人参皂苷单体Rh2体外抑制鼻咽癌肿瘤干细胞增殖的研究

目的:探讨人参皂苷单体Rh2体外抑制鼻咽癌肿瘤干细胞增殖的作用以及对白细胞介素(IL)-6水平影响。方法:应用无血清悬浮培养法在鼻咽癌低分化细胞株CNE-2中筛选分离出鼻咽癌肿瘤干细胞样细胞亚群CNE-2S;按随机法将细胞分为生理盐水组、人参皂苷单体Rh2(30μmol/L)组和人参皂苷单体Rh2(60μmol/L)组;应用MTT法测各组CNE-2S细胞增殖;CNE-2S细胞凋亡应用DAPI染色法检测,分析细胞的光密度和面密度变化;酶联免疫吸附(Elisa)法测定各组CNE-2S细胞的IL-6水平。结果:30μmol/L人参皂苷单体Rh2对鼻咽癌肿瘤干细胞的抑制率为15.46%,明显低于生理盐水组(P<0.05);60μmol/L人参皂苷单体Rh2组的抑制率为44.33%,极显著低于生理盐水组(P<0.01)。人参皂苷单体Rh2干预后鼻咽癌肿瘤干细胞的DAPI染色光密度和面密度值均显著减小,比较差异有统计学意义(P<0.01);且60μmol/L人参皂苷单体Rh2组的光密度和面密度值均明显小于30μmol/L人参皂苷单体Rh2组,比较差异有统计学意义(P<0.01)。干预后3 d和6 d,人参皂苷单体Rh2组IL-6表达水平明显减少(P<0.01),且60μmol/L人参皂苷单体Rh2组的IL-6表达水平均分别明显低于30μmol/L人参皂苷单体Rh2组,比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:人参皂苷单体Rh2对体外培养鼻咽癌肿瘤干细胞的增殖具有明显抑制作用,且可促进其凋亡,下调IL-6表达可能在其中发挥重要作用。

人参皂苷单体Rh_2促使人脑胶质瘤U251细胞凋亡的实验研究

目的:观察人参皂苷单体Rh2(GS-Rh2)诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡作用,进而探讨其对端粒酶活性的影响和人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的机制。方法:人脑胶质瘤U251细胞经GS-Rh2处理后,采用MTT法检测细胞抑制率,免疫荧光技术观察凋亡小体,流式细胞仪经Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性改变,通过RT-PCR技术检测hTERT基因的表达。结果:GS-Rh2对U251细胞具有抑制作用,呈明显的剂量依赖关系,免疫荧光技术观察到凋亡小体的出现,流式细胞仪检测GS-Rh2引起U251细胞凋亡并与药物浓度存在依赖关系,TRAP-ELISA法发现GS-Rh2可以降低端粒酶活性且呈剂量和时间依赖关系,RT-PCR证实GS-Rh2可降低hTERT基因的表达。结论:人参皂苷单体Rh2能够诱导人脑胶质瘤U25l细胞发生凋亡,并抑制和降低细胞端粒酶活性,经过RT-PCR证实GS-Rh2作用于胶质瘤的分子生物学机制可能与抑制胶质瘤细胞hTERT基因有关,进而诱导细胞发生凋亡。

人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制。方法取对数生长期的KG1α细胞,分为两组:空白对照组(常规培养)和人参皂苷单体Rh2(S)组,采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态及数量,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪检测细胞周期的分布,Real-time PCR检测细胞中β-catenin基因mRNA水平,免疫细胞化学法检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的定位及表达,Western blot检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平。结果人参皂苷单体Rh2(S)对KG1α细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Rh2(S)作用48 h后,可见KG1α细胞分散生长,数量明显减少;可见数量不等,程度不同的凋亡细胞;G0/G1期细胞比例明显上升(P<0.05),G2+M和S期细胞比例明显下降(P<0.05);细胞中β-catenin基因mRNA水平明显降低(P<0.01)。β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论人参皂苷单体Rh2(S亚型)对KG1α细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制可能抑制Wnt/β-catenin/TCF4/CyclinD1信号通路,使细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡。

人参皂苷单体Rh_2对小鼠前胃癌MFC细胞的增殖抑制作用

目的:探讨Ginseng Rh2(G-Rh2)对小鼠前胃癌MFC细胞的增殖抑制作用及其机制。方法:MFC细胞(密度为1.0×109·L-1)分为空白组、G-Rh2组(3、10、30mg·L-1)组,MTT法检测MFC细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;流式细胞仪和免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白cyclinD1、细胞周期依赖激酶(CDK)抑制蛋白p27kip1在MFC细胞中的定性和定量表达。结果:与相应空白组比较,G-Rh2(3、10、30mg·L-1)组在1、2和4h细胞增殖活性随着剂量和时间增加而逐渐下降(P<0.05或P<0.01);与空白组比较,各药物处理组G0/G1期细胞比率随着剂量增加而上升(P<0.05或P<0.01),同时细胞周期蛋白cyclinD1含量逐渐降低(P<0.05或P<0.01),细胞周期抑制蛋白p27kip1含量逐渐升高(P<0.05或P<0.01)。结论:人参皂苷单体G-Rh2可抑制MFC细胞增殖,可使MFC细胞周期阻滞在G0/G1期而抑制细胞活性,这一过程可能与p27kip1升高、细胞周期蛋白cyclinD1含量降低有关。

