产β-葡萄糖苷酶酵母菌的分离鉴定及其在人参皂苷Rg3转化中的应用

筛选产β-葡萄糖苷酶的微生物及其在转化人参皂苷Rg3中的应用。kefir粒发酵人参后,采用改良七叶苷琼脂培养基筛选产β-葡萄糖苷酶的微生物,并结合菌落形态以及26S rDNA D1/D2区核酸序列鉴定。结果发现1株在七叶苷琼脂培养基上呈黑色水解斑的微生物,经分子生物学鉴定,该菌种为马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)。在单因素试验基础上,应用Box-Behnken设计原理,设计人参-水质量比、发酵时间、接种量3因素3水平响应面试验,优化马克斯克鲁维酵母发酵人参,转化人参皂苷Rg3的发酵条件,建立回归模型。优化后的发酵条件为人参-水质量比1∶2.65、接种量2.94%、发酵时间3 d,该条件下人参皂苷Rg3含量为3.31 mg/g,转化率为248%。该结论为全组分人参发酵食品工业化生产提供理论数据。

UPLC法测定木鳖子药材中丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的含量

目的:建立UPLC法测定木鳖子中丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯含量的方法,并对不同产地样品进行测定。方法:Waters BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,线性梯度洗脱;流速0.25 m L/min,柱温30℃,检测波长203 nm。结果:丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯浓度与峰面积在0.35~5.60μg之间线性关系良好(r=0.999 6),加样回收率为97.98%,RSD为1.60%。结论:该方法简便、快捷、重复性好,可用于木鳖子药材的质量控制。

GS0202菌产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶条件及其酶的反应条件

为提高Arthrobacter chlorophenolicus GS0202菌所产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3的能力,采用单因素研究方法,对菌体发酵条件,及其所产酶的酶反应条件进行了研究。结果表明,菌体发酵的最适培养基组成为胰蛋白胨10 g,酵母粉5 g,氯化钠10 g,水1 L;诱导物为人参总皂苷,其加入量为3.2 mg/mL,培养温度为28℃;酶反应的最适条件为25℃,pH 4,底物质量浓度为3 mg/mL。

微波法提取木鳖子中丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的工艺研究

目的:建立木鳖子中丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的微波提取方法,为木鳖子药材的进一步开发利用提供实验依据。方法:实验采用微波提取技术,以丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯含量为指标,考察乙醇浓度、微波功率、提取时间及提取温度对提取工艺的影响。结果:丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的线性范围为0.024~0.120 mg,平均加样回收率为100.2%。微波提取的最佳提取工艺为35%乙醇65℃,400 w提取12 min,平均提取率为0.267%。结论:微波法提取木鳖子中丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的方法可靠稳定,优选出的提取工艺简单、节能、省时可行。

木鳖子中丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯测定

建立测定木鳖子中丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯高效液相色谱法,并对木鳖子不同部位进行测定。色谱条件为Agilent HC-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,甲醇-φ(甲酸)=0.2%水溶液(体积比为78∶22)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长210nm,室温测定。结果显示丝石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯质量浓度在6.44×10-2~1.03mg/mL呈良好线性关系(r=0.999 7)。该方法操作简便、重复性好、准确性好,可用于木鳖子药材炮制方法研究过程中的质量控制。

利用重组酶高效转化制备稀有人参皂苷C-Mc1和C-Mc

为了高效制备稀有人参皂苷C-Mc和CMc1,调取了Terrabacter ginsenosidimutans中的人参皂苷酶基因,构建载体GST-bgpA,并转化到Escherichia coli C41(DE3)中表达,得到人参皂苷3-O-β-D-葡萄糖苷酶。该酶分子质量为72.4 kDa,转化人参皂苷Rc的最适pH为7.0,最适温度为40℃,米氏常数K_(m)值为6.25 mmol/L,V_(m)值为19.6 mmol/(h·L)。为了降低成本,利用粗酶转化人参皂苷Rc制备C-Mc1和C-Mc。粗酶制备C-Mc1的反应条件:20 g/L的人参皂苷Rc在40℃下酶反应24 h;制备C-Mc的反应条件:5 g/L的人参皂苷Rc在40℃下酶反应60 h。此条件下,粗酶转化制备并分离纯化得到C-Mc1和C-Mc的单体,并经HPLC检测,其纯度均在90%以上。C-Mc1的酶转化制备:产物得到C-Mc和C-Mc1,其摩尔得率分别为74.9%和11.1%。C-Mc的酶转化制备:C-Mc的摩尔得率为93.2%。该研究为稀有人参皂苷C-Mc和C-Mc1产业化提供了依据。

