人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响

目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。

人参皂苷Rg1干预小鼠巨大肩袖损伤后的肌肉退变

背景:肩袖肌退变(肌肉萎缩、纤维化和脂肪浸润)是肩袖撕裂后出现的常见问题,严重影响肩关节功能和手术预后。人参皂苷Rg1具有抗氧化、抗细胞凋亡、降血脂等生物效应,然而人参皂苷Rg1对肩袖损伤后肌肉退变的影响未见报道。目的:探讨人参皂苷Rg1对巨大肩袖损伤小鼠肌肉退变的影响。方法:将60只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组,每组15只。假手术组小鼠切开右肩皮肤后缝合,其余3组小鼠均行右侧肩关节肩袖损伤造模,模拟巨大肩袖撕裂手术切断冈上肌肌腱和肩胛上神经压迫。术后假手术组和模型组腹腔注射生理盐水0.5 mL;人参皂苷Rg1低、高剂量组予以腹腔注射人参皂苷Rg130,60 mg/kg,1次/d,共注射6周。末次注射后次日予以步态分析评估小鼠肢体功能,安乐死后取术侧冈上肌测量肌肉萎缩率、肌肉收缩力,肌肉组织进行油红O染色、Masson染色,RT-PCR检测萎缩、纤维化、脂肪浸润相关基因的表达。结果与结论:①与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组爪印面积、步长显著增加(P<0.05);②与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组肌纤维横截面积、冈上肌收缩力显著增加(P<0.05),湿肌质量减少比率、脂肪浸润面积比率、胶原纤维面积比率显著下降(P<0.05);③与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组肌肉组织中萎缩、纤维化和脂肪浸润相关基因的表达显著下降(P<0.05);④人参皂苷Rg1低、高剂量组爪印面积、冈上肌收缩力、肌纤维横截面积无统计学差异(P>0.05),人参皂苷Rg1高剂量组其他指标均优于低剂量组(P<0.05);⑤结果说明,人参皂苷Rg1能显著减轻小鼠巨大肩袖撕裂后肩袖肌萎缩、纤维化和脂肪浸润,并有利于肌肉力量及肢体功能的改善。

人参皂苷Rb1减轻脂多糖诱导急性肺损伤的作用研究

目的:探讨人参皂苷Rb1(GsRb1)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用及其作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、GsRb1给药组(低、中、高剂量组),气管内给予LPS造模,给药组在造模前3 d分别腹膜腔注射给予不同剂量GsRb1预处理,造模12 h将其麻醉,先采集肺泡灌洗液后再处死取出肺组织,计算肺湿/干比,试剂盒检测灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及肺髓过氧化物酶(MPO)活性,Western blot检测肺组织核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达。结果:高剂量GsRb1能明显降低肺组织湿/干比(P<0.05);中、高剂量GsRb1能明显降低肺组织MPO活性(P<0.05);高剂量GsRb1明显降低小鼠肺泡灌洗液IL-1β和TNF-α水平(P<0.05);高剂量GsRb1能明显降低肺组织NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05)。结论:GsRb1可能通过调控NF-κB通路,减轻炎症反应,抑制LPS诱导的小鼠ALI。