人参皂苷单体Rh_2诱导小鼠前胃癌细胞系凋亡的分子机制

目的:观察人参皂苷Rh2(G-Rh2)诱导小鼠前胃癌MFC细胞的凋亡,探讨Ca2+在G-Rh2诱导细胞凋亡中的作用,揭示G-Rh2诱导MFC细胞凋亡的分子机制.方法:分别对无血清培养24h后的MFC正常细胞组、G-Rh2(3、10、30mg/L)给药组、Ca2+螯合剂BAPTA(20μmol)+G-Rh2(10mg/L)给药组及BAPTA(20μmol)组,荧光显微镜(Hoechst33258)观察细胞形态学改变;流式细胞仪Annexin V-FITC双染法检测细胞早期凋亡率;琼脂糖凝胶电泳法观察细胞晚期凋亡;共聚焦显微镜分析G-Rh2给药后细胞内钙和细胞线粒体膜电位,Western blot分析caspase3的表达.结果:10mg/L的G-Rh2能显著抑制无血清培养的MFC细胞增殖和诱导MFC细胞凋亡,可剂量和时间依赖性的提高细胞内钙浓度,降低细胞线粒体膜电位,增加caspase3的表达,但这些作用均可被BAPTA(20μmol)抑制.结论:G-Rh2可激活细胞内Ca2+信号转导途径,从而最终通过线粒体凋亡途径诱导胃癌细胞凋亡.

人参单体皂苷Rh_2诱导小鼠前列腺癌RM-1细胞凋亡

目的：探讨人参单体皂苷Rh2抗小鼠前列腺癌细胞RM-1的作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法检测不同浓度Rh2与RM-1细胞株存活率的关系;吖啶橙染色观察Rh2诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞凋亡周期,计算细胞平均凋亡指数。结果：RM-1细胞经Rh2处理后,细胞生长明显受抑制,当Rh2浓度为5、15、25和30mg·L^-1时,其生长抑制率分别为12.0%、36.1%、51.2%和69.3%,呈明显的浓度依赖性;吖啶橙荧光染色可见经药物处理的细胞呈现明显的凋亡形态;细胞周期G1期前出现凋亡峰,Rh2浓度为15和25mg·L^-1时,细胞凋亡率分别为41.9%和48.9%。结论：5-30mg·L^-1Rh2可诱导RM-1细胞凋亡,其具有明显的抗肿瘤作用。

人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE-2S细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE-2S细胞增殖及凋亡的影响。方法:将生长在对数期的人鼻咽癌CNE-2S细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组。对照组常规培养,阴性对照组采用含有DMSO的培养液培养,实验组在对照组细胞的基础上加入不同浓度人参皂苷单体Rh2处理。采用MTT法测定细胞增殖,PI单染流式细胞术分析各时期细胞所占百分比,Annexin V-PI双染流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果:与阴性对照组相比,实验组各浓度下的Rh2对CNE-2S细胞均具有显著的增殖抑制作用(P<0.05),且随着Rh2浓度的增加而呈现增强的趋势,其中浓度为12.5 mg·L-1 Rh2增值抑制率最低,浓度为100 mg·L-1Rh2增值抑制率最高。不同浓度人参皂苷单体Rh2 G0/G1期细胞分布显著高于阴性对照组(P<0.001),且G2/M、S期细胞比例显著低于阴性对照组(P<0.01),且随着人参皂苷单体Rh2浓度的增加作用呈现增强的趋势(P<0.05);不同浓度的Rh2单体作用24h,CNE-2S细胞早期、晚期凋亡率及总凋亡率均较阴性对照组明显增高(P<0.001),并且在Rh2单体浓度为100 mg·L-1时,凋亡率最高。结论:人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE-2S细胞增殖及凋亡具有显著的影响,并且可能对单体Rh2的浓度存在依懒性。

人参单体皂苷Rh2抑制缺氧条件下人视网膜血管内皮细胞增殖及整合素αvβ3表达的研究

目的探讨人参单体皂苷Rh2对缺氧条件下人视网膜血管内皮细胞生长及整合素(integrin)αvβ3表达的影响。方法建立人视网膜血管内皮细胞缺氧模型,并给予其不同浓度的人参单体皂苷Rh2,应用MTT法观察人参单体皂苷Rh2对人视网膜血管内皮细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测人视网膜血管内皮细胞凋亡的情况;用RT-PCR检测对Integrinαv和β3基因的表达。结果MTT结果显示,缺氧对照组细胞增殖活性明显强于正常对照组(P<0.05);缺氧细胞加用Rh2后的增殖明显受到抑制,与缺氧对照组比差异具有显著性(P<0.05);流式细胞结果显示,加用Rh2后的细胞凋亡率与缺氧对照组比无显著性差异(P>0.05)。RT-PCR结果表明,和正常对照组比,缺氧对照组的细胞Integrinαv和β3基因的表达明显增强,Rh2可显著下调Integrinαv和β3基因表达。结论人参单体皂苷Rh2在缺氧条件下能明显抑制人视网膜血管内皮细胞的生但无明显诱导凋亡的作用。