丹参-人参配伍调控MDSCs重塑黑色素瘤免疫微环境的研究

目的研究丹参-人参配伍对鼠源黑色素瘤细胞株B16F10体内外免疫微环境的影响及其干预B16F10血行转移的作用机制。方法体外构建T淋巴细胞-B16F10共培养体系,流式细胞术检测丹参-人参配伍体外能否增强T淋巴细胞对B16F10的杀伤能力;构建B16F10小鼠尾静脉血行转移模型,利用动物活体成像技术、HE染色法观察丹参-人参体内对B16F10肺转移的作用。利用流式细胞术、免疫组化及免疫荧光技术检测荷瘤小鼠体内CD4^(+)、CD8^(+)T细胞、骨髓源性抑制细胞(MDSCs)等免疫细胞数量,利用qPCR技术检测MDSCs增殖的相关mRNA表达水平。结果丹参-人参配伍体外可增强T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤能力,在体可有效抑制小鼠B16F10肺转移,增强CD4^(+)、CD8^(+)T细胞浸润,通过抑制MDSCs增殖的相关mRNA表达水平,进而抑制转移灶MDSCs的表达。结论丹参-人参配伍可通过调控MDSCs重塑黑色素瘤免疫微环境,达到抑制肿瘤转移的目的。研究为丹参-人参配伍的临床抗肿瘤转移应用奠定基础。

人参黄芩配伍通过调控S100B信号通路对下肢动脉硬化闭塞症大鼠内皮细胞功能、氧化应激的影响

目的 探究人参黄芩配伍通过调控钙结合蛋白(S100B)信号通路对下肢动脉硬化闭塞症大鼠内皮细胞功能、氧化应激的影响。方法 选取40只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(N)组、模型(M)组、曲美他嗪(T)组、人参黄芩配伍(G)组各10只,对M、E、G组采用高脂饮食加隐动脉内膜损伤法建立下肢动脉硬化闭塞症模型,N组不建立该模型,建模成功后,对T组灌胃30 mg/kg曲美他嗪,对G组灌胃2 g/kg人生黄芩,N组、M组同期灌胃同体积生理盐水,塔洛夫(Tarlov)评分评价大鼠下肢运动功能,苏木素-伊红(HE)染色法检测血管组织病理形态,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测内皮细胞功能相关指标,黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测氧化应激相关指标,Western印迹检测S100B信号通路相关蛋白表达。结果 与N组比较,M组Tarlov评分明显降低(P<0.05);与M组比较,T、G两组Tarlov评分均明显升高(P<0.05);且与T组相比,G组升高显著(P<0.05);N组血管结构清晰完整,血管内皮细胞无增生及脱落,未见动脉硬化斑块及炎性细胞浸润,M组动脉壁各层分界不清,血管壁明显变厚,平滑肌细胞排列紊乱,可见大量内皮细胞增生、脱落及炎性细胞浸润,且出现明显动脉硬化斑块,与M组相比,T、G两组血管形态有所改善,动脉硬化斑块明显减少,且G组比T组改善明显;与N组比较,M组血清中内皮素(ET)-1、肝细胞生长因子(HGF)显著升高,NO显著降低(P<0.05);与M组比较,T、G两组血清中ET-1、HGF明显降低,NO显著升高,且G组与T组相比差异显著(P<0.05);与N组比较,M组血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量显著降低,丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05);与M组比较,T、G两组SOD含量显著升高,MDA含量显著降低,且G组比T组变化显著(P<0.05);与N组比较,M组血管组织中S100B、细胞外信号调节激酶(ERK)、核因子(NF)-κB蛋白表达明显升高(P<0.05);与M组比较,T、G两组血管组织中S100B、ERK、NF-κB蛋白表达均明显降低,且G组比T组降低显著(P<0.05),而P组与G组相比无明显差异(P>0.05),O组比P组降低明显(P<0.05)。结论 人参黄芩配伍可显著改善下肢动脉硬化闭塞症大鼠内皮细胞功能及氧化应激,其机制可能与抑制S100B信号通路有关。

