人参-五味子药对对PCPA失眠大鼠神经递质及cAMP/Epac/Raf1信号通路的作用机制研究

目的通过观察人参-五味子药对对失眠大鼠下丘脑中神经递质及其cAMP/Epac/Raf1信号通路水平的影响,探讨人参-五味子药对对PCPA失眠大鼠的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、地西泮组、人参-五味子低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只。除空白组外,其余5组连续3 d对大鼠进行腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制失眠模型。模型复制成功后,人参-五味子药对低、中、高剂量组给药浓度分别为0.3、0.9、2.7 g/mL,地西泮组给药浓度为0.002 g/mL,模型组、空白组每天生理盐水灌胃,各组每日灌胃2 mL,连续给药14 d。观察记录各组大鼠的行为学变化;采用HE(苏木素-伊红)染色法检测大鼠下丘脑组织病理形态的改变;ELISA(酶联免疫吸附法)测定大鼠下丘脑中甘丙肽(GAL)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、腺苷(Ado)水平;RT-PCR(实时荧光定量聚合酶链式反应)检测大鼠下丘脑中Eapc、Raf1mRNA的表达;IHC(免疫组织化学染色法)检测大鼠下丘脑中cAMP蛋白的含量。结果和空白组相比:模型组大鼠下丘脑病理切片损伤明显;GAL、5-HT、Ado含量显著下降(P<0.05),NE含量显著上升(P<0.05),下丘脑Eapc、Raf1 mRNA表达显著下降(P<0.05),下丘脑cAMP蛋白表达显著下降(P<0.05),差异有统计学意义。与模型组相比:地西泮组、人参-五味子低、中、高剂量组下丘脑病理切片损伤明显改善;地西泮组、人参-五味子中、高剂量组GAL、5-HT、Ado含量显著上升(P<0.05),NE含量显著下降(P<0.05),下丘脑Eapc、Raf1 mRNA表达显著上升(P<0.05),下丘脑cAMP蛋白表达显著上升(P<0.05),差异有统计学意义。结论人参-五味子药对可能通过上调cAMP/Epac/Raf1信号通路,缓解PCPA大鼠失眠症状。

基于网络药理学与分子对接研究人参-五味子药对治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的作用机制

目的:基于网络药理学与分子对接研究人参-五味子药对治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)的作用机制。方法:借助中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索人参和五味子的化学成分,并进行筛选,通过PharmMapper和STRING数据库进行药物化学成分靶点的预测,再结合CytoScape软件绘制出可以反映药物、化学成分和靶点之间联系的网络图;通过PharmGKB、TTD、GeneCards、DisGENET和OMIM数据库获得冠心病的相关靶点。制作韦恩图得到药物与疾病之间的交集而获取共同靶点,利用STRING数据库和CytoScape软件绘制药物疾病共同靶点的蛋白质-蛋白质相互作用网络并进行可视化分析。通过R语言对共同靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)富集分析,研究筛选出人参-五味子治疗冠心病的关键信号通路,最后根据高拓扑分析选择核心有效成分与核心靶点进行分子对接验证。结果:共获得人参-五味子药对30个活性成分,药物靶点188个,冠心病靶点1632个,两者共同靶点65个,其中度值比较高的有白蛋白(Albumin,ALB)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt Serine/threonine-protein Kinase 1,AKT1)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β);涉及通路主要有脂质与动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物(Advanced Glycation End-product,AGE)与其受体(Receptor for Advanced Glycation End-products,RAGE)信号通路等通路;分子对接结果显示,主要有效成分山柰酚与核心靶点ALB、AKT1、IL-1β能较好结合。结论:人参-五味子药对能够治疗冠心病,可能是其主要靶点ALB、AKT1、IL-1β等通过保护血管内皮细胞、进行抗炎反应、缓解动脉粥样硬化等方面来实现的。

基于熵权法和灰色关联度法结合生物活性优选人参-五味子药对最佳配伍比例

目的:通过熵权法和灰色关联度法并结合生物活性优选人参-五味子最佳配伍比例。方法:对人参-五味子单煎液和合煎液的总皂苷、总黄酮、总多糖、总酚酸、总三萜、总木脂素进行测定;DPPH法和ABTS法研究单煎液和合煎液的抗氧化活性;采用熵权法对总物质成分、抗氧化活性等指标进行权重分析,以相对关联度为评价测度,选择10个评价指标构建人参-五味子不同比例配伍的评价模型,筛选最优配伍比例。细胞生物活性验证,采用CCK8法测A549细胞增殖抑制实验,结合人参-五味子共煎液通过免疫调节巨噬细胞RAW264.7影响A549增殖实验,最终确定人参-五味子最佳配伍。结果:灰色关联度分析中,人参-五味子配伍1∶6比例相对关联度为0.657,效果最好,1∶2比例配伍效果次之。细胞实验的IC_(50)值验证人参-五味子配伍之后的生物活性与灰色关联度分析结果一致。最终优选人参-五味子最优配伍比例为1∶6。结论:基于熵权法和多指标测定的灰色关联度分析并结合生物活性的筛选方法,可系统、全面比较人参-五味子不同比例配伍的效果,最终优选出最佳配伍,为人参-五味子配伍药用资源的高效合理利用及药用新资源的开发提供依据。