基于网络药理学探讨人参皂苷Rb1治疗帕金森病的作用机制

目的:利用网络药理学技术探讨中药人参皂苷Rb1治疗帕金森病的作用机制,为人参皂苷Rb1的临床合理应用提供科学理论依据。方法:通过在SwissTargetPrediction、SEA以及SuperPred数据库中预测人参皂苷Rb1的靶点;使用关键词“Parkinson Disease”在GeneCards和Omim数据库中获得有关帕金森疾病的相关的靶点;将人参皂苷Rb1与帕金森病的靶点相互映射,作Veen图,从而获得交集基因;然后使用Cytoscape3.8.2软件构建“药物-作用靶点”网络;将韦恩图中与帕金森病相关的21个共有药物靶点导入String(https://string-db.org/)数据库中,进行蛋白-蛋白相互作用预测,从而预测出核心靶点。将人参皂苷Rb1治疗帕金森病的核心靶点导入到DAVID数据库中,得到GO分析结果和KEGG富集结果。利用AutoDock Vina对人参皂苷Rb1和关键靶点进行分子对接,验证其相互作用活性。结果:人参皂苷Rb1治疗帕金森病的核心靶点有4个,分别为BCL2L1、VEGFA、FGF2、KDR,相关通路28条。结合人参皂苷Rb1的生物学特性,发现人参皂苷Rb1治疗帕金森病可能是通过PI3K/Akt信号通路参与的生物调节过程,而此调节过程与细胞生物工程中的凋亡的相关机制密切相关。通过关键靶点与人参皂苷Rb1进行分子对接验证,靶点相互作用结合性高。结论:人参皂苷Rb1治疗PD可能是通过减少细胞凋亡的生物过程发挥作用,影响的相关的通路有PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、Notch信号通路,通过与BCL2L1、VEGFA、FGF2、KDR等靶点产生作用。

人参皂苷Rg1治疗多发性骨髓瘤的网络药理学预测与验证

目的:利用网络药理学和体外细胞实验,探究人参皂苷Rg1治疗多发性骨髓瘤(MM)的作用机制。方法:利用TTD、DisGeNet、GeneCards、PharmGKB、PubChem、Super-PRED、PharmMapper预测MM靶标,利用CTD和SymMap数据库预测人参皂苷Rg1靶标,取交集靶点构建蛋白质-蛋白质相互作用网络。基于基因本体(GO)和KEGG-pathway数据库,富集Rg1治疗MM的主要生物功能和信号通路。分子对接验证核心靶点与Rg1之间的结合能力。利用CCK-8、流式细胞术、Western blot实验,分别检测不同剂量人参皂苷Rg1(5、10、20μmol/L)对RPMI 8226细胞的细胞活性、凋亡率、ROS水平及核心作用靶点Caspase3、Bax、Bcl-2、和NF-κB p65的相对表达。结果:筛选得到215个Rg1-MM靶点。GO和KEGG富集分析提示Rg1改善MM的作用机制可能涉及氧化应激、细胞凋亡及炎症相关信号通路。分子对接提示Rg1可能通过调控NFKB1、STAT3、AKT1、MAPK3、CASP3、BCL2等靶点发挥效用。体外实验表明,与对照组比较,Rg1组(5、10、20μmol/L)可显著抑制RPMI 8226细胞增殖(P<0.01)、促进细胞凋亡(P<0.01)和ROS产生(P<0.01),同时抑制NF-κB信号通路的活化(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1对MM有潜在的治疗作用,能够调节RPMI 8226细胞的氧化应激、细胞凋亡和增殖,其作用机制涉及对NF-κB信号通路的调控。

