拓扑特肯对人口腔上皮癌细胞株（KB）的增殖抑制及其p-Erk1／2的表达

目的 测定拓扑特肯对体外培养口腔上皮癌细胞株（KB)的生长抑制作用及其Erk1／2磷酸化水平。从MAPKs信号通路探讨拓扑特肯对KB细胞杀伤作用机理。方法 MTT法测定拓扑特肯对KB细胞毒性作用。免疫印记法检测不同浓度拓扑特肯作用于KB细胞时Erk1／2的活化表达。结果 拓扑特肯对KB细胞有显著毒作用，IC50为00.046ug/ml；随着拓扑特肯作用浓度的升高，作用时间的增长KB细胞p-pErk1／2水平显著降低。结论 拓扑特肯对KB细胞的增殖抑制作用可能由于其下调了KB细胞p-pErk1／2的表达。

HSP70高表达对人口腔上皮癌细胞（KB）过氧基异丙苯氧化损伤的影响及机制研究

目的探讨HSP70高表达对肿瘤细胞过氧基异丙苯敏感性的影响及其机理。方法将KB细胞在40℃预热不同时间，诱导细胞HSP70高表达，用RT-PCR检测细胞HSP70mRNA水平；将细胞暴露于0．001mM、0．002mM、0．004mM、0．008mM的过氧基异丙苯16h，用MTT比色法检测细胞活力，观察预热对不同水平过氧基异丙苯敏感性的影响；保持过氧基异丙苯浓度为0．002mM不变，观察不同预热时间对细胞过氧基异丙苯敏感性的影响。结果40℃预热后细胞的HSP70含量升高，在预热120min后达到最高，以后缓慢下降，可维持10h以上；预热细胞对不同浓度过氧基异丙苯的敏感性均显著低于未预热细胞；，对于相同浓度的过氧基异丙苯而言，预热120min的细胞敏感性最低。结论预热可以引起细胞HSP70表达增高，降低细胞对过氧基异丙苯的敏感性。

沉默survivin基因介导口腔表皮癌细胞KB及KBv200凋亡的比较研究

背景与目的:Survivin是IAPs家族的重要成员之一,研究表明可结合凋亡途径中的Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9抑制其活性,引起肿瘤细胞的抗凋亡作用,尤其使肿瘤细胞耐受化疗药物诱导的凋亡,与化疗耐药密切相关。survivin在人口腔表皮癌细胞KB及其耐药株KBv200均有表达,本实验拟通过RNAi方法沉默survivin基因比较研究它介导KB和KBv200细胞的凋亡作用。方法:RT-PCR法检测细胞中survivinmRNA水平,流式细胞仪检测细胞中survivin蛋白水平,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态,PI染色结合流式细胞仪法检测细胞凋亡率,以及Caspase-3活性测定试剂盒检测Caspase-3的活性,MTT法测定肿瘤细胞生长情况。结果:KBv200细胞中survivinmRNA和蛋白表达量较高。转染mu6/survivin质粒后48h,KB和KBv200细胞中survivinmRNA表达抑制率分别为(61.98±8.12)%和(59.29±6.32)%,蛋白表达抑制率分别为(44.25±5.26)%和(38.76±4.31)%。转染mu6/survivin质粒后24h、48h、72h,流式细胞仪结果显示KB和KBv200细胞凋亡都明显增加,均在48h凋亡达到高峰,以KB凋亡率较高,并且Caspase-3活性也都明显增加,均在48h达到最高。同时KB细胞生长抑制率分别为(33.04±2.17)%、(56.25±3.32)%和(58.26±5.15)%,KBv200细胞生长抑制率则分别为(35.23±3.43)%、(44.90±4.12)%和(44.19±4.37)%。结论:siRNA方法能够有效沉默survivin基因,不仅能诱导KB细胞凋亡,而且能介导耐药株KBv200细胞凋亡。

乌头碱抗耐药性人口腔鳞状上皮癌细胞作用的体外研究

目的观察温阳药附子、乌头主要成分乌头碱单用及与长春新碱伍用后的抗癌效果。方法以耐药性人口腔鳞状上皮癌细胞(KBv200)为研究对象,采用细胞体外孵育技术中MTT比色法测定乌头碱的抗癌效果。结果不同浓度的乌头碱能够增加长春新碱对KBv200细胞杀伤的敏感性。结论乌头碱能增加化疗药物的敏感性,其在抗耐药肿瘤方面具有潜在的研究价值。

