人参皂苷Rg2立体异构体对皮层神经元抗凋亡作用的研究

先前的研究已经证明人参皂苷Rg2(ginsenoside-Rg2,Rg2)对人类健康有许多益处,包括抗休克,预防或治疗冠心病和预防多梗塞性痴呆等。另外,Rg2包含2个立体异构体:20(R)-人参皂苷Rg2[20(R)-Rg2]和20(S)-人参皂苷Rg2[20(S)-Rg2]。然而,目前Rg2对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia and reperfusion injury,CIRI)诱导神经元凋亡的影响以及这种影响是否具有立体异构性尚未见报道。因此,研究使用大脑皮层神经元建立常用于体外模拟CIRI的氧糖剥离/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)的细胞模型来探索Rg2立体异构体对OGD/R诱导的皮层神经元凋亡的影响。结果显示与模型组相比,20(R)-Rg2和20(S)-Rg2的3种剂量(20、40、80μmol/L)预处理均显著增加细胞存活率(P<0.05),显著降低胱天蛋白酶-3(Caspase-3)的活性(P<0.05)和凋亡率(P<0.05);40、80μmol/L剂量组均显著提高缺氧诱导因子-1α(hypoxiainducible factor,HIF-1α)-促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)信号通路活化(P<0.05)。20(R)-Rg2的这种抗凋亡作用显著大于20(S)-Rg2。这些结果表明20(R)-Rg2和20(S)-Rg2均能降低由OGD/R诱导的皮层神经元凋亡,并且20(R)-Rg2具有更好的预防作用。20(R)-Rg2有潜力被用作预防CIRI的功能性食品中的有效成分之一。

人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响

目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。

高效液相色谱法分离20(S)和20(R)—人参皂苷Rg_2构型异构体

目的建立20(S)和20(R)—人参皂苷Rg2构型异构体的高效液相色谱法分离。方法用YWG-C18分析柱,以甲醇—水(67∶33)为流动相,在203 nm波长处检测,分离两种构型异构体。结果上述方法可以将人参皂苷Rg2两种构型异构体完全分离,纯度达98%以上。结论该方法简便,分离效果好。

人参皂苷Rg1调节Nrf2/ARE信号通路对大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症的影响

目的探讨人参皂苷Rg1(GRg1)调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应原件(ARE)信号通路对大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的作用。方法将雌性孕SD大鼠随机分为正常组(Normal组)、ICP模型组(Model组)、低剂量GRg1组(GRg1⁃L组,20 mg/kg GRg1)、高剂量GRg1组(GRg1⁃H组,40 mg/kg GRg1)、高剂量GRg1+Nrf2抑制剂全反式维甲酸(ATRA)组(GRg1⁃H+ATRA组,40 mg/kg GRg1+10 mg/kg ATRA),每组12只。采用苯甲酸雌二醇、黄体酮联合注射的方式建立大鼠ICP模型。给药结束后ELISA法检测大鼠血清总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和总胆汁酸(TBA)、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、γ⁃干扰素(IFN⁃γ)和白细胞介素⁃1β(IL⁃1β)及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。HE染色观察大鼠肝切片的病理学变化。免疫印迹法检测大鼠肝组织Nrf2/ARE信号通路相关蛋白的表达。结果与Normal组相比,Model组大鼠血清ALT、AST、TBIL、ALP、TBA水平均显著升高(P<0.05),Normal组炎症因子TNF⁃α、IFN⁃γ、IL⁃1β和肝组织MDA水平[分别为(248.26±27.64)pg/mL、(153.68±18.47)pg/mL、(189.53±23.21)pg/mL和(2.89±0.36)nmol/mg]均较Model组大鼠[分别为(53.47±8.69)pg/mL]、(24.72±2.94)pg/mL、(46.89±6.82)pg/mL和(1.05±0.14)nmol/mg]显著升高(P<0.05),Normal组肝组织SOD水平和Nrf2、ARE蛋白表达水平[分别为(53.18±8.77)U/mg、0.34±0.03、0.40±0.04]均较Model组大鼠[分别为(128.95±16.34)U/mg、0.87±0.09、0.94±0.09]显著降低(P<0.05);与Model组相比,GRg1⁃L组、GRg1⁃H组大鼠相关指标变化与上述相反(P<0.05)。Nrf2抑制剂减轻了GRg1对ICP大鼠的治疗作用。结论GRg1可能通过激活Nrf2/ARE信号通路对大鼠ICP具有一定的治疗作用。