基于网络药理学和分子对接技术探究人参皂苷Rb_(1)抗脑缺血再灌注损伤的作用机制

目的:通过网络药理学和分子对接技术寻找人参皂苷Rb_(1)抗脑缺血再灌注损伤的可能作用机制,为今后实验研究提供一定的理论依据。方法:通过SuperPred数据库获取人参皂苷Rb_(1)相关作用靶点,利用GEO、GeneCards和OMIM数据库获取脑缺血再灌注损伤的异常表达分子,通过交集分析获得人参皂苷Rb_(1)作用于脑缺血再灌注损伤的可能靶点。对所选靶点进行蛋白-蛋白相互作用网络构建、GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析,获得有效靶点的基因和信号通路。最后运用AutoDock软件对关键靶点与人参皂苷Rb_(1)进行分子对接,获得最佳结合靶点。结果:在SuperPred数据库中获得人参皂苷Rb_(1)的潜在作用靶点163个,在GeneCards和OMIM数据库中获得脑缺血再灌注损伤的潜在作用靶点228个,分析后获得14个人参皂苷Rb_(1)与脑缺血再灌注损伤的交集靶点。GO功能富集分析得150个条目,KEGG信号通路富集分析得24条信号通路。分子对接结果显示,人参皂苷Rb_(1)与NFKB1和STAT3有较强的亲和力。结论:人参皂苷Rb_(1)可能通过NFKB1和STAT3信号通路产生抗脑缺血再灌注损伤作用。

基于网络药理学探讨人参皂苷Rg1对神经母细胞瘤作用机制

目的:从网络药理学角度探讨人参皂苷Rg1与神经母细胞瘤(NB)的核心靶点及其分子作用机制。方法:利用PharmMapper等数据库筛选Rg1治疗NB的作用靶点并进行GO/KEGG富集分析、核心靶点筛选、Hub基因预后模型以及分子对接模型,分析Hub基因在神经母细胞瘤作用机制。结果:初步筛选出Rg1-NB交集靶点129个,GO、KEGG分析结果发现Rg1可能通过PI3K/Akt、MAPK、JAK/STAT信号通路影响神经母细胞瘤增殖、迁移、凋亡等生物过程;PPI互作聚类分析结果表明,Rg1可能通过调控细胞凋亡、生物节律、酪氨酸蛋白激酶等发挥治疗作用;通过对Rg1治疗NB作用靶点进行Hub基因筛选以及基因、表型分析,发现Rg1治疗Hub基因为AKT1、MTOR、STAT3,进一步预后模型分析发现STA3高表达组的NB患者的生存率显著高于低表达,说明STAT3为预后保护因素,且Rg1与STAT3有9个结合位点,结合自由能为-6.57 kcal/mol,结合效果较好。结论:通过数据库筛选出3个人参皂苷Rg1治疗神经母细胞瘤核心靶点依次为AKT1、MTOR、STAT3,进一步通过建立核心基因预后模型、分子对接实验及GO、KEGG分析表明,人参皂苷Rg1可能通过JAK/STAT信号通路发挥功能,影响神经母瘤细胞的发展,为Rg1治疗神经母细胞瘤分子机制、药物靶点的选择及新型治疗技术的开发提供一定的参考和理论依据。

