人参稀有皂苷的研究

人参的重要活性成分人参稀有皂苷具有较强的抗癌抗肿瘤等与药理作用。对人参稀有皂苷的化学成分、药理活性、制备方法的深入研究,有助于其药用价值的开发与利用。

人参稀有皂苷Compound K混合胶束的处方优化及体外评价

目的:优化人参稀有皂苷Compound K(CK)混合胶束的处方,考察其体外释放度和表观渗透系数(Papp)。方法:以大豆磷脂和维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)为辅料,采用溶剂挥发法制备CK混合胶束。以载药量、包封率、粒径为指标,采用正交试验优化投药量、大豆磷脂-TPGS比例、水化体积。考察最优处方所制胶束的形态、粒径、载药量、包封率、溶解度、体外释放度和在结肠腺癌Caco-2细胞模型中的Papp。结果:CK混合胶束的最优处方投药量为1.0 mg,大豆磷脂-TPGS比例为1∶1,水化体积为10 ml。所制混合胶束呈球形或类球形,平均粒径为(110±2.69)nm,载药量为(4.32±0.19)%,包封率为(92.23±2.76)%,溶解度为(469.21±0.024)μg/ml,150 h时累积释放度为(66.19±0.027)%(n=3)。CK原料药和CK混合胶束的Papp分别为26.20、3.78(n=6)。结论:优化的制备工艺可行,成功制得CK混合胶束。

人参稀有皂苷13周灌胃后对大鼠肝脏毒性研究

目的:以热转化后的人参稀有皂苷为原料,探究人参稀有皂苷90 d口服对大鼠肝毒性的研究。方法:将48只雌雄大鼠随机分为人参稀有皂苷高剂量(600 mg/kg)组、人参稀有皂苷中剂量(200 mg/kg)组、人参稀有皂苷低剂量(60 mg/kg)组与空白对照组。90 d经口灌胃处理后通过UHPLC-MS对大鼠血清进行代谢组学分析以及肝脏流式细胞凋亡综合分析对大鼠肝脏的潜在损伤。结果:雌雄大鼠高剂量组肝细胞凋亡率和对照组比较,有极显著差异(P<0.01)。代谢组学结果表明,与对照组相比,中低剂量组无显著差异(P>0.05),而高剂量雌性大鼠血清中出现了23种差异代谢物,如组氨酸、谷氨酸、脯氨酸和精氨酸等,并影响了组氨酸和尿素循环等代谢途径,血氨升高,引发肝损伤;在高剂量雄性大鼠血清中出现了10种差异代谢物,如亚油酸和花生四烯酸等,影响了α-亚麻酸和亚油酸代谢途径,高浓度的花生四烯酸表现出致炎性和毒性,可以通过血液吸收进入门静脉系统引起肝损伤。结论:高剂量的人参稀有皂苷对雌雄大鼠有轻微肝损伤,其主要原因是组氨酸和α-亚麻酸和亚油酸代谢途径的改变所导致的,对雌雄大鼠未观察到的肝脏不良反应水平均小于200 mg/kg。

酶反应产物中人参稀有皂苷F_2与C-Mc的分离

原人参二醇类皂苷混合物经人参皂苷酶生物转化后可生成F2、C-Mc等7～10种稀有人参皂苷。天然人参中不含人参皂苷C-Mc,且F2的含量极低。在生物转化所得的人参二醇类皂苷酶反应产物中,分离纯化得到稀有人参皂苷F2与C-Mc,并进行HPLC检测。反应后得到粗产品40g,经脱糖脱色和硅胶柱分离后,成功得到稀有人参皂苷F23.49g,纯度为98.2%,得率8.72%;得到C-Mc 0.70g,纯度为82.2%,得率为1.80%。成功分离出了F2和C-Mc制品,建立了初步的分离制备方法。

黑参中原人参二醇型稀有皂苷含量测定方法研究

目的 建立黑参中原人参二醇型稀有皂苷Rg3(S)、Rg3(R)、Rh2(S)和Rh2(R)的含量测定方法。方法利用高效液相色谱法,采用Agilent色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),在波长203nm处,柱温30℃,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,进行方法学考察,包括线性关系、精密度试验,稳定性试验、重复性试验、回收率试验以及样品含量测定等。结果 得到4种原人参二醇型稀有皂苷的标准曲线及其线性回归方程,表明4种人参皂苷在一定范围内呈现良好的线性关系。方法学考察中各项RSD值均小于3%,表明仪器的精密度良好,供试品溶液在24h内稳定,该方法重复性和准确度都达到要求。结论 最终建立的黑参中原人参二醇型稀有皂苷Rg3(S)、Rg3(R)、Rh2(S)和Rh2(R)含量测定方法 简单便捷、经济有效、重复性准确度高,可为进一步控制黑参质量提供检测依据。