心肌纤维化中人参皂苷Rg1和分化抑制因子-2的作用

心血管疾病是影响全球预期寿命的重要因素,心肌纤维化是心血管疾病终末期的基础病理表现,也是心血管疾病的加重因素。中医药改善心肌纤维化效果显著,人参皂苷Rg1可通过多种机制减轻心肌纤维化。分化抑制因子2 (ID2)是多脏器纤维化的负性调控因子,其表达增高对肝、肺、肾小管等多组织纤维化起减轻作用。本文对人参皂苷Rg1改善心肌纤维化和Id2与心肌纤维化关系进行综述,为基于Id2靶点的中药干预提供思路。

高效液相色谱法同时测定人参中人参皂苷F2和人参皂苷Rg3的含量

目的建立反相高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)同时测定人参中人参皂苷F2和人参皂苷Rg_(3)含量的分析方法。方法样品经高温高压蒸汽灭菌处理后,以0.4%磷酸水溶液:乙腈(90:10,V:V)为流动相,梯度洗脱,样品经C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,并于203 nm波长检测。结果人参皂苷F2在质量浓度8.46~84.56μg/mL之间呈现良好的线性关系,r^(2)=1.0000,加标回收率为97.54%~104.28%,相对标准偏差为2.4%;人参皂苷Rg_(3)在质量浓度18.61~139.60μg/mL之间呈现良好的线性关系,r^(2)=0.9999,加标回收率在96.42%~102.25%之间,相对标准偏差为2.0%。结论该方法前处理简捷、快速,色谱分析又能同时测定人参(药材)中人参皂苷F2和人参皂苷Rg_(3)含量,提高检测效率,可用于实验室对人参中人参皂苷F2和人参皂苷Rg_(3)的批量检测。

高效液相色谱法测定心脉素注射液中20(S)-人参皂苷Rg_2和20(R)-人参皂苷Rg_2构型异构体的含量

建立心脉素注射液中20(S)-人参皂苷Rg_2和20(R)-人参皂苷Rg_2构型异构体的高效液相色谱测定法。采用YWG—C_(18)分析柱,以甲醇-磷酸溶液(1→25)(7:3)为流动相,在203nm波长处检测。平均回收率分别为99.5％和100.6％。相对标准偏差分别为1.2％和1.4％。该方法准确、简便。

能量分辨质谱区分与检测人参皂苷同分异构体20(S)-Rf和Rg_(1)

将连续变化的碰撞能量与串联质谱相结合,建立了能量分辨质谱(Energy-resolved mass spectrometry,ERMS)分析方法用以区分和检测人参皂苷同分异构体20(S)-Rf和Rg_(1).ERMS将子离子与母离子强度的比值定义为强度分数(Intensity fraction,IF),两个子离子强度的比值定义为强度比(Intensity ratio,IR),并通过IF和IR分别对连续变化的碰撞能量作图建立特征碎片离子的IF和IR曲线.虽然20(S)-Rf和Rg_(1)的串联质谱图无明显差异,但是多元统计分析结果显示其特征碎片离子[M-Glc-H]-,[M-2Glc-H]-和[M-2Glc-C_(6)H_(12)-H]-的IF和IR曲线差异显著,有明显的区分边界,可以直接区分20(S)-Rf和Rg_(1).进一步利用ERMS实时分析了原人参三醇型皂苷生物转化产物中20(S)-Rf和Rg_(1)的相对摩尔含量.结果表明,ERMS不需液相色谱分离即可实现20(S)-Rf和Rg_(1)的快速区分和相对含量检测.

