新城疫病毒D90杀伤口腔鳞癌细胞系CAL-27机制的研究

目的探讨新城疫病毒(NDV)D90杀伤口腔鳞癌细胞系CAL-27的机制。方法 CAL-27细胞用稀释10倍的D90病毒作用0、12、24、36 h后用以Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术检测NDV D90对口腔鳞癌细胞系CAL-27细胞凋亡情况的影响,接种于24孔板中的CAL-27细胞用稀释10倍的D90病毒作用12 h,4',6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色检测NDV D90对CAL-27细胞作用前后细胞形态学的变化;用稀释10倍的病毒与细胞分别共同孵育12、24、36 h,同时设置对照组。使用BCA蛋白测定试剂盒的裂解物中的蛋白质含量进行测定。免疫蛋白印迹法检测NDV D90作用CAL-27细胞后对凋亡相关蛋白表达量的影响。结果 NDV D90能引起细胞CAL-27的凋亡,并且凋亡率随着病毒作用的时间增加而升高[0 h,12 h,24 h,36 h的凋亡率分别为(3.68±1.50)%、(19.22±0.99)%、(82.80±0.74)%、(99.69±0.13)%];D90作用于CAL-27后细胞核出现凋亡的相关形态改变,如核固缩以及核碎裂;随着病毒作用时间的增加,细胞色素C蛋白表达水平升高,胱天蛋白酶3前体蛋白(procaspase-3)以及procaspase-9蛋白表达水平降低,procaspase-8蛋白表达水平没有明显变化,同时未检测到肿瘤坏死因子α蛋白的表达。结论 NDV D90毒株能引起人口腔鳞癌细胞系CAL-27的凋亡,且凋亡率呈时间依赖性;NDV D90引起CAL-27细胞凋亡主要是通过线粒体途径,死亡受体途径没有被激活或者作用非常小。

十字孢碱对口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨十字孢碱(staurosporine,ST)对人口腔鳞状细胞癌细胞株CAL27增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度的ST对CAL27细胞增殖的抑制作用,DAPI荧光染色法观察不同浓度的ST对CAL27细胞凋亡的改变,流式细胞术检测不同浓度ST对CAL27细胞凋亡率和周期分布的影响;蛋白免疫印迹法检测不同浓度ST对CAL27细胞周期蛋白cyclin D1、Cdk4、Cdk6、p21表达的影响。结果 ST对CAL27细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),抑制作用具有药物浓度依赖性。通过DAPT染色,ST能明显诱导细胞凋亡及凋亡形态改变。CAL27细胞出现Annexin V-FITC/PI流式细胞术观察发现与对照组相比,ST可诱导CAL27细胞凋亡率明显增加(P<0.05),并引起细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05)。蛋白免疫印迹法检测结果显示,经ST处理细胞后,cyclin D1、Cdk4和Cdk6蛋白表达明显降低,p21蛋白表达升高(P<0.05)。结论 ST可显著抑制口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖并诱导其凋亡,其机制考虑是通过阻滞细胞周期于G2/M期,进而抑制肿瘤细胞生长并促进细胞凋亡。

敲低circ0001273抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的探讨circ_0001273对口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用,为口腔鳞癌的靶向治疗研究提供相关的研究基础。方法收集12例临床诊断为口腔鳞癌患者肿瘤标本及癌旁组织,qRT⁃PCR检测circ_0001273、circ_0018569和circ_0027152的表达,选取在癌及癌旁组织中表达差异最大的circ_0001273;在UM1及CAL27两种口腔鳞癌细胞株中使用siRNA敲低circ_0001273,以MTS、Transwell实验分别检测对UM1及CAL27细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果circ_0001273在12例口腔鳞癌组织中表达异常升高(P<0.05),在UM1及CAL27细胞中敲低circ_0001273后,UM1及CAL27细胞的增殖、迁移及侵袭能力均显著下降(P<0.05)。结论敲低circ_0001273可以抑制口腔鳞癌的增殖、迁移及侵袭。

