SPE-UPLC联用快速检测保健品中人参皂苷Rh2成分

目的:基于固相萃取与超高液相色谱联用技术,建立一种快速准确检测保健品中人参皂苷Rh2成分的方法,为市售含有人参皂苷Rh2成分的保健品的质量评价提供参考。方法:样品预处理后经甲醇超声提取,中性氧化铝SPE小柱净化,筛选合适的洗脱剂进行HLB-SPE小柱分离纯化,采用WatersT3(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,乙腈-水为流动相梯度洗脱,PDA全波长扫描,流速0.3 mL·min^(-1)。结果:SPE-UPLC法测得人参皂苷Rh2浓度在9.7~99.8μg·mL^(-1)与其峰面积线性关系良好(r=0.999),平均回收率为99.20%。结论:该方法准确、简便、快速,并能有效去除辅料干扰,稳定性高,可用于含有人参皂苷Rh2有效成分的保健食品的质量控制。

装载人参皂苷Rh2外泌体的制备及其对肝癌细胞株Huh7、PLC半数抑制浓度测算

目的制备装载人参皂苷Rh2(G-Rh2)的外泌体(Exos@G-Rh2),并测算其对肝癌细胞株Huh7、PLC的半数抑制浓度(IC50)。方法利用外泌体提取试剂盒从肝癌Huh7细胞培养上清中分离提纯外泌体(Exos),采用电穿孔法制备装载G-Rh2的外泌体Exos@G-Rh2,使用透射电子显微镜观察Exos@G-Rh2、Exos形态,使用纳米颗粒跟踪分析仪测算Exos@G-Rh2、Exos粒径,采用高效液相色谱(HPLC)法测算Exos@G-Rh2中G-Rh2含量,并计算Exos@G-Rh2载药量。采用PKH-26荧光染色法观察肝癌细胞株Huh7、PLC对Exos@G-Rh2的摄取情况,采用CCK-8法测算Exos@G-Rh2、游离G-Rh2对Huh7细胞、PLC细胞的IC50。结果Exos及Exos@G-Rh2在电镜下均可见经典的茶托状结构,且有质膜包裹,形态无显著差异。Exos@G-Rh2、Exos粒径分别为(156.90±10.23)nm、(143.47±8.62)nm,两者相比,P>0.05。Exos@G-Rh2载药量为24.25%±0.27%。在Huh7细胞、PLC细胞中,红色荧光清晰可见,主要在细胞质中。在Huh7细胞中,游离G-Rh2的IC50值为(34.96±1.37)µg/mL,而Exos@G-Rh2的IC50值为(29.74±2.83)µg/mL,两者相比,P<0.05;在PLC细胞中,游离G-Rh2的IC50值为(33.41±1.47)µg/mL,而Exos@G-Rh2的IC50值为(30.08±1.12)µg/mL,两者相比,P<0.05。结论成功制备Exos@G-Rh2,其形态和粒径与Exos无显著差异,可被Huh7细胞、PLC细胞摄取。与游离G-Rh2相比,Exos@G-Rh2对Huh7细胞、PLC细胞的IC50更低。

人参皂甙Rh_2注射液对荷肝癌(H_(22))小鼠免疫功能的影响

本研究以荷肝癌 (H2 2 )小鼠为实验模型 ,观察人参皂甙Rh2 注射液对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素、NK细胞毒活性和IL - 2免疫指标的影响。结果表明 :人参皂甙Rh2 注射液能提高荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、增加血清溶血素抗体生成能力、促进小鼠脾NK细胞杀伤活性和IL - 2活性。人参皂甙Rh2注射液明显提高荷瘤小鼠免疫功能。

人参皂苷Rh2对糖尿病肾病变大鼠肾损伤的保护作用及其机制

目的:探讨人参皂苷Rh2对糖尿病肾病变(DKL)大鼠肾脏损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法:通过高脂高能量饲料配以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法制备DKL大鼠模型。将30只SD成模大鼠随机分为模型组、低剂量(10 mg·kg^(-1))Rh2组和高剂量(20 mg·kg^(-1))Rh2组,每组10只,另选取10只SD大鼠作为正常对照组。检测各组大鼠体质量和肾脏质量,并计算肾指数,干预8周后全自动分析仪检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白(UP)水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠肾组织中Ⅳ型胶原(ColⅣ)水平,Western blotting法检测各组大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3和Smad7蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.01),肾脏质量和肾指数明显升高(P<0.01),血清中Scr、BUN和24 h UP水平均升高(P<0.01),肾组织中ColⅣ水平升高(P<0.01),肾组织中TGF-β1和Smad3蛋白表达水平升高(P<0.01),而肾组织中Smad7蛋白表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,低和高剂量Rh2组大鼠体质量升高(P<0.05或P<0.01),肾脏质量和肾指数均降低(P<0.05或P<0.01),血清中Scr、BUN和24 h UP水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),肾组织中ColⅣ水平降低(P<0.01),肾组织中TGF-β1和Smad3蛋白表达水平降低(P<0.01),肾组织中Smad7蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:人参皂苷Rh2可抑制DKL大鼠肾脏纤维化,改善肾功能,对DKL大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与Rh2调节TGF-β1/Smads信号通路表达有关。

