人同源盒基因NKX3·1对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用

构建人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3·1基因全长编码片段,将NKX3·1cDNA重组到真核表达载体pcDNA3·1(+)中;将pcDNA3·1-NKX3·1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP细胞,用RT-PCR和Western印迹检测NKX3·1cDNA在转录水平和蛋白水平的表达;绘制细胞生长曲线,观察NKX3·1对前列腺癌细胞增殖的抑制作用;用DNA/ladder和流式细胞术检测NKX3·1对前列腺癌细胞凋亡的影响,进一步用RT-PCR检测凋亡相关基因caspase3、caspase8、caspase9、Apaf1、survivin和Bcl2表达的变化.人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体pcDNA3·1-NKX3·1经酶切及测序鉴定正确.pcDNA3·1-NKX3·1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和Western印迹证明能有效表达NKX3·1.生长曲线显示,前列腺癌细胞转染NKX3·1cDNA后细胞增殖受到抑制;前列腺癌细胞转染NKX3·1cDNA48h后,DNA电泳呈现具有凋亡特征的DNAladder;流式细胞术检测出现明显凋亡峰;RT-PCR检测凋亡相关基因.结果显示,caspase3、caspase8、caspase9基因表达明显增加,Bcl2基因表达明显减少.本研究成功构建了真核表达载体pcDNA3·1-NKX3·1,转染PC-3和LNCaP细胞后能有效表达,并对细胞具有诱导凋亡作用.

人同源盒基因NKX3.1内含子及5'上游10kb调控区功能的初步分析

目的检测人同源盒NKX3.1基因内含子及5'上游10 kb调控区对启动子活性的影响,分析其雄激素反应性和组织特异性,为进一步研究该基因表达调控机制奠定基础。方法利用基因重组技术分别构建5'上游10 kb调控区/内含子-NKX3.1基本启动子-荧光素酶报告基因质粒。转染雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP后,检测荧光素酶表达活性,观察内含子及5'上游调控区对NKX3.1启动子活性的影响;加入雄激素类似物R1881刺激,进一步检测其雄激素反应性;通过转染不同细胞分析其组织特异性。结果荧光素酶报告基因分析表明,NKX3.1基因5'上游-7 681～-6 483 bp可以增强其启动子活性2.6倍,但该增强作用并不具有组织特异性。内含子及5'上游10 kb其他区域对NKX3.1启动子活性未见明显的增强作用。R1881刺激并不能使内含子及5'上游10 kb调控区活性明显增强。结论 NKX3.1基因内含子及5'上游10 kb调控区不具备雄激素反应性,5'上游-7 681～-6 483 bp可以增强NKX3.1启动子活性,但其组织特异性增强元件并不存在于该片段。

微小RNA-433-3p靶向同源异形盒基因A1抑制胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的研究

目的探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向同源异形盒基因A1(HOXA1)对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(正常培养,不进行任何处理)、si-NC组(转染miR-433-3p siRNA阴性对照)、si-miR-433-3p组(转染miR-433-3p siRNA)、mimic-NC组(转染miR-433-3p mimic阴性对照)和miR-433-3p mimic组(转染miR-433-3p mimic)。荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测MGC-803细胞中miR-433-3p及HOXA1 mRNA表达;细胞计数法、Transwell法分别检测MGC-803细胞增殖、侵袭;双荧光素酶报告基因试验检测miR-433-3p与HOXA1的靶向关系。结果与对照组和si-NC组相比,si-miR-433-3p组MGC-803细胞中miR-433-3p表达降低(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数升高(P<0.05)。与对照组和mimic-NC组相比,miR-433-3p mimic组MGC-803细胞中miR-433-3p表达升高(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数降低(P<0.05)。TargetScan网站预测及双荧光素酶报告基因试验结果显示,miR-433-3p与HOXA1在MGC-803细胞中存在靶向关系。结论miR-433-3p能靶向调控HOXA1抑制胃癌MGC-803细胞的增殖、侵袭过程。