基于网络药理学、分子对接和体外实验探讨人参皂苷Rg1对心肌缺血再灌注损伤的作用机制

目的 利用网络药理学、分子对接技术与体外实验的方法研究人参皂苷Rg1治疗心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury, MIRI)的潜在作用机制。方法 借助Swiss Target Prediction、Drug Bank、Pharm Mapper数据库查找人参皂苷Rg1潜在作用靶点,借助Disgenet、Genecard、OMIM查找MIRI的疾病靶点,借助韦恩图获取共同靶点;借助STRING数据库和Cytoscape v.3.7.0软件构建可视化的蛋白互作网络模型并筛选出核心靶点,将核心靶点导入DAVID数据库进行GO功能和KEEG通路富集分析,预测人参皂苷Rg1治疗MIRI的潜在作用机制;借助AutoDock vina软件将核心靶点进行分子对接;利用H9c2细胞进行糖氧剥夺6小时后复氧18小时模拟体内MIRI过程;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶(serine/threonine-protein kinase, Akt)、热休克蛋白90α(heat shock protein HSP 90-alpha, HSP90AA1)、淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白的表达。结果 人参皂苷Rg1的潜在作用靶点有147个,MIRI的疾病靶点有2357个,共同靶点有38个;PPI结果筛选出的核心靶点有信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、Akt1、HSP90AA1、Akt2、一氧化氮诱导合成酶(nitric oxide synthase, inducible, NOS2)、成纤维细胞生长因子2、细胞因子信号传导抑制剂3、凋亡调节因子、72 kDa IV型胶原酶;GO分析富集条目183条,分子功能30条,生物学过程130条,细胞组份23条;KEEG通路富集分析涉及磷脂酰肌醇3-激酶/Akt信号通路、肿瘤信号通路、Rap1信号通路、肿瘤相关病毒感染通路、化学致癌受体活化通路、Relaxin信号通路、化学致癌受体活化通路机制;分子对接结果显示人参皂苷Rg1与核心靶蛋白STAT3、Akt1、HSP90AA1、Akt2、NOS2均能稳定对接;体外实验结果显示,与模型组相比较,人参皂苷Rg1组的细胞凋亡率显著下降(P<0.05);蛋白免疫印迹法结果显示,与模型组相比较,人参皂苷Rg1组的Akt、抗凋亡蛋白Bcl-2增加,HSP90AA1下降(P<0.05)。结论 人参皂苷Rg1治疗MIRI的作用机制主要与激活PI3K/Akt信号通路,调节Akt、HSP90AA1、Bcl-2蛋白表达量有关。

基于网络药理学探究三七皂苷Ft1和Fc治疗血栓的潜在位点分析

为探讨三七中活性成分三七皂苷Ft1和Fc治疗血栓疾病的作用机制,通过Swiss Target Prediction、Super-pred、BindingDB数据库检索三七Ft1、Fc靶点,在OMIM、Gene Cards、Drug Bank数据库中检索与血栓疾病发生相关靶点,借助Venny网站和STRING数据库建立靶蛋白互作网络模型,使用Centiscape 2.2进行拓扑参数分析,并且对三七Ft1和Fc核心靶点进行GO、KEGG通路富集分析,最后进行分子对接验证。结果表明,三七皂苷Ft1、Fc分别有90和149个预测靶点,4303个与血栓疾病发生相关靶点,维恩图分析核心靶点分别为14和18个,其中三七Ft1与其核心靶点STAT3、VEGFA、HSP90AA1紧密结合,三七Fc与其核心靶点STAT3、VEGFA、CXCR4紧密结合。基于网络药理学,探讨三七皂苷Ft1和Fc治疗血栓多靶点和多途径的特性,为三七皂苷Ft1和Fc治疗血栓疾病的研究提供了新思路。

基于网络药理学及分子对接的人参皂苷调控肿瘤免疫物质基础

人参皂苷具有化学多样性,增强肿瘤免疫认知尚不系统,因此有必要系统揭示人参皂苷增强肿瘤免疫物质基础及作用机制。采用网络药理学和分子对接方法,构建人参皂苷化学成分数据库,进行活性成分筛选并调控肿瘤免疫潜在作用机制。实验结果显示,共收集到414个人参皂苷,其中57个具有潜在活性。靶点预测结果表明,57个人参皂苷与肿瘤免疫交集靶点为139个。GO和KEGG通路富集分析获得577个GO项目和145条KEGG通路。分子对接结果显示,人参皂苷Rh3与RORC、20(S)-Rg3与VEGFA依靠氢键作用力表现出较强的结合活性,结合能分别为-11.003和-8.849 kJ/mol。机制分析结果表明,139个交集靶点作用于PI3K/Akt、Jak/Stat、MAPK相关通路调控肿瘤免疫。

