人参-知母-赤芍提取物对血管性痴呆大鼠海马神经元的保护作用及机制

目的:观察人参-知母-赤芍提取物对血管性痴呆大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)的影响,探讨其保护海马神经元的作用机制。方法:60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组,假手术组,模型组,人参-知母-赤芍提取物组(0. 20 g·kg-1)和美金刚组(2. 1 mg·kg-1),每组12只。采用双侧颈总动脉反复夹闭合并腹腔注射硝普钠的方法建立血管性痴呆大鼠模型,造模后,正常组,假手术组,模型组给予同等体积生理盐水,每日1次,连续14 d。采用Morris水迷宫评价各组大鼠学习记忆能力;苏木素-伊红(HE)染色观察海马CA1区病理改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马神经元胞膜NMDAR1的蛋白表达水平;免疫组化法(IHC)检测海马NMDAR1的表达情况;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测海马组织中NMDAR1 mRNA的表达水平。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长(P <0. 01),在平台所在象限停留时间及穿越平台的次数显著减少(P <0. 01),海马CA1区神经细胞层次减少,排列紊乱、出现核固缩、神经元丢失,NMDAR1蛋白及mRNA表达显著升高(P <0. 01);与模型组比较,人参-知母-赤芍提取物组,美金刚组逃避潜伏期明显缩短(P <0. 05,P <0. 01),在平台所在象限停留时间及穿越平台的次数明显增加(P <0. 05,P <0. 01),海马CA1区神经元数目与形态有明显改善,海马神经元NMDAR1蛋白及NMDAR1 mRNA表达明显降低(P <0. 05)。结论:人参-知母-赤芍提取物能够改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,减轻海马CA1区神经元的损伤,其机制可能与下调海马神经元NMDAR1的表达有关。

人参、银杏叶提取物对β-淀粉样蛋白_(1-40)毒性损伤大鼠全脑神经递质的影响

目的探讨给予人参、银杏叶提取物（脑维康）前后,β-淀粉样蛋白（β-amyloid peptide,Aβ）1-40毒性损伤大鼠全脑乙酰胆碱、单胺类递质及其代谢产物水平的变化和可能机制.方法以双侧海马CA1区注射Aβ1-40（每侧4 g·L^-1）大鼠为模型,给药组大鼠每天灌胃给予脑维康（15.5、31、62 mg·kg^-1）4 wk.以改进的柱前、柱后双酶柱结合高效液相电化学方法检测大鼠全脑乙酰胆碱含量,以高效液相电化学方法检测大鼠全脑单胺类神经递质及其代谢产物的含量.结果双侧海马注射Aβ1-404 wk后,大鼠全脑乙酰胆碱、5-羟色胺含量明显降低 （P〈0.05～0.01）,多巴胺、去甲肾上腺素表现下降趋势.给药4 wk后,脑维康各给药组大鼠全脑乙酰胆碱含量较模型组大鼠升高（P〈0.05～0.01）,多巴胺、5-羟色胺水平无变化,高香草酸、5-羟吲哚乙酸水平呈下降趋势,其中脑维康15.5 mg·kg^-1组高香草酸含量下降（P〈0.05）.结论脑维康可升高Aβ1-40毒性损伤大鼠脑内的乙酰胆碱水平,对单胺类递质代谢有一定的调节作用.该药改善大鼠学习记忆损伤的机制可能与其保护脑内胆碱能和单胺能系统或干预神经递质的合成、摄取和降解等作用有关.

RP-HPLC法同时测定人参提取物转化产物中20(S)、20(R)-人参皂苷Rg2和20(S)、20(R)-人参皂苷Rh1的含量

目的建立同时测定人参提取物转化产物中20（s）、20（R）-人参皂苷Rg2和20（s）、20（R）-人参皂苷Rh1含量的方法。方法采用RP．HPLC法。色谱柱为迪马C18柱（4．6mm×250mm，5um），流动相为乙腈-水梯度洗脱，检测波长为203nm，流速为1．0mL·min^-1，柱温为30℃。结果人参提取物转化产物中20（S）、20（R）—人参皂苷Rg2和20（S）、20（R）-人参皂苷Rhl质量浓度分别在4．0～80mg·L^-1、2．8—56mg·L^-1、3．2—64mg·L^-1、2．4—48mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为0．9998、0．9998、0．9991、0．9997，回收率分别为100．3％、98．1％、98．0％、99．9％，回收率的RSD值分别为3．1％、2．7％、4．7％、4．0％。结论方法准确、可靠、重现性好，为人参提取物转化产物的质量控制提供参考依据。

