霉菌发酵时,采用人参二醇皂苷诱导物比人参提取液诱导物的产酶总活力提高10%~15%.所产的2种诱导酶均能水解人参二醇皂苷的3-O-和20-O-多种糖基,均为人参皂苷酶Ⅰ型;但是人参二醇皂苷诱导物所产酶几乎全部转化人参二醇皂苷为C-K,而人参提取液诱导物所产酶则残留中间产物.使用黑曲霉人参二醇皂苷诱导所产酶,在转化西洋参二醇皂苷的动态研究中发现,酶反应1.5~2.5h,主要为产物F2;酶反应12h后,主要产物为C-K皂苷.基于此,40g人参二醇类皂苷在45℃粗酶反应24h,经处理得到含C-K质量分数为87%的23g酶反应产物,C-K转化率达85%(摩尔分数).用40g西洋参二醇皂苷在45℃粗酶反应2.5h,经处理得到含有质量分数为58%的F2和27%的C-K的26g酶反应产物,F2转化率为50.4%,C-K转化率为29.5%.通过人参二醇皂苷诱导的黑曲霉粗酶转化人参二醇类皂苷动态研究,建立了C-K转化率为85%,F2转化率为50%的制备方法,为大批量制备提供了基础依据.

原人参二醇类皂苷(PPD)在酶反应中转化动态及其产物稀有皂苷的制备

目的为了生物转化低成本制备人参稀有皂苷,利用Aspergillus g.848菌的粗酶与市售的原人参二醇类皂苷(PPD)混合皂苷反应,制备人参稀有皂苷C-K、C-Mc、F_2单体和4种异构体的Rh2组皂苷。方法酶与PPD皂苷反应,生成稀有皂苷;用HPLC法测定PPD皂苷原料和产物皂苷的组成,用硅胶柱法分离产物中的单体皂苷,用NMR法确认产物单体皂苷结构;用UPLC-MS法确认产物Rh2组。结果原料PPD中含有人参皂苷Rb_1、Rd、Rb_2、Rc和4种异构体的人参皂苷Rg3组;酶反应时,若生产以F_2为主的皂苷时,最佳反应时间为1.5~2.0h;若生产以C-K为主的皂苷时,反应时间为24.0~30.0h;若生产以Rh2组为主的皂苷时,反应6.0~12.0h时,Rg_3组产量低而Rh_2组产量高。以C-K为主的皂苷生产中,从30 g的PPD皂苷酶反应得到20 g产物,经硅胶柱分离,得到8.16 g的C-K、1.01 g的C-Mc、0.45 g的F_2单体和0.19 g的Rh_2组皂苷,并以NMR和UPLC-MS法核对了其结构。结论 PPD皂苷经酶转化成功地制备了高活性C-K、C-Mc、F_2和Rh_2组皂苷。

大孔吸附树脂和丙酮沉淀分离纯化西洋参中人参二醇类和三醇类皂苷

目的:建立从西洋参中提取分离纯化人参二醇类和三醇类皂苷的方法。方法:用大孔吸附树脂从西洋参提取物中富集西洋参总皂苷,再利用丙酮沉淀分离得到人参二醇类和三醇类皂苷。结果:得到含量大于85%的人参二醇类皂苷(收率4.0%),含量大于60%的人参三醇类皂苷(收率1.0%)。结论:此法较好地分离了人参二醇类和三醇类皂苷,该方法简单、实用,适合于工业化大生产。

超高效液相色谱法检测6种人参皂苷含量

采用超声提取药食同源植物（人参、西洋参、三七）中原人参三醇皂苷（Rg1、Re、Rf）和原人参二醇皂苷（Rb1、Rc、Rd）,建立了超高效液相色谱（UPLC）检测方法。以50%甲醇溶液为提取剂,料液比1∶80（g∶m L）,超声时间30 min。采用乙腈和0.05%磷酸水为流动相,梯度洗脱,检测波长为203 nm。该方法在质量浓度5~1 000μg/m L范围内线性良好,6种皂苷的最低检出限在22.5~51.0 mg/kg之间,平均回收率98.1%~105.5%。该方法准确、灵敏度高、重现性好、省时快捷,适合日常、大批量样品的检测。用此方法测定市售人参、西洋参及三七样品,结果表明3类样品中原人参二醇类皂苷含量高于三醇类皂苷,三七样品中Rg1的含量比人参和西洋参高,西洋参中Re含量高于人参和三七样品,而Rf仅在人参样品中检测到。

西洋参茎叶组分分析及含量测定

目的提高西洋参茎叶利用率,系统研究各皂苷成分含量。方法通过大孔树脂吸附法从西洋参茎叶中提取分离得到总皂苷,再利用硅胶柱层析法分离出人参二醇类皂苷、人参三醇类皂苷、齐墩果酸类皂苷。对二醇类、三醇类皂苷进行含量测定,并与西洋参根、人参中两类皂苷含量进行比较分析。结果研究证明西洋参茎叶总皂苷含量明显高于西洋参根。结论西洋参茎叶皂苷含量是西洋参根中总皂苷含量的2.89倍,是人参中总皂苷含量的15.99倍。