人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对人肺腺癌NCI-H1975细胞的作用研究

目的探讨人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对人肺腺癌细胞的体外作用,以期为非小细胞肺癌治疗研究提供理论依据。方法体外培养人肺腺癌NCI-H1975细胞,CCK-8法检测不同浓度人参皂苷和吉非替尼作用后的细胞活力,计算半抑制浓度(IC_(50)),然后用同样的方法检测人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对细胞活力的影响;分别用PI染色法、Annexin V-FITC/PI双染法和JC-1法检测人参皂苷Rh2、吉非替尼单药和联合用药对细胞周期、凋亡和线粒体膜电位的影响。结果人参皂苷Rh2和吉非替尼单药对NCI-H1975细胞的作用呈剂量依赖性和时间依赖性,作用24、48、72 h的IC_(50),Rh2分别为57.90、41.38、32.62μg·mL^(-1),吉非替尼分别为56.50、22.80、13.19μmol·L^(-1);两药以IC_(50)剂量联用作用72 h后,与各单药组比较,联合用药组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞周期无明显阻滞,细胞凋亡率显著升高(P<0.01),细胞线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。结论人参皂苷Rh2和吉非替尼联用可显著抑制NCI-H1975细胞活力和诱导细胞凋亡,其作用优于单独用药。

人参皂苷RH2通过BCL2L1/PI3K/AKT信号通路逆转环磷酰胺诱导的卵巢颗粒细胞损伤

目的探究人参皂苷RH2对环磷酰胺诱导的卵巢颗粒细胞(KGN)损伤的保护作用及分子机制。方法选取KGN细胞作为研究对象,应用环磷酰胺刺激建立早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)的体外模型。设置正常组、模型组(环磷酰胺,8μM,24 h)以及人参皂苷RH2组(40μM,24 h)。采用CCK8法检测人参皂苷RH2(40μM,24 h)对环磷酰胺导致的KGN细胞损伤的保护作用;应用AO/EB染色检测细胞凋亡情况;网络药理学(Network pharmacology,NP)分析人参皂苷RH2在POI中的潜在作用靶点以及下游通路。Western blot法检测BCL2L1、p-PI3K、p-AKT、PI3K以及AKT的蛋白表达。分子对接检测人参皂苷RH2与BCL2L1的结合能力。结果环磷酰胺刺激后,KGN细胞活性率呈剂量依赖性下降,而给予人参皂苷RH2能够逆转环磷酰胺导致的KGN细胞增殖率下降以及细胞凋亡。BCL2L1可能是人参皂苷RH2保护环磷酰胺诱导的KGN细胞损伤的靶点。过表达BCL2L1能够增加RH2对环磷酰胺诱导的KGN细胞损伤的保护作用。低表达BCL2L1能够逆转RH2对环磷酰胺诱导的KGN细胞损伤的保护作用。同时,人参皂苷RH2能够逆转由环磷酰胺导致的KGN细胞中p-PI3K/PI3K以及p-AKT/AKT表达升高。并且BCL2L1与人参皂苷RH2有很好的关联度(-7.28 kcal/mol),具有很强的结合能力。结论人参皂苷RH2对环磷酰胺损伤的卵巢颗粒细胞具有保护作用,该保护作用可能通过激活BCL2L1/PI3K/AKT通路,抑制卵巢颗粒细胞损伤。

人参皂甙Rh_2诱导C_6胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:观察不同浓度人参皂甙Rh2(G-Rh2)对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡作用,并在分子水平探讨其作用机理。方法:细胞计数法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞的DNA组织含量变化,电镜下观察细胞的超微结构改变。结果:1)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L对C6胶质瘤细胞有增殖抑制作用,且呈明显量效关系;2)流式细胞术分析经G-Rh2作用72h的C6胶质瘤细胞的DNA组织直方图提示有凋亡发生;3)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L可使G0/G1期细胞比率下降(P<0.05,P<0.01),S期细胞比率明显升高(P<0.05,P<0.01),而G2/M期细胞相对稳定(P>0.05);4)电镜结果提示经4μmol/LG-Rh2作用72h的C6细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论:G-Rh2对C6胶质瘤细胞有诱导凋亡作用,呈剂量依赖性抑制C6胶质瘤细胞增殖,对脑胶质瘤的治疗有重要意义。