茶多酚抑制口腔上皮癌细胞增殖机理研究

目的探讨茶多酚抑制口腔上皮癌细胞增殖的作用及其相关机理。方法建立茶多酚抑制肿瘤细胞生长的体外模型,采用MTT法和流式细胞仪技术,体外观察茶多酚对口腔上皮癌细胞增殖抑制及相关蛋白表达的影响。结果不同浓度的茶多酚(50、100、200、400μg/m1)对口腔上皮癌细胞均有抑制作用,呈剂量依赖关系,抑制率分别为44.5%,58.2%,74.5%和79.7%。在细胞增殖受到明显抑制时,细胞被阻滞于G0/G1期,不能进入S期及G2期。与对照组比较,随着茶多酚浓度的增高,细胞表面CD151表达水平逐渐增高,CD82表达水平逐渐降低。结论茶多酚可抑制口腔上皮癌细胞增殖,其作用机制与改变细胞表面CD151和CD82蛋白表达水平有关。

Raf-1基因可能与口腔上皮癌细胞多药耐药性发生机制有关

目的通过检测Raf-1基因在口腔上皮癌多药耐药细胞株（KBV）及敏感细胞株（KB）中表达的差异，探讨Raf-1基因在口腔上皮癌细胞多药耐药性发生中的作用。方法体外培养口腔上皮癌多药耐药株及敏感株，通过RT-PCR技术及免疫荧光技术、免疫印迹技术检测Raf-1基因在KB及KBV细胞中转录及翻译水平的差异，通过MTT法及流式细胞检测技术（FCM）检测KB及KBV细胞对长春新碱（VCR）敏感度的差异。结果KB组细胞株在Raf-1基因转录和翻译水平均非常显著地低于KBV组（P〈0．01）；MTT法检测结果显示，KBV组细胞对长春新碱的耐药性是KB组的16．5倍；流式细胞术检测结果显示，KB组细胞凋亡率显著高于KBV组（P〈0．01）。结论Raf-1基因可能参与口腔上皮癌耐药性的发生过程，成为引起肿瘤细胞耐药的重要原因之一。

拓扑特肯诱导人口腔上皮癌细胞凋亡的机制

目的 :研究拓扑特肯 (Topotecan ,TPT)诱导体外培养的人口腔上皮癌细胞 (KB)凋亡的作用及其可能机制 .方法 :体外培养KB细胞 ,加 30mg/L的TPT孵育 1 2 ,2 4和4 8h ,用MTT法检测TPT对KB细胞增殖的作用 ;DNA凝胶电泳和流式细胞仪技术检测TPT诱导KB细胞凋亡 ,West ern blot检测 p p38MAPK的表达 .结果 :TPT处理细胞 1 2 ,2 4和 4 8h后 ,KB细胞的抑制率分别为 (2 4± 9) % ,(34±7) %和 (4 5± 1 0 ) % ,各组间有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;流式细胞仪检测其凋亡率 ,1 2h时 (1 1 .5± 2 .8) % ,2 4h(31 .2± 4 .1 ) % ,各组间有显著性差异 (P <0 .0 1 ) ;DNA凝胶电泳可见TPT作用 1 2h组DNA碎片化 ,是典型的细胞凋亡生化指标 ;TPT处理细胞 1 2 ,2 4和 4 8h后 ,KB细胞的 p p38MAPK表达逐渐升高 (n =3,P <0 .0 5 ) .结论 :TPT可通过p p38MAPK开放表达信号通路诱导体外培养的TPT处理KB细胞凋亡 .