人参皂苷Rg_2对大鼠化学性心肌缺血的影响

目的 :观察人参皂苷Rg2 对化学性心肌缺血的保护作用。方法 :采用异丙肾上腺素、亚硝酸钠、垂体后叶素制备大鼠心肌缺血模型 ,iv给予人参皂苷Rg2 2 .5～ 10 .0mg·kg-1,观察心电图及心肌病理变化。结果 :人参皂苷Rg2 能明显抑制心电图S T段J点偏移 ,减小心肌坏死面积 ,降低肌酸激酶 (CK)、过氧化脂质 (MDA)含量 ,升高超氧化物歧化酶 (SOD)。结论 :人参皂苷Rg2 对大鼠心肌缺血有明显改善作用。

人参皂苷Rg_2对兔戊巴比妥钠心力衰竭的影响

目的 观察人参皂苷Rg2 (Rg2 )对兔戊巴比妥钠心力衰竭的影响。方法 复制戊巴比妥钠致心力衰竭模型 ,静脉注射Rg2 2 .5 ,5 .0和 1 0 .0mg/kg ,观察对血流动力学的影响。 结果 Rg2 2 .5 ,5 .0和 1 0 .0mg/kg静脉注射 ,可加快HR ,升高SBP ,DBP ,MAP ,LVSP及±dp/dtmax。 结论 Rg2 能改善心功能不全兔的血流动力学状况 ,具有强心作用。

人参皂苷Rg2对犬急性心源性休克的治疗作用

目的 :研究人参皂苷 (Rg2 )对急性心源性休克的治疗作用。方法 :采用冠状动脉分支结扎法复制犬缺血性心源性休克模型 ,给予Rg2 0 5mg/kg ,1mg/kg,生脉 15 0mg/kg,iv。观测药物对平均动脉压 (MBP)、心输出量(Co)、总外周阻力 (TPVR)、心外膜电图 (EECG)、心肌梗塞范围 (MIS)和血清心肌酶水平的影响。结果 :Rg2能明显增加心源性休克犬MBP、Co ;明显降低TPVR及心外膜电图ST段升高的总mV数 (ε -ST)和ST段升高等于或大于 2mV的电极数 (N -ST) ;缩小MIS ;减少血清磷酸肌酸激酶 (CPK)、乳酸脱氢酶 (LDH)和天冬氨酸转氨酶 (AST)的活性。结论 :Rg2对心源性休克犬缺血心肌有明显的保护作用 ,其作用优于生脉。

人参皂苷Rg3对结肠癌Caco-2细胞增殖和迁移的影响

目的研究人参皂苷Rg3对结肠癌Caco-2细胞的增殖和迁移能力的影响,为该药物的临床应用提供实验依据。方法MTT法检测人参皂苷Rg3处理的Caco-2细胞增殖情况,AnnexinV-PI流式细胞术检测Rg3处理的Caco-2细胞凋亡情况,实时RT-PCR和Western blot检测Bax、Bcl-2和caspase-3基因表达情况变化,ELISA检测细胞培养上清中IL-6和VEGF质量浓度,划痕实验检测细胞迁移能力。结果人参皂苷Rg3可显著降低Caco-2细胞的增殖并诱导凋亡,Rg3处理的Caco-2细胞中Bax和caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调;Rg3可以影响细胞培养上清中IL-6和VEGF因子的分泌,Rg3处理的Caco-2细胞迁移能力。结论人参皂苷Rg3促进细胞凋亡,抑制结肠癌Caco-2细胞增殖和迁移。