拟人参皂苷F_(11)在大鼠体内的药物代谢研究

目的 探讨拟人参皂苷F11在大鼠体内的药物代谢产物及其过程。方法 ip拟人参皂苷F11后 ,应用TLC分析排泄物中的代谢产物 ,并利用制备薄层分离制备代谢产物 ,通过波谱解析 (MS ,1HNMR ,13CNMR ,1H 1HCOSY)确定其结构。结果 从粪便中分离鉴定了 3种代谢产物 ,分别为拟人参皂苷RT5,ocotillol和 1个新的代谢产物F 3 1,并确定其结构为 6 O α L 吡喃鼠李糖基 ( 1- 2 ) β D 吡喃葡糖基 ( 2 0S ,2 3S ,2 4R) 达玛 2 0 ( 2 4 ) 环氧 3 β ,6α,12 β,2 3 ,2 5 五醇 ( 6 O α L rhamnopyranosyl ( 1- 2 ) β D glucopyranosyl ( 2 0S ,2 3S ,2 4R) dammar 2 0 ( 2 4 ) epoxy 3 β ,6α,12 β ,2 3 ,2 5 pentanol)。但在尿液和胆汁中并未发现任何代谢产物。 结论 拟人参皂苷F11不被肝脏代谢 。

生藤中新甾体皂苷衍生物的结构鉴定

目的 研究生藤的化学成分。方法 利用各种色谱技术分离纯化 ,通过理化常数测定和波谱方法鉴定其结构。结果 从生藤茎的 95 %Et OH提取物中分离得到 7个化合物 ,其结构经波谱等方法鉴定为 β-谷甾醇 - 3- O- β- D-葡萄糖苷 - 6′- O-二十烷酸酯 ( ) ,2α,3β,2 3-三羟基 -齐墩果 - 12 -烯 - 2 8-酸 ( ) ,2α,3β,2 3-三羟基 -乌苏 - 12 -烯 - 2 8-酸( ) ,β-谷甾醇 - 3- O- β- D-葡萄糖苷 ( ) ,硬脂酸 ( ) ,葡萄糖 ( )和蔗糖 ( )。结论 所有化合物均为首次从该植物中分离得到 ,其中化合物 为 1新化合物。

人参根三醇组皂苷元25-OH-PPT、25-OCH_3-PPT、PPT、PT的HPLC/ELSD法测定及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

目的建立25-OH-PPT、25-OCH_3-PPT、PPT、PT同步检测的方法;从人参根皂苷水解产物中筛选发现具有降血糖活性的三醇组皂苷元。方法采用HPLC-ELSD法测定25-OH-PPT、25-OCH_3-PPT、PPT、PT;采用体外实验测定4种皂苷元对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果 HPLC-ELSD测定结果表明,25-OH-PPT、25-OCH_3-PPT、PPT、PT在0.05~1.0 mg具有良好的线性关系,回收率分别为95.0%、98.4%、103.3%和96.0%,RSD分别为1.05%（n=4）、1.87%（n=4）、2.15%（n=4）和1.15%（n=4）,质量分数分别为8.07%、4.55%、1.46%和4.53%。4种皂苷元对α-葡萄糖苷酶呈现出不同强度的抑制活性,25-OH-PPT抑制活性强于阿卡波糖。结论 4种皂苷元降血糖活性强弱顺序为25-OH-PPT〉25-OCH_3-PPT〉PPT〉PT。HPLC/ELSD测定方法简单、快速、有效。