基于网络药理学探索人参皂苷Rd抗结肠癌的关键靶点及作用机制

目的:通过网络药理学联合分子对接技术,探讨人参皂苷Rd抗结肠癌的分子机制。方法:在Swiss Target Prediction数据库中搜索参皂苷Rd搜索对应靶点的活性成分,从GeneCards数据库及OMIM数据库筛选结肠癌的靶点,将交集靶点进行功能富集和生物学途径分析,通过Cytoscape软件绘制蛋白质互作网络(PPI),并将排序前4的核心靶点与人参皂苷Rd的进行分子对接。结果:通过网络药理学分析发现人参皂苷Rd治疗结肠癌的关键靶点为44个;本体富集(GO)分析结果显示,包括2 406个生物过程(BP)、48个细胞成分(CC)和169个分子功能(MF);京都基因与基因组百科全书(KEGG)结果发现了91个信号通路。将排列前4的核心靶点与人参皂苷Rd进行分子对接,结果表明人参皂苷Rd对关键靶点具有有效的结合热。结论:MMP9、IL2、NR3C1、JUN、PTGS2、STAT3、PRSS1、F2RL1、CYP27B1和F2是人参皂苷Rd治疗结肠癌的关键靶点,可能通过PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、Wnt信号通路等抑制结肠癌,后续可通过基础实验进一步验证。

基于网络药理学和分子对接技术探究人参皂苷Rh2治疗肺纤维化的作用机制

为了考察人参皂苷Rh2治疗肺纤维化的作用机制,采用网络药理学和分子对接技术探究了人参皂苷Rh2治疗肺纤维化的作用靶点及其作用机制.网络药理学分析显示:人参皂苷Rh2的靶点共有70个,肺纤维化的靶点共有2963个,药物和肺纤维化病的交集基因共有50个,药物治疗肺纤维化的核心靶点共有10个.人参皂苷Rh2治疗肺纤维化的生物学通路和功能分析分别有122条和361条.分子对接结果显示,人参皂苷Rh2与9个核心靶点具有较为稳定的结合活性.研究结果可为后续探究人参皂苷Rh2治疗肺纤维化提供参考.

人参皂苷Rb_2的药理学研究概况

综述了人参皂苷Rb2对脂代谢、糖代谢、视网膜色素上皮细胞、DNA、RNA以及蛋白质的合成、肿瘤细胞、中枢神经系统、心血管系统等方面的药理作用以及在动物体内的分布、代谢和药代动力学研究概况。

基于网络药理学和分子对接技术研究人参皂苷Rg1治疗阿尔茨海默病的分子生物学机制

目的:基于网络药理学和分子对接技术分析人参皂苷Rg1治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的分子生物学机制。方法:利用TCMSP、PharmMapper、Uniprot数据库筛选出人参皂苷Rg1的作用靶点,利用GeneCards、CTD数据库筛选AD相关靶点,对靶点进行PPI网络构建、GO富集、KEGG通路注释分析。采用AutoDock分子对接软件进行分子对接来预测人参皂苷Rg1对AD作用靶点的结合活性。结果:筛选出人参皂苷Rg1潜在靶点有203个,与AD相关的靶点有45个,GO富集结果显示生物过程有42个条目、分子功能有24个条目、细胞成分有14个条目,KEGG通路注释分析共分析出78条信号转导通路,包括雌激素信号通路、跨膜酪氨酸激酶信号通路、FoxO信号通路、肿瘤坏死因子信号通路等。结论:人参皂苷Rg1可能通过作用于CTSB、BCHE、AKT1等45个与AD相关的潜在靶点,调节细胞自噬、保护神经元、营养神经、抑制细胞凋亡、减少炎症反应、抗氧化应激、改善脑代谢等多种途径以减少Aβ的积累、抑制tau蛋白累积及异常磷酸化、减轻内皮细胞及神经元损伤发挥改善AD症状的作用。