20-(S)和20-(R)人参皂苷Rg_2对心源性休克犬血流动力学和血氧含量的影响

目的 观察比较 2 0 - ( S)和 2 0 - ( R)人参皂苷 Rg2 ( ginsenoside Rg2 )不同构型对犬急性心源性休克血流动力学和血氧含量的影响。方法 结扎冠状动脉左前降支 ( L AD)造成心源性休克模型 ,分别 iv1mg/ kg的 2 0 - ( S) -人参皂苷 Rg2 ,2 0 - ( R) -人参皂苷 Rg2 、混合型人参皂苷 Rg2 ,观察比较对休克犬血流动力学和血氧含量各项指标的作用。结果 两种不同构型和混合型的人参皂苷 Rg2 ,与溶媒对照组比较 ,对平均动脉压 ( MAP)、左室内压( L VSP)、左室内压最大变化速率 (± dp/ dtmax)均有升高作用 ,增加心输出量 ( CO)、心脏指数 ( CI)、心博指数( SI)、动脉血氧含量、静脉血氧含量。结论 人参皂苷 Rg2 不同构型对犬急性心源性休克均具有较好的治疗作用。两种构型 Rg2 组比较 ,各项指标作用强度无显著差异。

人参皂苷Rg_2对拟血管性痴呆大鼠学习记忆的影响

目的:研究人参皂苷Rg2对拟血管性痴呆大鼠学习记忆的影响,并探讨其与谷氨酸离子型受体基因表达的关系。方法:双侧颈总动脉永久性结扎制备拟血管性痴呆大鼠模型,人参皂苷Rg2治疗后,检测大鼠自发性活动变化并用水迷宫法检测大鼠学习记忆变化;采用RT-PCR方法检测海马NR1、NR2A、NR2B和GluR2基因表达的变化。结果:拟血管性痴呆大鼠自发性活动显著减少,学习记忆能力明显下降,表现为信息游泳时间和选择游泳时间延长;人参皂苷Rg22.5、5.0、10.0mg/kg能剂量依赖性地增加大鼠自发性活动,缩短信息游泳时间和选择游泳时间,提高选择正确率,显著改善大鼠学习记忆障碍。拟血管性痴呆大鼠海马谷氨酸离子型受体亚基NR1mRNA表达显著增加,而NR2A、NR2B和GluR2mRNA的表达均显著降低,人参皂苷Rg2能逆转此变化。结论:人参皂苷Rg2能显著改善大鼠学习记忆障碍,机制可能与其有效调节脑内谷氨酸受体亚基基因的表达有关。

人参皂苷Rg_2与毒毛旋花子苷K的强心作用及毒性比较

目的 观察人参皂苷 Rg2 (简称 Rg2 )与毒毛旋花子苷 K(SK)对衰竭犬心的强心作用及毒性比较。方法 复制戊巴比妥钠致心力衰竭模型。给予 Rg2 0 .5 mg/m in和 SK0 .0 6 2 5 mg/m in,观察对心功能的影响及药物毒性反应。结果 二药均能升高血压 (BP)、加强心肌收缩力 ,增加左室内压 (L VSP)和左室内压最大变化速率 (± dp /dtmax) ,强心效力 SK稍大于 Rg2 ,但治疗宽度及治疗指数 Rg2 明显大于 SK。结论 Rg2 是一种安全范围宽的中效强心药物。

人参皂苷Rg1对细胞衰老过程中p21,cyclin E和CDK2表达的影响

目的 探讨p21、细胞周期蛋白E(cyclin E)和周期蛋白依赖性蛋白激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在人参皂苷Rgl对抗三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导’WI-38细胞衰老过程中的可能作用。方法 细胞超微结构、流式细胞分析和β-半乳糖苷酶细胞化学染色观察衰老细胞,蛋白印迹法检测p21,cyclin E和CDK2蛋白的表达。结果 Rgl预处理可明显减弱t-BHP对WI-38细胞衰老的诱导作用,同时p21表达水平明显降低,cyclin E和CDK2表达水平增加。结论 人参皂苷Rgl对抗三丁基过氧化氢对细胞衰老的诱导作用可能与其改变p21,cyclin E和CDK2的表达水平有关。

人参皂苷Rg_2对犬戊巴比妥钠心力衰竭的影响

目的 观察人参皂苷Rg_2(Rg_2)对犬戊巴比妥钠心力衰竭的影响。方法 复制戊巴比妥钠致心力衰竭模型,静脉注射Rg_2 0.5、1.0、2.0 mg·kg^(-1),观察对血流动力学的影响。结果 Rg_2 0.5、1.0、2.0mg·kg^(-1)静脉注射,可加快HR、升高SBP、DBP、MAP、LVSP及±dp/dt_(max);降低LV-EDP。结论 Rg_2能改善心功能不全犬的血流动力学状况,具有强心作用。

