人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响

目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。

人参皂苷Rb1通过KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进肝细胞癌HepG2细胞发生氧死亡

目的:探讨人参皂苷Rb1(Gn-Rb1)对肝细胞癌(HCC)HepG2细胞氧死亡的影响及其可能的分子机制。方法:采用生物信息学方法分析氧死亡的关键基因PGAM5表达对HCC患者生存期的影响。选取辽宁省肿瘤医院收治的8例HCC患者的HCC组织与癌旁组织,通过WB法及qPCR检测氧死亡相关基因蛋白与mRNA的表达情况。将HepG2细胞随机分为对照组与Gn-Rb1组(予以200μmol/L Gn-Rb1干预),采用细胞克隆形成实验、划痕愈合实验分别检测Gn-Rb1对HepG2细胞的集落形成能力、迁移能力的影响,ELISA检测对细胞ROS生成水平的影响,微板法检测对细胞LDH释放水平的影响;WB法、qPCR法检测Gn-Rb1对HepG2氧死亡关键基因蛋白质与mRNA水平表达的影响。结果:生物信息学分析发现,PGAM5高表达肝癌患者总生存时间较低表达患者更长(P<0.05)。在临床HCC组织与癌旁组织样本中发现,相较于癌旁组织,在蛋白质与mRNA水平上,肿瘤组织KEAP1与PGAM5表达显著降低,NRF2表达显著升高(均P<0.01),p-AIFM1蛋白水平显著升高(P<0.05)。对HepG2细胞予以200μmol/L Gn-Rb1干预后,相较于对照组,Gn-Rb1组HepG2细胞的迁移能力与集落形成能力显著降低(均P<0.01),而LDH水平显著升高(P<0.05);相比于对照组,在mRNA和蛋白质水平上,Gn-Rb1组细胞中KEAP1、PGAM5表达均显著升高而NRF2表达均显著降低(均P<0.05),p-AIFM1蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:HCC组织中氧死亡被抑制,而Gn-Rb1能够通过调控KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进HepG2细胞氧死亡的发生,抑制细胞增殖和迁移能力。

SPE-UPLC联用快速检测保健品中人参皂苷Rh2成分

目的:基于固相萃取与超高液相色谱联用技术,建立一种快速准确检测保健品中人参皂苷Rh2成分的方法,为市售含有人参皂苷Rh2成分的保健品的质量评价提供参考。方法:样品预处理后经甲醇超声提取,中性氧化铝SPE小柱净化,筛选合适的洗脱剂进行HLB-SPE小柱分离纯化,采用WatersT3(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,乙腈-水为流动相梯度洗脱,PDA全波长扫描,流速0.3 mL·min^(-1)。结果:SPE-UPLC法测得人参皂苷Rh2浓度在9.7~99.8μg·mL^(-1)与其峰面积线性关系良好(r=0.999),平均回收率为99.20%。结论:该方法准确、简便、快速,并能有效去除辅料干扰,稳定性高,可用于含有人参皂苷Rh2有效成分的保健食品的质量控制。

装载人参皂苷Rh2外泌体的制备及其对肝癌细胞株Huh7、PLC半数抑制浓度测算

目的制备装载人参皂苷Rh2(G-Rh2)的外泌体(Exos@G-Rh2),并测算其对肝癌细胞株Huh7、PLC的半数抑制浓度(IC50)。方法利用外泌体提取试剂盒从肝癌Huh7细胞培养上清中分离提纯外泌体(Exos),采用电穿孔法制备装载G-Rh2的外泌体Exos@G-Rh2,使用透射电子显微镜观察Exos@G-Rh2、Exos形态,使用纳米颗粒跟踪分析仪测算Exos@G-Rh2、Exos粒径,采用高效液相色谱(HPLC)法测算Exos@G-Rh2中G-Rh2含量,并计算Exos@G-Rh2载药量。采用PKH-26荧光染色法观察肝癌细胞株Huh7、PLC对Exos@G-Rh2的摄取情况,采用CCK-8法测算Exos@G-Rh2、游离G-Rh2对Huh7细胞、PLC细胞的IC50。结果Exos及Exos@G-Rh2在电镜下均可见经典的茶托状结构,且有质膜包裹,形态无显著差异。Exos@G-Rh2、Exos粒径分别为(156.90±10.23)nm、(143.47±8.62)nm,两者相比,P>0.05。Exos@G-Rh2载药量为24.25%±0.27%。在Huh7细胞、PLC细胞中,红色荧光清晰可见,主要在细胞质中。在Huh7细胞中,游离G-Rh2的IC50值为(34.96±1.37)µg/mL,而Exos@G-Rh2的IC50值为(29.74±2.83)µg/mL,两者相比,P<0.05;在PLC细胞中,游离G-Rh2的IC50值为(33.41±1.47)µg/mL,而Exos@G-Rh2的IC50值为(30.08±1.12)µg/mL,两者相比,P<0.05。结论成功制备Exos@G-Rh2,其形态和粒径与Exos无显著差异,可被Huh7细胞、PLC细胞摄取。与游离G-Rh2相比,Exos@G-Rh2对Huh7细胞、PLC细胞的IC50更低。