穿山龙中原薯蓣皂苷杂质的分离与鉴定

目的对穿山龙Dioscorea nipponica Makino中原薯蓣皂苷所含杂质的化学成分进行研究。方法从穿山龙提取物中得到原薯蓣皂苷粗品,再采用大孔吸附树脂、制备HPLC法进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分得3个杂质,经鉴定分别为黄山药皂苷H(dioscoreside H,1)、原纤细薯蓣皂苷(protogracillin,2)和26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-呋甾烷-5-烯-3β,22ξ,26-三醇-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(26-O-β-D-glucopyranosyl-[25R]-furost-5-en-3β,22ξ,26-triol-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl{1→4}-β-D-glucopyranoside,3)。结论化合物1和3为首次从穿山龙中分离得到。

20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-20(S)-原人参二醇对抗肝癌药物的增敏作用研究

目的探讨20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-20(S)-原人参二醇(人参皂苷IH901)与医学上常用抗肝癌药物环磷酰胺(CTX)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(cDDP)单独用药及联合用药体外抗肝癌细胞Bel-7402、SMMC-7721的活性。方法应用MTT法检测人参皂苷IH901、CTX、5-FU、cDDP分别在不同质量浓度下单独及联合用药对肝癌细胞的增殖抑制率,并根据金氏公式计算其协同指数(Q值),进而评价两药联用的增敏效果。结果 IH901与CTX联合用药后对Bel-7402、SMMC-7721抑制作用明显增强,且二者合用具有协同作用;而IH901与5-FU联合用药后对2种细胞仅相加效果;IH901与cDDP联合用药,对Bel-7402仍然是相加的效果,对SMMC-7721则是具有轻微的协同效果。结论人参皂苷IH901可增强CTX对肝癌细胞增殖的抑制作用,具有化疗协同效果,且具有一定的广谱性,可能成为一种潜在的抗肝癌药物。

粪箕笃中皂苷的分离纯化

目的:研究粪箕笃的皂苷类化学成分,寻找新的活性物质。方法:用硅胶柱色谱进行分离,通过光谱分析(HPLC-MS,1HNMR,13CNMR)鉴定其化学结构。结果:从粪箕笃提取物中分离得到1种皂苷,其化学结构鉴定为β-谷甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(1)。结论该化合物为从本属植物中分得。

麦冬药材中6种麦冬皂苷的质量分数测定

建立HPLC法同时测定麦冬药材中penogenin-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1-2)-β-D-葡萄糖苷、去木糖-14-hydro sprengerinin C、麦冬皂苷Ra、penogenin-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1-2)-β-吡喃木糖(1-4)-β-D-葡萄糖苷、14-hydro sprengerinin C和慈溪麦冬皂苷A 6种麦冬皂苷的质量分数。色谱条件为lunna NH2色谱柱(4. 6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-水(90∶10),流速1. 0m L/min,检测波长208 nm,柱温为室温。该条件下上述6种麦冬皂苷线性范围分别为0. 96~9. 60μg/m L,0. 92~9. 20μg/m L,0. 97~9. 70μg/m L,0. 94~9. 40μg/m L,1. 04~10. 40μg/m L,0. 92~9. 20μg/m L。在相应线性范围内线性相关系数均大于0. 999 1;方法回收率为98. 59%~101. 77%,RSD为1. 15%~1. 98%。所建方法可用于麦冬药材及相关制剂中麦冬皂苷的测定。

产人参皂苷转化β-葡萄糖苷酶乳酸菌菌株的筛选

为筛选出具有人参皂苷生物转化作用的乳酸菌菌株,以七叶苷-MRS琼脂为底物从发酵食品中分离出产β-葡萄糖苷酶的乳酸菌,从中选择酶活性较高的菌株,进一步研究其产酶的特点及性质。结果表明,分离的27株乳酸菌中有3株具有β-葡萄糖苷酶活性,对其鉴定结果均为植物乳杆菌。比较粗酶液活性,筛选出酶活性最高的植物乳杆菌菌株E59,该菌株在培养时间为12h时β-葡萄糖苷酶产酶活性达到最高,粗酶液的最适pH为5.5,最适温度为37℃。实验确定该菌株能将人参皂苷Rb1转化成稀有皂苷Rg3。随着人参被批准为新资源食品,此菌株产β-葡萄糖苷酶将应用于人参皂苷Rb1的生物转化,为人参食品的开发和利用,扩大人参的消费市场具有较高的应用前景。