p53过表达抑制同源盒基因NKX3.1启动子活性

NKX3.1是前列腺特异表达的同源盒基因,在前列腺癌的发生发展中起重要作用,而在前列腺癌进展中常会发生p53的基因突变.为研究两者之间的关系,构建NKX3.1启动子(1040bp)-荧光素酶报告基因重组质粒(pGL3-1040)及其缺失突变体,瞬时转染前列腺癌细胞LNCaP.通过荧光素酶表达活性分析,检测p53过表达对NKX3.1启动子活性的影响.结果表明:p53在LNCaP细胞中过表达可明显抑制NKX3.1启动子活性;RT-PCR及Western引迹检测p53过表达对NKX3.1表达的影响.结果表明,p53过表达可以明显抑制同源盒基因NKX3.1的表达.通过TRANSFAC软件分析,在NKX3.1基因上游-526至-507区存在一个p53反应元件的5′核心序列.缺失pGL3-1040中的p53反应元件核心序列并不能消除p53对NKX3.1启动子的抑制作用,表明p53不是通过p53反应元件直接抑制NKX3.1启动子活性.进一步通过5′缺失突变分析,发现NKX3.1启动子-140～+8bp区仍受p53负调控.此148bp区域中含有一个Sp1和一个CREB元件,瞬时共转染Sp1表达载体或CREB表达载体的结果表明,p53并不是通过与Sp1或CREB相互作用对NKX3.1启动子发挥抑制作用的.上述结果表明,p53过表达可以抑制同源盒基因NKX3.1启动子活性,下调NKX3.1基因的转录,其调控机制有待进一步研究.

神经元素3与成对盒基因4促进胰腺十二指肠同源框蛋白1诱导间充质干细胞向胰腺分泌细胞分化

目的:探索神经元素3(neurogenin 3,NGN3)与成对盒基因4(paired box gene 4,PAX4)对胰腺十二指肠同源框蛋白1(pancreatic and duodenal homeobox factor1,PDX1)驱动间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向胰腺β细胞分化过程中的作用。方法:构建PDX1基因及NGN3与PAX4双基因表达腺病毒,重组腺病毒Adxsi-CMV-PDX1感染诱导MSCs1周后,再行重组腺病毒Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4感染诱导MSCs;分别检测PDX1、PAX4、NGN3、NK转录因子相关的2.2(NK transcription factor related,gene family 2,locus2,NKX2.2)、v-maf muscu-loaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog B(MafB)、胰岛素(Insulin)、胰高血糖素(Glucagon)多种胰腺分泌细胞相关分子表达情况。结果:成功构建腺病毒Adxsi-CMV-PDX1与Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4;MSCs经Adxsi-CMV-PDX1与Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4分步诱导后,免疫细胞化学与间接荧光检测显示PDX1、NGN3与PAX4因子在细胞核内稳定表达;重组腺病毒稳定转染5 d后,细胞开始变圆并集聚成团,用双硫腙(dithizone,DTZ)染色细胞质呈亮红色;细胞经诱导1周后,用RT-PCR检测到神经源分化因子1(neurogenic differentiation 1,NruroD1)与NKX2.2表达,2周后可检测胰岛素/胰岛素原分子;间接荧光检测显示诱导后的细胞先后开始表达NKX2.2、MafB等转录因子与胰岛素/胰岛素原、胰高血糖等胰岛分泌细胞相关分子,但未能检测到v-maf musculoaponeurotic fibro-sarcoma oncogene homolog A(MafA)与C肽分子表达。结论:NGN3与PAX4对PDX1诱导间充质干细胞向胰腺分泌细胞分化具有促进作用。

