三亚地区2019-2020年急性肠胃炎患者A群双埃可病毒的分子特征

目的了解热带地区A群双埃可病毒(Parechovirus-A,PeV-A)流行率及其基因特征。方法2019年1月至2020年8月期间在三亚中心医院开展急性腹泻病监测,收集病例资料和患者粪便标本,采用巢式RT-PCR检测PeV-A,并对特定基因序列进行系统进化分析。结果纳入了2019年1月至2020年8月期间就诊的急性肠胃炎患者267例。PeV-A检出率为3.37%(9/267),检测到三种PeV-A基因型(HPeV1、HPeV3和HPeV5),它们与中国北京或中国香港的参考毒株关系最为密切。HPeV阳性患者主要为2岁以下幼儿,在夏季和冬季(分别为5月至8月和12月至2月),PeV-A的检出率较高。与PeV-A阴性腹泻患者相比,PeV-A阳性腹泻患者有更高比例的呼吸道感染、腹痛、呕吐和发烧。轮状病毒和诺如病毒是急性胃肠炎患者中最常见的与PeV-A共感染的病毒。结论PeV-A是三亚地区急性胃肠炎的重要病原体,流行的基因型与我国其他地区报道的相似。

北京市急性腹泻患儿中A组双埃可病毒的感染状况及基因型研究

目的对2021年北京市急性腹泻患儿A组双埃可病毒(parechovirus A,PeV-A)的感染状况及基因型别进行研究。方法2021年1~12月,每月随机抽取北京市腹泻监测某哨点医院门诊就诊的<60月龄急性腹泻患儿粪便标本。提取病毒核酸,通过实时荧光RT-PCR检测PeV-A。用巢式RT-PCR扩增PeV-A的VP3/VP1连接区,通过测序和NCBI BLAST程序比对确定PeV-A基因型别;用实时荧光PCR对A组轮状病毒、诺如病毒、肠道腺病毒、星状病毒和札如病毒进行检测,分析混合感染状况。利用生物信息学及统计软件分别完成进化和统计分析。结果198例粪便标本中,PeV-A阳性11例,检出率为5.56%(11/198)。其中,2例混合肠道腺病毒感染。81.82%(9/11)的PeV-A阳性患儿<24月龄。秋季检出率最高,为12.50%(7/56)。90.91%(10/11)的PeV-A感染集中在夏秋两季。11例阳性标本中有9例测序成功,其中,7例为PeV-A1B型,2例为PeV-A3型。结论2021年北京市急性腹泻患儿感染PeV-A共检出PeV-A1B和PeV-A3两种型别,2岁以内婴幼儿是PeV-A感染的好发人群。腹泻患儿感染PeV-A主要集中在夏秋两季。

EVaGreen实时荧光PCR法检测人类双埃可病毒

目的:构建实时荧光PCR法以测定人类双埃可病毒RNA。方法:通过相关资料自行设计合成人类双埃可病毒引物,将病毒RNA进行反转录之后,进行基于EVaGreen染料的实时荧光定量(Real-time)PCR扩增,通过高分辨率溶解曲线、核酸电泳及产物测序验证PCR结果。结果:对该病毒保守区约260BP片段扩增成功,测序证实为人双埃可病毒序列,建立了该病毒EVaGreen实时荧光PCR检测方法。结论:为人类双埃可病毒的检测提供了一种快速简便的方法。

福州市腹泻住院儿童中A组双埃可病毒流行情况及基因型别分析

目的探讨福州市5岁以下腹泻住院儿童中A组双埃可病毒(parechovirus A,PeV-A)的流行情况和基因型别分布。方法通过Real-time RT-PCR方法对2018年福州市腹泻监测哨点医院5岁以下腹泻住院儿童粪便标本进行PeV-A筛查;采用巢式RT-PCR方法扩增PeV-A阳性标本的VP3/VP1连接片段并进行测序分型。结果在316例标本中检测出PeV-A阳性标本28例,阳性率为8.86%,其中2例混合杯状病毒感染,与轮状病毒、腺病毒和星状病毒无混合感染。阳性标本中成功分型24例,包括21例PeV-A1、1例PeV-A3和2例PeV-A6,主要流行型别为PeV-A1型,占87.5%(21/24)。PeV-A感染主要发生在1岁以下婴幼儿群体中,感染高峰期在8~10月份。结论PeV-A1是引起福州腹泻住院儿童的主要病原体,主要以1岁以下婴幼儿为感染对象。