LCMS-IT-TOF法分析黄芪赤风汤提取物的化学成分

目的：分析鉴别黄芪赤风汤提取物化学成分。方法：采用高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱法（LCMS-IT-TOF）对黄芪赤风汤提取物化学成分进行分析,采用Venusil MP-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,乙腈（A）-水（B）为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源为质谱离子源,正、负离子检测模式,获得不同化合物的多级质谱数据。结果：根据高分辨质谱数据信息,结合对照品质谱信息及相关文献,共鉴定推断出41个化合物。结论：LCMS-IT-TOF可全面、快速分析黄芪赤风汤提取物中的化学成分,为其质量控制提供参考。

人参三七川芎提取物延缓衰老小鼠血管老化的实验研究

目的探讨衰老小鼠血管老化所导致的血管壁结构和功能的改变以及人参、三七、川芎提取物的干预作用。方法建立自然衰老小鼠模型,小鼠随机分为衰老模型组、人参三七川芎提取物高、中、低剂量组、维生素E组,另设青年对照组,观察各组主动脉形态学改变,检测血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管组织抗超氧阴离子、晚期糖基化终末产物(AGEs)、基质金属蛋白酶(MMP-2)与其抑制剂(TIMP-2)含量以及MMP-2/TIMP-2比值。结果人参三七川芎提取物能够改善衰老小鼠主动脉形态学衰老变化,HE染色见内皮细胞脱落减少,平滑肌细胞(SMC)增生减少,Masson染色显示中药各组胶原纤维相对含量降低(P<0.05),中药高剂量组SMC相对含量降低(P<0.05)。中药高、中、低剂量组血管组织抗超氧阴离子含量显著增高,AGEs含量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。中药各剂量组小鼠血管组织MMP-2水平降低,TIMP-2水平显著升高,MMP-2/TIMP-2比值明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论人参三七川芎提取物能够改善衰老小鼠主动脉形态学衰老变化,降低血管组织中活性氧的生成,减少AGEs生成,抑制MMP-2的活性,调节MMP-2/TIMP-2的平衡,从而最终降低衰老小鼠血管的僵硬度,减少血管重构,延缓小鼠血管老化的发生。

知母及其不同炮制品的指纹图谱建立与抗氧化活性的谱-效关系研究

目的:建立知母及其不同炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的指纹图谱,并考察其与抗氧化活性的谱-效关系。方法:分别采用高效液相色谱法(HPLC)和高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),色谱条件分别为色谱柱Thermo BDS Hypersil C18、流动相乙腈-0.2%醋酸水溶液、流速1.0 m L/min、柱温30℃、检测波长258 nm、进样量10μL以及色谱柱XDB-C18、流动相乙腈-0.2%醋酸水溶液(梯度洗脱)、流速0.9 m L/min、柱温30℃、雾化器温度40℃、氮气流速1.6 m L/min、进样量10μL。分别以芒果苷、知母皂苷BⅡ为参照,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)》绘制20批知母及其炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的指纹图谱并进行相似度评价,标定共有峰。以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为指标,考察20批知母及其炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的抗氧化活性。以DPPH自由基清除率为因变量、共有峰峰面积为自变量,采用偏最小二乘回归法分别分析知母乙醇提取物和丙酮提取物与抗氧化活性的谱-效关系。结果:从20批知母炮制品乙醇提取物指纹图谱中标定出共有峰8个(M1~M8),指认出芒果苷(色谱峰M7);相似度为0.389~1.000;从丙酮提取物指纹图谱中标定出共有峰7个(S1~S7),指认出知母皂苷BⅡ(色谱峰S5);相似度为0.044~0.999。20批知母及其炮制品乙醇提取物的DPPH自由基清除率为21.23%~81.39%,生知母显著低于盐知母、酒知母(P<0.001);丙酮提取物的DPPH自由基清除率为49.73%~83.78%,生知母显著高于盐知母、酒知母、炒知母(P<0.001)。知母乙醇提取物图谱中峰M2~M7的标准化回归系数均大于0,与抗氧化活性成正相关;仅峰M7的变量重要性投影(VIP)值大于1。知母丙酮提取物图谱中峰S4~S7的标准化回归系数均大于0,与抗氧化活性成正相关;VIP值大小排序依次为峰S5>S6>S4,且VIP值均大于1。结论:成功建立知母乙醇提取物和丙酮提取物的指纹图谱。芒果苷(峰M7)可能是知母乙醇提取物抗氧化作用的主要药效物质;知母皂苷BⅡ(峰S5)、峰S6、峰S4可能是知母丙酮提取物抗氧化作用的主要药效物质。