人参皂苷F2对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应的改善作用

作为人参的主要生物活性物质,多数人参皂苷已被证实具有良好的抗炎作用,但是其抗炎机制研究较少,尤其是人参皂苷F2。因此,该研究基于脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7细胞产生炎症,构建体外细胞炎症模型,探究人参皂苷F2的抗炎作用。细胞活力实验表明人参皂苷F2在100μmol/L内对细胞无毒性作用,为安全浓度范围。人参皂苷F2可以显著抑制LPS刺激RAW264.7细胞NO释放,且呈剂量依赖性抑制(0~100μmol/L)。人参皂苷F2(50、100μmol/L)也呈剂量依赖性抑制一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA表达,100μmol/L时显著抑制iNOS和TNF-α的mRNA表达。经人参皂苷F2处理可显著下调iNOS蛋白表达,但对COX2蛋白表达无显著促进作用(P>0.05)。此外,经扫描电镜(SEM)观察,100μmol/L人参皂苷F2处理可以显著改善LPS刺激RAW264.7细胞的细胞形态改变。蛋白印迹表明,人参皂苷F2提高了PDK1、AKT、IκB-α蛋白的表达,降低了AKT蛋白磷酸化、NF-κB的核易位。该文研究结果表明人参皂苷F2具有较好的抗炎作用,并可能通过AKT/IκB-α/NF-κB信号通路发挥其抗炎作用,可为相关天然抗炎药物的开发提供理论支撑。

人参皂苷Rg_(3)对人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的影响

目的探讨人参皂苷Rg_(3)对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的改善作用及对核转录因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)信号通路的调节作用。方法用不同浓度人参皂苷Rg_(3)处理过氧化氢诱导的SRA01/04细胞,用噻唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞存活率。将第3代对数生长期SRA01/04细胞随机分为正常组、氧化损伤组(用200μmol∙mL^(−1)过氧化氢处理)、人参皂苷Rg_(3)低剂量组和人参皂苷Rg_(3)高剂量组(分别用40、80μg∙mL^(−1)人参皂苷Rg_(3)处理6 h,更换培养基后用200μmol∙mL^(−1)过氧化氢处理12 h),用MTT法检测细胞存活率,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用试剂盒检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,GSH-Px)的含量,用蛋白印迹法检测Nrf2、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch like epichlorohydrin related protein 1,Keap1)和HO-1蛋白的相对表达量。结果与0μg∙mL^(−1)人参皂苷Rg_(3)组比较,10、20、40、80μg∙mL^(−1)人参皂苷Rg_(3)组的细胞存活率逐渐升高(P<0.05)。与正常组比较,氧化损伤组的细胞存活率、SOD和GSHPx含量以及Nrf2、Keap1和HO-1蛋白相对表达量降低,细胞凋亡率和MDA含量升高(P<0.05);与氧化损伤组比较,人参皂苷Rg_(3)低剂量和人参皂苷Rg_(3)高剂量组的细胞存活率、SOD和GSH-Px含量以及Nrf2、Keap1和HO-1蛋白的相对表达量升高,细胞凋亡率和MDA含量降低(P<0.05);人参皂苷Rg_(3)低剂量和人参皂苷Rg_(3)高剂量组各项指标水平变化规律相同,人参皂苷Rg_(3)高剂量组更显著(P<0.05)。结论人参皂苷Rg_(3)可抑制过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞凋亡,减轻氧化应激损伤,其可能是通过激活Nrf2/HO-1信号通路发挥调节作用的。