人参皂苷Rg1减轻热应激致小鼠睾丸损伤的机制研究

目的探讨人参皂苷Rg1减轻热应激致小鼠睾丸损伤的机制。方法20只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为4组,每组5只。对照组(Control组)和热应激组(HS组)小鼠腹腔注射0.9%生理盐水[10 mL/(kg·d)×14 d],热应激+人参皂苷Rg1组(HS+Rg1组)和人参皂苷Rg1组(Rg1组)小鼠腹腔注射人参皂苷Rg1[20 mg/(kg·d)×14 d]。HS组与HS+Rg1组小鼠在给药第7天时,将麻醉后小鼠下腹部置于43℃水浴中单次热应激30 min。小鼠精母细胞GC-2spd(ts)分为4组:对照组(Control组)细胞常规培养48 h;热应激组(HS组)细胞常规培养36 h,置于43℃水浴中单次热应激30 min,继续培养12 h;热应激+Rg1组(HS+Rg1组)在细胞培养体系中加入Rg1(终浓度50μmol/L),热应激处理同HS组;Rg1组不给予热应激处理,其余同HS+Rg1组。建模完成后1 d采集眼球血,ELISA法检测血清睾酮水平;摘取睾丸观察形态并称量,计算睾丸指数,HE染色观察睾丸组织病理学形态;制备睾丸组织匀浆检测过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;取附睾精子,计算机辅助精子分析(CASA)系统分析小鼠精子浓度和活力;TUNEL染色检测GC-2spd(ts)细胞凋亡情况;Western blot检测GC-2spd(ts)细胞Nrf2、Keap1、HO-1、Bax、Bcl-2和Caspase3蛋白表达量;RT-qPCR检测GC-2spd(ts)细胞Nrf2蛋白靶基因GCLC、GCLM和NQO1相对表达量。结果Rg1可阻止热应激所致睾丸质量和睾丸指数下降,减轻睾丸组织结构损伤,阻止精子浓度和活力下降,拮抗热应激所致睾丸间质细胞数量减少和血清睾酮水平下降,降低睾丸组织中MDA累积,提高抗氧化酶CAT和SOD的活性。Rg1还可减轻GC-2spd(ts)细胞凋亡,下调Bax、Caspase3和Keap1蛋白表达,增强Bcl-2、Nrf2和HO-1蛋白表达量,增强Nrf2蛋白靶基因GCLC、GCLM和NQO1相对表达量。结论Rg1对正常小鼠睾丸结构和功能影响不显著,但可有效提高小鼠睾丸抗热应激损伤能力,其机制可能与Rg1激活Nrf2信号通路,提高抗氧化酶活性,减少生精细胞凋亡有关。

人参皂苷Rb1通过AMPK/SIRT1/PGC-1α轴调节线粒体裂变融合缓解哮喘气道炎症

哮喘(bronchial asthma)以气道炎症和高反应性为主要特征,严重危害人类健康^([1])。AMP-activated protein kinase(AMPK)作为氧化还原蛋白,能有效调节细胞内氧化应激,可通过激活高度保守的NAD+依赖性去乙酰化酶Sirtuin 1(SIRT1)/NF-κB通路抑制哮喘^([2])。PPARγcoactivator-1α(PGC-1α)在线粒体生物合成和功能调节中得到广泛应用^([3])。人参皂苷Rb1是人参根茎的重要提取物,具有抗炎,抗凋亡,能够抑制哮喘气道高反应性等作用^([4])。本研究探讨了Rb1可能通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1α信号轴改善小鼠支气管上皮细胞在CRE诱导下发生的氧化应激线粒体动力学障碍,最终有效缓解哮喘气道炎症的发生和发展。

人参皂苷Rg1对小鼠生精改善作用的研究

目的研究人参皂苷Rg1对邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)诱导的生精损伤小鼠的保护作用,为天然生精药物开发提供理论依据。方法将30只C57BL/6雄性小鼠随机分为三组,对照组、DBP组(400 mg/kg)、Rg1+DBP组(Rg120 mg/kg,DBP 400 mg/kg),连续给药35 d后,处死小鼠,收集血清、睾丸、附睾,对精子密度、活力及畸形率进行检测和计算,采用酶联免疫吸附试验检测血清睾酮(testosterone,T)、促卵泡激素(follicle-stimulating Hormone,FSH)和促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)的水平,测定小鼠睾丸组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)含量水平。结果与对照组相比,DBP组小鼠精子活力及密度明显降低(P<0.01),精子畸形率没有明显改变;血清中T、LH显著降低,FSH明显升高(P<0.01);睾丸组织GSH-Px、SOD水平明显下降,MDA含量升高(P<0.01)。与DBP组相比,DBP+Rg1组精子活力及密度明显增加(P<0.01),精子畸形率没有明显改变;血清中T、LH显著升高,FSH明显降低(P<0.01);睾丸组织GSHPx、SOD水平明显升高,MDA含量明显下降(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1具有改善DBP诱导的生殖功能损伤的作用,机制可能与人参皂苷Rg1抗氧化损伤抗作用有关。