人参单体皂甙Rh_2对体外培养的前列腺癌细胞株PC-3M抑制效应的研究

目的 :探讨人参单体皂甙 Rh2 对体外培养的 PC- 3M细胞株的抗肿瘤效应。方法 :采用 MTT实验及 3 H- Td R掺入实验观察 Rh2 对 PC- 3M细胞生长状态及细胞 DNA合成的影响。结果 :高剂量 Rh2可明显抑制 PC- 3M细胞的生长 ,细胞 DNA合成减慢 ,并呈剂量依赖性。结论 :Rh2 对 PC-

人参皂甙Rh_2抗乳腺癌细胞细胞侵袭和转移的实验研究

目的观察人参皂甙Rh2对人乳腺癌MCF7/Adr细胞侵袭和迁移的作用及其机制。方法用MTT比色法,检测人参皂甙Rh2(Rh2)对MCF7/Adr细胞的活力;Transwell小室测定其侵袭力和迁移力;Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9和核转录因子KappaB(NF-KB)蛋白水平的变化。结果用人参皂甙Rh2处理后,MCF7/Adr细胞生长受到抑制,且作用呈时效-量效依赖关系;同时细胞侵袭和迁移能力明显降低;MMP2、MMP9和NF-kB蛋白的表达均明显减弱。结论人参皂甙Rh2能够减弱MCF7/Adr细胞侵袭和转移,其机制可能与降低MMP2、MMP9和NF-kB蛋白表达有关。

人参单体皂甙Rh_2增强顺铂对PC-3M致凋亡效应的研究

目的 :探讨人参单体皂甙Rh2 与顺铂 (DDP)联合应用对前列腺癌细胞株PC - 3M细胞凋亡的影响。方法 :应用MTT实验检测细胞生长抑制率 ,NP - 4 0快速分离片段化DNA电泳、流式细胞计量术观察PC - 3M细胞凋亡的变化。结果 :15 0mg/LRh2 与 0 4mg/LDDP联合给药 :①可使 0 4mg/LDDP的肿瘤细胞生长抑制率由2 5 0 %提高到 6 1 0 % ,增加了 1 4 4倍 ;②凋亡片段化DNA电泳检测显示较二者单独给药时更明显的DNA凋亡梯形电泳带 ;③可使 0 4mg/LDDP诱导PC - 3M细胞凋亡率从 0 3%提高到 5 2 2 % ,相当于其 10倍剂量 4 0mg/LDDP的诱导凋亡效应 ( 5 7 4 % ) ,明显高于Rh2 单独应用的凋亡率 13 6 % (P <0 0 1)。结论 :Rh2 能显著增强DDP对PC

三七叶甙制备抗癌活性成分20(R)-人参皂甙-Rh_2和人参皂甙Rg_3

20（R）-ginsenoside-Rh2,ginsenoside-Rg3 and 20（S）-ginsenoside Rg3 were prepared by the hydrolysis of leaf saponins of Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen with solution of 50% acetic acid and then column chromatography on silica gel.Their structures were characterized by spectroscopic analysis,chemical degradation and comparison with authentic samples.

人参皂甙Rh_2对耐药乳腺癌细胞P-糖蛋白和基质金属蛋白酶及其诱导物表达的影响

目的观察人参皂甙Rh2对人乳腺癌MCF7/Adr细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、基质金属蛋白酶诱导物(extracel-lular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)和基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinases1,MMP1)、MMP2、MMP9表达的影响。方法采用MTT比色法检测药物对MCF7/Adr细胞的毒性作用;流式细胞仪测定细胞内阿霉素(adriamycin,ADM)的荧光强度;Real time RT-PCR和Western blot检测细胞P-gp、EMMPRIN、MMP1、MMP2和MMP9mRNA和蛋白水平的变化。结果 ADM组与对照组相比,ADM能上调细胞P-gp、EMMPRIN、MMP1、MMP2和MMP9蛋白表达;人参皂甙Rh2能抑制ADM对细胞P-gp、EMMPRIN、MMP1、MMP2和MMP9蛋白和mRNA水平的上调作用。结论人参皂甙Rh2可以有效逆转乳腺癌细胞耐药细胞系MCF7/ADM的耐药性。

