miR-197在人口腔鳞状细胞癌中的表达及对细胞增殖的作用机制

目的探讨miR-197在人口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及对细胞增殖的作用机制。方法选取2015年3月—2019年3月在海南医学院第一附属医院选择手术切除病灶的100例OSCC患者的肿瘤组织及癌旁组织(距离病灶边缘超过2.5 cm),qRT-PCR检测miR-197在OSCC组织及细胞系CAL27中的表达,Western blotting检测JAK2在OSCC组织及细胞系中的表达。构建沉默miR-197表达的病毒载体(miR-197-siRNA)及miR-197-siRNA阴性对照(miR-197-siRNA-NC),转染CAL27细胞,以未处理的CAL27细胞作为空白对照;倒置显微镜观察转染miRNA-197后的细胞形态;流式细胞术、EdU标记实验、Transwell小室实验分别检测miR-197对CAL27细胞凋亡率、DNA合成能力、侵袭能力的影响;荧光素酶实验基因报告分析miR-197与JAK2的作用关系,Western blotting检测各组细胞中JAK2的表达。结果qRT-PCR结果显示,与癌旁组织相比,miR-197在OSCC组织中的表达明显升高,JAK2在OSCC组织中的表达明显降低(P<0.05)。与人正常口腔黏膜角化细胞株HOKs相比,miR-197在人OSCC细胞株CAL27中的表达明显上升,JAK2在CAL27中的表达明显下降(P<0.05);与miR-197-siRNA-NC组相比,miR-197-siRNA组贴壁细胞数量明显减少,胞质空泡样,细胞堆积明显增多,染色质固缩,核膜破损严重,线粒体空泡。流式细胞术、EdU标记实验、平板集落克隆实验、软琼脂集落形成实验结果表明,与miR-197-siRNA-NC组相比,miR-197-siRNA组细胞凋亡率明显增加,细胞内DNA合成明显受阻,细胞增殖和侵袭明显受到抑制,差异均具有统计学意义(P<0.05);荧光素酶实验基因报告分析结果证明,miR-197与JAK2具有靶向调控关系;Western blotting结果表明,与miR-197-siRNA-NC组相比,miR-197-siRNA组细胞中JAK2的表达明显升高(P<0.05)。结论miR-197在OSCC中呈高表达,下调miR-197可抑制OSCC细胞增殖,这可能与JAK信号通路有关。

MMP-9抑制剂对人口腔鳞状细胞癌细胞系CAL27生物学行为影响机制的研究

目的:探究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)抑制剂(BB-94)对人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞系CAL27恶性生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:用含不同浓度(0、0.125、0.25、0.5、1.0μg/mL)BB-94培养液培养对数生长期CAL27细胞48 h,明胶酶谱实验分析细胞培养上清液中MMP-9的活性;细胞计数试剂盒-8(cell counting kit‐8,CCK-8)实验检测细胞存活率;流式细胞术、伤口愈合实验及Transwell实验检测CAL27细胞凋亡、迁移及侵袭情况;实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western blotting)检测PI3K、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated proteinkinaseB,又称p-Akt)、MMP-9、波形蛋白(vimentin,Vim)、神经钙黏素(N-cadherin,N-cad)、上皮钙黏素(E-cadherin,E-cad)表达情况。结果:CAL27细胞MMP-9相对活性、存活率、划痕愈合率、细胞侵袭数、PI3K和Akt mRNA相对表达水平及PI3K、p-Akt、Vim、N-cad、MMP-9蛋白相对表达水平均随BB-94作用浓度增大而降低(P<0.05),CAL27细胞凋亡率、E-cad蛋白相对表达水平均随BB-94作用浓度增大而升高(P<0.05)。结论:MMP-9抑制剂可抑制人口腔鳞状细胞癌细胞系CAL27恶性生物学行为,其作用机制可能与阻止PI3K/Akt信号通路激活及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)进展有关。

