HPLC法同时测定人参皂苷Rb_1、Rc、Rd、Rg_3、CK和Rh_2

目的:建立高效液相色谱法同时测定人参皂苷Rb_1、Rc、Rd、Rg_3、CK和Rh_2的方法。方法:采用ODSC_(18)(4.6mm×150mm)色谱柱,流动相乙腈0.05%磷酸水,梯度洗脱,流速1mL/min,检测波长203nm,柱温35℃。结果:人参皂苷Rb_1、Rc、Rd、Rg_3、CK和Rh_2分离效果良好,线性关系良好,相对标准偏差和回收率符合2010年版中华人民共和国药典要求。结论:本方法简便、准确、稳定、重现性好,可用于上述人参皂苷的含量测定。

人参皂苷Rb_1、Rg_3、Rh_2抗肿瘤作用与机制概况

人参皂苷是中药人参抗肿瘤作用的主要成分,临床药理研究表明:人参皂苷Rb1可以通过抑制P-gp外排药物,增强细胞对药物的敏感性,降低肿瘤细胞多药耐药性,拮抗免疫功能的抑制和维持机体对肿瘤细胞的免疫功能;Rg3则主要通过影响肿瘤细胞蛋白质表达、作用于细胞分裂来诱导肿瘤细胞凋亡,并能抑制肿瘤新血管生长;Rh2通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡、控制肿瘤细胞转移来起到抗肿瘤作用,本文通过对人参皂苷Rb1、Rg3、Rh2抗肿瘤作用及机制的阐述,为其临床应用开发提供理论依据。

乙醇体系中金属离子催化转化人参皂苷Rb1的研究

人参皂苷Rb1是人参中的主要皂苷之一,但人体吸收量极少,而其衍生物Rg3、Rk1、Rg5却易于人体吸收,但其制备和分离成本较高。针对以上问题将人参皂苷Rb1在50%乙醇水溶液体系和无水乙醇体系中进行催化条件的优化,并分析其产物。实验发现,通过对金属离子催化效果的筛选,选取NbCl_(5)为反应催化剂;在50%乙醇水溶液体系中最优条件下反应,Rg3得率为18.29%;在无水乙醇体系中最优条件下反应,Rg3得率为49.45%。根据两组反应产物的对比,推测在50%乙醇水溶液体系反应时,水可能供给电子基团,并生成更多水合化合物即20(S)-25-OH-Rg3和20(R)-25-OH-Rg3;在无水乙醇体系反应时,电子基团可能无法供给,形成双键,生成其他化合物即Rk1和Rg5。该发现为金属离子催化人参皂苷以制备稀有人参皂苷的方法奠定了理论基础。

微生物转化人参皂苷Rb_1为Rg_3的研究

利用18种菌株对人参皂苷Rb1进行生物转化研究,发现一种绿毛状GY-06菌使人参皂苷Rb1有效地转化为Rg3.经形态学和内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)基因序列分析,确定其为一种扩展青霉(Penicilliumexpansum).

人参茎叶中提取分离人参皂苷F2、Rg1、Rb1、Rb2、Rb3单体化合物的方法

目的从人参茎叶中提取分离人参皂苷F2、Rg1、Rb1、Rb2、Rb3单体化合物,纯度达98%以上。方法从人参茎叶中提取总皂苷后,粗分段,经硅胶柱色谱法分离,再经加压C18反相柱色谱纯化。结果从人参茎叶中提取分离得到纯度达98%以上的目标人参皂苷。结论此方法简单可行,相较于其他方法节省成本和时间。

从土壤中分离微生物转化人参皂苷Rb_1为Rg_3

选用从土壤中分离出的148种微生物来进行人参皂苷Rb1微生物转化,HPLC分析显示能转化人参皂苷Rb1为Rg3的菌株11种。其中菌株YS-22和YS-38使人参皂苷Rb1有效地转化为Rg3。通过显微镜观察,YS-22属于杆菌,YS-38属于球菌。