花色苷对LO2细胞核受体报告基因的影响

研究花色苷矢车菊素-3-O-β-D-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-β-D-glucoside,C3G)及其苷元矢车菊素(cyanidin)对代谢综合征紧密相关的一系列核受体转录活性的影响。将维甲酸X受体(RXR)、孕烷X受体(PXR)、雌激素受体(ER)、法尼醇X受体(FXR)、肝脏X受体α和β(LXRα,LXRβ)、3种过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARα、PPARγ、PPARδ)等核受体-萤光素酶报告基因和绿色荧光蛋白基因内参转染至人肝细胞LO2建立模型,分别以1、10、100μmol/L的Cyanidin或C3G干预培养细胞24h,筛选可被Cyanidin或C3G激活的核受体类型。结果显示,与溶剂对照组(0.1%DMSO)相比,3种浓度的Cyanidin对RXR都有抑制作用,但是仅在100μmol/L浓度条件下对PXR有较弱的激活作用(1.42±0.19,P<0.05);C3G则对PXR、ER、LXRα、LXRβ、PPARγ、PPARδ等多种核受体有激活作用(P<0.05),其中对PXR、LXRα、LXRβ、PPARγ等核受体的激活倍数超过对照组50%以上。实验结果提示,花色苷改善代谢综合征的作用机制可能与它对一系列细胞核受体的激活作用有关;比较Cyanidin和C3G对核受体的激活能力,发现C3G的作用效果强于其苷元Cyanidin。

人参皂苷Rg_3及人参皂苷Rh_2在肠道菌群失调大鼠体内的药动学研究

目的 研究人参皂苷Rg3及其脱糖基代谢物人参皂苷Rh2在林可霉素诱导的肠道菌群失调大鼠体内的药动学特征。方法 建立同时测定大鼠血浆中人参皂苷Rg3及人参皂苷Rh2的LC-MS/MS分析方法，并进行专属性、线性、回收率、准确度、精密度的考察。采用ig林可霉素诱导菌群失调大鼠模型，测定正常大鼠及模型大鼠粪便含水量及β-葡萄糖苷酶活性。正常大鼠及肠道菌群失调大鼠分别ig给予人参皂苷Rg3（20 mg/kg），于不同时间点眼眶取血测定血药浓度。结果 与对照组比较，模型组大鼠粪便含水量显著增加（P〈0.01），β-葡萄糖苷酶活性显著降低（P〈0.01）；大鼠血浆中人参皂苷Rg3的Cmax、AUC0~∞值均有所升高，但不具有显著性差异；而其活性代谢物人参皂苷Rh2的Cmax、AUC0~t值与对照组相比显著降低（P〈0.01）。结论 肠道菌群失调对人参皂苷Rg3的药动学行为影响较小，但显著改变了其活性代谢物人参皂苷Rh2的药动学，可能与菌群失调后导致大鼠肠道菌大幅下降进而影响了人参皂苷Rg3的肠道脱糖代谢有关。

人参皂苷IH901对ECV304细胞增殖和迁移的影响及其分子机制

本文探讨人参皂苷20-O-(β-D-吡喃葡萄糖)-20(S)-原人参二醇皂苷(IH901)对ECV304细胞的增殖和迁移的抑制作用。以不同浓度的IH901体外作用ECV304细胞,采用MTT法检测IH901对ECV304细胞生长的抑制效果和对基质黏附能力的影响,显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率,划痕法检测细胞的迁移能力,ELISA检测试剂盒检测VEGF和bFGF在ECV304细胞中的表达,Western blotting检测被激活的cleaved caspase-9和cleaved caspase-3两种蛋白的表达量。结果表明,人参皂苷IH901可能通过抑制ECV304细胞分泌VEGF和bFGF,并上调促凋亡蛋白cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达,从而使得细胞被阻滞在G0/G1期,并且在形态学上观察到典型的细胞凋亡变化,如细胞皱缩,体积变小,伴随核固缩,最终导致人参皂苷IH901对ECV304细胞与细胞外基质黏附能力和细胞迁移能力有明显的抑制作用,且呈时间和浓度依赖关系。