JUP对人口腔鳞状细胞癌生物学特性及预后的影响及机制分析

目的分析心肌桥粒盘状珠蛋白(JUP)的表达水平对人口腔鳞状细胞癌细胞的相关生物学特性和预后的影响,并对其影响机制进行探讨。方法回顾性抽取2016年12月至2018年12月格尔木市人民医院口腔科收治的65例口腔鳞状细胞癌患者癌组织及距离癌组织病灶2 cm左右的癌旁组织标本为研究对象。定量即时聚合酶链锁反应(qRT-PCR)检测口腔鳞状细胞癌患者癌组织及癌旁组织中JUPmRNA的表达情况。构建JUP干扰(对照组:未感染细胞组;shNC组:无关序列片段对照组;shJUP组:JUP沉默慢病毒组)和过表达(对照组:未感染细胞组;NC组:空载体对照组;JUP过表达组:过表达组)载体,包装成慢病毒,感染人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞,建立该基因沉默和过表达的稳转细胞株,并通过qRT-PCR和Western blot分别检测JUP在基因和蛋白水平上的表达情况。CCK-8和细胞划痕实验分别检测两种稳转细胞株的增殖、迁移以及侵袭能力。利用K-M曲线数据库资料分析JUP的表达与口腔鳞状细胞癌病人的预后相关性。结果 JUP基因在口腔鳞状细胞癌中的表达量较癌旁组织显著降低(P <0. 01)。与对照组细胞(sh NC)相比,稳定沉默JUP的人口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113,其增殖能力无显著差异(P> 0. 05);与对照组细胞(shNC)相比,稳定沉默JUP的人口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113(shJUP),其细胞凋亡能力明显降低(P <0. 05);与对照组(NC)相比,划痕愈合实验显示,外源性导入JUP的Tca8113细胞其迁移、侵袭能力显著下降(P <0. 05);K-M曲线结果显示低表达JUP与人口腔鳞状细胞癌病人的不良预后相关。结论 JUP的低表达与口腔鳞状细胞癌病人的转移密切相关,且与口腔鳞状细胞癌病人的不良预后相关。

甘草苷调控PI3K/Akt/m-TOR信号通路对口腔鳞状细胞癌细胞及裸鼠移植瘤小鼠的作用研究

目的:目的探讨甘草苷(Liquiritin,LIQ)对人口腔鳞状细胞癌细胞(OSCCs)的增殖抑制、凋亡诱导作用和分子机制并通过裸鼠模型进行验证。方法:CCK-8检测LIQ对口腔鳞状细胞癌细胞的增殖抑制作用;流式细胞术及TUNEL实验检测凋亡情况;Western blot检测蛋白表达变化;构建裸鼠瘤模型,连续给药20 d,绘制肿瘤生长曲线,并计算抑瘤率。结果:LIQ可以抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖及裸鼠瘤体积增长,并诱导细胞凋亡;LIQ抑制PI3K/Akt/m-TOR信号通路的过度激活。结论:LIQ能够在体内外对口腔鳞状细胞癌产生抗癌效果,其机制可能是通过抑制PI3K/AKT/m-TOR信号通路的过度激活。

人口腔鳞状细胞癌SCC9细胞miR-146a-5p表达及对细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-146a-5p在人口腔鳞状细胞癌SCC9细胞系中的表达及对SCC9细胞增殖、凋亡的影响。方法取对数生长期人口腔鳞状细胞癌SCC9细胞和人正常口腔角质HOK细胞,采用实时荧光定量PCR法检测miR-146a-5p mRNA、肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor associated factor 6, TRAF6)mRNA相对表达量。取对数生长期人口腔鳞状细胞癌SCC9细胞,随机分为观察组(转染miR-146a-5p mimics)和空白对照组(转染等量ddH2O),转染24、48 h,采用CCK-8法检测2组细胞增殖,FITC-PI荧光双染法检测细胞凋亡;转染24 h,采用实时荧光定量PCR法检测PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA相对表达量,Western blot法检测PI3K、Akt、mTOR蛋白相对表达量。结果 SCC9细胞miR-146a-5p mRNA相对表达量(8.33±0.58)高于HOK细胞(1.04±0.01),TRAF6 mRNA相对表达量(0.05±0.01)低于HOK细胞(1.05±0.01)(P<0.05)。转染24、48 h,观察组SCC9细胞增殖吸光度值(1.65±0.02、1.96±0.04)高于空白对照组(1.33±0.01、1.57±0.02)(P<0.05),SCC9细胞凋亡率[(0.89±0.01)%、(1.23±0.01)%]低于空白对照组[(2.77±0.01)%、(4.23±0.01)%](P<0.05)。转染24 h,观察组Scc细胞PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA相对表达量(2.98±0.05、8.20±0.06、5.34±0.03)高于空白对照组(1.05±0.01、1.03±0.01、1.07±0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白相对表达量(2.32±0.01、10.23±0.02、5.25±0.01)高于空白对照组(0.62±0.01、4.58±0.01、0.09±0.01)(P<0.05)。结论 SCC9细胞miR-146a-5p表达上调,TRAF6表达下调;miR-146a-5p可促进SCC9细胞增殖,抑制其凋亡,其机制可能是增强PI3K/Akt/mTOR信号通路表达。