人参单体皂甙Rh_2对前列腺癌细胞株PC-3M细胞移行周期的影响

目的 :探讨Rh2 对体外培养的PC - 3M细胞移行周期的影响。方法 :应用 [3 H]-TdR掺入法和流式细胞仪测定DNA含量及进行细胞周期的分析。结果 :PC - 3M细胞的 [3 H]-TdR掺入量明显少于对照组 (P <0 0 1) ;流式细胞仪测定G1期细胞数百分比明显高于对照组。结论 :Rh2 可使PC - 3M细胞增殖周期阻滞在G1期 ,肿瘤细胞增殖减慢。

人参皂甙Rh2抗肿瘤作用机制的研究

恶性肿瘤治疗至今尚无好的方法.传统化疗药因其缺乏特异性的细胞毒性作用,治疗中容易造成正常细胞的损伤,从而引起一系列的并发症.人参皂甙Rh2是人参中提取的天然活性成分,具有很高的抗肿瘤活性,而对正常细胞无毒副作用.文章从人参皂甙Rh2的抗肿瘤作用机制(抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、诱导分化、抑制肿瘤DNA合成、提高荷瘤机体的免疫功能和抑制肿瘤转移、抗肿瘤耐药性增强、其他化疗药物对耐药肿瘤作用)等方面进行研究.

人参单体皂甙Rh_2对非小细胞肺癌患者肺泡巨噬细胞免疫活性的影响

目的:探讨人参单体皂甙Rh2(G-Rh2)对非小细胞肺癌患者肺泡巨噬细胞(AM)分泌细胞毒效应分子的影响。方法:采用ELISA法和酶法分别检测35例非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液及其AM培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)和NO浓度,并分别用干扰素-α(IFN-α)、G-Rh2以及两药联合干预AM培养,检测其上清液中TNF-α和NO变化情况。结果:所有非小细胞肺癌患者其AM均可产生一定量的TNF-α和NO;非小细胞肺癌患者荷瘤侧肺NO和TNF-α活性在肺泡灌洗液及AM培养上清液中均明显低于非荷瘤侧肺。G-Rh2干预下AM培养上清液中TNF-α和NO的浓度较对照组明显升高(P<0.05);与TNF-α干预AM培养上清液中TNF-α和NO的浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。G-Rh2和TNF-α联合干预时AM培养上清液中TNF-α和NO的浓度明显大于TNF-α或G-Rh2单独干预(P<0.01)。结论:G-Rh2能促进非小细胞肺癌患者肺泡巨噬细胞分泌细胞毒效应分子,联合干扰素时其作用更显著,两者具有协同性。

人参皂甙Rh_2对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用

背景与目的目前寻找低毒高效的分化诱导剂是肿瘤诱导分化治疗的关键。人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物学活性,其主要的活性有效成分人参皂甙Rh2(ginsenosideRh2,G-Rh2)具有较强的抗癌活性,但其抗肿瘤机制还不十分清楚。因此,本研究探讨G-Rh2对人肝癌细胞株SMMC-7721的生长抑制作用及抗癌机制。方法以MTT法、光镜、电子显微镜观察G-Rh2对SMMC-7721细胞增殖、形态、超微结构的影响。用免疫组化染色和ELISA法检测细胞浆中甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)合成情况,酶促反应试剂盒检测细胞浆中碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)和γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT)活性,放射免疫法检测细胞AFP和白蛋白(albumin,Alb)分泌量,并观察G-Rh2对以上指标的影响。结果G-Rh2以时间依赖性和浓度依赖性抑制SMMC-7721细胞增殖,10μg/mlG-Rh2作用6天抑制率达50%;而20μg/mlG-Rh2作用4天抑制率近50%。经20μg/mlG-Rh2作用4天,肝癌细胞形态及亚细胞结构向正常肝细胞方向逆转。10μg/ml、20μg/mlG-Rh2作用SMMC-7721细胞后,AFP合成明显下降(P<0.05),分泌量从6.60±0.30下降到2.35±0.06(P<0.01);γ-GT及耐热型ALP活性显著降低(P<0.01);ALP活性及Alb分泌量显著升高(P<0.01)。

高效液相色谱法测定生脉注射液中人参皂甙Rb_1的含量

高效液相色谱法测定生脉注射液中人参皂甙Ｒｂ１的含量张梅张艺杨顺荣陈海红梅娇（成都中医药大学６１００７５）张运伟（四川宜宾制药厂６４４０００）生脉注射液由红参、麦冬、北五味子提取制成，具有“回阳救逆”的功效，临床用于抗休克、升血压、改善微循环，主治冠心...