人参提取物速释微丸的制备及性质考察

目的:制备含有人参提取物固体分散体的速释微丸制剂,并探讨其释药特征。方法:采用熔融法将人参提取物与PEG 6000混合制备固体分散体,用差示热扫描量热法(DSC)对药物固体分散体进行表征,研究药物在载体中的存在状态;并以固体分散体为原料,用挤出-滚圆技术制备速释微丸,同时考察常用辅料对微丸释药的影响,通过检查微丸的收率和崩解时限评价微丸的质量。结果:所制备的微丸收率为91.55%、崩解时限为27.50 s,药物迅速释放效果良好。结论:以人参提取物固体分散体为药物所制备的速释微丸收率高、溶化性好、崩解迅速、硬度适宜,并且能显著改善人参提取物的体外溶出特征。

人参-三七-川芎提取物对过氧化氢诱导内皮细胞衰老SIRT1自噬通路的机制研究

观察人参-三七-川芎提取物对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的内皮细胞衰老SIRT1-自噬通路的影响。该研究以血管内皮细胞作为研究对象,过氧化氢诱导内皮细胞衰老作为模型,实验分为空白对照组(control),模型组(model)、模型+DMSO组(DMSO),白藜芦醇组(RESV)及人参-三七-川芎提取物低(GNS-L)、中(GNS-M)、高(GNS-H)剂量组,药物干预时间为24 h。应用倒置显微镜观察细胞生长状态,透射电子显微镜观察自噬小体的形成,免疫荧光染色观察细胞微管相关蛋白1轻链3β(LC3)的变化,自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)双荧光体系融合蛋白示踪自噬流,单丹磺酰尸胺(dansylcadaverine,MDC)染色检测自噬囊泡,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测蛋白沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin 1,SIRT1)、泛素结合蛋白p62及LC3Ⅱ的表达。H_(2)O_(2)造模后,细胞生长速度放慢,细胞贴壁能力下降,SA-β-gal染色蓝染细胞增多,胞质内出现一定数量的双层膜结构的自噬小体及次级溶酶体,自噬流水平略增。给予药物干预后,与模型组相比,各剂量组细胞形态改善,贴壁能力尚可,细胞膜相对完整光滑,SA-β-gal染色蓝染细胞减少,胞质中出现较多自噬小体、自噬空泡及次级溶酶体,自噬溶酶体数量增多,自噬流增加,LC3及MDC染色的荧光强度明显提高,SIRT1及LC3Ⅱ蛋白表达增加,同时p62蛋白表达下调,表明用药后可以提高细胞自噬水平。中药人参-三七-川芎提取物可以延缓血管内皮细胞的衰老,且药物干预后,自噬流及相关蛋白SIRT1、LC3Ⅱ及p62变化明显,自噬水平明显提升,且EX527削弱了中药延缓血管衰老的作用,中药人参-三七-川芎提取物可能通过SIRT1自噬通路延缓血管内皮细胞的衰老。