正常和病变的口腔黏膜上皮细胞对α干扰素的敏感性差异研究

目的观察正常和不同病变程度的口腔黏膜上皮细胞对α干扰素(IFN-α)敏感性的差异,为IFN-α的抗肿瘤应用和机制的研究提供基础。方法分别培养正常口腔黏膜上皮细胞株(NOK)、口腔黏膜异常增生上皮细胞株(DOK)、口腔表皮样癌细胞株(KB),取传至第3代对数生长期细胞接种于细胞培养板,对照组每孔加入2 m L含10%胎牛血清的完全培养液,实验组设IFN-α浓度100、500、1 000 U/m L 3个浓度组,实验组每孔分别加入含相应浓度IFN-α的完全培养液,常规培养24 h后检测细胞增殖能力、细胞凋亡和细胞周期变化情况。结果不同浓度的IFN-α分别作用于3种细胞,对NOK细胞株的增殖能力无影响,而DOK、KB细胞株各实验组与对照组相比增殖能力明显减慢,差异均有显著统计学意义(均P<0.01)。浓度500 U/m L IFN-α对NOK细胞株的凋亡无影响,但有促进DOK、KB细胞株凋亡的作用。浓度500 U/m L IFN-α对NOK细胞株周期无影响,DOK细胞株G0/G1期细胞比例显著减少,而G2/M期细胞比例显著增加,KB细胞株G2/M期细胞比例显著增加。结论正常上皮细胞对IFN-α不敏感,而DOK、KB细胞株对IFN-α敏感;IFN-α有抑制DOK、KB细胞株的增殖能力、促其凋亡的作用,且细胞周期阻滞于G2/M期。

体外培养口腔上皮细胞感染白色念珠菌后白介素-8的表达改变

目的:观察白色念珠菌对体外培养口腔黏膜上皮细胞(KB细胞)表达白介素8(IL-8)的影响。方法:采用逆转录-聚合酶反应(RT-PCR)技术及酶联免疫吸附实验(ELISA),分别检测体外口腔上皮细胞感染菌丝型、孢子型、灭活白色念珠菌及白色念珠菌培养上清后表达、分泌IL-8的mRNA水平及上清液中的蛋白含量,对实验数据间差异进行t检验,判断分析其统计学意义。结果:菌丝型、孢子型及120℃灭活处理的白色念珠菌均能诱导KB细胞增强IL-8的表达,RT-PCR成像分析系统Mark值分别为180.23、186.36、143.41,与对照组85.57相比,具有显著性差异(P<0.05);白色念珠菌的培养上清(Mark值为80.87)却不能增加其表达。动态观察结果显示,白色念珠菌诱导KB细胞表达、分泌IL-8随时间增加而增强,72h达到高峰,随后出现下降趋势;剂量依赖性观察发现,KB细胞随着菌量增多而IL-8的分泌减少,呈现负相关性。结论:白色念珠菌能增加口腔上皮细胞分泌IL-8,IL-8可能与黏膜局部白色念珠菌感染、防御密切相关。

乌司他丁对人口腔表皮样癌KB细胞转移和侵袭的影响

目的:探讨乌司他丁对人口腔表皮样癌细胞系KB的转移和侵袭能力的影响。方法:分别通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验探讨乌司他丁对人口腔表皮样癌细胞系KB的转移和侵袭的影响;明胶酶谱实验研究乌司他丁对人口腔表皮样癌细胞系KB分泌活性MMP-9的影响。结果:划痕实验结果显示:与对照组转移细胞数(130.22±14.99)相比,乌司他丁处理后的KB细胞(69.78±11.79)转移能力明显受到抑制(P<0.05);Transwell小室侵袭结果显示,乌司他丁治疗组KB细胞侵袭的细胞数目(223.44±28.54)明显低于阴性对照组(501.11±30.75),(P<0.05);明胶酶谱结果显示,乌司他丁处理后的KB细胞活性MMP-9的表达明显降低(P<0.05)。结论:乌司他丁可能通过抑制MMP-9的活性从而抑制口腔癌细胞的转移和侵袭。

苦参碱对KB细胞及其多药耐药细胞KBv200的凋亡诱导作用

目的观察中药苦参的提取物苦参碱对口腔上皮癌KB细胞及其多药耐药细胞KBv200的凋亡诱导作用。方法MTT法观察苦参碱对体外培养的KB及KBv200细胞存活率的影响。吖啶橙溴乙啶(AO EB)双荧光染色检测二者细胞凋亡率。流式细胞术分析苦参碱对细胞周期的影响;扫描电镜观察苦参碱作用后的细胞形态学变化。结果苦参碱质量浓度在0.50、1.00、1.50、2.00mg ml时,均有抑制KB及KBv200增殖的作用,双荧光染色及流式细胞术提示苦参碱可诱导KB及KBv200细胞凋亡,使细胞生长停滞在S期;扫描电镜观察发现不同质量浓度的苦参碱作用24h后,细胞出现体积缩小、细胞质空泡化、细胞核碎裂等凋亡现象。结论苦参碱对KB及KBv200细胞有增殖抑制作用,可诱导KB及KBv200细胞凋亡,其机制可能与其导致细胞S期阻滞有关。