MiR-375增加肿瘤坏死因子对人口腔鳞癌细胞杀伤活性及机制研究

目的探讨micro RNA-375(mi R-375)对肿瘤坏死因子(TNF-α)杀伤人口腔鳞癌细胞生物效应的影响。方法将人口腔鳞癌细胞Cal27用mi R-375模拟物转染后用TNF-α治疗,采用MTT法检测治疗后Cal27细胞的增殖情况;通过流式细胞术检测Cal27细胞治疗后的凋亡情况;通过流式细胞术检测Cal27细胞内DNA的含量,测定凋亡特征性sub G1期的细胞比值;定量PCR法检测治疗后Cal27细胞抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl、c IAP2、c FLIPL的表达。结果 mi R-375+TNF-α组对Cal27细胞增殖的抑制率为(37.8±5.2)%,凋亡率为(20.5±3.8)%,TNF-α组分别为(6.2±2.7)%、(1.0±0.3)%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);mi R-375+TNF-α组,Cal27细胞的c IAP2、c FLIPL表达较TNF-α组显著下降(2.15±0.16比6.87±0.42、1.54±0.10比3.98±0.25)(P<0.05),Bcl-2,Bcl-xl表达不变。结论 mi R-375降低c IAP2、c FLIPL的表达,提高人口腔鳞癌Cal27细胞对TNF-α的敏感性,提高凋亡率。

IL-22/IL-22RA1通路在口腔鳞状细胞癌恶性进展中的作用及其机制

目的:探讨IL-22/IL-22受体A1(IL-22RA1)通路在口腔鳞状细胞癌(OSCC)恶性进展中的作用及其机制。方法:利用GEO数据库和免疫组化法分析IL-22RA1在OSCC组织及配对癌旁组织中的表达水平,采用组织芯片免疫组化法检测并分析IL-22RA1表达水平与OSCC患者临床病理特征的关系,通过EBI ArrayExpress数据库分析IL-22RA1表达水平与患者预后的关系。采用免疫荧光法检测IL-22和IL-22RA1在OSCC组织中表达水平并分析两者间的相关性。用RNA干扰技术敲减OSCC细胞WSU-HN4和CAL27的IL-22RA1表达,用q PCR法验证敲减效率。采用克隆形成实验、Transwell小室法分别检测IL-22对阴性对照(si NC)组和IL-22RA1敲减(siIL-22RA1)组OSCC细胞克隆形成及迁移能力的影响,WB法检测IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达水平及STAT1、STAT3和ERK1/2磷酸化水平的影响。结果:OSCC组织中IL-22RA1 mRNA的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。IL-22RA1表达水平与OSCC患者的肿瘤大小(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)及预后不良(P<0.05)有关联。OSCC组织中的IL-22和IL-22RA1表达水平无明显关联,IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达无影响(均P>0.05)。IL-22可显著增强OSCC细胞的克隆形成和迁移能力(均P<0.01),并可激活OSCC细胞的STAT1、STAT3及ERK1/2信号分子;敲减OSCC细胞的IL-22RA1后,IL-22则无法发挥上述作用。结论:IL-22/IL-22RA1可通过调控细胞增殖和迁移促进OSCC的生长和转移,其下游机制可能是激活ERK1/2-STAT1/3信号通路。

维生素C逆转口腔鳞状细胞癌顺铂耐药的作用

目的:探讨维生素C(vitamin C,VC)逆转口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC或口腔鳞癌)顺铂(cisplatin,DDP)耐药的作用及其机制。方法:选用体外培养的人口腔鳞癌CAL27细胞,用浓度梯度递增法筛选出耐DDP的CAL27/DDP细胞株,用平板克隆形成实验、CCK-8、划痕愈合实验、Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术分别检测单独应用DDP以及联合VC对CAL27/DDP细胞克隆形成、细胞增殖、迁移和凋亡的影响,Wester blotting分别检测CAL27、CAL27/DDP和VC处理后CAL27/DDP细胞中P-gp蛋白的表达变化。结果:DDP对CAL27/DDP细胞的IC50比CAL27细胞显著上升(P<0.05),CAL27/DDP细胞对DDP耐药;联合VC后,DDP对CAL27/DDP细胞的IC50比DDP单用时显著降低(P<0.05)。DDP联合VC能显著抑制CAL27/DDP细胞的迁移能力(P<0.01),同时提高细胞的凋亡率(P<0.01)。CAL27/DDP细胞中P-gp蛋白表达水平相对CAL27细胞升高(P<0.05),在VC干预后其表达水平下降(P<0.05)。结论:VC可逆转口腔鳞癌细胞DDP耐药,此种逆转作用是通过抑制P-gp蛋白表达实现的。

