人参皂苷Rg1经线粒体通路抗Aβ_(25-35)致原代大鼠皮层神经元凋亡

目的:通过人参皂苷Rg1与原代培养大鼠皮层神经元预培养,评价抗β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)所致神经元损伤,并探讨Rg1的神经保护作用及相关分子机制。方法:原代神经元培养7 d成熟后,分别以1、10、20μmol/L Rg1预处理24 h,加入Aβ毒性片段Aβ25-3510μmol/L模拟阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)脑组织局部微环境。孵育72 h后,光镜观察细胞形态学改变,评价Rg1是否具有神经保护作用及相关量效关系。采用JC-1染色,考察神经元线粒体膜电位(ΔΨm)变化,并运用Western blot技术,检测凋亡相关蛋白的表达变化。结果:Aβ25-35作用72 h严重损伤原代皮层神经元,引起神经元碎裂和死亡。Rg1预处理能对抗Aβ25-35的细胞损伤作用,显著提高神经元存活率,并呈现剂量依赖性,其中Rg1(20μmol/L)活性最强。Aβ25-35处理24 h能降低神经元的线粒体ΔΨm,下调Bcl-2/Bax的比值,引起细胞色素c从线粒体释放入胞浆,活化caspase 3和caspase 9,从而引起神经元凋亡。而Rg1预培养能保护原代神经元,减轻或避免上述损伤作用,且其抗凋亡效应可被雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780和糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486部分拮抗。结论:Rg1在1μmol/L至20μmol/L浓度具有抗Aβ25-35损伤原代培养大鼠皮层神经元作用,该活性与抑制线粒体凋亡通路相关联。

人参皂苷Rh_2增强紫杉醇诱导Hela细胞的凋亡

目的:探讨人参皂苷Rh2能否增强紫杉醇诱导Hela细胞的凋亡。方法:应用SRB法检测药物抑肿瘤效应;荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;应用金氏公式分析药物间的相互作用。结果:人参皂苷Rh2可浓度依赖性地抑制Hela细胞的增殖,并可协同性地增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用;人参皂苷Rh2可协同性地增强紫杉醇诱导的Hela细胞凋亡,并具有浓度依赖性。结论:人参皂苷Rh2可协同性地增强紫杉醇对Hela细胞增殖抑制作用和诱导凋亡作用。

人参皂苷对糖尿病大鼠膈肌收缩特性的保护作用

目的研究人参皂苷对糖尿病(DM)大鼠膈肌功能的保护作用。方法对链脲菌素诱导的DM大鼠模型予以人参皂苷腹腔注射4周后,应用离体大鼠膈肌条,测定其单收缩张力(Pt)、最大强直张力(P0)、力—频率曲线、疲劳指数(FI)的变化;检测膈肌组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化,并在电镜下观察超微结构的改变。结果DM组膈肌的Pt、P0、FI显著降低(P<0·01),在给予10、20、40、60、100Hz刺激时,膈肌张力显著降低(P<0·01);膈肌组织中SOD活力显著降低(P<0·01),MDA含量显著增加(P<0·01);电镜下,肌小节和线粒体形态改变,而人参皂苷可抑制上述现象。结论人参皂苷对DM膈肌的损伤有保护作用。

人参皂苷Rg3对培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活性的影响

目的:研究人参皂苷Rg3(GS-Rg3)对体外培养人瘢痕疙瘩的直接抑制作用及可能机制。方法:通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度GS-Rg3(25、50、100和200 mg.L-1)在不同作用时间(24、48和72 h)对成纤维细胞增殖活性的影响。结果:与对照组相比GS-Rg3对瘢痕疙瘩成纤维细胞有抑制作用,随着时间延长及浓度增加,抑制作用有增加趋势。最大抑制浓度为100 mg.L-1。结论:GS-Rg3对体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞有抑制作用,且随着时间延长及浓度增加,其抑制作用增强。