Buparlisib通过PI3K/AKT通路调控人口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的研究

目的:研究PI3K抑制剂Buparlisib对人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的增殖抑制及诱导凋亡作用,及Buparlisib对PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用OSCC细胞系SCC131为研究对象,分析Buparlisib在低、中、高3种剂量(1μmol/L,2μmol/L,和4μmol/L)下对OSCC的抗肿瘤作用。利用MTT法检测Buparlisib对细胞活力的影响;Annexin V/PI双染实验检测Buparlisib对细胞的诱导凋亡作用;采用JC-1染色实验检测细胞线粒体膜电位变化;免疫印迹法(Western Blot,WB)检测Buparlisib作用下caspase 3,9活化以及PI3K/AKT信号通路的激活。结果:在0~8μmol/L Buparlisib作用SCC131细胞24 h和48 h后,对细胞活力具有抑制作用,且呈时间和浓度依赖性;SCC131细胞在1μmol/L,2μmol/L,和4μmol/L Buparlisib处理24 h后,细胞凋亡率显著升高,且伴随着线粒体膜电位降低和凋亡相关蛋白caspase 3,9的激活。此外,Buparlisib通过抑制p-AKT和p-PI3K的表达水平,阻断PI3K/AKT信号通路激活。结论:抑制PI3K/AKT信号通路激活,Buparlisib具有成为OSCC治疗药物的潜力。

斑马鱼药物筛选模型在人口腔鳞癌中的应用

目的 建立新型斑马鱼的人口腔鳞状细胞癌(OSCC)药物筛选模型,并在体内实时动态观察山竹醇(Garcinol)对OSCC细胞的影响。方法 培养转基因斑马鱼Tg(fli1a:EGFP),不同浓度的Garcinol处理胚胎5天,筛选最适浓度。培养人OSCC细胞系SCC-15,不同浓度的细胞膜红色荧光探针(DiI)标记细胞,筛选最适浓度。通过显微注射建立斑马鱼OSCC模型。通过Garcinol药物实验,实时动态观察0.5μmol/L、1μmol/L Garcinol处理24 h和48 h后对体内OSCC细胞增殖的影响。结果 利用斑马鱼初步建立一种新型的OSCC药物筛选模型,并发现天然产物Garcinol能明显抑制斑马鱼体内OSCC细胞的增殖,其抑制能力呈一定的浓度依赖性。结论 Garcinol对OSCC细胞增殖有明显的抑制作用,有作为治疗口腔癌药物的应用前景。此外,斑马鱼OSCC药物筛选模型可以应用于抗口腔癌药物筛选的初步研究。

黏着斑激酶抑制剂TAE226对人口腔鳞癌细胞增殖的影响

目的研究黏着斑激酶抑制剂TAE226对口腔鳞癌HSC-3细胞增殖能力的影响,为临床治疗提供参考。方法 (1)采用CCK-8法检测不同浓度的TAE226(1、5、10、20μmol/L)作用细胞12、24、36、48、60、72h后的光密度(OD)值,计算不同浓度的TAE226在不同时间对该细胞增殖的抑制率;(2)采用流式细胞术检测不同浓度的TAE226对口腔鳞癌细胞周期和凋亡的影响;(3)采用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析。结果 (1)CCK-8法增殖实验结果:与对照组相比,不同浓度的TAE226作用于人口腔鳞癌HSC-3细胞株后,均对细胞增殖有抑制作用(P<0.05)。当TAE226的浓度为1、5μmol/L时,在12h时细胞增殖抑制率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),但是随着时间的延长,差异有统计学意义(P<0.05)。随着TAE226浓度的逐渐升高,其对口腔鳞癌HSC-3细胞增殖的抑制作用逐渐增强(P<0.05)。(2)流式细胞术结果:TAE226可以促进口腔鳞癌细胞的凋亡,且与细胞的浓度呈正相关。TAE226可以将HSC-3细胞周期阻滞于G2期。结论TAE226可以有效地抑制HSC-3细胞增殖,促进细胞的凋亡,阻滞细胞周期于G2期。