人参次苷H滴丸定性与定量方法研究

目的：建立人参次苷H滴丸质量控制方法。方法：采用薄层色谱法同时鉴别人参皂苷Rh1和Rh2;采用香草醛冰醋酸-高氯酸比色法测定总皂苷含量;采用高效液相色谱法测定人参皂苷Rh1和Rh2含量。结果：人参皂苷Rh1和Rh2样品分离较好,薄层色谱斑点清晰;总皂苷含量测定的平均回收率为98.81%,线性范围为0.056~0.448 mg.mL-1;人参皂苷Rh1线性回归方程y=6 462.7x＋2.073 5,当进样量在0.208~4.16μg范围内,与其峰面积呈线性,r=0.9997;人参皂苷Rh2线性回归方程y=9867.2x＋0.1204,当进样量在1.148~22.96μg范围内,与其峰面积呈线性,r=0.999 9。结论：建立的人参次苷H滴丸质控方法准确、专属性及重现性好且快速简便,可用于该制剂的质量控制。

人参次苷H滴丸原料药中皂苷含量测定及细胞膜色谱技术对效应成分筛选

目的建立高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(HPLC-MS/MS)测定人参次苷H滴丸(SGHDP)原料药中拟人参皂苷RT5、20(S)-人参皂苷Rh1、20(S)-人参皂苷Rh2的方法并采用细胞膜色谱(CMC)技术筛选效应成分。方法采用Century SIL BDS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.2%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,正离子多重反应监测(MRM)模式进行扫描定量,并对CMC技术中所得的红细胞膜固相化SGHDP的效应成分进行确定。结果拟人参皂苷RT5、20(S)-人参皂苷Rh1、20(S)-人参皂苷Rh2分别在0.095~0.235、0.042~0.168、0.105~0.419 mg/m L线性关系良好(r2≥0.999 0),3种成分的平均加样回收率分别为99.95%、100.12%、100.06%,RSD分别为1.06%、0.96%、0.91%。SGHDP原料药中拟人参皂苷RT5、20(S)-人参皂苷Rh1、20(S)-人参皂苷Rh2质量分数分别为21.24%、21.42%、29.70%。红细胞膜固相化SGHDP的效应成分为20(S)-人参皂苷Rh2。结论该方法对SGHDP原料药中3种人参皂苷含量的测定准确、可靠,为SGHDP的质量控制提供了新的参考依据。20(S)-人参皂苷Rh2为红细胞膜固相化成分,推测其可能是SGHDP的效应成分,与前期的抗癌及抗抑郁的研究结果一致。

人参次苷H滴丸对慢性温和不可预见性应激大鼠的抗抑郁作用

目的探讨人参次苷H滴丸对慢性温和不可预见性应激结合孤养方法建立抑郁模型大鼠的抗抑郁作用及其作用机制。方法 96只大鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组和人参次苷H滴丸28、56、112 mg/kg组,每组16只。除对照组外各组分别孤养并接受5周慢性温和不可预见性应激刺激造模。同时氟西汀(10 mg/kg)组、人参次苷H滴丸28、56、112mg/kg组ig给药,对照组、模型组ig相应体积(10 mL/kg)纯水。对大鼠体质量变化、糖水消耗比、敞箱实验行为学评分进行比较,对血浆皮质酮(CORT)、皮层、海马区神经营养因子(BDNF)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)水平变化进行检测。尼氏染色后观察海马CA1、CA3区神经元数目和形态。结果与模型组比较,人参次苷H滴丸56、112 mg/kg组体质量显著升高(P<0.05),人参次苷H滴丸28、56、112 mg/kg组糖水消耗比显著升高(P<0.01);敞箱实验中人参次苷H滴丸56 mg/kg组大鼠水平运动得分显著提高(P<0.05),56、112 mg/kg组垂直运动得分显著提高(P<0.05、0.01);人参次苷H滴丸28、56、112 mg/kg组大鼠血浆CORT水平均有所降低,但差异并无统计学意义;人参次苷H滴丸56 mg/kg组皮层、海马BDNF水平显著升高(P<0.05),人参次苷H滴丸56、112 mg/kg组大鼠皮层、海马5-HT水平显著升高(P<0.05、0.01);人参次苷H滴丸28、56 mg/kg组大鼠皮层、海马DA水平显著升高(P<0.05、0.01);人参次苷H滴丸28、56、112 mg/kg组大鼠皮层、海马NE水平升高十分显著(P<0.01)。人参次苷H滴丸28、56、112 mg/kg组海马CA1、CA3区锥体细胞形态较为规则,排列较为松散,锥体细胞数量相对增多。结论人参次苷H滴丸具有抗抑郁作用,其作用机制可能是通过改善抑郁大鼠肾上腺轴功能亢进症状,提高模型大鼠皮层与海马5-HT、DA、NE水平,上调BDNF表达,以及抑制海马CA1、CA3区神经元锥体细胞的凋亡。