心肌纤维化中人参皂苷Rg1和分化抑制因子-2的作用

心血管疾病是影响全球预期寿命的重要因素,心肌纤维化是心血管疾病终末期的基础病理表现,也是心血管疾病的加重因素。中医药改善心肌纤维化效果显著,人参皂苷Rg1可通过多种机制减轻心肌纤维化。分化抑制因子2 (ID2)是多脏器纤维化的负性调控因子,其表达增高对肝、肺、肾小管等多组织纤维化起减轻作用。本文对人参皂苷Rg1改善心肌纤维化和Id2与心肌纤维化关系进行综述,为基于Id2靶点的中药干预提供思路。

人参皂苷对过氧化氢诱导的Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

为研究人参皂苷对H_(2)O_(2)诱导的人结肠癌(Caco-2)细胞氧化应激损伤的保护作用,构建H_(2)O_(2)诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型,以不同质量浓度(10、20、50μg/mL)的人参皂苷干预H_(2)O_(2)诱导后的Caco-2细胞,通过形态学观察,CCK-8法检测细胞活力,测定胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平,测定氧化损伤标志物丙二醛(malondialdehyde,MDA)活力以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,评价人参皂苷的抗氧化应激水平。结果表明,200μmol/L的H_(2)O_(2)诱导Caco-2细胞4 h后,细胞存活率达到58%左右,符合建模要求。添加10~50μg/mL的人参皂苷明显提升受损细胞的存活率、SOD以及胞内GSH-Px活性,降低受损细胞内ROS和MDA水平,对H_(2)O_(2)诱导的Caco-2细胞氧化应激损伤起到良好的保护作用。

人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能、Janus激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路的影响。方法卵清蛋白致敏建立过敏性哮喘大鼠模型,造模成功的SD大鼠随机分成模型组、地塞米松组(0.5 mg/kg)、人参皂苷Rb1低剂量组(25 mg/kg)、人参皂苷Rb1高剂量组(50 mg/kg),每组14只。取14只健康大鼠设为对照组,各组腹腔注射相应药物处理14 d。酶联免疫吸附试验检测大鼠血清白细胞介素(IL)-4、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、免疫球蛋白(Ig)E水平,苏木素-伊红染色观察肺组织病理变化并进行肺损伤评分,分别采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和Western印迹法测定大鼠肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平。结果对照组肺组织结构正常,未观察到病理学改变;模型组肺组织出现肺泡壁充血和炎性细胞浸润的明显病理变化;地塞米松组、人参皂苷Rb1高剂量组肺组织损伤的严重程度明显减轻,炎性细胞浸润明显被抑制;人参皂苷Rb1低剂量组肺组织仍可见炎症反应,但较模型组程度轻。与对照组比较,模型组血清IL-4、TNF-α、IgE水平、肺损伤评分、肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平显著升高,IFN-γ水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、人参皂苷Rb1低、高剂量组血清IL-4、TNF-α、IgE水平、肺损伤评分、肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显降低,IFN-γ水平明显升高(P<0.05);人参皂苷Rb1高剂量组上述指标水平变化明显优于人参皂苷Rb1低剂量组(P<0.05);地塞米松组和人参皂苷Rb1高剂量组上述指标水平变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠具有治疗作用,可改善过敏性哮喘大鼠肺损伤,减轻炎症反应,提高免疫功能,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活有关。