小鼠SRY同源盒基因SOX1的克隆及其真核表达载体pEGFP-C_3-SOX1的构建

目的:克隆小鼠SRY同源盒基因SOX1的全长cDNA,构建其携带增强型荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-C3-SOX1,为进一步研究SOX1在间充质干细胞神经分化中的作用奠定基础。方法:采用RT-PCR方法从小鼠早期胚胎中扩增带有EcoRⅠ和HindⅢ双酶切位点的SOX1 cDNA片断,与pGEM-T载体连接后转化感受态细菌JM109,然后通过蓝白筛选、酶切技术筛选、鉴定出阳性菌落并进行DNA测序。用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切获得目的片断,再与EcoRⅠ和HindⅢ双酶切过的pEGFP-C3质粒相连接,重组子转化JM109感受态大肠杆菌,酶切方法鉴定阳性菌落。结果:多酶切及DNA测序结果表明提取及纯化的pEGFP-C3-SOX1质粒含有SOX1 cDNA碱基片段,方向及大小正确。结论:从小鼠胚胎中可成功克隆SOX1全长cDNA,并构建其真核表达载体pEGFP-C3-SOX1。

缺血性脑卒中致血管性痴呆患者血清HOXA1 及SMAD3基因表达与认知功能和预后的关系

目的探讨缺血性脑卒中致血管性痴呆(VD)患者血清同源异性盒基因A1(HOXA1)、SMAD家族成员3(SMAD3)基因表达与认知功能和预后的关系研究。方法选择2021年1月—2023年2月辽宁省金秋医院神经内科收治的缺血性脑卒中患者241例为研究对象,根据3个月后是否发生VD分为痴呆组(n=117)和非痴呆组(n=124)。根据痴呆组患者出院3个月后预后功能障碍分为Ⅰ级亚组(n=48)、Ⅱ级亚组(n=43)、Ⅲ级亚组(n=26)。Spearman相关性分析缺血性脑卒中致VD患者血清HOXA1和SMAD3基因表达与简易精神状态量表(MMSE)评分的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HOXA1和SMAD3基因表达对缺血性脑卒中致VD患者预后功能障碍为Ⅲ级的预测价值。结果与非痴呆组比较,痴呆组血清HOXA1和SMAD3基因表达均明显升高(t=30.176、16.855,P<0.001);缺血性脑卒中致VD患者轻度亚组、中度亚组、重度亚组血清HOXA1和SMAD3基因表达依次升高,且差异均有统计学意义(F=308.625、153.360,P<0.001);与预后功能障碍Ⅰ~Ⅱ级亚组比较,Ⅲ级亚组患者血清HOXA1和SMAD3基因表达均明显升高(t=8.274、9.396,P<0.01);Spearman相关性分析结果显示,缺血性脑卒中致VD患者血清HOXA1和SMAD3基因表达与MMSE评分均呈显著负相关(r=-0.564、-0.518,P<0.01);血清HOXA1、SMAD3及二者联合预测缺血性脑卒中致VD患者Ⅲ级预后功能障碍的AUC分别为0.772、0.831、0.899,二者联合的AUC大于单项指标(Z/P=2.001/0.045、2.116/0.034)。结论HOXA1和SMAD3基因表达与缺血性脑卒中所致VD患者认知功能和预后密切相关,且血清HOXA1和SMAD3基因表达在缺血性脑卒中所致VD患者预后功能障碍的预测中具有较高的应用价值。

骨碎补及其主要成分对小鼠子宫内膜同源盒基因10 mRNA、白血病抑制因子和整合素ανβ3的影响

目的:探索骨碎补及其主要成分对胚泡着床障碍模型小鼠子宫内膜的影响。方法:实验动物分为7组:空白组、模型组、西药组I(补佳乐组)、西药组II(阿司匹林组)、骨碎补组、骨碎补总黄酮组、骨碎补柚皮苷组,以GnRHa+HMG+HCG方法造模,干预后检测各组相关指标的表达量。结果:骨碎补组及总黄酮组小鼠子宫内膜同源盒基因10(HOXA-10)mRNA表达明显增加(P<0.05);骨碎补组、总黄酮组及柚皮苷组白血病抑制因子(LIF)表达明显增加(P<0.05);骨碎补组整合素ανβ3表达明显增加(P<0.05),总黄酮组差异无统计学意义(P>0.05),但积分光密度值明显增加(P<0.05)。结论:骨碎补可能通过调节胚泡着床期子宫内膜HOXA 10、LIF、整合素ανβ3的表达,有利于胚泡对子宫内膜的黏附,从而改善子宫内膜容受性。总黄酮作为骨碎补药材的主要活性成分,亦可改善子宫内膜容受性。