人参-三七-川芎提取物对高糖高脂诱导血管内皮细胞衰老的影响

目的:观察益气活血中药人参、三七、川芎提取物延缓高糖高脂诱导的血管内皮细胞衰老的分子生物学机制。方法:采用40mmol·L^-1葡萄糖和100μmol·L^-1棕榈酸钠造模,实验分为空白组、模型组和中药低、中、高剂量组(50,100,200mg·L^-1),干预48h。采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)检测细胞增殖能力;细胞衰老β-半乳糖苷酸(SA-gal)染色检测细胞衰老程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞p16,p21蛋白表达水平的变化;免疫荧光检测p-H2A.X(Ser139)表达,线粒体ROS(mtROS)产生和线粒体膜电位(MMP)改变。结果:与空白组比较,模型组细胞增殖能力及MMP水平降低(P<0.01),SA-β-gal蓝染细胞数量,mtROS生成和p16,p21,p-H2A.X(Ser139)表达增加(P<0.05,P<0.01);而与模型组比较,人参-三七-川芎提取物可提高细胞增殖能力和MMP水平(P<0.01),减少SA-β-gal蓝染细胞数量和mtROS生成(P<0.01),并能够降低p16,p21和p-H2A.X(Ser139)的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:益气活血中药人参-三七-川芎提取物能够延缓高糖高脂引起的血管内皮细胞衰老,其机制可能与升高线粒体膜电位,减少ROS生成引起的DNA损伤累积有关。

人参、银杏叶提取物对Aβ_(1-40)诱导的大鼠原代神经元凋亡的保护作用

目的:观察β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)对原代神经元的损伤以及人参、银杏叶提取物(extracts of ginseng and ginkgobiloba,EGGB)的保护作用。方法:以Aβ1-40诱导大鼠原代神经元建立Aβ毒性损伤细胞模型,结合Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术、MTT比色法、透射电镜及Western blot法,确定Aβ1-40的造模浓度与时间,检测EGGB对原代神经元细胞增殖活性、凋亡率、超微结构和细胞caspase-3蛋白表达的影响。结果:1μmol.L-1Aβ1-40作用24 h可诱导原代神经元凋亡率显著升高(P<0.01);EGGB(5,50 mg.L-1)可明显增强细胞增殖活性(P<0.05);EGGB(50 mg.L-1)可明显抑制神经元凋亡、改善细胞超微结构、抑制caspase-3的过度表达(P<0.05,P<0.01)。结论:Aβ1-40可明显诱导体外培养的原代神经元凋亡,EGGB则有较好的神经保护作用,可有效抑制神经元凋亡,这种作用可能是与其改善神经元及亚细胞器结构、提高细胞增殖活性、抑制caspase-3的过度表达等有关。

HPLC-UV-ELSD同时测定知母黄柏药对提取物中盐酸小檗碱、黄柏碱、知母皂苷BⅡ

目的:建立知母黄柏药对提取物中盐酸小檗碱、黄柏碱、知母皂苷BⅡ的HPLC-UV-ELSD含量测定方法。方法:采用HPLC-UV-ELSD方法,色谱柱:Dikma C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.2%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温30℃,UV检测波长280 nm,蒸发光散射检测器检测,漂移管温度46℃,氮气压力1.5 Bar。结果:盐酸小檗碱、黄柏碱及知母皂苷BⅡ的线性范围分别是1.008～3.528μg(r=0.999 5),0.322～1.127μg(r=0.999 6),0.702～2.457μg(r=0.999 8),平均加样回收率分别为100.11%,98.97%,99.56%;其RSD分别为1.08%,0.90%,1.37%。结论:该法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于知母黄柏药对提取物中主要有效成分的含量测定。

GC-MS和化学计量学组合方法研究赤芍二氯甲烷提取物化学成分

目的:系统分析加速溶剂萃取法获得的赤芍二氯甲烷提取物化学组分。方法:气相色谱-质谱(GC-MS)检测提取物,利用化学计量学组合方法,即重叠色谱峰用粗糙惩罚平滑法处理后,经直观推导式演进特征投影(HELP)法解析,得到提取物中各成分的色谱和质谱信息,通过利用各组分质谱信息和谱库标准质谱相似度而获得定性分析结果,用总体积积分法和归一化法相对定量。结果:解析获得71个色谱峰,定性分析出52个组分,占总含量的86.97%。二氯甲烷提取物中主要含有酸、酚、醇和酯类等物质,其中苯甲酸、牡丹酚和邻甲基苯酚含量依次最高。结论:提出了简便快速对赤芍二氯甲烷提取物化学成分进行系统研究的方法。所得结果信息量多,定性准确度高,可为赤芍的研究和质量控制提供依据。