苦参碱对KB及其多药耐药细胞KBv200增殖与凋亡影响的对比研究

目的:研究中药苦参提取物苦参碱对体外培养的口腔上皮癌KB细胞和具有多药耐药特征的KBv200细胞增殖和凋亡的影响。方法:以MTT法对比观察苦参碱对细胞存活率的影响;以吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)双荧光染色检测细胞凋亡率;流式细胞术分析苦参碱对细胞周期的影响;扫描电镜观察苦参碱作用后的细胞形态学变化。结果:苦参碱浓度在0.50、1.00、1.50、2.00mg/ml时,均有抑制KB及KBv200增殖的作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为1.35mg/ml和1.43mg/ml;双荧光染色及流式细胞术提示苦参碱可诱导KB及KBv200细胞凋亡,使细胞生长停滞在S期;扫描电镜观察发现不同浓度的苦参碱作用24h后,细胞出现体积缩小、细胞质空泡化、细胞核碎裂等凋亡现象。苦参碱对两种细胞增殖和凋亡的影响均未见明显差异(P>0.05)。结论:苦参碱对KB及多药耐药的KBv200细胞均具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。提示苦参碱可克服肿瘤的多药耐药现象,故有可能成为一种理想的中药抗肿瘤制剂。

激光共焦显微拉曼光谱技术在人舌鳞癌细胞检测中的应用

目的:采用激光共焦显微拉曼光谱技术对人舌鳞癌细胞CAL-27进行检测,并将其与正常人体口腔黏膜上皮细胞(NHOK)进行对比和分析,从而从分子层面区分CAL-27和NHOK。方法:培养CAL-27和NHOK,并用激光共焦显微拉曼光谱对其进行检测,以及采用主成分分析法和线性判别技术对其进行分析。结果:对比CAL-27和NHOK光谱差谱,发现谱宽于735、959、1 334、1 575 cm-1处,CAL-27的峰值比NHOK强,但在1 033 cm-1处,则相对要弱。结合主成分分析和线性判别技术的灵敏度为96.8%,特异性为90.3%,诊断率为93.5%。受试者操作特性曲线下面积为0.971。结论:采用激光共焦显微拉曼技术可区分CAL-27和NHOK。

骨形成蛋白-2/4、-5及Ⅰ型、Ⅱ型BMP受体在舌癌细胞系Tca8113细胞中的表达及意义

目的 探讨骨形成蛋白 (BMP)及其受体与口腔鳞癌发生、发展的可能关系。方法 用免疫组织化学、原位杂交方法分析 BMP- 2 /4、 - 5及 型、 型 BMP受体在 Tca8113细胞中的表达。结果 Tca8113细胞能不同程度表达BMP- 2 /4、 - 5及 、 型 BMP受体 ,其阳性信号定位于癌细胞胞浆。结论 BMP及其受体与口腔鳞癌发生。

低强度两种波长激光对KB细胞增殖与凋亡的影响

比较同等照射条件下的低强度 5 3 2nm、63 2 .8nm激光对人口腔上皮癌 (KB)细胞增殖及凋亡的影响 ,用MTT法检测细胞增殖 ,用DNA电泳、TUNEL法检测细胞凋亡。结果表明 :在 0 .4J cm2 ～ 10 .0J cm2 的剂量范围内 ,63 2 .8nm激光可以显著促进KB细胞增殖 ,而 5 3 2nm激光作用不明显 ;上述两种波长激光在剂量为 3 0J cm2 、5 0J cm2 时均不能诱导细胞凋亡。