乙醇体系中金属离子催化转化人参皂苷Rb1的研究

人参皂苷Rb1是人参中的主要皂苷之一,但人体吸收量极少,而其衍生物Rg3、Rk1、Rg5却易于人体吸收,但其制备和分离成本较高。针对以上问题将人参皂苷Rb1在50%乙醇水溶液体系和无水乙醇体系中进行催化条件的优化,并分析其产物。实验发现,通过对金属离子催化效果的筛选,选取NbCl_(5)为反应催化剂;在50%乙醇水溶液体系中最优条件下反应,Rg3得率为18.29%;在无水乙醇体系中最优条件下反应,Rg3得率为49.45%。根据两组反应产物的对比,推测在50%乙醇水溶液体系反应时,水可能供给电子基团,并生成更多水合化合物即20(S)-25-OH-Rg3和20(R)-25-OH-Rg3;在无水乙醇体系反应时,电子基团可能无法供给,形成双键,生成其他化合物即Rk1和Rg5。该发现为金属离子催化人参皂苷以制备稀有人参皂苷的方法奠定了理论基础。

基于网络药理学探讨人参皂苷Rb1治疗帕金森病的作用机制

目的:利用网络药理学技术探讨中药人参皂苷Rb1治疗帕金森病的作用机制,为人参皂苷Rb1的临床合理应用提供科学理论依据。方法:通过在SwissTargetPrediction、SEA以及SuperPred数据库中预测人参皂苷Rb1的靶点;使用关键词“Parkinson Disease”在GeneCards和Omim数据库中获得有关帕金森疾病的相关的靶点;将人参皂苷Rb1与帕金森病的靶点相互映射,作Veen图,从而获得交集基因;然后使用Cytoscape3.8.2软件构建“药物-作用靶点”网络;将韦恩图中与帕金森病相关的21个共有药物靶点导入String(https://string-db.org/)数据库中,进行蛋白-蛋白相互作用预测,从而预测出核心靶点。将人参皂苷Rb1治疗帕金森病的核心靶点导入到DAVID数据库中,得到GO分析结果和KEGG富集结果。利用AutoDock Vina对人参皂苷Rb1和关键靶点进行分子对接,验证其相互作用活性。结果:人参皂苷Rb1治疗帕金森病的核心靶点有4个,分别为BCL2L1、VEGFA、FGF2、KDR,相关通路28条。结合人参皂苷Rb1的生物学特性,发现人参皂苷Rb1治疗帕金森病可能是通过PI3K/Akt信号通路参与的生物调节过程,而此调节过程与细胞生物工程中的凋亡的相关机制密切相关。通过关键靶点与人参皂苷Rb1进行分子对接验证,靶点相互作用结合性高。结论:人参皂苷Rb1治疗PD可能是通过减少细胞凋亡的生物过程发挥作用,影响的相关的通路有PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、Notch信号通路,通过与BCL2L1、VEGFA、FGF2、KDR等靶点产生作用。

心肌纤维化中人参皂苷Rg1和分化抑制因子-2的作用

心血管疾病是影响全球预期寿命的重要因素,心肌纤维化是心血管疾病终末期的基础病理表现,也是心血管疾病的加重因素。中医药改善心肌纤维化效果显著,人参皂苷Rg1可通过多种机制减轻心肌纤维化。分化抑制因子2 (ID2)是多脏器纤维化的负性调控因子,其表达增高对肝、肺、肾小管等多组织纤维化起减轻作用。本文对人参皂苷Rg1改善心肌纤维化和Id2与心肌纤维化关系进行综述,为基于Id2靶点的中药干预提供思路。