人参皂苷Rg1对小鼠脑缺血再灌注后脑组织损伤及Nrf2/HO-1途径的影响

目的:观察人参皂苷Rg1对小鼠脑缺血再灌注后脑组织损伤的影响,并从核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路研究其作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分组,连续给药3 d,末次给药1 h后,结扎双侧颈总动脉造成脑缺血20 min,再灌注24 h。以具有抗氧化应激损伤作用、治疗缺血性脑血管病有效的药物依达拉奉作为阳性对照药。取脑组织行海马CA1区神经细胞病理学测定,RT-PCR法测定Nrf2和HO-1mRNA表达,Western bloting测定脑组织胞核、胞浆Nrf2和全细胞HO-1蛋白含量。结果:(1)缺血再灌注24 h后,神经细胞出现病理性损伤,细胞存活率显著降低。人参皂苷Rg1和依达拉奉可使神经细胞损伤明显减轻,细胞存活率显著升高。(2)脑缺血再灌注24 h,脑组织Nrf2 mRNA和HO-1 mRNA表达增强,同时脑组织胞核和胞浆中Nrf2蛋白含量增加,核转位率升高,HO-1蛋白表达增强。人参皂苷Rg1和依达拉奉均能降低脑组织胞浆Nrf2蛋白含量,升高胞核Nrf2含量,使Nrf2核转位率升高,并使脑组织HO-1 mRNA和蛋白表达显著增加。依达拉奉的作用强于人参皂苷Rg1,但两药对脑组织Nrf2 mRNA表达无显著影响。结论:人参皂苷Rg1具有抗脑缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号途径、促进Nrf2合成和核转位、从而促进下游抗氧化蛋白HO-1的表达有关。

川芎嗪和人参皂苷Rgl对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

目的研究川芎嗪和人参皂苷Rgl对Caco-2细胞上P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响。方法利用高效液相色谱检测P-gp底物罗丹明-123的浓度,用流式细胞仪测定Caco-2细胞膜上P-gp的表达量。结果中、高浓度(120,240 mg·L^(-1))的川芎嗪能够使Caco-2细胞内Rh-123的浓度分别增加了1.7和8.2倍,与细胞孵育72 h后能够使Caco-2细胞表面P-gp的表达水平下调46.4%和61.2%,在1.5 h使罗丹明-123在Transwell的BL侧的累积排放量增加了1.3和1.8倍。中浓度(10 mg·L^(-1))的人参皂苷Rgl对罗丹明-123的外排和转运无显著影响。高浓度(20 mg·L^(-1))的人参皂苷Rgl使细胞内Rh-123的浓度增加了3.5倍,使1.5 h后在BL侧累积转运量增加1.3倍。中、高浓度(10,20 mg·L^(-1))的人参皂苷Rgl与细胞孵育72 h对P-gp的表达影响不大。中浓度(120 mg·L^(-1))的川芎嗪和人参皂苷Rgl(10 mg·L^(-1))合用时,细胞内Rh-123的浓度增加6.4倍,使罗丹明-123的累积转运量增加1.6倍,使P-gp的表达下调了38.2%。结论川芎嗪减少P-gp对细胞内罗丹明-123的外排,增强罗丹明-123跨小肠上皮细胞的转运;同时川芎嗪直接抑制P-gp的活性而影响P- gp功能,长期应用川芎嗪可下调P-gp的表达水平影响降低肠道P-gp的活性。高浓度的人参皂苷Rgl通过直接抑制P-gp的外排转运功能而影响肠道P-gp的功能,长期应用不影响P-gp的表达水平。当川芎嗪和人参皂苷Rgl合用时,对肠道P-gp功能具有协同抑制作用,但是对P-gp的表达无协同作用。