人参-三七-川芎提取物延缓过氧化氢诱导的内皮细胞衰老中线粒体氧化应激的作用

目的:通过观察人参-三七-川芎提取物(GNC)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老中线粒体氧化应激的影响,探讨GNC对衰老HUVECs的治疗机制。方法:本研究以HUVECs作为研究对象,H_(2)O_(2)诱导内皮细胞衰老作为模型,实验分为空白组,H_(2)O_(2)组,H_(2)O_(2)+DMSO组(DMSO),白藜芦醇组(Resv)及GNC提取物低(GNC-L),中(GNC-M),高(GNC-H)质量浓度组,除空白组,H_(2)O_(2)组外,其余各组分别给予DMSO 1 mL·L^(-1),Resv 8μmol·L^(-1),GNC 400,300,200 mg·L^(-1)药物干预,24 h后除空白组外给予300μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)诱导HUVECs衰老,再给予正常培养基培养24 h。采用衰老特异性β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法鉴定细胞衰老程度,流式细胞仪分析细胞周期,采用Mito SOX RED荧光染色法测定细胞内线粒体活性氧(mtROS)水平,以JC-10为荧光探针检测细胞内线粒体膜电位变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测含锰超氧化物歧化酶(MnSOD)与磷酸化(p-)p66的蛋白表达。结果:SA-β-gal染色结果显示,与空白组比较,H_(2)O_(2)组SA-β-gal染色蓝染细胞显著增多(P<0.01);与H_(2)O_(2)组比较,各浓度组SA-β-gal染色蓝染细胞显著减少(P<0.01);细胞周期结果显示,与空白组比较,H_(2)O_(2)组G0/G1期细胞数量比例明显增多(P<0.05),G2/M期细胞比例明显减少(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,GNC各组及Resv组G0/G1期细胞数量比例明显减少(P<0.05),GNC-H组,Resv组在G2/M期细胞比例明显增加(P<0.05)。线粒体ROS荧光结果显示,与空白组比较,H_(2)O_(2)组强度明显减弱(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,GNC-H,GNC-M组强度明显增高(P<0.05);线粒体膜电位结果显示,与空白组比较,H_(2)O_(2)组荧光强度显著下降(P<0.01);与H_(2)O_(2)组比较,GNC-H,GNC-M,GNC-L组线粒体膜电位荧光强度显著增高(P<0.01),Resv组明显增高(P<0.05);Western blot结果显示,与空白组比较,H_(2)O_(2)组MnSOD含量明显降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,GNC-H与GNC-M组表达明显增多(P<0.05);与空白组比较,H_(2)O_(2)组p-p66含量显著增高(P<0.01);与H_(2)O_(2)组比较,各用药组表达显著降低(P<0.01),表明用药后可减轻细胞内线粒体氧化应激反应。结论:中药人参-三七-川芎提取物可以延缓H_(2)O_(2)诱导的血管内皮细胞的衰老,药物干预后,细胞线粒体活性氧、线粒体膜电位及相关蛋白MnSOD,p-p66蛋白发生明显改善,氧化应激反应减轻,其机制可能是中药通过抑制线粒体氧化应激反应延缓血管内皮细胞衰老的进程。

人参-三七-川芎提取物对内皮微粒介导HUVECs衰老的干预作用

目的:观察人参-三七-川芎提取物对延缓内皮微粒(EMPs)诱导的血管内皮细胞衰老的影响,并探索其作用机制。方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,复制性衰老10~12代细胞作为衰老模型,实验分为年轻组(2~4代细胞)、衰老组(10~12代细胞)、单纯EMPs干预组(提取衰老细胞产生的EMPs来干预年轻细胞)以及中药低、中、高剂量组(200,300,400 mg·L-1)。结合衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法和碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期来判断细胞衰老程度。采用细胞活性和细胞增殖检测(CCK-8)法筛选给药浓度,两步离心法分离出EMPs,藻红蛋白(PE)CD31抗体或异硫氰酸荧光素(FITC)Annexin V标记分离得到的EMPs,并用流式细胞术进行定量,2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFDA)染色检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果:与衰老组比较,中药给药组可显著降低衰老细胞SA-β-gal活性(P<0.01),使细胞周期S期阻滞得到恢复(P<0.01),并降低衰老细胞分泌CD31+EMPs及Annexin V+EMPs的数量(P<0.05)。与年轻组比较,单纯EMPs干预组可诱导年轻细胞SA-β-gal活性增强(P<0.01),细胞周期阻滞于S期(P<0.05),与衰老组比较,但在EMPs干预的同时给予中药干预后,可明显抑制EMPs介导增强的SA-β-gal活性(P<0.05),并使S期阻滞得到恢复。中药组还可明显抑制EMPs诱导的细胞内ROS增高(P<0.05,P<0.01)。结论:人参-三七-川芎提取物可通过影响EMPs延缓复制性血管内皮细胞衰老,其机制可能与抑制EMPs诱导的细胞内ROS水平增高有关。