茶条槭叶化学成分的分离鉴定及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

目的研究茶条槭Acer tataricum subsp.ginnala树叶80%乙醇提取物中的化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性。方法实验采用硅胶,ToyopearlHW-40c、SephadexLH-20凝胶和制备液相色谱等手段进行分离纯化,并应用1H-NMR、13C-NMR、MS等波谱技术鉴定了化合物结构,并对部分单体化合物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性测试。结果从茶条槭叶的乙酸乙酯和正丁醇部位中分离得到23个化合物,分别鉴定为maplexinB(1)、3″-O-galloyl-benzyl-O-α-Lrhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(2)、没食子酸甲酯(3)、没食子酸(4)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(5)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(6)、槲皮素-3-O-β-D-来苏糖苷(7)、槲皮素-3-O-(2″-没食子酰基)-α-L-鼠李糖苷(8)、槲皮素-3-O-(2″-O-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷(9)、槲皮素-3-O-(6″-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷(10)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(11)、槲皮素-3-O-(2″,6″-二-O-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷(12)、3,6-di-O-没食子酰基-1,5脱水葡萄糖醇(13)、槲皮素-3-O-(2″-O-没食子酰基)-α-L-阿拉伯糖苷(14)、山柰酚-3-O-(2″-没食子酰基)-α-L-鼠李糖苷(15)、山柰酚-3-O-(6″-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷(16)、槲皮素(17)、山柰酚(18)、1-p-香豆酰基-β-D-葡萄糖苷(19)、茶条槭素B(20)、茶条槭素C(21)、茶条槭素A(22)、槲皮素-3-O-(2″-O-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷(23)。结论化合物1、2、10、12、16、19为首次从本植物分离得到,化合物2、10、12、16、19同时为本科植物中首次分离得到。化合物8、12、14~16具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

HPLC波长转换法同时测定益心康片中三七、人参和何首乌的含量

目的 HPLC波长转换法同时测定益心康片中人参、三七和何首乌的含量。方法采用高效液相色谱法,C18柱,以乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为1. 0mL·min-1;检测波长为320nm 0~18min和203nm 18~80min;柱温30℃。结果三七皂苷R1在0. 464 8~4. 648μg线性关系良好(r=0. 9993),平均加样回收率为99. 1%,RSD 0. 95%(n=6);人参皂苷Rg1在0. 368 1~3. 680 8μg线性关系良好(r=0. 9994),平均加样回收率为99. 2%,RSD 0. 87%(n=6);人参皂苷Rb1在0. 3744~3. 744μg线性关系良好(r=0. 9993),平均加样回收率为99. 0%,RSD 0. 91%(n=6); 2,3,5,4'四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0. 15237~1. 5237μg线性关系良好(r=0. 9999),平均加样回收率为99. 0%,RSD 0. 92%(n=6)。结论该方法简便、准确,可用于测定益心康片的含量。

东北刺人参根部的酚苷成分

目的研究东北刺人参Oplopanax elatus的亲水性成分及其抗结直肠癌活性。方法利用大孔树脂,正、反相硅胶柱及制备HPLC色谱方法分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构;并进行HCT-116和HT-29细胞增殖活性测定。结果从东北刺人参干燥根提取物正丁醇部位分离并鉴定了11个酚苷化合物,其中6个苯丙素苷成分:3,5-二甲氧基肉桂酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(1)、3-羟基二氢肉桂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷(2)、3-甲氧基肉桂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷(3)、3-甲氧基二氢肉桂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷(4)、3,5-二甲氧基二氢肉桂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷(5)、3,5-二甲氧基肉桂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷(6);5个木脂素苷成分:3,3′-二甲氧基-4,9,9′-三羟基-4′,7-环氧-5′,8-木脂素-4,9-O-β-D-二葡萄糖苷(7)、(+)-5,5′-二甲氧基落叶松脂素-4′-O-β-D-葡萄糖苷(8)、(+)-异落叶松脂素-9′-O-β-D-葡萄糖苷(9)、(+)-异落叶松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷(10)、(+)-5,5′-二甲氧基落叶松脂素-9′-O-β-D-葡萄糖苷(11)。所有酚苷对HCT-116和HT-29细胞增殖均无明显抑制作用(IC50>100μmol/L)。结论化合物4、6、9、11均为首次从该植物中分离得到,化合物1、2和10首次从该属植物中分离得到。