小鼠抗人前B细胞白血病同源盒基因3多克隆抗体的制备与鉴定

目的制备前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)多克隆抗体。方法采用反转录PCR扩增PBX3基因区序列,并重组入原核表达载体pGEX-4T-1,重组载体转化BL21大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导GST-PBX3融合蛋白的表达。SDS-PAGE纯化融合蛋白,并用GST-PBX3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,收集经过免疫的小鼠血清即抗PBX3的多克隆抗血清,采用间接ELISA检测其效价,通过免疫细胞化学技术及Western blot法鉴定其特异性。结果成功构建pGEX-4T-1/PBX3原核表达载体,转化BL21菌株后可高效表达GST-PBX3融合蛋白,且以不可溶包涵体形式存在。SDS-PAGE纯化蛋白并免疫小鼠产生的抗PBX3血清可特异识别细胞外源过表达的PBX3蛋白,同时可检测到细胞外源性PBX3蛋白的细胞内定位情况。结论获得效价和特异性良好的PBX3多克隆抗体。

同源盒基因10调控胰岛素样生长因子结合蛋白3与肠癌细胞5-氟尿嘧啶抵抗的关系研究

目的:研究同源盒基因10(HOXD10)调控胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)与肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-Fu)抵抗的关系。方法:原代肠癌细胞SW480敲减HOXD10,5-Fu耐药株细胞过表达HOXD10及敲减IGFBP3。CCK-8检测细胞增殖活性,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,实时荧光定量PCR(qPCR)及免疫蛋白印迹(WB)检测HOXD10及IGFBP3表达水平。结果:耐药株在各5-Fu浓度下(5、10、20μg/ml)的增殖活性,与0μg/ml的5-Fu增殖活性比较无统计学差异(均P>0.05);而原代SW480细胞在5μg/ml的增殖活性出现下降(P<0.01)。耐药细胞组HOXD10的相对表达倍数(0.51±0.096)与原代细胞组(1.00±0.091)比较下调,而耐药细胞组的IGFBP3相对表达倍数(4.21±0.32)显著高于原代细胞组(1.00±0.22),WB也证实了耐药细胞组较原代肠癌细胞组有较低的HOXD10和更高的IGFBP3表达水平。在原代细胞组中敲减HOXD10、IGFBP3的表达水平增高;而在耐药细胞组中过表达HOXD10、IGFBP3的表达水平显著减低。在耐药株中敲减IGFBP3或过表达HOXD10后,耐药株对5-Fu敏感性增强,细胞克隆形成能力减弱。结论:HOXD10-IGFBP3调控轴与维持肠癌耐药表型密切相关,靶向抑制IGFBP3或过表达HOXD10可能在肠癌5-Fu化疗耐受提供精准干预靶点。

胰腺十二指肠同源盒基因-1/神经生成素3信号通路在胰岛β细胞分化中的作用机制研究进展

胰岛β细胞数量的绝对不足或相对减少可导致糖尿病的发生发展。胰腺十二指肠同源盒基因-1(Pdx-1)是胰腺发育和胰岛素基因转录的重要调控基因,在胰腺发育和胰腺各种细胞的分化中发挥重要作用。神经生成素3(Ngn3)是对胰岛发育有重要影响的转录因子,可始动内分泌祖细胞,促进胰内胚层细胞向内分泌细胞分化,同时维持成熟胰岛细胞的功能。Pdx-1/Ngn3信号通路可促进干细胞向胰岛β细胞的分化和增殖,Pdx-1是Ngn3的上游调控因子,对胰干细胞的作用在于激活Ngn3的表达,Ngn3可通过调控神经细胞分化因子1、胰岛素瘤相关蛋白1(Insm1)、胰岛素基因增强结合蛋白1及Insm2、桩蛋白6、Nkx2同源框2、NK6 Homeobox 1等直接靶基因,影响胰内分泌细胞的分化和形成。