人参皂苷Rb_(1)脂质体的制备及对脂肪细胞中脂滴积聚的抑制作用

[目的]制备β-谷甾醇修饰的人参皂苷Rb_(1)脂质体(β-Rb_(1)-Lip),减少Rb_(1)降解并增强人参皂苷Rb_(1)降脂效果。[方法]采用薄膜水和法制备了β-谷甾醇修饰的人参皂苷Rb_(1)脂质体,利用MTT法评估脂质体的生物安全性,借助油红O染色试验和酶标仪测量TG含量,考察了脂质体β-Rb_(1)-Lip对脂肪细胞3T3-L1的脂滴积聚抑制作用。[结果]制备的β-Rb_(1)-Lip脂质体的包封率为83.74%,平均粒径为198 nm,β-Rb_(1)-Lip在12 h内Rb_(1)释放率约为80%,表现出良好的缓释效果。对于降脂活性,50μmol/L的β-Rb_(1)-Lip表现出显著的细胞内脂滴抑制率,与同浓度Rb_(1)单体相比,β-Rb_(1)-Lip对3T3-L1细胞内脂滴的抑制效果更为显著,且对细胞没有毒副作用。[结论]β-Rb_(1)-Lip具有包封率高、粒径小和缓释效果明显的特征,能够持续释放活性成分人参皂苷Rb_(1),增强其降脂功效并减少用量。

人脐带间充质干细胞共培养联合人参皂苷Rg1对心力衰竭细胞模型的影响

背景:目前,如何促进细胞扩增、减少细胞损失、提高细胞归巢率、减少细胞凋亡是人脐带间充质干细胞临床前研究的主要问题。人参皂苷Rg1可在体外或体内促进间充质干细胞在不同微环境中的增殖、分化,其可能是提高人脐带间充质干细胞移植效率的候选药物。目的:探讨人脐带间充质干细胞共培养联合人参皂苷Rg1对戊巴比妥钠诱导的心衰细胞模型的影响。方法:将H9C2细胞分为5组:对照组、戊巴比妥钠组、人脐带间充质干细胞组、人参皂苷Rg1组、人脐带间充质干细胞+人参皂苷Rg1组。对照组H9C2细胞用正常DMEM培养基培养24 h,其他组H9C2细胞用含0.8%戊巴比妥钠的DMEM培养基培养7 min构建心衰细胞模型。建模后,分别用人脐带间充质干细胞、人参皂苷Rg1单独或共同处理。采用CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况,按试剂盒说明检测Na^(+)-K^(+)-ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性,ELISA测定上清液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平,RT-qPCR测定细胞中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6、Bax和Bcl-2 mRNA表达,Western blot测定细胞中Bax、Bcl-2、Toll样受体4、p65和p-p65蛋白表达。结果与结论:①与戊巴比妥钠组比较,人脐带间充质干细胞组、人参皂苷Rg1组和人脐带间充质干细胞+人参皂苷Rg1组H9C2细胞活力和EdU阳性率升高,TUNEL阳性率以及Bax mRNA和蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高,Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性降低,Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性升高,H9C2细胞上清液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平降低,H9C2细胞中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6 mRNA表达降低,Toll样受体4和p-p65蛋白表达降低,差异均有显著性意义(P<0.05);②与人脐带间充质干细胞组和人参皂苷Rg1组比较,人脐带间充质干细胞+人参皂苷Rg1组上述指标进一步改善(P<0.05)。结果表明:人脐带间充质干细胞联合人参皂苷Rg1提高了戊巴比妥钠诱导的心衰细胞活力,并抑制了Toll样受体4/核因子κB通路介导的炎症。

人参皂苷Rb1减轻脂多糖诱导急性肺损伤的作用研究

目的:探讨人参皂苷Rb1(GsRb1)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用及其作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、GsRb1给药组(低、中、高剂量组),气管内给予LPS造模,给药组在造模前3 d分别腹膜腔注射给予不同剂量GsRb1预处理,造模12 h将其麻醉,先采集肺泡灌洗液后再处死取出肺组织,计算肺湿/干比,试剂盒检测灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及肺髓过氧化物酶(MPO)活性,Western blot检测肺组织核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达。结果:高剂量GsRb1能明显降低肺组织湿/干比(P<0.05);中、高剂量GsRb1能明显降低肺组织MPO活性(P<0.05);高剂量GsRb1明显降低小鼠肺泡灌洗液IL-1β和TNF-α水平(P<0.05);高剂量GsRb1能明显降低肺组织NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05)。结论:GsRb1可能通过调控NF-κB通路,减轻炎症反应,抑制LPS诱导的小鼠ALI。