人参-三七-川芎提取物延缓高糖诱导的小鼠血管钙化的机制

目的:从小鼠颈总动脉、胸主动脉中骨桥蛋白(OPN)和平滑肌22α蛋白(SM22α)表达及血管钙盐沉积程度,探讨人参-三七-川芎提取物对高糖诱导的小鼠血管钙化的保护作用。方法:130只雄性C57BL/6小鼠先随机分为正常组和高糖组。高糖组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)后,高脂饮食连续喂养7个月,之后再次随机分为模型组、人参-三七-川芎提取物低、高剂量组(0.819,1.638 g·kg^-1)及二甲双胍组(150 mg·kg^-1)。每组灌胃给药,每天1次,连续9周,并监测血糖变化。给药结束前7 d,购进一批4周龄雄性C57BL/6小鼠,正常喂养1周,作为青年组。全部给药结束后,收集小鼠颈总动脉和胸主动脉组织。分别采用冯库萨(Von Kossa)染色判断小鼠颈总动脉、胸主动脉钙盐沉积程度,免疫组化检测小鼠颈总动脉、胸主动脉中OPN与SM22α蛋白表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定小鼠颈总动脉中OPN与SM22α蛋白表达情况。结果:与青年组比较,正常组小鼠血糖升高无统计学差异,颈总动脉、胸主动脉结构染色均匀,未见黑色颗粒状沉淀;与正常组比较,模型组血糖显著升高(P<0.01),血管中内膜弹性纤维内有大量棕黑色颗粒沉积,钙盐沉积程度明显;与模型组比较,各给药组血糖明显下降(P<0.05,P<0.01),血管钙盐沉积程度明显减轻。与青年组比较,正常组小鼠颈总动脉、胸主动脉中OPN蛋白和SM22α蛋白表达无显著改变;与正常组比较,模型组颈总动脉、胸主动脉中内膜OPN蛋白表达呈阳性,SM22α蛋白表达呈弱阳性,颈总动脉中OPN蛋白表达灰度值显著升高(P<0.01),SM22α蛋白表达灰度值显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组颈总动脉、胸主动脉中内膜OPN蛋白和SM22α蛋白表达显著改善,颈总动脉中OPN蛋白表达灰度值明显降低(P<0.05,P<0.01),SM22α蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:高糖能够诱导小鼠颈总动脉、胸主动脉钙化,加速血管老化,这一形成过程可能与OPN与SM22α表达有关。人参-三七-川芎提取物可通过调节OPN与SM22α表达,减轻血管钙化,延缓血管老化。

人参-三七-川芎提取物延缓高糖诱导的小鼠血管衰老的机制探讨

目的:从单磷酸腺苷活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)通路探讨人参-三七-川芎提取物对高糖诱导的小鼠血管衰老的保护作用。方法:130只雄性C57BL/6小鼠先随机分为空白组和高糖组,高糖组腹腔注射链脲佐菌素(STZ),并用高脂饮食连续性喂养7个月后再次随机分组,分为模型组、人参-三七-川芎提取物低剂量组(0.819 g·kg^(-1))、人参-三七-川芎提取物高剂量组(1.638 g·kg^(-1))及二甲双胍组(150 mg·kg^(-1)),灌胃给药,每天1次,连续9周,期间检测小鼠体质量和血糖变化。给药结束后,苏木素-伊红(HE)染色检测小鼠胸主动脉形态,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠胸主动脉周期蛋白依赖激酶抑制因子2A(p16),周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21),AMPK,p-AMPK,mTOR,pmTOR,肝激酶B1(LKB1),p-LKB1,核糖体蛋白s6激酶(p70s6k),p-p70s6k蛋白表达情况。结果:与空白组相比,模型组小鼠体质量显著降低、血糖显著升高(P<0.01),在药物干预9周后,各给药组小鼠体质量无明显差异,血糖值较模型组明显下降(P<0.05,P<0.01)。与空白组相比,模型组内膜损伤严重且有增生,中膜明显增生且排列不整齐,给药各组内膜损伤不明显,中膜少量增生,p16,p21,mTOR,p-mTOR,p70s6k,p-p70s6k蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),AMPK,p-AMPK,LKB1,p-LKB1蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01)。药物干预后,各给药组p16,p21,mTOR,p-mTOR,p70s6k,p-p70s6k蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01),AMPK,p-AMPK,LKB1,p-LKB1蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:高糖能够诱导小鼠主动脉衰老,人参-三七-川芎提取物可能通过AMPK/mTOR通路改善由高糖诱导的小鼠主动脉衰老。