理化及生物转化稀有人参皂苷的方法

为了实现稀有人参皂苷的大批量生产,从生物、化学、物理3个角度综述稀有人参皂苷的制备方法,从催化剂、转化条件和制备效率等方面进行总结和分析。结果显示,生物转化具有效率高、环境友好等优点,其转化效率大多高于化学转化和物理转化。此外,在所有参与转化的底物中,人参皂苷Rb_(1)、Rb_(3)较容易被转化成稀有人参皂苷CK、Rh_(2)、Rg_(3)等,Rb_(1)、Rb_(3)转化生产稀有人参皂苷Rg_(3)、CK等已较为成熟和产业化,随着技术的不断进步,稀有人参皂苷的批量生产技术水平将不断提升。

高效液相色谱法同时检测发酵人参中三种稀有人参皂苷

该研究建立高效液相色谱(HPLC)技术同时测定发酵人参中3种稀有人参皂苷Rg3、Rg3(R)、Rg5的方法。采用Xtimate-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水为流动相梯度洗脱,流速1 m L/min,进样量20μL,柱温30℃,采用外标法定量并进行方法学考察。结果表明,发酵人参中稀有人参皂苷Rg3、Rg3(R)、Rg5分别在78.76~315.02μg/m L、39.94~159.75μg/m L、42.54~170.16μg/m L质量浓度范围内呈良好线性关系(相关系数R^(2)>0.99),检出限(LOD)分别为0.05μg/m L、0.08μg/m L、0.02μg/m L,定量限(LOQ)分别为0.15μg/m L、0.23μg/m L、0.07μg/m L,不同加标水平Rg3、Rg3(R)、Rg5的平均回收率分别在101.61%~104.10%、100.22%~104.04%、100.68%~102.79%之间,精密度实验、重复性实验结果相对标准偏差(RSD)分别为2.6%、2.0%、2.5%;0.3%、0.6%、0.5%,均<5.0%。该方法操作简单,准确度好,精密度高,适用于发酵人参中稀有人参皂苷Rg3、Rg3(R)、Rg5的含量测定。

人参中稀有皂苷超临界二氧化碳提取

针对人参稀有皂苷极性较小的特点,选择超临界二氧化碳流体(SFE-CO2)技术进行提取,最佳提取实验条件为:压力35MPa,温度50℃,夹带剂为70%乙醇,夹带剂用量为1.7mL/g。利用高效液相色谱-电喷雾质谱联用分析方法分析其萃取产物,证明该提取方法的提取效率与超声提取接近,且该方法具有环境友好的特点。

人参稀有皂苷组分联合紫杉醇治疗A549肺癌的实验研究

中药组分联合化疗药物抗肿瘤是近年来临床肿瘤治疗的新方向。该研究通过MTT法优选人参稀有皂苷组分与紫杉醇的最优配比,并探讨其对肺癌A549细胞增殖、凋亡能力及体内抗肿瘤药效的影响。研究发现,优选出人参稀有皂苷组分与紫杉醇的配比为4∶6时,对肺癌A549细胞增殖的抑制作用与等剂量的紫杉醇相当。进一步研究发现,联合使用对A549细胞凋亡的诱导作用显著增加,同时上调caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2/Bax比率。荷瘤鼠模型显示两者联用可以显著抑制肿瘤生长,并减轻紫杉醇抗肿瘤时的肝毒副作用。该文建立的人参稀有皂苷组分-紫杉醇多组分体系,通过促进紫杉醇诱导细胞凋亡抑制肺癌A549细胞的增殖和生长,减少了紫杉醇的用量,达到降低紫杉醇的毒性,增强抗肺癌的效果,为后期研究及临床应用提供了理论依据。

蜗牛酶转化人参皂苷Rb_1制备人参稀有皂苷CompoundK的研究

目的:确定蜗牛酶转化人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷Compound K(CK)的主要因素,并优选出转化效率高、稳定、适合工业化生产的工艺条件。方法:采用蜗牛酶水解人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷CK,以转化率为指标,通过单因素考察p H值、温度、底物浓度、酶用量、反应时间对转化率的影响,并通过响应面法试验优化制备工艺;采用MS,1H-NMR,13C-NMR鉴定酶解产物。结果:酶解反应的最优条件为温度55℃、p H值5.5醋酸-醋酸钠缓冲液,底物浓度1.0mg/m L,酶与底物质量比1∶1,反应时间36h,在此条件下的转化率为86.91%;经核磁图谱证实产物为人参稀有皂苷CK。结论:蜗牛酶水解人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷CK反应条件温和,工艺简单可靠,适合工业化生产。