白屈菜碱对KB细胞株的抗肿瘤作用机制探讨

目的:探讨白屈菜碱(chelidonine)对人口腔上皮样癌细胞KB细胞株的抗肿瘤作用机制。方法:以不同浓度的白屈菜碱作用于体外培养的KB细胞株24、48、72 h,应用MTT检测细胞生长抑制率;Transwell小室检测肿瘤细胞的侵袭作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫印迹实验分析Caspase-3、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9信号通路相关蛋白的表达水平。结果:MTT结果显示白屈菜碱对KB细胞株的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间剂量依赖性;侵袭试验结果表明,白屈菜碱能够抑制KB细胞侵袭作用,且随着浓度的增大,抑制侵袭作用增强;流式双染检测白屈菜碱作用KB细胞24 h后细胞的凋亡率,与对照组相比差异有统计学意义;蛋白免疫印迹试验显示白屈菜碱组的Caspase-3、Bax表达明显上调,Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达下调,与对照组相比差异有统计学意义。结论:白屈菜碱对KB细胞具有明显的抑制增殖、侵袭和促进凋亡的作用;其抗肿瘤机制可能与下调Bcl-2、MMP-2、MMP-9,上调Caspase-3、Bax的表达有关。

唑来膦酸脂质体抑制口腔上皮癌KB细胞增殖的研究

目的研究唑来膦酸脂质体抑制口腔上皮癌KB细胞增殖的作用。方法用逆向蒸发法制备唑来膦酸脂质体。实验分组为空白组、对照组和实验组。空白组予以新鲜培养基,对照组予以含10μmol·L^(-1)唑来膦酸的完全培养液,实验组予以含10μmol·L^(-1)唑来膦酸脂质体的完全培养液。于干预24,48和72 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法考察口腔上皮癌KB细胞的存活率。结果唑来膦酸脂质体的平均粒径为100.72 nm,包封率83.56%,载药量5.21%,平均电位-18.21 mV。干预24 h后,实验组和对照组的存活率分别为(44.87±7.23)%和(65.27±5.11)%;干预48 h后,实验组和对照组的存活率分别为(35.34±4.22)%和(55.11±7.11)%;干预72 h后,实验组和对照组的存活率分别为(22.67±6.54)%和(48.22±8.13)%,差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论用逆向蒸发法制得的唑来膦酸脂质体粒径分布均匀,具有较好的稳定性,符合制剂学要求。唑来膦酸脂质体对口腔上皮癌KB细胞的增殖抑制作用明显强于唑来膦酸游离药。

PI3K/AKT信号通路在促进口腔鳞癌侵袭转移中的作用

目的:研究PI3K/AKT信号通路在TNF-α诱导上皮间质转化(EMT)发生时促口腔鳞癌侵袭转移中的作用。方法:采用免疫蛋白印迹实验(western blot)方法、实时荧光定量RT-PCR,分别从蛋白质、mRNA水平检测炎症微环境中PI3K/AKT信号通路抑制剂作用前后关键因子表达变化。结果:TNF-α作用后,PI3K/AKT信号通路中关键因子AKT蛋白表达升高,E-钙黏蛋白mRNA表达降低,而加入相应抑制剂LY294002后,AKT的蛋白表达被抑制,E-钙黏蛋白较前者表达升高。结论:抑制PI3K/AKT信号通路可降低TNF-α诱导EMT发生促口腔鳞癌细胞侵袭转移的作用。

口腔颌面部肿瘤

良性淋巴上皮病、淋巴上皮癌、MALT淋巴瘤的关系；关于“恶性淋巴上皮病”命名的商榷；CXCR4受体在口腔鳞癌细胞系中的表达及对细胞增殖和迁徙的影响；舌癌cNO患者哨位淋巴结检测方法的比较；口腔癌的放射治疗.

表桔儿茶素桔酸酯和茶提取物对人口腔癌细胞和正常细胞的体外细胞毒活性

作者比较研究了红茶多酚提取物、绿茶多酚提取物及它们的主要成分表桔儿茶素桔酸酯（EGCG）体外对人6种细胞系的作用，包括永久性致癌细胞（人舌鳞状癌细胞CAL27、人鳞状细胞癌HSC-2和人唾液腺癌细胞HSG1）和非致癌细胞（人龈上皮细胞S—G；人正常龈成纤维细胞HGF-1和GN56）．