人参皂苷对Aβ_(25-35)蛋白诱导的老年性痴呆体外模型NG108-15神经元细胞凋亡的抑制作用

【目的】探讨在以NG108-15细胞作为神经元代表、β-淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默病体外细胞模型中,人参皂苷Rg1保护神经元的作用及其机制。【方法】采用倒置显微镜观察细胞形态,结合流式细胞仪检测凋亡率,进行Aβ25-35造模浓度与时间的选择以及Rg1预处理最佳浓度时间的选择;在此基础上,采用荧光显微镜和数据处理系统(DMR)图像分析仪检测免疫细胞化学法标记的核因子-κB(NF-κB)的活性;采用免疫组化染色法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达;采用酶标光度计、半胱氨酸/天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)比色检测试剂盒检测caspase-3活性。【结果】20μmol/L Aβ25-35作用24 h可诱导NG108-15细胞凋亡,2μmol/L Rg1组的NF-κB活性与模型组比较显著性提高(P<0.01),Rg1预处理组Bcl-2表达呈阳性,且caspase-3活性较模型组显著性降低(P<0.01)。【结论】高浓度聚焦状的Aβ25-35可下调神经元内NF-κB的活性,诱导细胞凋亡,Rg1通过启动神经元中NF-κB的活化从而上调Bcl-2表达,抑制caspase-3活性而发挥保护神经元的作用。

西洋参果总皂苷对冠状动脉结扎犬血流动力学及心肌缺血的影响

目的:观察西洋参果总皂苷(PQFS)对实验性心肌缺血犬的血流动力学及其相关指标的影响。方法:将实验犬随机分为对照组、银杏叶片组(24 mg.kg-1)及PQFS 24、12和6 mg.kg-13个剂量组,每组6只。结扎犬左冠状动脉前降支(LAD)造成急性心肌缺血模型,测定血流动力学指标、心肌梗塞面积及血清酶学变化。结果:与对照组比较,PQFS 24、12和6 mg.kg-1组冠状动脉血流量增加(P<0.05),心肌耗氧量减少(P<0.05),心肌梗塞面积缩小(P<0.01),血清中谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH-L)活性降低(P<0.01,P<0.05),血清中丙二醛(MDA)含量减少(P<0.01,P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)活性增加(P<0.01,P<0.05)。结论:PQFS可降低冠脉阻力,增加冠脉流量,减少心肌耗氧量,具有保护缺血心肌作用。

绞股蓝皂苷对鼠应激能力影响的效果评估

目的:观察在不同类型应激状态下,绞股蓝皂苷对鼠应激能力的影响,并与人参皂甙作用效果进行比较。方法:①实验于2004-07/08在宜春学院生物工程研究所完成。选用昆明种小鼠90只,SD大鼠30只。②常压下缺氧应激模型:将30只小鼠随机分为3组:生理盐水组(给予相同容积的生理盐水)、绞股蓝皂苷和人参皂苷(100mg/kg分别灌胃绞股蓝皂苷和人参皂苷),各组均连续干预3d。均在末次给药50min后将小鼠置于250mL的盛有碱石灰10g的磨口广口瓶内,每瓶放小鼠1只,然后密塞涂以凡士林,造成瓶内氧气逐渐减少,形成缺氧环境,以呼吸停止为判断死亡指标。观察记录在缺氧应激状态下,小鼠存活的时间。③异丙肾上腺素作用下的缺氧应激模型:分组、给药同“常压下缺氧应激模型实验”。于在末次给药35min后,腹腔注射异丙肾上腺素15mg/kg,25min后,按“常压下缺氧应激模型实验”法观察记录小鼠在缺氧应激状态下存活的时间。强迫游泳应激模型:分组、给药同“常压下缺氧应激模型实验”。在末次给药50min后将小鼠置于25℃,水深35cm的恒温水箱中强制游泳,小鼠游泳至力竭时开始下沉,以小鼠下沉至水底为指标,观察记录小鼠自游泳开始至下沉水底的时间。④急性心肌缺血性应激模型:随机将SD大鼠30只分成为3组:生理盐水组(给予0.1mL/只)、绞股蓝皂苷组(给予绞股蓝皂苷30mg/kg)和人参皂苷组(给予人参皂苷30mg/kg),每组10只。15min后记录一次心电图。然后,舌下静脉注射垂体后叶素0.5μg/kg(药物浓度100μg/L),造成大鼠急性心肌缺血。并立即记录心电图的变化,若ST段较实验前抬高0.1mV或T波低平、双向、倒置或出现心律失常者,则为缺血阳性指标,否则为阴性,缺血指标阴性率高则对心肌缺血的保护作用强。⑤计量资料差异性比较采用方差分析,进行F检验和q检验;计数资料以百分数表示,进行χ2检验。结果:昆明种小鼠90只和SD大鼠30只均进入结果分析。①常压缺氧应激实验结果:人参皂苷组和绞股蓝皂苷组小鼠应激存活时间均明显长于生理盐水组(P<0.05)。②异丙肾上腺素作用下的缺氧应激实验结果:绞股蓝皂苷和人参皂苷对异丙肾上腺素作用下的缺氧应激小鼠无明显影响(P>0.05)。各组小鼠应激存活时间差异不明显(P>0.05)。③强迫游泳应激实验结果:各组动物平均游泳时间无差异(P>0.05)。但人参皂苷和绞股蓝皂苷均能延长小鼠强迫游泳的泳时,泳时延长率分别59%和57%,显示其具有一定的抗疲劳作用趋势。④大鼠急性心肌缺血应激实验结果:绞股蓝皂苷和人参皂苷都可使缺血性心电图变化发生率减少(P<0.01,0.05),表明两药均能部分对抗垂体后叶素所致的心肌缺血反应,对大鼠急性心肌缺血有保护作用。人参皂苷组和绞股蓝皂苷组缺血指标阴性率明显高于生理盐水组(P<0.05,0.01)。结论:绞股蓝皂苷能明显提高小鼠常压缺氧、异丙肾上腺素作用下的缺氧、强迫游泳应激能力及大鼠急性心肌缺血应激能力,且该种作用与人参皂苷类似。