埃可病毒11型利用双受体CD55和FcRn侵染细胞的分子结构基础

埃可病毒11型属于小RNA病毒科,肠道病毒属,是B族肠道病毒中的一个重要血清型.埃可病毒11型可导致儿童和青少年脑炎和脑膜炎等疾病,在婴儿和新生儿中导致重症感染甚至致命的病例也时有报道.此外,埃可病毒11型还多次在新生儿和婴幼儿群体中引起暴发性感染,如2019年中国广东省发生的院内感染暴发事件,造成了19例新生儿的感染和5例死亡,严重威胁人类健康和公共卫生安全.CD55是20世纪90年代初发现的部分埃可病毒的吸附受体,该受体可以帮助病毒吸附在细胞表面,但并不能介导病毒完成完整的入侵过程.我们在2019年的研究中,发现了人新生儿Fc受体(neonatal Fc receptor,FcRn)是B族肠道病毒的通用脱衣壳受体,并以埃可病毒6型为例解析了病毒入侵机制.本研究利用冷冻电子显微镜技术,解析了埃可病毒11型在入侵过程中不同pH条件下各阶段的病毒颗粒结构,以及病毒与两受体的复合物,共10个原子或近原子水平高分辨率冷冻电子显微镜结构,并结合表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)和脂质体模拟试验等分子水平试验,系统地阐述了埃可病毒11型利用CD55和FcRn"双受体系统"入侵细胞的分子机制.埃可病毒11型利用其VP2、VP3结构域与吸附受体CD55的3、4两个短同源重复(short consensus repeat,SCR)结构域结合,结合后病毒颗粒不发生变构.病毒与脱衣壳受体Fc Rn结合之后,开始发生变构,并可在脂质体膜的辅助作用下释放遗传物质完成脱衣壳.与埃可病毒6型不同的是,埃可病毒11型结合FcRn之后在中性条件下即可起始变构.本项研究解析了重要病原埃可病毒11型侵染细胞的分子结构基础,并进一步完善了非囊膜病毒的"双受体"入侵模型.

广州和厦门鼠类携带3种致腹泻病毒检测分析

目的了解鼠类携带致腹泻病毒情况,充实感染性腹泻病原体动物宿主的流行病学背景资料。方法2012—2014年采用笼捕法捕捉鼠类,收集来自广东省广州市和福建省厦门市的鼠类粪便样品,提取病毒RNA,RT-PCR检测样品中的A组轮状病毒(RVA)、GI、GII型诺如病毒(No V)和人双埃可病毒(HPeV)的核酸序列,并对实验获得序列进行测序和系统进化树分析。结果共收集样品224份,分别来自188只褐家鼠、27只黄毛鼠、9只黄胸鼠。在褐家鼠粪便中检出1份HPeV核酸阳性,阳性率为0.53%(1/188),但病毒分型实验未成功。在所有标本中未发现RVA或GI、GII型NoV核酸阳性。结论首次发现在褐家鼠有携带HPeV的可能,但仍有待进一步研究证实。

2013年深圳市儿童病毒性腹泻中主要病毒的检测与研究

目的了解深圳市儿童病毒性腹泻的季节分布及流行病学特点,为制定防治对策提供依据。方法从5岁以下腹泻儿童粪便标本中选取已排除细菌感染的标本,用RQ-PCR检测人双埃可病毒、轮状病毒A组、诺如病毒、肠道腺病毒及星状病毒,对检测结果进行分析。结果 120份标本中病毒的阳性率为39.2%,其中人双埃可病毒的阳性率为12.5%,A组轮状病毒的阳性率为14.2%,诺如病毒的阳性率为15.8%。夏季是人双埃可病毒的感染高峰,秋、冬季是轮状病毒及诺如病毒的感染高峰,A组轮状病毒发病人群都集中在2岁以下低年龄段儿童,双埃可病毒及诺如病毒在5岁以下儿童中普遍易感。结论除轮状病毒及诺如病毒外,双埃可病毒在儿童腹泻中也占有较大比例,需要引起重视。