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表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系的建立
被引量:
6
1
作者
汪春义
戚凤春
+4 位作者
陈桂玲
申镇维
王宣军
谢英林
盛军
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2007年第11期818-820,共3页
目的建立表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系。方法将已构建成的植物表达载体pBI121/(CTB-BA)转入农杆菌LBA4404中,通过农杆菌与人参愈伤组织细胞的共培养,将人胰岛素基因整合到人参愈伤组织细胞中,对其表达产物进行检测,并用小鼠进行降...
目的建立表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系。方法将已构建成的植物表达载体pBI121/(CTB-BA)转入农杆菌LBA4404中,通过农杆菌与人参愈伤组织细胞的共培养,将人胰岛素基因整合到人参愈伤组织细胞中,对其表达产物进行检测,并用小鼠进行降糖试验。结果表达产物的基因组DNA测序结果与设计完全相同。Westernblot检测显示,在相对分子质量约17000处有特异蛋白反应带。ELISA法检测人胰岛素表达量为5.31μIU/ml。小鼠降糖试验表明人参愈伤组织细胞有降血糖的作用,而转化的人参愈伤组织细胞降血糖作用更明显。结论人胰岛素已在人参愈伤组织细胞中成功表达。
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关键词
人胰岛素
人参愈伤组织细胞
农杆菌
共培养
表达
下载PDF
职称材料
人干扰素基因植物表达载体的构建及其在人参愈伤组织细胞中的表达
被引量:
8
2
作者
任琦
盛军
任志霞
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第9期852-855,共4页
目的:利用组织培养人参愈伤组织细胞表达人干扰素,探讨用植物细胞表达人类基因的可行性。方法:用PCR从pBV889扩增人干扰素α2b(hIFN-α2b)编码基因,将其克隆于pMD18-T载体和pBI121,进而构建植物细胞表达载体pBIFN。用冻融法将pBIFN导入...
目的:利用组织培养人参愈伤组织细胞表达人干扰素,探讨用植物细胞表达人类基因的可行性。方法:用PCR从pBV889扩增人干扰素α2b(hIFN-α2b)编码基因,将其克隆于pMD18-T载体和pBI121,进而构建植物细胞表达载体pBIFN。用冻融法将pBIFN导入根瘤农杆菌LBA4404,经卡那霉素和利福霉素筛选后利用农杆菌介导的转化法将hIFN-α2基因导入人参愈伤组织细胞。经G418筛选,形成阳性细胞。用PCR、RT-PCR、Western blot和WISH/VSV系统检测转基因组织。结果:经PCR检测表明hIFN-α2b基因已成功整合到人参愈伤组织细胞基因组中。RT-PCR证明存在hIFN-α2b基因的转录产物。Western blot分析表明转基因人参愈伤组织细胞能有效表达hIFN-α2b蛋白。WISH/VSV系统检测分析表明表达的hIFN-α2b具有生物学活性。结论:本研究利用转基因人参愈伤组织细胞成功地表达了人干扰素,为进一步提高口服干扰素的疗效打下基础。
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关键词
人干扰素α2b
人参愈伤组织细胞
转基因
根瘤农杆菌
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职称材料
乙型肝炎病毒表面抗原基因在人参细胞中的高效表达
被引量:
2
3
作者
高正伦
盛军
+5 位作者
刘丹
刘晓宇
李娟
郝淑美
吉海滨
刘建华
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2008年第2期119-122,130,共5页
目的提高乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)在人参愈伤组织细胞中的表达。方法构建一种植物细胞表达载体pBIBeo,该载体携带CaMV 35S双增强启动子和TMV(U1株)翻译增强子。用pBIBeo转化的农杆菌LBA4404与人参愈伤组织细胞共培养,经G418筛...