HPLC测定心悦胶囊中人参皂苷Rg_1、Re及Rb_3的含量

目的:研究心悦胶囊中人参皂苷Re、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb3的定量方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱:Lun C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水梯度洗脱;检测波长为203 nm。结果:线性范围为人参皂苷Rg1在0.098 9~1.978 0μg(r=0.999 1,n=5),人参皂苷Re在0.312 0~5.38μg(r=0.999 2,n=5),人参皂苷Rb3在0.448~8.96μg(r=0.999 1,n=5)。平均加样回收率人参皂苷Rg1为97.1%,RSD=2.46%(n=6),人参皂苷Re为97.5%,RSD=1.89%(n=6),人参皂苷Rb3为100.0%,RSD=2.28%(n=6)。结论:本法简便、灵敏、准确,可用于心悦胶囊的质量控制。

HPLC法测定红参浸膏中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rg3的含量

目的:建立可同时测定红参浸膏中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg3含量的高效液相色谱方法。方法:采用HPLC方法,色谱柱是AgilentZorbaxSB-C18柱(4.6mm×150mm,4μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温30℃,检测波长203nm。结果:红参浸膏中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg3的含量分别为0.22%,0.24%,0.67%,0.48%)。该方法精密度高,人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg3的分离度好,相关系数分别是0.9996、0.9990、0.9995及0.9996);变异系数CV分别为0.7%、0.7%、0.6%及0.6%;加标回收率分别达102%、105%、101%及102%。结论:建立的HPLC分析检测方法可以用作红参浸膏实际生产时的质量监控。

一测多评法同时测定人参中人参皂苷Rb_1、Rg_1、Re、Rc、Rb_2、Rd

目的建立可用于人参Panax ginseng中6个成分的一测多评法(QAMS)。方法采用高效液相色谱法,使用Phenomenex Luna C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,柱温25℃,检测波长203 nm。以人参皂苷Rb_1为参照物,建立其与人参皂苷Rg_1、Re、Rc、Rb_2、Rd的相对校正因子,外标法与QAMS分别测定6个成分含量,t检验评价QAMS的可行性和适用性。结果在一定线性范围内,人参皂苷Rb_1相对人参皂苷Rg_1、Re、Rc、Rb_2、Rd的相对校正因子重复性好,2种方法所得6个成分的含量无明显差异,实验得相对校正因子可供参考。结论该法用于人参多种成分的同步质量评价是准确、可行的,可作为一种新的质量评价模式为中药及中药制剂实现多成分同时监控提供有益借鉴。

HPLC法测定林下山参制浆前后人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2含量的变化

目的分析林下山参制浆后人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2含量的变化情况。方法采用HPLC-UV法,Innoval ODS-2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水溶液进行梯度洗脱;柱温30℃;体积流量1.0 mL/min;进样体积20μL;检测波长203 nm。结果林下山参中6种人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2质量分数分别由制浆前的0.651、0.506、0.363、0.014、0.023、0.031 mg/g变化为制浆后的0.517、0.413、0.105、0.122、0.214、0.098 mg/g。人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2分别在2.5~100 mg/L具有良好的线性关系,r2均大于0.999 5;精密度、稳定性及重复性良好;平均加样回收率为95%~105%,RSD为1.25%~3.05%。结论林下山参中6种人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2的含量在制浆前、后发生变化。林下山参制浆后人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1的含量降低,稀有人参皂苷Rg_3、Rh_1、Rh_2的含量分别增高8.7、9.3、3.2倍。基于HPLC最佳分离参数建立的6种人参皂苷成分同时分析的方法具有较好的准确性和可靠性,可为林下山参浆的质量评价提供科学依据。