珠子参叶总皂苷抗炎镇痛作用的实验研究

目的:研究珠子参叶总皂苷的抗炎镇痛作用。方法:采用小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性、棉球肉芽肿和热板实验。结果:大、中剂量组可对抗二甲苯所致小鼠耳廓肿胀,减少醋酸致小鼠毛细血管通透性增加,大剂量组可抑制肉芽组织增生,对热板引起的疼痛有一定的镇痛效果。结论:珠子参叶总皂苷有一定的抗炎镇痛作用。

人参皂苷Rg1对Caco-2细胞PepT1转运功能的影响

【目的】观察人参皂苷Rg1对Caco-2细胞肽转运载体PepT1转运二肽化合物的能力及其蛋白、mRNA表达的影响。【方法】Caco-2细胞长满瓶底后继续培养28 d,然后给予人参皂苷Rg1(终浓度为50 mmol/L)处理,并设立空白对照组及cAMP抑制剂(Rp-8-Br-cAMP)对照组,采用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞对二肽化合物Glycyl-Sarcosine的转运能力,采用Western blot法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR法测定PepT1 mRNA(SLC15A1)的表达水平。【结果】人参皂苷Rg1处理组Caco-2细胞15、30、60、120 min时点Glycyl-Sarcosine吸收转运累计量均显著高于空白对照组对应时点的量(P<0.05或P<0.01),人参皂苷Rg1与Rp-8-Br-cAMP合用组15、30、60、120 min时点均显著低于相应时点单用人参皂苷Rg1组(P<0.05或P<0.01),人参皂苷Rg1处理后Caco-2细胞膜PepT1蛋白表达显著增加(P<0.05);荧光定量PCR结果显示:人参皂苷Rg1能显著下调SLC15A1表达(P<0.05)。【结论】人参皂苷Rg1具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该作用可能与其促进胞浆中PepT1蛋白嵌入胞膜中发挥转运二肽的功能有关,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系。