miR-224通过调控同源异型盒基因B3表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨miR-224通过调控同源异型盒基因B3(HoxB3)表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用RT-PCR法检测miR-224在大肠癌细胞株及人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC中的表达,大肠癌细胞转染miR-224 inhibitor,并通过双荧光素酶实验、Western blot及RT-PCR证实HoxB3是miR-224的靶基因。MTT及Annexin V-PI法检测miR-224及HoxB3表达量下调后分别对大肠癌细胞活力的影响。流式细胞术检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞周期的影响;Western blot检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞中细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA 3)、细胞周期蛋白D1(CyclinD 1)、p21及p27表达的影响。结果大肠癌细胞中miR-224表达量高于人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC,且HCT 116中的表达量最高,因此选为后续细胞株。双荧光素酶报告基因证实HoxB3是miR-224下游靶基因,Western blot及RT-PCR结果证实下调miR-244的表达水平后HoxB3蛋白及mRNA表达量均显著下降(P<0.01)。下调miR-224及干扰HoxB3表达都能显著降低HCT_116细胞活力(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01)。下调miR-224还能使HCT_116细胞周期阻滞在G_1期,抑制CDCA3及CyclinD1表达(P<0.01),促进p21及p27表达(P<0.01)。结论 miR-224在大肠癌细胞中高表达,并能通过调控靶基因HoxB3的表达及调节细胞周期相关蛋白的表达而参与大肠癌细胞的增殖与凋亡。

同源盒A9和前B细胞白血病同源盒基因在结肠癌中的表达及意义

目的观察同源盒A9(HOXA9)和前B细胞白血病同源盒基因(PBX3)在结肠癌组织及其癌旁组织中的表达,探讨二者与结肠癌临床病理参数的关系及其对结肠癌3年预后的影响。方法选取2014年8月至2016年5月于南阳市第一人民医院进行手术治疗的结肠癌病人77例,取其癌组织及相应癌旁组织,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测结肠癌及其癌旁组织HOXA9 mRNA、PBX3 mRNA表达情况,免疫组织化学法检测其癌组织及癌旁组织标本中HOXA9P与PBX3蛋白表达,分析HOXA9P、PBX3表达与临床病理特征的关系,运用Spearman法分析HOXA9P与PBX3表达相关性,通过Kaplan-Meier法对结肠癌病人3年内存活情况进行分析。结果与癌旁组相比,结肠癌组HOXA9 mRNA[(3.09±0.55)比(1.02±0.15)]、PBX3 mRNA表达水平[(2.51±0.47)比(0.98±0.11)]、HOXA9、PBX3蛋白阳性表达率显著升高(P<0.05);HOXA9、PBX3表达均与结肠癌病人分化程度、TNM分期有关(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示结肠癌组织中HOXA9与PBX3 mRNA表达呈正相关(rs=0.643,P<0.05);Kaplan-Meier法分析显示HOXA9、PBX3阳性表达组3年内总生存率(OS)显著低于阴性表达组(41.2%VS 84.6%,43.6%VS 86.4%)。结论结肠癌组织中HOXA9、PBX3均高表达,二者呈正相关,均与结肠癌分化程度、TNM分期及预后相关,可能共同参与结肠癌的发生发展。