超声辅助酶解人参总皂苷制备人参稀有皂苷Compound K的研究

该实验采用超声辅助酶解人参总皂苷以制备人参稀有皂苷Compound K。以转化率为指标,通过单因素考察超声功率、超声时间等超声预处理因素和pH、温度、底物浓度、酶用量、反应时间等酶解因素对转化率的影响,并应用响应面法试验优化制备工艺;采用MS,1H,13C-NMR鉴定酶解产物。结果表明,超声辅助酶解反应的最适条件为超声功率250 W,超声时间15 min,酶解pH 5.5,酶解温度50℃,酶解时间36 h,酶用量-底物4∶5,底物质量浓度1.0 g·L-1;反应产物相对分子质量622.4,核磁图谱证实产物为人参稀有皂苷Compound K。在此条件下,以人参总皂苷计,人参稀有皂苷Compound K转化率为6.91%。该工艺反应条件温和,转化率较高,工艺简单可靠,适合工业化生产。

超声辅助结合离子液体双水相提取-高效液相色谱法测定三七中5种稀有人参皂苷的含量

建立了超声辅助结合离子液体双水相提取-高效液相色谱法测定三七中5种稀有人参皂苷20（S）-Rg2,20（S）-Rh1,Rk3,20（S）-Rg3及Rk1含量的方法.考察了影响提取率的多种因素并确立了最佳提取条件,在该条件下,5种稀有人参皂苷加样回收率均在92.07%-110.55%之间,RSD值均〈5.43%.实验结果表明,该方法具有快速、高效、准确且环保等优点,为中药材及其制剂中微量化学成分的提取、富集与分析提供了参考.

密闭式微波降解法促进常见人参皂苷向稀有人参皂苷转化的规律

采用密闭微波技术对7种常见人参皂苷单体(Rb1,Rb2,Rb3,Rc,Rd,Re和Rg1)进行降解,通过高效液相色谱(HPLC)分析并与相同条件下非微波降解物对比,研究了密闭微波降解人参皂苷的产物在化学结构及组成上的变化规律,以期快速、高效地制备生物活性高的稀有人参皂苷.结果表明,密闭式微波降解法能够使常见人参皂苷基本降解完全,而相同条件下非微波降解法则基本不发生降解.原人参二醇型人参皂苷易水解掉C20位糖,并发生C20位构型变化,生成20(R)-Rg3和20(S)-Rg3,其中20-(R)为优势构型,C20位羟基进一步脱水产生稀有人参皂苷Rk1和Rg5.同时,20(S/R)-Rg3失去C3位的1分子葡萄糖转化为20(S/R)-Rh2,C20位羟基再进一步脱水生成了Rk2和Rh3.此外,人参皂苷C20位所连的糖种类与构型影响了降解产物中各稀有皂苷的组成与比例,但7种原人参二醇型人参皂苷密闭式微波降解产物中Rg5含量均为最高.密闭式微波降解对原三醇型人参皂苷的转化作用与原二醇型人参皂苷具有相似的规律,人参皂苷Re和Rg1的密闭式微波降解产物中Rh4含量均为最高.本文结果进一步说明在相同的降解条件下,密闭式微波降解法的降解效率远高于高温高压非微波降解法,密闭式微波降解可明显促进常见人参皂苷向稀有人参皂苷转化,因此采用密闭微波技术对常见人参皂苷进行降解可以大量获得稀有人参皂苷.

重组嗜热β-葡萄糖苷酶转化稀有人参皂苷Rd和CK

利用高效液相色谱(HPLC)法,对重组嗜热β-葡萄糖苷酶(Fpglu1)转化稀有人参皂苷(Rd和CK)进行研究,并表征了其催化动力学参数.利用同源模建和分子动力学模拟等生物信息学技术,探究了Fpglu1转化人参皂苷的结构基础及其相互作用.结果表明,Fpglu1能够水解人参总皂苷生成稀有皂苷Rd和CK,其催化人参皂苷Rb_1,Rb_2和Rc的K_m值分别为0.318,1.840和5.269 mmol/L;酶的转换数(k_(cat))值分别为144.191,0.572和0.011 s^(-1).当转化时间分别为6和102 h时,Rd和CK的产率达到最大,分别为60%和93%.通过对该酶的结构预测及皂苷分子的对接研究发现,底物位于由疏水性氨基酸构成的底物口袋中,氨基酸残基Glu194和Glu367是参与催化作用的关键,且实验测得的酶促反应动力学参数(K_m)与对接的相互作用能量值存在线性关系.