SLC7A11-AS1调控miR-429对口腔鳞癌细胞CAL-27细胞增殖和凋亡的影响

探讨SLC7A11-AS1调控miR-429对口腔鳞癌细胞CAL-27细胞增殖和凋亡的应用效果。方法:选取我院2018年5月到2021年7月之间收治的患有口腔鳞癌患者癌组织及癌旁组织共计29例进行研究,并将CAL-27细胞分为si-NC组和si-SLC7A11-AS1组,以及si-SLC7A11-AS1+anti-miRNC组和si-SLC7A11-AS1+anti-miR-429组。全部采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测的方式,在SLC7A11-AS1和miR-429表达水平和平板克隆实验检测克隆形成细胞数,以及流式细胞术检测细胞凋亡率和Transwell检测细胞迁移数,甚至包括蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达和双荧光素酶报告实验验证SLC7A11-AS1和miR-429的靶向关系上的情况对比。结果:SLC7A11-AS1在口腔鳞癌中的表达水平较高,这意味着SLC7A11-AS1在CAL-27中克隆数降低,随之细胞凋亡概率上升能够促进口腔鳞癌中起着促进癌细胞的作用。SLC7A11-AS1加以抑制处理后,Bax、Bcl-2表达水平降低。结论:SLC7A11-AS1抑制表达后上调miR-429能够显著降低CAL-27的增殖,提高细胞凋亡和迁移率。

上调LncRNA TUG1通过海绵miR-133a和激活Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞癌的影响

目的探讨LncRNA TUG1通过miR-133a对口腔鳞癌Cal27细胞的影响及其潜在的作用机制。方法选择2020年10月—2021年5月确诊的口腔鳞癌组织50例及癌旁正常组织40例。通过实时荧光定量PCR检测LncRNA TUG1和miR-133a在口腔鳞癌组织、癌旁正常组织、口腔鳞癌Cal27细胞和口腔上皮HIOEC细胞中的差异表达;检测下调TUG1对Cal27细胞活力、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响。生物信息学软件miRanda预测LncRNA TUG1和miR-133a间的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验检测TUG1和miR-133a的相关性。下调miR-133a表达,检测Cal27细胞增殖、侵袭和EMT能力。pcDNA-TUG1和miR-133a mimics共转染Cal27细胞,检测LncRNA TUG1通过miR-133a对Cal27细胞增殖、侵袭和EMT的影响。过表达或下调TUG1表达后,蛋白免疫印迹试验检测β-catenin、Cyclin D1和c-myc蛋白表达量,XAV939作用Cal27细胞,检测过表达TUG1对Cal27细胞增殖、侵袭和EMT的影响。结果与癌旁正常组织比较,口腔鳞癌组织中LncRNA TUG1的表达上调,miR-133a表达下调(P<0.01)。与HIOEC细胞比较,Cal27细胞中LncRNA TUG1的表达上调,miR-133a表达下调(P<0.01)。下调LncRNA TUG1表达明显抑制了Cal27细胞增殖、侵袭与EMT;LncRNA TUG1靶向且负调控miR-133a;下调miR-133a促进Cal27细胞增殖、侵袭与EMT;上调LncRNA TUG1通过miR-133a促进Cal27细胞增殖、侵袭与EMT。上调LncRNA TUG1激活了Cal27细胞内Wnt/β-catenin信号通路,并通过此通路促进Cal27细胞增殖、侵袭与EMT。结论上调LncRNA TUG1通过miR-133a和激活Wnt/β-catenin信号通路促进口腔鳞癌的发展。

干扰TAZ基因对舌鳞癌细胞CAL27增殖凋亡的影响及其机制

目的探讨干扰TAZ基因后对舌鳞癌细胞CAL27增殖和凋亡的影响以及可能的分子调控机制。方法实验分为干扰组和对照组,将稳定干扰TAZ基因的慢病毒载体转染至舌鳞癌细胞CAL27中作为干扰组,并以非特异性序列转染CAL27细胞作为对照组。利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blotting检测干扰效率,CCK-8细胞活力实验及Ed U染色法检测转染后细胞增殖能力的改变,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,Western blotting检测与周期及凋亡相关蛋白的表达情况。结果干扰TAZ基因后,RT-PCR和Western blotting检测结果显示,TAZ mRNA和蛋白表达水平明显降低; CCK-8细胞增殖活力检测及Ed U染色法显示细胞增殖能力降低;细胞早期凋亡和晚期凋亡比例均增多; G0/G1期细胞比例增多,而G2/M期细胞减少。同时,干扰TAZ基因后,周期相关蛋白CYCLIN D1、CDK4和CDK6等表达水平降低;而凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase9表达水平均升高,Bcl-2表达水平降低。结论干扰TAZ基因可以通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白的表达,来影响舌鳞癌细胞的增殖和凋亡。