人参皂苷Rg1调节Nrf2/ARE信号通路对大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症的影响

目的探讨人参皂苷Rg1(GRg1)调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应原件(ARE)信号通路对大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的作用。方法将雌性孕SD大鼠随机分为正常组(Normal组)、ICP模型组(Model组)、低剂量GRg1组(GRg1⁃L组,20 mg/kg GRg1)、高剂量GRg1组(GRg1⁃H组,40 mg/kg GRg1)、高剂量GRg1+Nrf2抑制剂全反式维甲酸(ATRA)组(GRg1⁃H+ATRA组,40 mg/kg GRg1+10 mg/kg ATRA),每组12只。采用苯甲酸雌二醇、黄体酮联合注射的方式建立大鼠ICP模型。给药结束后ELISA法检测大鼠血清总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和总胆汁酸(TBA)、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、γ⁃干扰素(IFN⁃γ)和白细胞介素⁃1β(IL⁃1β)及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。HE染色观察大鼠肝切片的病理学变化。免疫印迹法检测大鼠肝组织Nrf2/ARE信号通路相关蛋白的表达。结果与Normal组相比,Model组大鼠血清ALT、AST、TBIL、ALP、TBA水平均显著升高(P<0.05),Normal组炎症因子TNF⁃α、IFN⁃γ、IL⁃1β和肝组织MDA水平[分别为(248.26±27.64)pg/mL、(153.68±18.47)pg/mL、(189.53±23.21)pg/mL和(2.89±0.36)nmol/mg]均较Model组大鼠[分别为(53.47±8.69)pg/mL]、(24.72±2.94)pg/mL、(46.89±6.82)pg/mL和(1.05±0.14)nmol/mg]显著升高(P<0.05),Normal组肝组织SOD水平和Nrf2、ARE蛋白表达水平[分别为(53.18±8.77)U/mg、0.34±0.03、0.40±0.04]均较Model组大鼠[分别为(128.95±16.34)U/mg、0.87±0.09、0.94±0.09]显著降低(P<0.05);与Model组相比,GRg1⁃L组、GRg1⁃H组大鼠相关指标变化与上述相反(P<0.05)。Nrf2抑制剂减轻了GRg1对ICP大鼠的治疗作用。结论GRg1可能通过激活Nrf2/ARE信号通路对大鼠ICP具有一定的治疗作用。

人参皂苷Rg1通过Sestrin2保护心肌细胞的作用

目的研究人参皂苷Rg1(G-Rg1)对抗心肌缺血再灌注损伤中Sestrin2的作用及相关机制。方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞,按实验要求随机分5组,分别为对照组,缺氧复氧组,G-Rg1组,缺氧诱导因子-1α(Hypoxia Inducible Factor-1,HIF-1,HIF-1α)抑制剂组,Sestrin2 siRNA干扰组。流式细胞术检测各组心肌细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量。蛋白质免疫印迹法检测HIF-1α、Sestrin2、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)、活化转录因子6(the activating transcription factor6,ATF-6)和跨膜蛋白激酶1(inositol requiring enzyme 1,IRE-1)蛋白表达。免疫荧光法检测Sestrin2、HIF-1α、IRE-1蛋白表达。结果与对照组相比,缺氧复氧组细胞内ROS水平、HIF-1α、Sestrin2、ATF-6、PERK、IRE-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与缺氧复氧组相比,G-Rg1组细胞内ROS水平明显降低(P<0.05),HIF-1α、Sestrin2、ATF-6、PERK、IRE-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与G-Rg1组比较,HIF-1α抑制剂组心肌细胞内ROS水平升高,Sestrin2蛋白表达明显下调(P<0.05);与G-Rg1组比较,siRNA干扰组心肌细胞内ROS水平升高,IRE-1表达明显升高(P<0.05)。结论G-Rg1通过上调Sestrin2表达,保护缺氧复氧心肌细胞,并维持内质网应激平衡稳态。

人参皂苷Rh2对糖尿病肾病变大鼠肾损伤的保护作用及其机制

目的:探讨人参皂苷Rh2对糖尿病肾病变(DKL)大鼠肾脏损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法:通过高脂高能量饲料配以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法制备DKL大鼠模型。将30只SD成模大鼠随机分为模型组、低剂量(10 mg·kg^(-1))Rh2组和高剂量(20 mg·kg^(-1))Rh2组,每组10只,另选取10只SD大鼠作为正常对照组。检测各组大鼠体质量和肾脏质量,并计算肾指数,干预8周后全自动分析仪检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白(UP)水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠肾组织中Ⅳ型胶原(ColⅣ)水平,Western blotting法检测各组大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3和Smad7蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.01),肾脏质量和肾指数明显升高(P<0.01),血清中Scr、BUN和24 h UP水平均升高(P<0.01),肾组织中ColⅣ水平升高(P<0.01),肾组织中TGF-β1和Smad3蛋白表达水平升高(P<0.01),而肾组织中Smad7蛋白表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,低和高剂量Rh2组大鼠体质量升高(P<0.05或P<0.01),肾脏质量和肾指数均降低(P<0.05或P<0.01),血清中Scr、BUN和24 h UP水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),肾组织中ColⅣ水平降低(P<0.01),肾组织中TGF-β1和Smad3蛋白表达水平降低(P<0.01),肾组织中Smad7蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:人参皂苷Rh2可抑制DKL大鼠肾脏纤维化,改善肾功能,对DKL大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与Rh2调节TGF-β1/Smads信号通路表达有关。