人参-三七-川芎提取物对糖尿病小鼠心肌纤维化的保护作用

目的:从心肌纤维化程度及心肌组织中胶原蛋白Ⅰ型(CollagenⅠ),胶原蛋白Ⅲ型(CollagenⅢ)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达,探讨人参-三七-川芎提取物(GNC)对糖尿病小鼠心肌纤维化的保护作用。方法:建立链脲佐菌素(STZ)联合高脂饲料诱导糖尿病小鼠模型,另设正常组,糖尿病小鼠按照随机数字表法分为模型组,GNC低、高剂量组(0.819,1.638 g·kg^-1)及二甲双胍组(150 mg·kg^-1)。各组均灌胃给药,正常组给与等剂量的去离子水,1次/d,连续9周。胶原纤维染色(Masson三色染色法)观察小鼠心肌间质纤维化程度,并用Image-pro plus 6.0分析软件计算胶原密度比值;免疫组化检测小鼠心肌组织CollagenⅠ,CollagenⅢ及TGF-β1蛋白表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠心肌组织内CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β1的蛋白表达电泳及灰度值水平。结果:Masson实验结果显示,与正常组比较,模型组小鼠心肌细胞肥大、变形,心肌间质尤其是在微血管周围,有大量蓝染的胶原纤维沉积,相互连接交织成网状(P<0.01);与模型组比较,GNC低、高剂量组和二甲双胍组小鼠心肌细胞排列紊乱明显改善,心肌间质蓝染的胶原纤维也较模型组明显减少(P<0.05)。免疫组化和Western blot结果显示:与正常组比较,模型组小鼠心肌组织CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β1阳性表达,蛋白表达含量明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组蛋白阳性表达均降低,蛋白表达含量趋于正常(P<0.05,P<0.01)。结论:STZ联合高脂饲料能够诱导糖尿病小鼠心肌纤维化,诱导CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β1蛋白高表达。人参-三七-川芎提取物可通过调节CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β1蛋白表达,改善糖尿病小鼠心肌纤维化。