人参皂苷Rg1抑制H_(2)O_(2)诱导人牙周膜细胞的凋亡及自噬

背景:课题组前期研究发现H_(2)O_(2)和人参皂苷Rg1能引起人牙周膜细胞活性氧水平发生变化,但活性氧和细胞凋亡、自噬的关系尚不清楚。目的:探索人参皂苷Rg1对H_(2)O_(2)诱导人牙周膜细胞凋亡和自噬的作用及机制。方法:将人牙周膜细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+Rg1组,其中人参皂苷Rg1(50μmol/L)预孵育24 h,H_(2)O_(2)处理2 h(500μmol/L)。CCK-8法检测细胞的增殖能力;荧光探针DCFH-DA检测细胞的活性氧水平;qRT-PCR、Western blot法检测血红素加氧酶1、凋亡相关因子Caspase-3、Bax、抗凋亡因子Bcl-2、自噬相关因子Beclin-1、P62、LC3、通路相关因子PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达。结果与结论:①与对照组比较,H_(2)O_(2)组人牙周膜细胞的增殖活力下降;与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+Rg1组人牙周膜细胞的增殖活力升高;②与对照组比较,H_(2)O_(2)组人牙周膜细胞内活性氧和血红素加氧酶1表达增加;与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+Rg1组人牙周膜细胞内活性氧和血红素加氧酶1表达降低;③与对照组比较,H_(2)O_(2)组人牙周膜细胞内Caspase-3、Bax、Beclin-1、LC3表达升高,Bcl-2、P62表达降低;与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+Rg1组人牙周膜细胞内Caspase-3、Bax、Beclin-1、LC3表达降低,Bcl-2、P62表达升高;④与对照组比较,H_(2)O_(2)组人牙周膜细胞内PI3K、AKT、mTOR表达降低;与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+Rg1组人牙周膜细胞内PI3K、AKT、mTOR表达升高;⑤结果提示:人参皂苷Rg1能够通过清除细胞内过量活性氧,上调PI3K/AKT/mTOR通路相关因子的表达,从而抑制H_(2)O_(2)诱导的人牙周膜细胞凋亡和自噬。

人参皂苷Rg1通过抑制TTR延缓X射线颅脑照射后小鼠海马衰老

目的探讨人参皂苷Rg1延缓X射线颅脑照射后小鼠海马衰老的可能机制。方法将40只C57BL/6J小鼠随机均分为空白对照组(Con组)、颅脑照射组(IR组)、人参皂苷Rg1预处理组(Rg1组)、人参皂苷Rg1预处理颅脑照射组(Rg1+IR组)。观察各组小鼠体质量、进食情况、活动状态、精神状态、毛色与大小便评估健康状况;采用Morris水迷宫评估小鼠认知能力;采用SA-β-Gal染色检测海马齿状回衰老细胞数量;采用转录组测序分析确定Rg1抗辐射衰老的靶点;采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测靶点的表达水平。结果与Con组相比,IR组小鼠体质量减轻、进食量减少、活动减少、精神倦怠、毛发灰暗、大便稀溏,出现明显的认知能力下降,海马齿状回衰老细胞增多(P<0.05)。与IR组相比,Rg1+IR组小鼠上述指标均有改善(P<0.05)。甲状腺素视黄质运载蛋白(TTR)为筛选出的最显著靶点。IR组小鼠海马中TTR表达较Con组升高(P<0.05),而Rg1+IR组TTR表达较IR组降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1可能通过抑制TTR延缓X射线颅脑照射后小鼠的海马衰老,从而保护认知能力。

