基于DLL4/Notch1信号通路探讨人参皂苷Rg-3对AOM/DSS诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠血管形成机制

目的基于Delta样配体4(delta-like ligand 4,DLL4)/Notch1信号通路探究人参皂苷Rg-3对氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠(azoxymethane/dextran sulphate sodium,AOM/DSS)诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠血管形成机制。方法48只C57BL/6J APCMin/+小鼠随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg-3组(10 mg/kg),每组16只。建立AOM/DSS诱导的结直肠癌模型,采集腹主动脉血与完整结直肠组织,检测血常规与炎症指标,HE染色观察肠组织形态,免疫组化、Western blotting检测肠组织DLL4、Notch1表达。肿瘤细胞、人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)分为对照组、人参皂苷Rg-3组、人参皂苷Rg-3+DLL4组,通过MTT、克隆形成、划痕、Transwell与血管形成实验检测细胞增殖、迁移、血管形成能力,Western blotting检测DLL4/Notch信号通路、血管形成相关分子表达情况。结果与对照组相比,模型组、人参皂苷Rg-3组RBC、Hct、Hb水平降低(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、DLL4、Notch1表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,人参皂苷Rg-3组RBC、Hct、Hb水平提高(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、DLL4、Notch1表达水平下降(P<0.05),肿瘤数量、2~3.5 mm及>3.5 mm的肿瘤数量减少(P<0.05)。细胞实验结果显示,与对照组相比,人参皂苷Rg-3组肿瘤细胞、HUVECs增殖、克隆形成、迁移、血管形成能力下降(P<0.05),DLL4、Notch1、VEGF、VEGFR2、转录因子重组信号结合蛋白Jκ(recombination signal binding protein-Jκ,RBP-Jκ)、Hes1表达水平降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rg-3通过抑制DLL4/Notch1信号通路促进血管形成,抑制AOM/DSS诱导结直肠癌进展。

异丙酚、人参皂苷Rg-1、蛋白磷酸酯酶-2A和氯化锂对大鼠电休克后学习记忆及海马内谷氨酸含量的影响

目的观察异丙酚、人参皂苷Rg-1、蛋白磷酸酯酶-2A(PP-2A)和氯化锂对电休克(ECT)后嗅球切除抑郁模型大鼠学习记忆和海马内谷氨酸(Glu)浓度的影响。方法按随机单位组设2个干预因素,即ECT干预(2水平:无处置、施行1疗程ECT)和药物干预(5水平:海马CA1区分别微量注射生理盐水、异丙酚、人参皂苷Rg-1、PP-2A、氯化锂,20 g/L)的所有组合(2×5析因设计)。全部ECT处置结束24 h内开始Morris水迷宫检测,高效液相色谱法检测Glu在海马内的浓度。结果单独使用异丙酚或ECT均可造成学习记忆障碍,而二者联合使用则会缓解ECT后的学习记忆障碍;人参皂苷Rg-1、PP-2A和氯化锂对学习记忆无明显影响,但与ECT合用则可改善ECT后的学习记忆;ECT干预与药物干预存在交互作用。ECT可明显增加海马中Glu浓度;异丙酚和人参皂苷Rg-1在ECT前后均可减少Glu浓度;且ECT干预与药物干预存在交互作用。PP-2A和氯化锂在ECT前后对Glu浓度无明显影响。结论 ECT可使海马Glu浓度升高,导致学习记忆障碍;异丙酚与人参皂苷Rg-1、PP-2A和氯化锂均可改善ECT后的学习记忆;前两者与降低海马中Glu浓度有关,后两者与此无关。

人参皂苷Rg-1对人内皮祖细胞增殖、凋亡和分泌HGF的影响

目的 探讨人参皂苷Rg-1(ginsenoside Rg1,GS-Rg1)对人内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)体外增殖和分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)的影响,为进一步研究GS-Rg1通过EPCs介导血管新生的作用机制奠定基础。方法 取正常剖宫产胎盘中的脐带血,密度梯度离心分离出单个细胞;通过CD31免疫荧光鉴定和双荧光染色的共聚焦拍摄(DiI-acLDL和FITC-UEA-1配合DAPI染核)共同对EPCs进行鉴定;将鉴定成功的EPCs分别在不同浓度梯度Gs-Rg1(0、5、10、2、40、80 mg/L)下干预培养48 h,确定Gs-Rg1促EPCs增殖的最佳浓度。另将获得的EPCs随机分为实验组(最佳浓度Gs-Rg1干预)和对照组(PBS干预)。采用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、流式细胞术及ELISA法分别检测GS-Rg1对EPCs的增殖、凋亡和分泌HGF的影响。结果 在一定范围(<40 mg/L)内,GS-Rg1的浓度与EPCs增殖呈正相关,Gs-Rg1促EPCs增殖的最佳浓度为40 mg/L;与对照组相比,实验组细胞增殖、抗凋亡和分泌HGF的能力显著增强,差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。结论 GS-Rg1对EPCs无毒性,且能改善其增殖功能和促进HGF的分泌。

人参皂苷Rg_1对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元保护作用研究

目的研究人参皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetra-hydropyridine,MPTP)致帕金森病小鼠黑质(substantia nigra,SN)多巴胺(dopamine,DA)能神经元变性的保护作用及其可能机制。方法C57BL6小鼠随机分为对照组(NS,ip)、MPTP组(30mg·kg-1×5d,ip)及Rg1(5mg·kg-1×8d,ip)预处理组。应用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫组织化学染色等技术观察了SN Caspase-3mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)mRNA的表达水平和黑质致密带(substantia nigra zona compacta,SNzc)TH免疫反应阳性细胞数量等多项指标的变化,用高效液相色谱法检测小鼠纹状体(striatum,Str)内DA及其代谢物二羟基苯乙酸(dihydroxyphenylace-tic acid,DOPAC)和高香草酸(homovanillic acid,HVA)含量。结果MPTP组SN内TH阳性细胞数量、Str内DA及其代谢产物DOPAC和HVA的含量明显减少,应用Rg1后可逆转上述改变(P<0.01)。MPTP组SN Bcl-2、THmRNA的表达明显降低(P<0.01);Caspase-3、Bax mRNA的表达明显增加(P<0.01)。应用Rg1后可逆转上述改变(P<0.05)。结论Rg1对MPTP致帕金森病小鼠SN DA能神经元具有明显的保护作用,其机制可能与抗凋亡过程有关。

HPLC法测定健脑补肾丸中人参皂苷Rg_1和Re的含量

目的:建立测定健脑补肾丸中人参皂苷Rg1和Re含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent C18柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,检测波长为203 nm,柱温为30℃,流速为1.0 ml/min,进样量为10μl。结果:人参皂苷Rg1和Re进样量分别在0.903～6.02、0.618～4.12μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 6、0.999 7);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1.3%;人参皂苷Rg1和Re的平均加样回收率分别为98.3%(RSD=1.63%,n=6)和98.1%(RSD=1.27%,n=6)。结论:该方法灵敏度高、操作简便、结果准确,可用于健脑补肾丸的质量控制。