人参皂苷Rg1和Rb1对流感病毒感染细胞的影响及其机制研究

目的研究人参皂苷Rg1和Rb1对流感病毒感染所致的细胞氧化应激损伤、细胞内转录因子（NF—KB和AP—1）转录活性及前炎症细胞因子IL-8释放的影响。方法甲型流感病毒H3N2作为刺激因素，以DCFH—DA为探针，流式细胞仪检测细胞内活性氧（iROS）产生水平。利用双荧光素酶顺式报告系统，榆测人参皂苷Rg1和Rb1对NF—κB—luc及AP-1-luc相对荧光素酶值的影响。RT—PCR法进一步验证人参皂苷Rg1和Rb1对TL-8mRNA表达水平的影响。结果病毒感染后细胞中ROS产生增加45％～55％，而给予有效浓度人参皂苷Rg1和Rb1后，荧光强度降低，与正常细胞内自由基含量基本相同。通过NF-κB及AP-1双荧光素酶报告系统检测发现，与正常对照组比较，病毒感染的细胞中NF—κB及AP-1荧光素酶报告活性明显升高；与病毒损伤组比较，人参皂苷Rg1、Rb1治疗组NF—κB及AP—1荧光素酶报告活性明显受到抑制。RT—PCR结果显示人参皂苷Rg1和Rh1能明显抑制病毒诱导的1L-8mRNA表达水平的变化，使之趋近于正常对照组水平。结论人参皂苷Rg1和Rb1可拈抗病毒感染细胞中ROS产生水平、降低氧化应激敏感的信号传导通路Nn-κB及AP-1的转录活性，并抑制二者下游靶基因IL-8表达。

GS0202菌产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶条件及其酶的反应条件

为提高Arthrobacter chlorophenolicus GS0202菌所产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3的能力,采用单因素研究方法,对菌体发酵条件,及其所产酶的酶反应条件进行了研究。结果表明,菌体发酵的最适培养基组成为胰蛋白胨10 g,酵母粉5 g,氯化钠10 g,水1 L;诱导物为人参总皂苷,其加入量为3.2 mg/mL,培养温度为28℃;酶反应的最适条件为25℃,pH 4,底物质量浓度为3 mg/mL。

三七总皂苷主要成分对人肝微粒体CYP3A4酶的抑制作用研究

目的:研究三七总皂苷主要成分人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb_1和三七皂苷R_1对人肝微粒体CYP3A4酶的体外抑制作用。方法:采用人肝微粒体体外孵育法,在孵育体系中分别加入不同浓度的人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb_1和三七皂苷R_1与探针底物睾酮共孵育,用LC-MS/MS法测定代谢产物6β-羟基睾酮的生成量反映CYP3A4酶活性的影响。结果:人参皂苷Rg_1在2~1 000μmol·L^(-1)的测试浓度范围内对CYP3A4未见剂量相关的抑制作用;人参皂苷Rb_1在2~200μmol·L^(-1)的测试浓度范围内对CYP3A4未见剂量相关的抑制作用,在1 000μmol·L^(-1)的测试浓度下对CYP3A4具有轻微抑制作用;三七皂苷R_1在2~1 000μmol·L^(-1)的测试浓度范围内对CYP3A4的IC_(50)为126μmol·L^(-1)(>100μmol·L^(-1))。结论:三七总皂苷3个主要有效成分单体对CYP3A4酶的体外抑制作用不同,人参皂苷Rg_1无抑制作用,人参皂苷Rb_1高浓度下有轻微抑制作用,三七皂苷R_1有弱抑制作用,三七总皂苷制剂与CYP3A4酶代谢相关的药物之间产生相互作用的可能性低。

HPLC法同时测定参附注射液中五种人参皂苷的含量

目的:建立同时测定参附注射液中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1、Rc、Rd 5种主要皂苷成分含量测定高效液相色谱法。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)柱(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(B)-水(A)二元梯度洗脱;在203 nm波长下进行含量测定。结果:表明人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1、Rc、Rd分别在31.72~158.60、11.43~57.15、129.87~649.35、117.30~586.50、18.71~93.55μg·mL^(-1)线性范围内线性关系良好(相关系数均大于0.995),平均加样回收率分别为98.28%、98.14%、99.40%、96.80%、98.63%。结论:同时测定参附注射液中上述5种成分,方法简便、准确、分离度好、重现性好,可用于参附注射液的质量控制;采用此种多成分、多指标评价中药注射剂的方法,更能体现产品的活性成分群及功能主治,控制产品有效性。