血清lncRNA DUXAP8及miR-24-3p在子痫前期诊断及妊娠结局评估中的价值

目的分析血清长非编码RNA双同源盒A伪基因8(lncRNA DUXAP8),微小RNA(miR)-24-3p在子痫前期(PE诊断及妊娠结局评估中的价值。方法选取2019年3月至2022年9月承德市中心医院妇儿院区产科124例PE患者为PE组,同期健康孕妇124例为对照组。根据妊娠结局分为不良组27例和良好组97例。均采用qRT-PCR法测定血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p水平。采用多因素Logistic回归分析PE孕妇妊娠结局影响因素。采用ROC曲线分析血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p水平诊断PE及预后的价值。结果PE组血清lncRNA DUXAP8水平低于对照组,miR-24-3p水平高于对照组(P<0.05)。TargetScanHuman网站预测显示,lncRNA DUXAP8与miR-24-3p间可能存在靶向关系。相关性分析表明,lncRNA DUXAP8与miR-24-3p呈负相关(r=-0.471,P<0.001)。血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p联合诊断PE的AUC显著高于单独诊断(Z_(lncRNA DUXAP8-联合)=3.285,P=0.001;Z_(miR-24-3p-联合)=3.020,P=0.003),联合诊断的敏感性为92.74%,特异性为72.31%。良好组孕妇血清lncRNA DUXAP8水平高于不良组,miR-24-3p水平低于不良组(P<0.05)。良好组孕妇收缩压、舒张压、产前血糖、血红蛋白、24 h尿蛋白、白细胞计数、LDH低于不良组,血小板计数、血清白蛋白高于不良组(P<0.05)。lncRNA DUXAP8是PE孕妇妊娠结局不良保护因素,miR-24-3p是危险因素(P<0.05)。血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p联合诊断PE孕妇妊娠结局的AUC显著高于单独诊断(Z_(lncRNA DUXAP8-联合)=2.113,P=0.035,Z_(miR-24-3p-联合)=3.033,P=0.002),联合诊断的敏感性为88.89%,特异性为80.41%。结论PE孕妇lncRNA DUXAP8水平降低,miR-24-3p水平升高,可能与PE的发生和孕妇妊娠结局相关。

前列腺特异的转录因子NKX3.1上调Dicer1基因的表达

目的:研究前列腺特异转录因子NKX3.1对Dicer1基因表达的影响。方法:转染pcDNA3.1-NKX3.1至前列腺癌PC3细胞,通过G418筛选,有限稀释法克隆培养获得NKX3.1稳定转染的PC3细胞-PC3(+);采用基因芯片检测NKX3.1对前列腺癌PC3细胞基因组表达谱的影响。进一步应用RT-PCR、Western blot-ting进行验证。为进一步检测Dicer1表达增高、促进microRNA的成熟作用,构建了microRNA let-7a-1靶序列-报道基因融合质粒,转染PC3细胞和PC3(+)细胞,通过报道基因检测成熟microRNA let-7a-1对其靶序列的作用。结果:基因组芯片显示,NKX3.1稳定表达的PC3(+)细胞中,Dicer1表达明显高于PC3细胞。RT-PCR、Western blotting结果验证PC3(+)细胞中Dicer1mRNA和蛋白质的表达水平均高于PC3细胞。microRNA let-7a-1靶序列-报道基因融合质粒,转染PC3细胞和PC3(+)细胞后,报告基因检测,PC3(+)细胞中荧光素酶活性明显低于PC3细胞。结论:NKX3.1可上调前列腺癌PC3细胞中Dicer1的表达,促进microRNA的成熟及作用。