从AMPK/mTOR通路探讨人参-三七-川芎提取物对糖尿病小鼠心脏老化的保护作用机制

目的:从AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的活化及心脏病理形态学变化、相关衰老蛋白的改变,探讨人参-三七-川芎提取物(GNC)对糖尿病小鼠心脏老化的保护作用机制。方法:C57BL/6雄性小鼠,SPF级,随机分为正常组和高糖组。高糖组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)联合喂食高脂饲料,造模成功后再次随机分为模型组,GNC低剂量组(0.819 g·kg^-1),GNC高剂量组(1.638 g·kg^-1)及二甲双胍组(150 mg·kg^-1)。每天1次,灌胃给药,连续9周,监测血糖变化。4周龄雄性C57BL/6小鼠正常喂养1周,为青年组。观察小鼠一般情况,苏木素-伊红(HE)染色结合透射电镜(TEM)观察小鼠心脏病理形态学变化,冯库萨(Von Kossa)染色判断小鼠心脏微血管钙盐沉积程度,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠心脏组织中AMPK/mTOR信号通路活化状态,以及衰老相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2),抑癌基因p53(p53),磷酸化抑癌基因p53(p-p53)表达。结果:与正常组比较,模型组血糖显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组血糖明显下降(P<0.05,P<0.01)。HE,TEM,Von Kossa 3个病理形态学实验结果显示:与正常组比较,模型组小鼠心肌细胞肥大,心肌纤维排列紊乱、灶性溶解坏死,线粒体肿胀、变性、嵴断裂、空泡变,心脏微血管结构紊乱、染色不均匀、中内膜有大量钙盐沉积;与模型组比较,各给药组小鼠病理形态学变化均有不同程度的改善。与正常组比较,模型组MMP-2,p53和p-p53蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),p-肝激酶B1(LKB1)/LKB1,p-AMPK/AMPK蛋白明显降低(P<0.05,P<0.01),p-mTOR/mTOR,p-核糖体蛋白S6激酶p70S6K/p70S6k蛋白显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组MMP-2,p53和p-p53蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),p-LKB1/LKB1,p-AMPK/AMPK蛋白明显升高(P<0.05,P<0.01),p-mTOR/mTOR,p-p70S6k/p70S6k蛋白明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:STZ联合高脂饲料能够诱导小鼠心脏老化,GNC能够改善糖尿病小鼠心脏老化,其作用机制可能与调控AMPK/mTOR通路相关蛋白表达有关。

人参-三七-川芎提取物对高糖诱导小鼠血管老化后α-SMA和Runx2蛋白表达的影响

目的:为了研究人参-三七-川芎提取物(GNC)对高糖诱导小鼠血管老化后α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和runt相关转录因子2(Runx2)蛋白表达的调控作用,阐明GNC延缓血管老化的保护作用机制。方法:C57BL/6小鼠,130只,雄性,随机分为正常组和高糖组。高糖组腹腔注射链脲佐菌素(STZ),造模成功后,喂食高脂饲料7个月,之后再次随机分为模型组,GNC低、高剂量组(0.819,1.638 g·kg^-1)及二甲双胍组(150 mg·kg^-1)。灌胃给药,每天1次,连续9周。取材前7 d,新购一批4周龄雄性C57BL/6小鼠正常喂养1周,为青年组。观察小鼠一般情况,实验结束后分别用苏木素-伊红(HE)染色结合透射电镜(TEM)观察小鼠颈总动脉形态学变化,马松(Masson)染色观察小鼠颈总动脉纤维化,免疫组化检测小鼠颈总动脉中基质金属蛋白酶-2(MMP-2),周期蛋白依赖激酶抑制因子2A(p16),周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21),α-SMA与Runx2蛋白表达。结果:HE,TEM,Masson 3个实验结果显示:与青年组比较,正常组小鼠颈总动脉中内外膜厚度、超微结构和血管壁中胶原和弹性纤维的相对含量几乎无变化;与正常组比较,模型组小鼠颈总动脉内膜不光滑,内皮细胞几乎完全脱落,胞质裂解,内弹性膜变薄、断裂、甚至脱离,可见增生的胶原纤维潜入中膜,中外膜增生明显且排列紊乱(P<0.01),血管平滑肌细胞变形、突起、分叉增多、甚至碎裂,并可见局灶性坏死,细胞内空泡和溶酶体等大量增多,并可见明显的自噬泡。血管壁中外膜胶原和弹性纤维的相对含量增加明显(P<0.01);与模型组比较,各给药组以上病理情况均有所改善(P<0.01)。免疫组化结果显示:与正常组比较,模型组小鼠颈总动脉MMP-2,p16,p21,Runx2高表达(P<0.01),α-SMA低表达(P<0.01);与模型组比较,各给药组各蛋白表达趋于正常(P<0.05,P<0.01)。结论:高糖能够诱导小鼠颈总动脉血管老化,改变α-SMA,Runx2蛋白表达。GNC可通过调节α-SMA,Runx2蛋白表达,延缓血管老化。

中药川赤芍的化学成分研究

从川赤芍的乙醇提取物中分离得到8个化合物,分别鉴定为芍药苷(paeoniforin,1),羟基芍药苷(oxy- paeoniflorin,2),苯甲酰芍药苷(benzoylpaeoniflorin,3),芍药苷内酯(albiflorin,4),苯甲酸(benzoic acid,5),β-谷甾醇(β-sitosterol,6),胡萝卜甙(daucosterol,7),没食子酸(gallic acid,8)。