人参皂苷Rg1调节miR-144-3p/FPR2/p38信号通路对实验性脑出血大鼠血脑屏障损伤和神经炎症的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1调节miR-144-3p对实验性脑出血大鼠神经炎症和血脑屏障损伤的影响,以及对甲酰基肽受体2(FPR2)/p38通路的调控作用。方法:90只SD大鼠随机分为对照组、脑出血组、人参皂苷Rg1低剂量组(10 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量组(40 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量+ago-miR-144-3p组(40 mg/kg人参皂苷Rg1+ago-miR-144-3p),每组18只,除对照组外均通过右侧尾状核注射胶原酶Ⅱ法构建实验性脑出血大鼠模型,按照各组要求腹腔注射给药以及脑内注射给药。对大鼠神经功能损伤进行评分;干湿比重法测定大鼠脑含水量;ELISA检测大鼠脑组织匀浆TNF-α、IL-6、IL-1β水平;电镜观察脑水肿周围超微结构;伊文思蓝(EB)法测定大鼠血脑屏障通透性;qRT-PCR与Western blot测定miR-144-3p/FPR2/p38通路表达。结果:与对照组相比,脑出血组大鼠血脑屏障损伤加重,大鼠神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达增加(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与脑出血组相比,人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组大鼠血脑屏障损伤减轻,神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达降低(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);ago-miR-144-3p可逆转人参皂苷Rg1对大鼠血脑屏障、神经炎症的保护作用(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可能通过调控miR-144-3p/FPR2/p38轴抑制大鼠血脑屏障损伤及神经炎症。

人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对人肺腺癌NCI-H1975细胞的作用研究

目的探讨人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对人肺腺癌细胞的体外作用,以期为非小细胞肺癌治疗研究提供理论依据。方法体外培养人肺腺癌NCI-H1975细胞,CCK-8法检测不同浓度人参皂苷和吉非替尼作用后的细胞活力,计算半抑制浓度(IC_(50)),然后用同样的方法检测人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对细胞活力的影响;分别用PI染色法、Annexin V-FITC/PI双染法和JC-1法检测人参皂苷Rh2、吉非替尼单药和联合用药对细胞周期、凋亡和线粒体膜电位的影响。结果人参皂苷Rh2和吉非替尼单药对NCI-H1975细胞的作用呈剂量依赖性和时间依赖性,作用24、48、72 h的IC_(50),Rh2分别为57.90、41.38、32.62μg·mL^(-1),吉非替尼分别为56.50、22.80、13.19μmol·L^(-1);两药以IC_(50)剂量联用作用72 h后,与各单药组比较,联合用药组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞周期无明显阻滞,细胞凋亡率显著升高(P<0.01),细胞线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。结论人参皂苷Rh2和吉非替尼联用可显著抑制NCI-H1975细胞活力和诱导细胞凋亡,其作用优于单独用药。