人参次苷H滴丸Ⅰ期人体耐受性研究

目的评价单次和多次给予健康受试者人参次苷H滴丸的安全性和耐受性。方法单中心、开放、随机、无对照试验设计,按剂量递增原则,逐组进行单次和多次给药研究。单次给药7个剂量组共纳入38例受试者,多次给药3个剂量组共纳入18例受试者。给药前后进行一般情况、实验室检查,并记录不良反应发生情况。结果 56例全部完成试验。药物不良反应发生情况:单次给药口腔溃疡1例,心悸2例,轻度腹部不适及腹泻1例。多次给药有眼干、口干等,偶有鼻衄、腹部不适等,均为现轻度。全部均轻微、短暂,且无明显剂量相关性。结论人参次苷H滴丸最大耐受剂量,单次给药为54粒;多次给药为每日2次,每次15粒,连续14 d是安全且可以耐受的。

UPLC测定人参次苷H滴丸中人参皂苷Rh_1和Rh_2含量

目的：建立测定人参次苷H滴丸中人参皂苷Rh1和Rh2含量的UPLC法。方法：采用Waters Acquity UPLC HSS T3分析柱（100mm×2．1mm，1．8μm），乙腈-水二元梯度洗脱模式，流速为0．46mL·min^-1，柱温35℃，紫外检测器检测，检测波长为203nm，外标法对人参次苷H滴丸的主要成分进行定量分析。结果：人参皂苷Rh1和Rh2的分离效果较好，人参皂苷Rh1的线性方程为y=2．500×10^6x＋3．080×10^2，r=1，在1．982～198．2μg·mL^-1范围线性良好；人参皂苷Rh2线性方程为y=2．400×10^6x＋2．042×10^3，r=0．9999，在6．501～650．1μg·mL^-1范围线性良好。平均加样回收率分别为99．66％和99．38％，RSD分别为0．34％（n=9）和0．35％（n=9）。结论：本方法前处理简单、准确、重复性好，且分析时间短，可以用于人参次苷H滴丸质量控制。

HPLC-MS/MS法测定人血浆中人参皂苷Rh_2的浓度

目的:建立了HPLC-MS/MS法测定人体血浆中人参皂苷Rh_2的浓度,并用于人参次苷H滴丸的药动学研究。方法:采用Welch Materials Column XB-C_(18)色谱柱(100 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水为流动相,流速为0.4 m L·min^(-1),柱温40℃。以阿立哌唑为内标,血浆样本碱化后,以二氯甲烷和乙醚(3∶2,v∶v)萃取,40℃水浴挥干后用流动相复溶进样。采用多反应离子监测,正离子模式扫描,电喷雾离子源。结果:建立的HPLC-MS/MS法在0.5～200 ng·m L^(-1)范围内人参皂苷Rh_2色谱响应与浓度相关性良好,定量下限为0.5 ng·m L^(-1);人参皂苷Rh_2及内标的保留时间分别为14.10和6.61 min;准确度、精密度、回收率和经内标校准后的基质效应均合格;稳定性各项数据均符合相关要求。结论:该法灵敏、专属性强、准确性好,适用于人血浆中人参皂苷Rh_2的浓度测定。