人参皂苷Rg1通过抑制NLRP3炎症小体途径减轻氧糖剥夺/复供后小胶质细胞炎症反应

目的探讨人参皂苷Rg1通过NLRP3炎症小体途径对小胶质细胞氧糖剥夺/复供损伤后炎症反应的影响,并进一步研究其抗炎的作用机制。方法将生长状态良好的BV-2小胶质细胞随机分为6组:无处理组(Con),氧糖剥夺/复供组(OGD/R),人参皂苷Rg1低、中、高剂量组(剂量分别为0.1、0.2、0.4 mmol/L,简称Rg1L、Rg1M、Rg1H),MCC950对照组(0.05 mmol/L,MCC950)。采用CCK8法检测细胞增殖;免疫荧光和免疫印迹法检测经不同浓度人参皂苷Rg1和MCC950作用48 h后,BV-2小胶质细胞内NLRP3炎症小体相关蛋白的表达。ELISA检测BV-2小胶质细胞培养液中炎症因子IL-1β、IL-18的表达水平。结果与Con组比较,经缺氧缺糖/复供处理的BV-2小胶质细胞胞质内可见明显的Iba-1绿色荧光表达;OGD/R处理BV-2小胶质细胞2 h后,加入不同浓度人参皂苷Rg1和MCC950培养48 h后,细胞增殖率呈现明显的下降趋势。OGD/R组呈现明显的NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18阳性表达。Rg1L、Rg1M、Rg1H 3组NLRP3蛋白表达水平显著下降,并且随着药物浓度的升高,表达越低。结果表明,与OGD/R组相比,人参皂苷Rg1和MCC950可抑制活化的BV-2小胶质细胞表达NLRP3(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1可能通过抑制NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白的表达、干扰NLRP3炎症小体合成,进一步抑制相关炎症因子IL-1β和IL-18的表达水平,从而抑制炎症反应。

人参皂苷Rb1通过激活AMPK减轻大鼠创伤性骨关节炎

目的探讨人参皂苷Rb1(G-Rb1)治疗大鼠创伤性骨关节炎(PTOA)的分子机制。方法将大鼠分为假手术组、模型组、低、中、高剂量组和抑制剂组,每组12只。假手术组大鼠切开髌骨外侧皮肤后立即缝合伤口,其他组大鼠采用前十字韧带切断加半月板部分切除法建立PTOA动物模型。建模2 h后,假手术组和模型组大鼠灌胃2 mL生理盐水。低、中和高剂量组大鼠分别灌胃2 mL浓度为10,20,40 mg/(kg·d)的G-Rb1溶液。抑制剂组大鼠灌胃2 mL浓度为40 mg/(kg·d)的G-Rb1溶液,同时腹腔注射20 mg/(kg·d)AMPK抑制剂Compound C。各组大鼠均处理4周。采用苏木素伊红(HE)染色评价大鼠关节软骨形态。采用番红O/固绿染色法评价大鼠关节软骨退变,然后进行国际骨关节炎研究学会(OARSI)评分。采用TUNEL染色检测软骨细胞凋亡情况。通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。通过RT-qPCR测定大鼠软骨中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、CollagenⅡ、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、Runt相关转录因子2(Runx2)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的mRNA水平。通过Western blot测定大鼠软骨中AMP活化蛋白激酶α(AMPKα)的磷酸化水平。结果与模型组比较,低、中和高剂量组大鼠的软骨损伤和退变明显减轻,OARSI评分和软骨细胞TUNEL阳性率均剂量依赖性降低(P<0.05),血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平剂量依赖性降低(P<0.05),Bax和MMP-13的mRNA相对表达量均剂量依赖性降低(P<0.05),Bcl-2、CollagenⅡ、Runx2和BMP-2的mRNA相对表达量均剂量依赖性升高(P<0.05),AMPKα相对磷酸化水平剂量依赖性升高(P<0.05)。Compound C减弱了高剂量G-Rb1对PTOA大鼠的治疗效果(P<0.05)。结论G-Rb1通过激活AMPK减轻大鼠PTOA进程。