人参皂苷Rb1通过KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进肝细胞癌HepG2细胞发生氧死亡

目的:探讨人参皂苷Rb1(Gn-Rb1)对肝细胞癌(HCC)HepG2细胞氧死亡的影响及其可能的分子机制。方法:采用生物信息学方法分析氧死亡的关键基因PGAM5表达对HCC患者生存期的影响。选取辽宁省肿瘤医院收治的8例HCC患者的HCC组织与癌旁组织,通过WB法及qPCR检测氧死亡相关基因蛋白与mRNA的表达情况。将HepG2细胞随机分为对照组与Gn-Rb1组(予以200μmol/L Gn-Rb1干预),采用细胞克隆形成实验、划痕愈合实验分别检测Gn-Rb1对HepG2细胞的集落形成能力、迁移能力的影响,ELISA检测对细胞ROS生成水平的影响,微板法检测对细胞LDH释放水平的影响;WB法、qPCR法检测Gn-Rb1对HepG2氧死亡关键基因蛋白质与mRNA水平表达的影响。结果:生物信息学分析发现,PGAM5高表达肝癌患者总生存时间较低表达患者更长(P<0.05)。在临床HCC组织与癌旁组织样本中发现,相较于癌旁组织,在蛋白质与mRNA水平上,肿瘤组织KEAP1与PGAM5表达显著降低,NRF2表达显著升高(均P<0.01),p-AIFM1蛋白水平显著升高(P<0.05)。对HepG2细胞予以200μmol/L Gn-Rb1干预后,相较于对照组,Gn-Rb1组HepG2细胞的迁移能力与集落形成能力显著降低(均P<0.01),而LDH水平显著升高(P<0.05);相比于对照组,在mRNA和蛋白质水平上,Gn-Rb1组细胞中KEAP1、PGAM5表达均显著升高而NRF2表达均显著降低(均P<0.05),p-AIFM1蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:HCC组织中氧死亡被抑制,而Gn-Rb1能够通过调控KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进HepG2细胞氧死亡的发生,抑制细胞增殖和迁移能力。

人参皂苷Rg1和Rb1改善慢性不可预测应激致大鼠抑郁、焦虑样行为的作用比较

目的研究人参皂苷Rg1和Rb1改善慢性不可预测应激诱导大鼠的抑郁样和焦虑样行为的作用及比较。方法SPF级SD雄性大鼠70只,适应5 d后进行糖水偏爱实验检测,根据糖水偏爱指数将动物分为7组,即对照组、模型组、氟西汀组、人参皂苷Rg124 mg/kg剂量组、人参皂苷Rg148 mg/kg剂量组、人参皂苷Rb133 mg/kg剂量组、人参皂苷Rb167 mg/kg剂量组。除对照组外,其余大鼠每天随机接受1~2种不同的刺激,造模时间共35 d。于第36天进行糖水偏爱、旷场实验、新奇环境摄食抑制实验、大鼠高架十字迷宫实验、强迫游泳等行为学实验,考察其抗抑郁、抗焦虑作用。采用ELISA法测定大鼠血清和海马IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α炎症因子水平,血清皮质酮(CORT)水平。结果与模型组相比,人参皂苷Rg1、Rb1组大鼠糖水偏爱指数提升,强迫游泳不动时间显著减少,人参皂苷Rg148 mg/kg剂量组新奇抑制摄食潜伏期显著减少,人参皂苷Rg1(24和48 mg/kg)剂量组开臂时间的比例显著上升,人参皂苷Rg1、Rb1两个剂量组血清中皮质酮的含量显著减少,人参皂苷Rg124 mg/kg剂量组血清中IL⁃1β和IL⁃6的水平显著降低,人参皂苷Rb133 mg/kg剂量组血清中TNF⁃α和IL⁃6的水平显著降低,人参皂苷Rg1(48 mg/kg)、Rb1(67 mg/kg)剂量组海马中IL⁃1β、IL⁃6和TNF⁃α的含量显著降低。结论两种人参皂苷均可能通过调节HPA轴、抑制神经炎症,从而改善慢性不可预测应激致大鼠抑郁、焦虑样行为,此外人参皂苷Rg1的抗焦虑作用优于Rb1。