人参皂苷RH2通过BCL2L1/PI3K/AKT信号通路逆转环磷酰胺诱导的卵巢颗粒细胞损伤

目的探究人参皂苷RH2对环磷酰胺诱导的卵巢颗粒细胞(KGN)损伤的保护作用及分子机制。方法选取KGN细胞作为研究对象,应用环磷酰胺刺激建立早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)的体外模型。设置正常组、模型组(环磷酰胺,8μM,24 h)以及人参皂苷RH2组(40μM,24 h)。采用CCK8法检测人参皂苷RH2(40μM,24 h)对环磷酰胺导致的KGN细胞损伤的保护作用;应用AO/EB染色检测细胞凋亡情况;网络药理学(Network pharmacology,NP)分析人参皂苷RH2在POI中的潜在作用靶点以及下游通路。Western blot法检测BCL2L1、p-PI3K、p-AKT、PI3K以及AKT的蛋白表达。分子对接检测人参皂苷RH2与BCL2L1的结合能力。结果环磷酰胺刺激后,KGN细胞活性率呈剂量依赖性下降,而给予人参皂苷RH2能够逆转环磷酰胺导致的KGN细胞增殖率下降以及细胞凋亡。BCL2L1可能是人参皂苷RH2保护环磷酰胺诱导的KGN细胞损伤的靶点。过表达BCL2L1能够增加RH2对环磷酰胺诱导的KGN细胞损伤的保护作用。低表达BCL2L1能够逆转RH2对环磷酰胺诱导的KGN细胞损伤的保护作用。同时,人参皂苷RH2能够逆转由环磷酰胺导致的KGN细胞中p-PI3K/PI3K以及p-AKT/AKT表达升高。并且BCL2L1与人参皂苷RH2有很好的关联度(-7.28 kcal/mol),具有很强的结合能力。结论人参皂苷RH2对环磷酰胺损伤的卵巢颗粒细胞具有保护作用,该保护作用可能通过激活BCL2L1/PI3K/AKT通路,抑制卵巢颗粒细胞损伤。

超临界CO_(2)萃取人参叶中人参总皂苷的工艺研究

目的:应用Box-Benhnken响应曲面设计优化超临界CO_(2)萃取人参叶中人参叶总皂苷的工艺条件。方法:利用超临界CO_(2)技术提取人参叶中的总皂苷,采用紫外分光光度法对萃取物中总皂苷的含量进行测定,通过Box-Benhnken响应曲面设计进行多元线性回归和二项式拟合考察超临界CO_(2)萃取条件对人参总皂苷提取率的影响。结果:分光光度法测定波长为205 nm时,总皂苷质量浓度为0.0508~0.1016 mg/mL呈现良好的线性关系(r=0.9977),超临界萃取条件萃取温度为40℃,萃取压力为20 MPa,物料粒度为80目,乙醇夹带剂含量为0.25 mL时,人参叶中的人参总皂苷平均提取率为15.89%,平行测定三次最高提取率为16.07%,相对标准偏差为1.53%。结论:采用超临界CO_(2)萃取人参叶中人参总皂苷,高效、环保、工艺稳定,适用于工业化推广。

人参皂苷Rh_(2)在卵巢颗粒细胞炎性反应中的作用及作用机制网络药理学与分子生物学研究

目的探讨西洋参中人参皂苷Rh(2简称Rh_(2))在脂多糖(LPS)致人卵巢颗粒细胞瘤细胞系KGN细胞炎性反应中的作用及作用机制。方法通过网络药理学方法筛选西洋参治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的潜在活性成分及靶点。以200 ng/mL LPS作用KGN细胞6 h诱导炎性反应,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定KGN细胞中炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,采用2',7'-二氯双氢荧光素双乙酸酯(DCFH-DA)染色法测定活性氧(ROS)的水平;40µmol/L Rh_(2)作用KGN细胞24 h后,采用免疫印迹(Western blot)法测定哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在LPS诱导的KGN细胞中的表达水平。结果网络药理学分析结果显示,共筛选出西洋参的主要化学成分11个、潜在靶点144个、治疗PCOS的靶点13个,其中Rh_(2)与下游靶基因mTOR是西洋参抗PCOS的关键活性成分及潜在作用靶点。分子生物学研究结果显示,Rh_(2)能抑制LPS导致的KGN细胞中ROS和mTOR表达水平的升高,下调IL-1β和TNF-α的表达;低表达(50 nmol/L)mTOR能促进Rh_(2)缓解LPS导致的KGN细胞炎性反应,过表达(3µg)mTOR能逆转此现象。结论Rh_(2)通过调控mTOR的表达水平参与LPS导致的卵巢颗粒细胞炎性反应。

人参皂苷Rg_(3)提取制备、化学结构及其药理作用研究进展

作为稀有皂苷的人参皂苷Rg_(3)(ginsenoside Rg_(3),G-Rg_(3))是人参的重要活性成分之一,随着人参在临床上的使用越来越广泛,学者对G-Rg_(3)的提取制备、化学组成及药理作用的研究也愈来愈深入。不同的提取制备方法对G-Rg_(3)的含量和纯度均会产生不同程度的影响,进而对其药理作用的发挥也会有所影响。G-Rg_(3)具有抗肿瘤、保护心血管系统、保护神经系统等药理作用。文章在全面查阅并梳理文献资料的基础上,对G-Rg_(3)的提取制备、化学结构及药理作用进行综述,并对G-Rg_(3)的研究前景进行展望,以期对G-Rg_(3)的进一步开发利用和研究提供有效的理论支持。