端粒酶在人参皂甙Rh_2诱导肝癌细胞分化中的作用

背景与目的:最近我们研究发现,终浓度为20μg/ml的人参皂甙单体Rh2(ginsenosideRh2,G-Rh2)对人肝癌细胞株SMMC-7721有诱导分化作用,但其作用机制有待进一步研究。一些研究表明端粒酶再激活可能在细胞的癌变和永生化过程中发挥重要作用。本研究从端粒酶活性调控方面探讨G-Rh2诱导SMMC-7721分化的作用机制。方法:采用TRAP-PCR-ELISA法定量检测20μg/mlG-Rh2处理SMMC-7721细胞后端粒酶活性,RT-PCR法检测细胞内端粒酶催化亚单位(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)和p21mRNA的表达,以流式细胞仪检测药物作用前后细胞周期的改变和细胞内CyclinD1、CyclinE和P16蛋白水平。结果:G-Rh2呈时间依赖性抑制SMMC-7721细胞端粒酶活性,20μg/mlG-Rh2处理细胞1天后,端粒酶活性从1.105下降到0.765(P<0.01);而作用细胞5天后,活性从1.152下降到0.326(P<0.01)。20μg/mlG-Rh2能抑制细胞hTERTmRNA表达。20μg/mlG-Rh2使G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少;处理细胞24h后,G1期细胞升高最明显,从60.85%增高到78.53%(P<0.01)。20μg/mlG-Rh2可诱导细胞周期抑制因子P16蛋白和p21mRNA的表达,抑制细胞周期正调节因子CyclinD1和CyclinE表达。结论:hTERTmRNA表达水平和细胞周期的进程与端粒酶的活性密切相关。

高效液相色谱法测定生脉注射液中人参皂甙Rg1、Re的含量

用高效液相色谱法同时测定生脉注射液中人参皂甙Ｒｇ１和Ｒｅ含量。用十八烷基硅烷键合相柱，检测波长２０３ｎｍ，流动相为乙腈－０．０５％磷酸溶液（１８：８２）。人参皂甙Ｒｇ１回收率为９９．０１％，ＲＳＤ＝１．５８％：人参皂甙Ｒｅ回收率为９９．３０％，ＲＳＤ＝１．３０％。并对萃取方法进行了探讨。

人参皂甙单体Rh2诱导髓性白血病细胞株凋亡的时效与量效

目的:已发现人参中某些有效组分能增强和激活机体免疫系统,具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物活性作用。选取人髓性白血病细胞株HL60为模型,探讨人参皂甙单体Rh2抑制其增殖和诱导凋亡的时效量效关系。方法:实验于2006-07/08在吉林医药学院临床检验实验室进行。①材料:人参皂甙单体Rh2购自吉林省宏久生物科技股份有限公司,批号050801,溶于pH7.4磷酸盐缓冲液中配成50g/L母液。人髓性白血病细胞株HL60购自中国科学院上海生物细胞研究所。②实验方法:取处于对数生长期的HL60细胞制备3×108L-1细胞悬液,接种后6h分别加入终浓度为5,10,20,40,80mg/L的人参皂甙单体Rh2100μL,于加药48h后采用MTT比色法检测人参皂甙单体Rh2对HL60细胞生长的抑制作用,计算抑制率和半数抑制浓度。选择半数抑制浓度的人参皂甙单体Rh2处理HL60细胞,分别于作用6,12,24,48,72h后采用MTT比色法测定抑制率,并与未加药对照组进行比较。半数抑制浓度的人参皂甙单体Rh2作用48h时倒置显微镜下观察HL60细胞形态,吉姆萨染色观察细胞凋亡情况。结果:①量效关系:人参皂甙单体Rh2浓度为5,10,20,40mg/L时,处理48h后HL60细胞生长抑制率呈升高趋势(F=9.45,P<0.01),具有明显的剂量依赖性;至80mg/L时抑制率与40mg/L基本相似。加药48h后半数抑制浓度为13.0mg/L。②时效关系:13.0mg/L人参皂甙单体Rh2处理HL60细胞6,12,24,48,72h后,抑制率逐渐升高(F=9.32,P<0.01),呈时间依赖性。③HL60细胞形态观察:与未加药对照组比较,经13.0mg/L人参皂甙单体Rh2处理后HL60细胞数量明显减少,细胞分散,体积缩小,细胞核呈碎片状。④凋亡细胞吉姆萨染色检测:经13.0mg/L人参皂甙单体Rh2处理后,HL60细胞出现核染色质浓缩、呈周边凝聚,核膜裂解形成凋亡小体、胞质出现空泡但胞膜完整的典型细胞凋亡形态学改变。结论:人参皂甙单体Rh2能有效抑制体外培养HL60细胞的增殖,并诱导其凋亡,干预效果呈时间和剂量依赖。