人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能、Janus激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路的影响。方法卵清蛋白致敏建立过敏性哮喘大鼠模型,造模成功的SD大鼠随机分成模型组、地塞米松组(0.5 mg/kg)、人参皂苷Rb1低剂量组(25 mg/kg)、人参皂苷Rb1高剂量组(50 mg/kg),每组14只。取14只健康大鼠设为对照组,各组腹腔注射相应药物处理14 d。酶联免疫吸附试验检测大鼠血清白细胞介素(IL)-4、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、免疫球蛋白(Ig)E水平,苏木素-伊红染色观察肺组织病理变化并进行肺损伤评分,分别采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和Western印迹法测定大鼠肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平。结果对照组肺组织结构正常,未观察到病理学改变;模型组肺组织出现肺泡壁充血和炎性细胞浸润的明显病理变化;地塞米松组、人参皂苷Rb1高剂量组肺组织损伤的严重程度明显减轻,炎性细胞浸润明显被抑制;人参皂苷Rb1低剂量组肺组织仍可见炎症反应,但较模型组程度轻。与对照组比较,模型组血清IL-4、TNF-α、IgE水平、肺损伤评分、肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平显著升高,IFN-γ水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、人参皂苷Rb1低、高剂量组血清IL-4、TNF-α、IgE水平、肺损伤评分、肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显降低,IFN-γ水平明显升高(P<0.05);人参皂苷Rb1高剂量组上述指标水平变化明显优于人参皂苷Rb1低剂量组(P<0.05);地塞米松组和人参皂苷Rb1高剂量组上述指标水平变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠具有治疗作用,可改善过敏性哮喘大鼠肺损伤,减轻炎症反应,提高免疫功能,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活有关。

人参总皂苷对博莱霉素诱导肺纤维化小鼠IL-6及IL-1β的影响

目的 研究人参总皂苷对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠肺组织中促炎细胞因子IL-6和IL-1β的影响。方法 随机将60只雄性昆明种小鼠分为正常对照组、模型组、以及阳性药吡菲尼酮组(100 mg/kg)和人参总皂苷(40、80、160 mg/kg)组;除正常对照组外,其余5组均通过气管单次滴注博莱霉素(3 mg/kg)构建小鼠肺纤维化模型。建模次日灌胃给药,每天1次,连续给药14 d,取肺组织观察其病理形态、肺部炎症和纤维化改变程度。检测肺纤维化小鼠肺组织中Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、白细胞介素-6(IL-6)以及白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白水平。结果 气管内单次滴注博莱霉素14 d后,模型组小鼠肺组织明显淤血实变,肺泡炎及肺纤维化明显,肺组织中COLⅠ、IL-6及IL-1β蛋白水平较正常对照组显著上调。与模型组相比,人参总皂苷及吡菲尼酮能够有效改善模型小鼠肺泡炎及肺纤维化程度,且明显减少肺组织中COLⅠ、IL-6及IL-1β蛋白水平。结论 人参总皂苷改善博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化与抑制炎症因子IL-6及IL-1β蛋白水平有关。