目的提高乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)在人参愈伤组织细胞中的表达。方法构建一种植物细胞表达载体pBIBeo,该载体携带CaMV 35S双增强启动子和TMV(U1株)翻译增强子。用pBIBeo转化的农杆菌LBA4404与人参愈伤组织细胞共培养,经G418筛选获得新生抗性细胞团PBIBeo,连续继代培养选育出用于植物源口服乙肝疫苗生产的高产细胞株。提取基因组DNA和mRNA,进行PCR和RT-PCR鉴定,Western blot鉴定HBsAg的特异性,电镜下观察纯化抗原颗粒大小,并以ELISA检测HBsAg的表达水平。结果转化的人参细胞基因组DNA进行PCR反应,得到约700 bp的启动子基因片段。提取mRNA进行RT-PCR反应,得到约700 bp的HBsAg基因片段。Western blot分析可见相对分子质量为24 000的特异性条带。亲和层析纯化细胞表达的HBsAg抗原,电镜观察可见平均直径为32 nm的颗粒。ELISA检测结果表明pBIBeo转化细胞株HBsAg表达量比pBIBSa转化细胞株提高1~2倍。结论人参细胞基因组已经整合了目的基因并稳定高效表达。
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关键词
乙型肝炎病毒表面抗原
人参愈伤组织细胞
表达
CaMV35S启动子
翻译增强子
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职称材料
题名
表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系的建立
被引量:
6
1
作者
汪春义
戚凤春
陈桂玲
申镇维
王宣军
谢英林
盛军
机构
吉林大学生命科学学院
长春生物制品研究所
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2007年第11期818-820,共3页
文摘
目的建立表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系。方法将已构建成的植物表达载体pBI121/(CTB-BA)转入农杆菌LBA4404中,通过农杆菌与人参愈伤组织细胞的共培养,将人胰岛素基因整合到人参愈伤组织细胞中,对其表达产物进行检测,并用小鼠进行降糖试验。结果表达产物的基因组DNA测序结果与设计完全相同。Westernblot检测显示,在相对分子质量约17000处有特异蛋白反应带。ELISA法检测人胰岛素表达量为5.31μIU/ml。小鼠降糖试验表明人参愈伤组织细胞有降血糖的作用,而转化的人参愈伤组织细胞降血糖作用更明显。结论人胰岛素已在人参愈伤组织细胞中成功表达。
关键词
人胰岛素
人参愈伤组织细胞
农杆菌
共培养
表达
Keywords
Human insulin
Ginseng callus cells
Agrobacterium tumerfaciens
Co-culture
Expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
人干扰素基因植物表达载体的构建及其在人参愈伤组织细胞中的表达
被引量:
8
2
作者
任琦
盛军
任志霞
机构
吉林大学生命科学学院生物药学系
长春生物制品研究所
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第9期852-855,共4页
基金
吉林省科技发展计划项目资助(20020639)
文摘
目的:利用组织培养人参愈伤组织细胞表达人干扰素,探讨用植物细胞表达人类基因的可行性。方法:用PCR从pBV889扩增人干扰素α2b(hIFN-α2b)编码基因,将其克隆于pMD18-T载体和pBI121,进而构建植物细胞表达载体pBIFN。用冻融法将pBIFN导入根瘤农杆菌LBA4404,经卡那霉素和利福霉素筛选后利用农杆菌介导的转化法将hIFN-α2基因导入人参愈伤组织细胞。经G418筛选,形成阳性细胞。用PCR、RT-PCR、Western blot和WISH/VSV系统检测转基因组织。结果:经PCR检测表明hIFN-α2b基因已成功整合到人参愈伤组织细胞基因组中。RT-PCR证明存在hIFN-α2b基因的转录产物。Western blot分析表明转基因人参愈伤组织细胞能有效表达hIFN-α2b蛋白。WISH/VSV系统检测分析表明表达的hIFN-α2b具有生物学活性。结论:本研究利用转基因人参愈伤组织细胞成功地表达了人干扰素,为进一步提高口服干扰素的疗效打下基础。
关键词
人干扰素α2b
人参愈伤组织细胞
转基因
根瘤农杆菌
Keywords
Human intefferon-α2 b
Ginseng callus cells
Transgene
Agrobacterium tumefaciens
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
乙型肝炎病毒表面抗原基因在人参细胞中的高效表达
被引量:
2
3
作者
高正伦
盛军
刘丹
刘晓宇
李娟
郝淑美
吉海滨
刘建华
机构
吉林大学生命科学学院
长春生物制品研究所天然药物室
长春理工大学生物技术系
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2008年第2期119-122,130,共5页
文摘
目的提高乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)在人参愈伤组织细胞中的表达。方法构建一种植物细胞表达载体pBIBeo,该载体携带CaMV 35S双增强启动子和TMV(U1株)翻译增强子。用pBIBeo转化的农杆菌LBA4404与人参愈伤组织细胞共培养,经G418筛选获得新生抗性细胞团PBIBeo,连续继代培养选育出用于植物源口服乙肝疫苗生产的高产细胞株。提取基因组DNA和mRNA,进行PCR和RT-PCR鉴定,Western blot鉴定HBsAg的特异性,电镜下观察纯化抗原颗粒大小,并以ELISA检测HBsAg的表达水平。结果转化的人参细胞基因组DNA进行PCR反应,得到约700 bp的启动子基因片段。提取mRNA进行RT-PCR反应,得到约700 bp的HBsAg基因片段。Western blot分析可见相对分子质量为24 000的特异性条带。亲和层析纯化细胞表达的HBsAg抗原,电镜观察可见平均直径为32 nm的颗粒。ELISA检测结果表明pBIBeo转化细胞株HBsAg表达量比pBIBSa转化细胞株提高1~2倍。结论人参细胞基因组已经整合了目的基因并稳定高效表达。
关键词
乙型肝炎病毒表面抗原
人参愈伤组织细胞
表达
CaMV35S启动子
翻译增强子
Keywords
HBsAg
Ginseng callus cells
Expression
CaMV 35S promoter
Translation enhancer
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系的建立
汪春义
戚凤春
陈桂玲
申镇维
王宣军
谢英林
盛军
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2007
6
下载PDF
职称材料
2
人干扰素基因植物表达载体的构建及其在人参愈伤组织细胞中的表达
任琦
盛军
任志霞
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
8
下载PDF
职称材料
3
乙型肝炎病毒表面抗原基因在人参细胞中的高效表达
高正伦
盛军
刘丹
刘晓宇
李娟
郝淑美
吉海滨
刘建华
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2008
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
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