GEO基因芯片结合网络药理学和分子对接技术探讨人参-茯苓-白术配伍治疗鼻咽癌作用机制及验证

目的基于GEO基因芯片数据库、网络药理学及分子对接技术,从分子水平探讨人参-茯苓-白术配伍治疗鼻咽癌的作用机制。方法在GEO数据库检索、下载鼻咽癌差异表达基因。通过TCMSP数据库检索人参、白术、茯苓化学成分及作用靶点。利用STRING平台及R语言、Perl语言软件筛选出交集靶点并进行蛋白相互作用分析、GO和KEGG通路富集分析,利用Cytoscape3.8.2构建靶点-通路网络,将人参-茯苓-白术配伍有效成分与核心靶点基因进行分子对接验证。利用CCK-8法检测并验证有效化合物对鼻咽癌细胞增殖的影响,Western blot验证其对靶点蛋白表达水平的影响。结果从GPL6480数据集获得2078个鼻咽癌的差异表达基因,共筛选出44种有效化学成分,21个交集靶点。核心靶点为JUN、IL1B、PLAU、STAT1、PTGS2,主要通过活性氧及一氧化氮生物合成过程、类固醇结合等生物过程,肿瘤、代谢、免疫、炎症等通路发挥作用;分子对接显示,花生四烯酸-PTGS2、苏齐内酯-PTGS2、豆甾醇-PLAU、β-谷甾醇-JUN对接效果好。CCK-8实验结果显示,不同浓度花生四烯酸、苏齐内酯、豆甾醇、β-谷甾醇均可抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖;Western blot结果显示,以上有效成分均可使对应的靶点蛋白表达下降。结论人参-茯苓-白术配伍通过多成分、多靶点、多通路防治鼻咽癌,可为后续研究提供方向。

人参黄芩配伍对多发性脑梗塞性痴呆模型大鼠脑能量的影响

目的:考察人参黄芩配伍对多发性脑梗塞性痴呆模型大鼠学习记忆功能的影响,并从脑能量角度探讨其作用机制。方法:采用微血栓栓塞法制备多发性脑梗塞性大鼠痴呆模型,采用Morris水迷宫评价其学习记忆能力;HE染色法观察海马CA1区病理学形态学;HPLC法测定脑组织ATP、ADP和AMP含量;流式细胞术检测大鼠海马线粒体肿胀及膜电位变化。结果:与模型组比较,人参黄芩配伍组逃避潜伏期显著缩短(P <0.05),穿越平台次数明显增加(P <0.05);海马CA1区椎体细胞排列紊乱和细胞数目减少明显改善(P <0.05);脑能荷值显著提高(P <0.05),线粒体肿胀度显著减轻,膜电位水平明显增高(P <0.05)。结论:人参黄芩配伍具有改善多发性脑梗塞性痴呆模型大鼠学习记忆功能的作用,保护线粒体损伤,改善脑能量进而保护神经细胞是其主要作用机制之一。

人参-附子体外心衰细胞保护作用配伍研究

目的通过建立体外心衰细胞模型,探讨人参附子不同配伍比例水煎液在相同浓度下对体外心衰细胞保护作用的强弱,筛选出疗效较好的人参附子配伍比例。方法取出生1~3 d SD大鼠的乳鼠心肌细胞进行原代培养用于实验;使用0.8%戊巴比妥钠加入心肌细胞培养板中得到心衰细胞模型;加入不同配伍比例人参附子水煎液,测得药物对心衰模型细胞离子转运相关酶活力的影响,测定培养液中脑钠肽(BNP)与肿瘤坏死因子(TNF-α)含量变化。结论2:1(人参:附子)组,1.5:1(人参:附子)组及1:1(人参:附子)组疗效较好,能够显著降低由心衰引起的TNF-α及BNP水平改变,通过调节心室肌细胞膜上离子转运相关酶活力,使心肌的收缩性加强,发挥抗心衰作用。