高效液相色谱法测定人参茎叶浸膏及人参根中的人参皂苷含量

目的 :采用高效液相色谱法测定人参茎叶浸膏及人参根中 6种人参皂苷Rb1,Rb2 ,Rc ,Rd ,Re ,Rg1的含量。方法 :高效液相色谱法分离和测定人参皂苷的含量。色谱柱 :NucleosilNH2 (4 6mmid× 2 5 0mm) ,流动相乙腈 水 (82∶18) ,检测波长 2 0 5nm。结果 :平均加样回收率 :Rb1为 92 4% ,Rb2 91 9% ,Rc 93 8% ,Rd 95 8% ,Re94 6 % ,Rg196 7% (n =3)。结论 :该方法可用于人参皂苷的含量测定。

一测多评法同时测定十味香鹿胶囊中5种人参皂苷

目的建立一测多评法同时测定十味香鹿胶囊(人参、香附、鹿角脱盘等)中人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb3的含有量。方法该药物甲醇提取液的分析采用Agilent EC-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,2.7μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温25℃;检测波长203 nm。以人参皂苷Rb1为内标,计算其他4种人参皂苷的相对校正因子,测定其含有量。结果 5种人参皂苷在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率99.05%~101.4%,RSD 1.12%~2.67%,一测多评所得结果与外标法接近。结论该方法简便可靠,可用于十味香鹿胶囊的质量控制。

RP-HPLC法测定西洋参茎叶中二醇皂苷5种成分含量

目的建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定西洋参茎叶二醇皂苷中5个成分(人参皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd)含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱AgilentTC-C18(4.6mm×250mm,5μm);乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱;检测波长203nm;体积流量1.0ml/min;柱温40℃。结果5种成分均达到基线分离,线性良好。人参皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd平均回收率分别为98.39%、97.36%、98.02%、97.70%、97.01%。结论该方法能快速、准确地测定西洋叁茎叶二醇皂苷5种成分的含量,而且重复性好。

HPLC法同时测定人参及其制剂中16种人参皂苷

目的建立同时测定人参及其制剂中16种人参皂苷的HPLC方法。方法采用C18（150mm×4．6mm，5μm）色谱柱；流动相为乙腈和水，梯度洗脱，体积流量1．0mL／min，检测波长203nm，柱温35℃。结果16种人参皂苷Rgl、Re、Rf、Rbl、Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F2、Rg3、Rh2及原人参三醇、compoundK、原人参二醇均得到良好分离，线性关系良好（r≥0．9990）。加样回收率均在95％-102％，RSD〈2％。结论该方法快捷简便、稳定可靠，可应用于人参及其制剂的质量控制。

高效液相色谱法测定三七类保健食品中6种皂苷的含量

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定三七类保健食品中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rg_2、人参皂苷Rb_1、人参皂苷Rd和人参皂苷Re含量的分析方法。方法用Kromasil 100-5-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0~25 min,17%A→19%A;25~45 min,19%A→29%A;45~55 min,29%A;55~95 min,29%A→40%A;95~97 min,40%A;97~100 min,40%A→17%A),流速1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温40℃。结果三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、Re、Rg_2、Rb_1、Rd分别在4.060~203.0,4.818~240.9,4.154~207.7,4.282~214.1,3.894~194.7,4.124~206.2μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数都在0.9985以上。该方法 6种皂苷平均回收率均高于93.4%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)小于2.5%。结论本法准确可靠、灵敏度高、重现性好,可作为含三七类保健食品的质量控制方法。

一测多评法同时测定红参中11种人参皂苷的含量

目的建立一测多评法(quantitative analysis single-marker,QAMS)测定红参药材中11种皂苷类成分的含量,为红参质量控制提供科学依据。方法采用HPLC法,Agilent C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,体积流量1.3 mL/min,柱温30℃,波长203 nm。以人参皂苷Rb1为参照物,建立其与人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rc、人参皂苷Ro、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg3的相对校正因子,外标法与QAMS分别测定11个成分含量。结果在一定线性范围内,人参皂苷Rb1相对人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rc、人参皂苷Ro、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg3的相对校正因子重复性好,2种方法所得11种成分的含量无明显差异,实验得相对校正因子可供参考。结论本研究建立的QAMS法,快速、简便、重复性好,可为红参药材的质量控制提供参考。