人参总皂苷对黑色素瘤自杀基因治疗的增效作用

【目的】观察人参总皂苷联合自杀基因HSV-tk/GCV治疗系统对小鼠黑色素瘤的生长抑制效应,探讨人参总皂苷对黑色素瘤自杀基因治疗的增效作用。【方法】选用85只C57BL/6J雄性小鼠,除正常组5只外其他均接种含20%B16tk+细胞的tk+和tk-混合细胞,造模成功后随机分为模型组、人参总皂苷组、tk/GCV组、人参总皂苷联合tk/GCV组(联合治疗组),每日腹腔注射给药,连续治疗7 d后检测瘤块质量,计算抑瘤率并进行常规组织病理学检查。以不同浓度人参总皂苷与更昔洛韦(GCV)分别或共同作用于B16tk-细胞,以及含20%B16tk+细胞的tk+和tk-混合细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组存活率,用金正均q值法分析人参总皂苷与自杀基因系统联合的相互作用是否具有协同性。【结果】各治疗组瘤块质量均较模型对照组低,联合治疗组的抑瘤率最高(32.29%),该组瘤体质量与模型组比较差异具有显著性意义(P<0.05);人参总皂苷、tk/GCV组的抑瘤率次之,其瘤体质量与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05);MTT检测结果显示:单独人参总皂苷对B16细胞的抑制程度不高,各浓度人参总皂苷联合tk/GCV作用72 h所得的金正均q值均小于1.15;肿瘤组织的病理切片结果显示人参总皂苷组和联合治疗组的淋巴细胞浸润程度明显高于模型组。【结论】人参总皂苷能够提高自杀基因系统对黑色素移植瘤的旁杀伤效应,其增效机制可能是通过机体的免疫调节途径实现。

人参总皂苷与三七总皂苷不同比例配伍对高糖刺激下腹膜间皮细胞增殖的影响

【目的】观察益气活血代表药物人参、三七的提取物在不同比例配伍下对大鼠腹膜间皮细胞(PMCs)增殖的影响。【方法】采用胰蛋白酶消化法分离大鼠PMCs,建立稳定的细胞培养模型,加入含42.5g/L葡萄糖的腹膜透析液作用3h后,再加入不同比例配伍的人参总皂苷和三七总皂苷,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的药物及其配伍对大鼠PMCs增殖的影响。【结果】人参总皂苷和三七总皂苷终浓度为100μg/mL及80μg/mL均能对高糖透析液损伤后的PMCs的增殖产生保护作用(P<0.01);三七总皂苷与人参总皂苷在浓度比为1∶9以及4∶1时能改善42.5 g/L腹透液作用3 h后对细胞产生的增殖抑制(P<0.01),且两组的保护效能差异无显著性意义(P>0.05)。【结论】具有益气活血作用的人参与三七提取物在一定比例配伍后能够对高糖刺激下的大鼠PMCs产生一定的保护作用。

人参皂苷Rb1对阿尔茨海默病模型细胞大电导钙激活钾通道变化机制的影响

【目的】观察阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型细胞的大电导钙激活钾通道BKCa的变化及人参皂苷Rb1对AD模型细胞上BKCa通道的影响。【方法】实验分为Aβ25-35模型组(终浓度为5、10、20、40μmol/L)、人参皂苷Rb1预处理组(终浓度为0.5、1、2、4μmol/L)、治疗组(Aβ25-35+人参皂苷Rb1)和空白对照组。采用膜片钳技术观察各组BKCa通道的平均开放时间、平均开放概率和电流幅度,选择Aβ25-35模型组及人参皂苷Rb1预处理组的最佳浓度,并观察人参皂苷Rb1对AD细胞的作用。【结果】20μmol/L Aβ25-35可显著降低BKCa通道的平均开放时间(P<0.05),抑制BKCa通道开放;4μmol/L人参皂苷Rb1组BKCa通道平均开放概率和开放时间较空白对照组均显著升高(P<0.05),与模型组比较均显著升高(P<0.05或P<0.01)。【结论】人参皂苷Rb1治疗AD的机制可能与其能激活BKCa通道、对抗Aβ25-35的毒性作用并保护神经细胞有关。

Rg3对甲状腺癌血管生成抑制作用的临床观察

为了探讨人参皂甙Rg3对人甲状腺癌血管生成的抑制作用 ,对 18例甲状腺癌患者在术前 2周口服Rg3 ,观察手术切除癌内微血管密度 (microvesseldexsity ,MVD)的变化。结果实验组血管减少明显 ,高倍镜下可见血管内皮细胞支架塌陷、变性、坏死 ;而对照组血管无明显改变。实验组MVD值计数 10 8 69± 2 5 2 4,对照组MVD计数 160 5 2±47 45 ,两组比较差异有统计学意义 ,P <0 0 0 1。初步研究结果提示 ,Rg3具有抑制甲状腺癌血管生成的作用 ,可有效抑制其生长和转移。