人参皂苷Rg1调节Nrf2/ARE信号通路对大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症的影响

目的探讨人参皂苷Rg1(GRg1)调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应原件(ARE)信号通路对大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的作用。方法将雌性孕SD大鼠随机分为正常组(Normal组)、ICP模型组(Model组)、低剂量GRg1组(GRg1⁃L组,20 mg/kg GRg1)、高剂量GRg1组(GRg1⁃H组,40 mg/kg GRg1)、高剂量GRg1+Nrf2抑制剂全反式维甲酸(ATRA)组(GRg1⁃H+ATRA组,40 mg/kg GRg1+10 mg/kg ATRA),每组12只。采用苯甲酸雌二醇、黄体酮联合注射的方式建立大鼠ICP模型。给药结束后ELISA法检测大鼠血清总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和总胆汁酸(TBA)、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、γ⁃干扰素(IFN⁃γ)和白细胞介素⁃1β(IL⁃1β)及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。HE染色观察大鼠肝切片的病理学变化。免疫印迹法检测大鼠肝组织Nrf2/ARE信号通路相关蛋白的表达。结果与Normal组相比,Model组大鼠血清ALT、AST、TBIL、ALP、TBA水平均显著升高(P<0.05),Normal组炎症因子TNF⁃α、IFN⁃γ、IL⁃1β和肝组织MDA水平[分别为(248.26±27.64)pg/mL、(153.68±18.47)pg/mL、(189.53±23.21)pg/mL和(2.89±0.36)nmol/mg]均较Model组大鼠[分别为(53.47±8.69)pg/mL]、(24.72±2.94)pg/mL、(46.89±6.82)pg/mL和(1.05±0.14)nmol/mg]显著升高(P<0.05),Normal组肝组织SOD水平和Nrf2、ARE蛋白表达水平[分别为(53.18±8.77)U/mg、0.34±0.03、0.40±0.04]均较Model组大鼠[分别为(128.95±16.34)U/mg、0.87±0.09、0.94±0.09]显著降低(P<0.05);与Model组相比,GRg1⁃L组、GRg1⁃H组大鼠相关指标变化与上述相反(P<0.05)。Nrf2抑制剂减轻了GRg1对ICP大鼠的治疗作用。结论GRg1可能通过激活Nrf2/ARE信号通路对大鼠ICP具有一定的治疗作用。

人参皂苷Rg1通过Sestrin2保护心肌细胞的作用

目的研究人参皂苷Rg1(G-Rg1)对抗心肌缺血再灌注损伤中Sestrin2的作用及相关机制。方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞,按实验要求随机分5组,分别为对照组,缺氧复氧组,G-Rg1组,缺氧诱导因子-1α(Hypoxia Inducible Factor-1,HIF-1,HIF-1α)抑制剂组,Sestrin2 siRNA干扰组。流式细胞术检测各组心肌细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量。蛋白质免疫印迹法检测HIF-1α、Sestrin2、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)、活化转录因子6(the activating transcription factor6,ATF-6)和跨膜蛋白激酶1(inositol requiring enzyme 1,IRE-1)蛋白表达。免疫荧光法检测Sestrin2、HIF-1α、IRE-1蛋白表达。结果与对照组相比,缺氧复氧组细胞内ROS水平、HIF-1α、Sestrin2、ATF-6、PERK、IRE-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与缺氧复氧组相比,G-Rg1组细胞内ROS水平明显降低(P<0.05),HIF-1α、Sestrin2、ATF-6、PERK、IRE-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与G-Rg1组比较,HIF-1α抑制剂组心肌细胞内ROS水平升高,Sestrin2蛋白表达明显下调(P<0.05);与G-Rg1组比较,siRNA干扰组心肌细胞内ROS水平升高,IRE-1表达明显升高(P<0.05)。结论G-Rg1通过上调Sestrin2表达,保护缺氧复氧心肌细胞,并维持内质网应激平衡稳态。

人参皂苷Rb1通过AMPK途径改善心力衰竭大鼠心脏能量代谢研究

目的:探讨人参皂苷Rb1(Gs-Rb1)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心脏能量代谢的影响,以及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)在其中的作用。方法:将阿霉素(Adr)诱导的心力衰竭大鼠随机分为CHF组、Gs-Rb1组、腺嘌呤9-β-D-阿拉伯呋喃糖苷(AraA)-1组、AraA-2组(AraA+Gs-Rb1),5’-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷(Aicar)-1组和Aicar-2组(Aicar+Gs-Rb1),每组5只,另外选取5只健康大鼠作为对照组。除CHF组和对照组腹腔注射等体积生理盐水外,余五组分别予相应药物腹腔注射。干预结束并经心脏超声心动图检查左心室射血分数(LVEF)后,分离左心室心肌组织并分别测定心肌细胞AMPK活性和高能磷酸盐底物水平。结果:与CHF组比较,Gs-Rb1组、Aicar-1组和Aicar-2组LVEF均显著升高(P<0.05),但AraA-1组、AraA-2组显著降低(P<0.05)。与CHF组比较,AraA-1组、AraA-2组AMPK活性显著降低(P<0.05),Gs-Rb1组、Aicar-1组和Aicar-2组AMPK活性均显著升高(P<0.05)。与CHF组比较,Gs-Rb1组、Aicar-1组和Aicar-2组的磷酸肌酸(PCr)、二磷酸腺苷(ADP)和三磷酸腺苷(ATP)水平均显著升高(P<0.05),且ATP/PCr显著提高(P<0.05),而ADP/ATP均显著降低(P<0.05)。结论:Gs-Rb1可能通过AMPK途径改善衰竭心脏的能量代谢,进而改善衰竭心脏的功能。