稀有人参皂苷IH901酶法转化与制备研究

本研究利用酶制剂蜗牛酶,酶法转化三七二醇组皂苷制备稀有人参皂苷IH901,正交实验优化酶解条件,建立酶法转化工艺。结果表明:超声法提取三七总皂苷正交实验优化条件为用75%乙醇溶液,15倍溶剂用量,超声波提取210min作为最佳条件,三七总皂苷得率为12.21%;酶法转化二醇组人参皂苷制备稀有人参皂苷IH901,正交实验优化的条件为物料比为6/1、反应时间9h、反应温度为45℃、pH值为3.0,酶解得率为54.24%;经硅胶柱分离获得IH901单体化合物,HPLC测定纯度达98%。酶法转化制备皂苷IH901的工艺方法简便,切实可行,可为中试生产提供参考。

人参稀有抗肿瘤皂苷制备方法的研究

人参皂苷为人参、西洋参以及三七的主要活性成分,研究表明人参皂苷,尤其是稀有人参皂苷具有特殊的抗肿瘤活性。综述了人参稀有抗肿瘤皂苷的制备方法,包括酸水解、碱水解、Smith降解、加热水解以及酶水解的方法,为其制备大量的人参稀有抗肿瘤皂苷提供参考。

稀有抗肿瘤人参皂苷衍生物的制备与分离

目的:研究稀有抗肿瘤人参皂苷衍生物的制备与分离。方法:采用硅胶柱层析等色谱方法对人参总皂苷酸解产物进行分离,并通过重结晶纯化、理化常数测定和波谱数据进行化合物的结构鉴定。结果:从人参总皂苷酸水解产物中分离得到11个化合物,鉴定出10个化合物的化学结构分别为达玛烷-20(22)-烯-3β,12β,26-三醇(Ⅰ)、20(S)-25-甲氧基-达玛烷-3β,12β,20-三醇(Ⅱ)、人参二醇(Ⅲ)、20(S)-原人参二醇(Ⅳ)、20(R)-原人参二醇(Ⅴ)、20(S)-人参三醇(Ⅵ)、拟人参皂苷-F11苷元(Ⅶ)、20(R)-原人参三醇(Ⅷ)、20(R)-达玛烷-3β,12β,20,25-四醇(Ⅸ)、20(R)-25-羟基原人参五醇(Ⅹ)。结论:化合物Ⅰ、Ⅱ为从西洋参(茎、叶、果、花蕾)中首次发现。化合物Ⅸ为本课题组首次发现和报道的具有显著抗肿瘤活性的原人参二醇型皂苷元衍生物。

稀有人参皂苷的酶转化研究进展

人参皂苷是五加科人参属植物的主要活性成分之一。研究表明,人参皂苷经过体内代谢后生成的稀有皂苷在抗肿瘤、抗炎、抗衰老等方面的药理作用要强于原型皂苷,因此,稀有皂苷的制备成为目前人参研究领域的热点内容。人参皂苷的酶转化是稀有人参皂苷制备的主要途径之一,近些年取得了突破性的进展,以不同种类的糖苷酶为切入点,将相关研究内容进行了综述,分别讨论了不同类型的糖苷酶在稀有皂苷生物转化过程中的应用,以期为稀有皂苷的大规模开发利用奠定基础。

党参内生菌转化人参根总皂苷为稀有人参皂苷F2和C-K的研究

利用组织分离法从党参中分离得到32种内生菌,其中菌株D19转化人参主皂苷为稀有皂苷的活性最强.在最佳发酵条件(水培养基,pH 5.0)下,稀有人参皂苷F2、C-K和Rh1的最高产率分别为30%、17%和8%.根据单体皂苷转化实验确定了稀有人参皂苷的来源和人参皂苷Rb1的转化路径,并通过16SrDNA序列分析,鉴定内生菌D19为藤黄色杆菌属(Dyella).

稀有人参皂苷生物转化的研究进展

人参皂苷作为人参中的主要活性成分,被广泛应用于食品和药品中。人参皂苷因化学结构差异导致其具有不同的性质和功能。具有高活性的稀有人参皂苷在自然界中含量很低,限制了人参皂苷资源的利用。通过不同方法将高含量人参皂苷转化为稀有人参皂苷是获得稀有人参皂苷的重要途径。本文以人参皂苷的结构、药理作用为基础,综述生物修饰法对人参皂苷的糖基水解和母核结构的影响,并对稀有人参皂苷在食品、药品中应用的研究现状、未来发展趋势进行了分析,为改善人参皂苷资源应用提供理论依据。