肝细胞癌患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR的表达水平及其与病理特征和预后的相关性

目的检测血清蛋白质酪氨酸磷酸酶3(PTPN3)、血管内皮生长因子(VEGF)、易洛魁族同源盒基因5(IRX5)、长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)在肝细胞癌(HCC)中的表达水平,并分析其与患者的病理特征和预后的相关性,为临床工作提供血清学参考。方法选取2020年6月至2022年10月南阳市中心医院收治的117例HCC患者作为观察组,另选取同期117例良性肝内结节患者作为对照组,比较两组患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平,分析HCC患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平与病理特征的关系。随访6个月,依据患者预后情况分为预后良好组72例和预后不良组45例,比较不同预后患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR单独及联合预测HCC预后的效能,采用相对危险度(RR)分析血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平与HCC预后的关系。结果观察组患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平分别为(181.42±10.19)ng/mL、(154.66±11.82)μmol/L、(82.42±8.23)ng/mL、1.20±0.28,明显高于对照组的(86.64±13.28)ng/m L、(83.64±9.50)μmol/L、(34.80±6.63)ng/m L、1.07±0.25,差异均有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期、分化程度、肿瘤直径、伴肝硬化、区域淋巴结转移、Ki-67指数、脉管内瘤栓、包膜侵犯HCC患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);肿瘤多发患者的血清VEGF水平为(154.10±10.26)μmol/L,明显高于肿瘤单发患者的(191.62±9.45)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后2个月,预后良好患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平分别为(153.69±22.24)ng/m L、(113.27±25.64)μmol/L、(70.53±10.24)ng/m L、1.15±0.23,明显低于预后不良患者的(217.58±27.06)ng/m L、(215.33±38.19)μmol/L、(96.35±14.88)ng/m L、1.36±0.28,差异均有统计学意义(P<0.05);绘制血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR单独及联合预测HCC预后的ROC,结果显示各血清联合预测的AUC最大,为0.924(95%CI:0.860~0.965);HCC预后不良的危险度分析结果显示,血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR所致RR值分别为4.604(95%CI:2.602~8.145)、7.139(95%CI:3.660~13.924)、4.733(95%CI:2.749~8.149)、4.690(95%CI:2.575~8.544)(P<0.05)。结论血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR在HCC中的表达异常升高,且与病理特征联系密切,对患者预后有一定评估作用。

Pdx-1、Ngn3联合MafA诱导干细胞分化为胰岛素分泌细胞移植治疗1型糖尿病大鼠的效果

目的通过胰十二指肠同源盒1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)共转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),移植治疗1型糖尿病大鼠并观察其疗效。方法Pdx-1、Ngn3和MafA共转染BMSCs诱导为IPCs,链脲佐菌素(STZ)制备45只1型糖尿病SD大鼠模型,BMSCs组(15只)肾被膜下移植2×10^(6) BMSCs,IPCs组(15只)大鼠肾被膜下移植2×10^(6) IPCs,sham-operation组(15只)大鼠肾被膜下注入等量生理盐水,另取15只健康SD大鼠肾被膜下注入等量生理盐水作为normal组。监测各组大鼠移植第0、7、14、21、28 d空腹血糖及体重;第21天对各组大鼠均行葡萄糖耐量试验;第28天取各组大鼠肾脏组织进行免疫组化。结果BMSCs和IPCs组大鼠血糖随时间下降,移植第21天两组大鼠空腹血糖低于移植第0天,且均低于同期sham-operation组(P<0.05),移植第28天IPCs组大鼠空腹血糖低于BMSCs组(P<0.05)。糖尿病大鼠中IPCs组和BMSCs组腹腔葡萄糖耐量实验曲线下面积小于sham-operation组,且IPCs组曲线下面积最小(P<0.05)。BMSCs组和IPCs组大鼠肾脏组织可见棕色荧光的胰岛素表达,且IPCs组胰岛素荧光光密度高于BMSCs组(P<0.05)。结论Pdx-1-Ngn3联合MafA诱导BMSCs形成的IPCs移植后在糖尿病大鼠体内可降低糖尿病大鼠的空腹血糖。