人参皂苷Rb1通过载脂蛋白M/线粒体凋亡途径对肝癌的影响及机制研究

目的:探究载脂蛋白M(ApoM)/线粒体凋亡在肝癌中的作用,以及人参皂苷Rb1(Rb1)通过ApoM/线粒体凋亡途径对肝癌影响的潜在机制。方法:生物信息学分析筛选ApoM在肝癌中的差异性表达及临床验证;分子对接技术确定Rb1与ApoM的靶向结合,体外培养人肝癌细胞(HepG2),并进行细胞活力检测(CCK-8)筛选Rb1最佳干预浓度,克隆实验用于检测HepG2细胞的增殖情况,划痕实验用于检测HepG2细胞的迁移能力,采用蛋白质印迹法(Western Blotting)检测ApoM及线粒体凋亡相关基因Bcl2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达,实时萤光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测ApoM及线粒体凋亡相关基因Bax、Bcl2、Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平。结果:生存分析发现ApoM低表达肝癌预后更差,分子对接提示Rb1与ApoM之间具有较高亲和力,克隆及划痕实验提示Rb1有效抑制HepG2细胞增殖,Western Blotting及RT-qPCR验证Rb1可以干预线粒体凋亡相关基因蛋白和mRNA表达。结论:揭示了ApoM/线粒体凋亡在肝癌中发挥重要作用,人参皂苷Rb1可能通过ApoM/线粒体凋亡途径影响肝癌的可能潜在机制。

基于RIP1/RIP3/MLKL介导程序性坏死通路探讨人参皂苷Rb1拮抗LPS诱导的黑质多巴胺神经元损伤机制

目的观察受体相互作用蛋白1(RIP1)/RIP3/混合激酶样蛋白(MLKL)介导的程序性坏死在脂多糖(LPS)诱导的大鼠黑质多巴胺能神经元损伤中的作用,探讨人参皂苷Rb1保护多巴胺能神经元的作用机制。方法将48只SD大鼠随机分为对照组、帕金森组、Rb1+帕金森组和Nec-1+帕金森组,每组12只。对照组大鼠黑质内注射生理盐水2μL,然后连续14 d腹腔内注射生理盐水(2 mL/kg);帕金森组大鼠黑质内注射LPS 5μg(2μL),然后连续14 d腹腔内注射生理盐水(2 mL/kg);Rb1+帕金森组大鼠腹腔注射人参皂苷Rb1(20 mg/kg)3 d,第4天黑质内注射5μg LPS后,再连续14 d腹腔内注射人参皂苷Rb1(20 mg/kg);Nec-1+帕金森组大鼠黑质内注射LPS 5μg,然后连续14 d腹腔内注射Nec-1(2 mg/kg)。LPS注射后14 d,皮下注射阿扑吗啡(APO)观察大鼠行为学变化;免疫组化法观察黑质内多巴胺能神经元数量及小胶质细胞形态;高效液相色谱法测定纹状体中多巴胺(DA)及其代谢物高香草酸(HVA)、二羟苯乙酸(DOPAC)的含量;RT-PCR法检测黑质中白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达情况;化学试剂盒检测黑质中超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法检测黑质中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙结合适配器分子1(Iba-1)及程序性细胞坏死相关蛋白(RIP1、RIP3、MLKL)表达情况。结果皮下注射APO后,帕金森组大鼠出现明显的旋转行为,Rb1+帕金森组和Nec-1+帕金森组大鼠旋转行为均较帕金森组明显改善。与对照组比较,帕金森组大鼠注射侧黑质内多巴胺能神经元大量丢失和小胶质细胞过度激活;注射侧纹状体中DA、DOPAC及HVA含量均明显降低(P均<0.05);注射侧黑质中SOD活性和TH蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),MDA含量和IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量及Iba-1、RIP1、RIP3、MLKL蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与帕金森组比较,Rb1+帕金森组和Nec-1+帕金森组大鼠注射侧黑质内多巴胺能神经元丢失和小胶质细胞激活情况均减轻;注射侧纹状体中DA、DOPAC及HVA含量均明显升高(P均<0.05);注射侧黑质中TH蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量及Iba-1、RIP1、RIP3、MLKL蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。其中Rb1+帕金森组大鼠注射侧黑质中SOD活性明显高于帕金森组(P<0.05),MDA含量明显低于帕金森组(P<0.05),但Nec-1+帕金森组SOD活性和MDA含量与帕金森组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论程序性坏死参与了LPS诱导的大鼠黑质多巴胺能神经元损伤,人参皂苷Rb1可通过抑制RIP1/RIP3/MLKL程序性坏死通路发挥抗炎及神经保护作用。