人参皂苷CK对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡/自噬的调控作用

目的基于PKM2/mTOR信号通路探讨人参皂苷CK(ginsenoside compound K,CK)对大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡/自噬的调控作用和机制。方法将SD大鼠分为正常组(n=10)、模型组(n=10),CK组(n=10)和甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)组(n=10)。大鼠右后足跖皮内注射10 mg/mL弗氏完全佐剂(complete Freund adjuvant,CFA)0.1 mL,制备大鼠AA模型。注射免疫后第15天开始,CK组每天灌胃给药80 mg/kg CK,连续18 d;MTX组每天灌胃给药0.5 mg/kg MTX,每3 d给药一次。每3 d记录大鼠体质量,全身关节炎评分,关节炎指数和足爪肿胀度;计算脾脏和胸腺指数;Western blot检测FLS凋亡和自噬相关蛋白及PKM2和mTOR通路相关蛋白的表达;过表达质粒试剂盒检测FLS自噬流;流式细胞术检测FLS凋亡。结果与AA组比较,CK组和MTX组全身炎症评分、关节炎指数、足爪肿胀度和脾脏指数明显降低(P<0.05),Bax、p62和p-mTOR/mTOR的蛋白水平显著上调(P<0.05),Beclin1、Bcl-2和PKM2的蛋白水平显著下调(P<0.05),FLS凋亡率升高(P<0.05),自噬小体减少。MTX组和CK组全身炎症评分、关节炎指数、足爪肿胀度和脾脏指数的差异无统计学意义(P>0.05)。结论CK可能通过PKM2/mTOR信号通路调节大鼠FLS凋亡/自噬缓解AA大鼠关节炎症。

不同浓度人参总皂苷对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织细胞凋亡、免疫球蛋白及LCN2/AQP4蛋白的影响

目的探究不同浓度人参总皂苷对慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)大鼠肺组织细胞凋亡、免疫球蛋白及脂质运载蛋白(LCN)2/水通道蛋白(AQP)4的影响。方法选取60只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组(A组:健康大鼠),模型组(B组:慢阻肺模型大鼠),二陈汤加味组(C组:模型大鼠给予二陈汤干预),低浓度人参总皂苷组(D1组:模型大鼠给予低浓度人参总皂苷干预),中浓度人参总皂苷组(D2组:模型大鼠给予中浓度人参总皂苷干预),高浓度人参总皂苷组(D3组:模型大鼠给予高浓度人参总皂苷干预),每组10只,干湿重法测定肺体脂数(LBF)、肺含水量(LWC),苏木素-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态;流式细胞仪检测肺组织细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM水平;Western印迹检测肺组织中LCN2、AQP4蛋白表达。结果B组与A组比较,LBF、LWC含量、细胞凋亡率、LCN2显著升高(P<0.05),与B组比较,C、D1、D2、D3组的含量明显降低(P<0.05),且人参总皂苷各剂量组呈剂量依赖趋势,而C组与D1组相比无明显差异(P>0.05);A组肺组织结构、肺泡正常完整,间质均匀且无充血,而B组可见明显水肿出血,肺间质明显增厚,且有大量炎细胞浸润,与B组比较,C、D1、D2、D3组出血症状明显减少,部分肺间质和肺泡的组织结构趋向正常,炎细胞浸润现象明显改善,且人参总皂苷剂量越高,改善越明显;与A组相比,B组的IgG、IgA、IgM、AQP4的含量显著降低(P<0.05),与B组相比C、D1、D2、D3组的IgG、IgA、IgM、AQP4含量明显升高(P<0.05)。结论人参总皂苷可以有效抑制慢阻肺大鼠肺细胞凋亡,提高免疫球蛋白表达水平,对肺组织具有保护作用,且呈现浓度依赖性,其作用机制可能与调控LCN2/AQP4蛋白表达有关。