人参皂苷Rd通过调控lncRNA MAGI1-IT1表达影响结肠癌SW480细胞的增殖和凋亡

目的:探讨人参皂苷Rd对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测结肠癌组织及细胞中lncRNA MAGI1-IT1表达水平;结肠癌细胞SW480分为对照组、低、中、高剂量人参皂苷Rd组、si-MAGI1-IT1组、si-NC组、高剂量人参皂苷Rd+pcDNA-MAGI1-IT1组、高剂量人参皂苷Rd+pcDNA组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞术评价细胞增殖和凋亡;蛋白质印迹法检测增殖(CyclinD1、p21)、凋亡(Caspase3、Bcl-2、cleaved-Caspase3、Bax)相关蛋白表达。结果:MAGI1-IT1在结肠癌组织中表达水平升高(P<0.05);中、高剂量人参皂苷Rd处理SW480细胞后,增加G_(0)/G_(1)期比例、凋亡率,降低S期比例,降低CyclinD1、Caspase3、Bcl-2蛋白表达水平,增加p21、cleaved-Caspase3、Bax表达水平,MAGI1-IT1表达水平降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。下调lncRNA MAGI1-IT1后,SW480的G_(0)/G_(1)期比例、凋亡率增加,S期比例下降,降低CyclinD1、Caspase3、Bcl-2蛋白表达水平,增加p21、cleaved-Caspase3、Bax表达水平(P<0.05)。上调lncRNA MAGI1-IT1逆转了人参皂苷Rd对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响。结论:人参皂苷Rd通过下调lncRNA MAGI1-IT1表达抑制结肠癌SW480细胞的增殖,促进其凋亡。

人参皂苷Rg1调节miR-144-3p/FPR2/p38信号通路对实验性脑出血大鼠血脑屏障损伤和神经炎症的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1调节miR-144-3p对实验性脑出血大鼠神经炎症和血脑屏障损伤的影响,以及对甲酰基肽受体2(FPR2)/p38通路的调控作用。方法:90只SD大鼠随机分为对照组、脑出血组、人参皂苷Rg1低剂量组(10 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量组(40 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量+ago-miR-144-3p组(40 mg/kg人参皂苷Rg1+ago-miR-144-3p),每组18只,除对照组外均通过右侧尾状核注射胶原酶Ⅱ法构建实验性脑出血大鼠模型,按照各组要求腹腔注射给药以及脑内注射给药。对大鼠神经功能损伤进行评分;干湿比重法测定大鼠脑含水量;ELISA检测大鼠脑组织匀浆TNF-α、IL-6、IL-1β水平;电镜观察脑水肿周围超微结构;伊文思蓝(EB)法测定大鼠血脑屏障通透性;qRT-PCR与Western blot测定miR-144-3p/FPR2/p38通路表达。结果:与对照组相比,脑出血组大鼠血脑屏障损伤加重,大鼠神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达增加(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与脑出血组相比,人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组大鼠血脑屏障损伤减轻,神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达降低(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);ago-miR-144-3p可逆转人参皂苷Rg1对大鼠血脑屏障、神经炎症的保护作用(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可能通过调控miR-144-3p/FPR2/p38轴抑制大鼠血脑屏障损伤及神经炎症。