人参皂苷Rb1通过AMPK/SIRT1/PGC-1α轴调节线粒体裂变融合缓解哮喘气道炎症

哮喘(bronchial asthma)以气道炎症和高反应性为主要特征,严重危害人类健康^([1])。AMP-activated protein kinase(AMPK)作为氧化还原蛋白,能有效调节细胞内氧化应激,可通过激活高度保守的NAD+依赖性去乙酰化酶Sirtuin 1(SIRT1)/NF-κB通路抑制哮喘^([2])。PPARγcoactivator-1α(PGC-1α)在线粒体生物合成和功能调节中得到广泛应用^([3])。人参皂苷Rb1是人参根茎的重要提取物,具有抗炎,抗凋亡,能够抑制哮喘气道高反应性等作用^([4])。本研究探讨了Rb1可能通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1α信号轴改善小鼠支气管上皮细胞在CRE诱导下发生的氧化应激线粒体动力学障碍,最终有效缓解哮喘气道炎症的发生和发展。

人参皂苷Rb1调节钙、钠通道影响受损心肌细胞的研究

目的 探讨人参皂苷Rb1(Gs-Rb1)减轻阿霉素(Dox)诱导的心肌细胞损伤,明确Gs-Rb1改善Dox心肌细胞损伤效应与其调节钠、钙通道有关,AMP依赖性蛋白激酶(AMPK)和/或钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)通路介导该作用。方法 提取大鼠左心室心肌细胞进行培养,将细胞随机分为7组:对照组(PBS)、Dox组、Gs-Rb1组、AraA(阿糖腺苷,AMPK抑制剂)组、AraA+Gs-Rb1组、KN93(CAMKII抑制剂)组及KN93+Gs-Rb1组,分别进行给药。ELISA法检测N末端B型利钠肽前体、AMPK和CaMKⅡ活性;DCFH-DA荧光探针试验检测线粒体内活性氧(mitROS)水平,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blot检测总LTCC(t-LTCC)、L型电压门控钙通道(LTCC)、兰尼定受体(RYR2)、肌浆网钙ATP酶(SERCA2a)和钙钠交换体(NCX)蛋白表达。结果 Gs-Rb1显著降低心肌细胞NT-proBNP水平,该作用可被AraA显著抑制;Gs-Rb1升高心肌细胞AMPK活性被AraA完全抑制,不被KN93影响;Gs-Rb1降低心肌细胞CaMKII活性;Gs-Rb1降低细胞内ROS和mitROS水平;Gs-Rb1升高SERCA2a蛋白表达,降低NCX表达量;各组tLTCC差异无明显统计学意义(均P>0.05)。结论 Gs-Rb1降低Dox诱导心肌细胞NT-proBNP水平,通过调节LTCC再分布、增强RYR2表达、增加SERCA2a和抑制NCX等减轻心肌细胞损伤,AMPK或/和CaMKII通路介导该效应;Gs-Rb1显著抑制Dox诱导的心肌细胞氧化应激,此效应可被AMPK通路和/或CaMKII通路介导。