不同病情进展程度妊高征患者胎盘组织中同源异型盒基因B3和血清整合素β_(1)表达差异及其与不良妊娠结局的关系

目的 研究不同病情进展程度妊高征患者胎盘组织中同源异型盒基因B3(HoxB3)、血清整合素β_(1)(ITGβ_(1))表达差异及其与妊娠结局的关系。方法 对2021年1月到2022年5月在苏州市第九人民医院进行治疗的妊娠期高血压患者120例作为研究对象,根据患者的病情,其中子痫前期患者60例,重度子痫前期患者34例,子痫患者26例,另选取同期健康孕妇120人作为对照,采用酶联免疫吸附法检测并比较观察组与对照组、不同病情以及不良妊娠结局患者的胎盘组织的HoxB3、ITGβ_(1)表达水平,研究胎盘组织HoxB3、ITGβ_(1)表达水平与妊娠结局以及病情进展的相关性。结果 观察组胎盘HoxB3低于对照组[(67.49±4.93)比(107.93±11.48)μg/L,t=35.455,P<0.001]、ITGβ_(1)表达水平高于对照组[(3.59±2.10)比(1.01±0.29)μg/L,t=13.335,P<0.001];不同病情进展程度妊娠期高血压患者胎盘组织中HoxB3(F=13.944,P<0.001)与ITGβ_(1)(F=15.306,P<0.001)的表达水平差异具有统计学意义。LSD-t检验分析表明,患者的HoxB3表达水平从高到低依次为子痫前期、重度子痫前期、子痫;患者的ITGβ_(1)表达水平从高到低依次为子痫、重度子痫前期、子痫前期;不良结局组中胎盘HoxB3的水平低于良好结局组[(60.73±2.64)比(69.09±3.88)μg/L,t=9.802,P<0.001]、不良结局组中胎盘ITGβ_(1)表达水平高于良好结局组[(6.72±1.33)比(2.85±1.47)μg/L,t=11.534,P<0.001];logistics回归分析显示,HoxB3、ITGβ_(1)是不同妊娠结局的影响因素(均P<0.05)。结论 妊娠期高血压患者胎盘组织中HoxB3、ITGβ_(1)表达与妊娠结局以及疾病进展呈现显著的相关性。

组织DDX5、PBX3的表达对前列腺癌术后复发的预测价值

目的探讨与分析组织死亡盒蛋白5(Dead-boxpolypeptide5,DDX5)、前B细胞白血病同源盒基因3(pre-B-cell leukemia homeobox 3,PBX3)的表达对前列腺癌术后复发的预测价值。方法采用回顾性方法,2018年8月到2022年5月选择在南阳市第一人民医院诊治的前列腺癌患者90例作为研究对象,采用免疫组化法检测癌组织DDX5、PBX3表达水平。随访患者的术后复发情况并进行预测价值分析。结果90例患者随访到2022年8月,平均随访时间为16.20±2.22个月,复发10例(复发组),占比11.1%,其中吻合口复发2例,淋巴结复发9例。复发组的DDX5、PBX3表达阳性率为80.0%、90.0%,显著高于非复发组的26.3%、21.3%(P<0.05)。Spearsman分析显示DDX5、PBX3表达阳性率与术后复发存在相关性(P<0.05);COX回归分析显示DDX5、PBX3表达阳性率为影响术后复发的重要因素(P<0.05);ROC曲线显示DDX5、PBX3表达阳性率预测术后复发的曲线下面积分别为0.806、0.857。结论前列腺癌术后复发比较常见,多伴随有DDX5、PBX3的高表达,组织DDX5、PBX3的表达对前列腺癌术后复发的预测具有重要价值。

髋关节骨性关节炎软骨组织Col2a1和Nkx3．2的表达水平及临床意义

目的探讨髋关节骨性关节炎软骨组织中Ⅱ型胶原α1链（Col2a1）和人同源盒基因Nkx3．2的表达水平及临床意义。方法收集36例髋关节骨性关节炎患者的软骨组织样本，采用RT—PCR法检测Col2a1和Nkx3．2的mRNA水平，Westernblot法检测样本中两指标的蛋白水平；分析不同病理参数的Col2a1和Nkx3．2的mRNA和蛋白水平。并选取同期的39例股骨颈骨折患者作对照。结果髋关节骨性关节炎患者的Col2a1和Nkx3．2的mRNA和蛋白水平均高于股骨颈骨折患者（P〈0．05）；髋关节骨性关节炎患者两指标的mRNA和蛋白水平在年龄、类型、病程、ISOA、K—L放射线分级及严重程度上有统计学差异（P〈0．05或0．01），在性别和侧别上无统计学差异（P〉0．05）。结论髋关节骨性关节炎软骨组织中Col2a1和Nkx3．2的表达水平上调，且在多数病理参数分布上有差异，提示两者在骨性关节炎软骨组织退变中起作用，可用于该疾病的诊断和治疗方案制订。