三种常见人呼吸道腺病毒六邻体蛋白的克隆、表达及抗原性分析

目的：克隆、表达常见的人呼吸道腺病毒的主要中和抗原六邻体蛋白，分析重组表达产物的抗原性和免疫原性。方法分别PCR扩增克隆人3型、4型、7型腺病毒完整的六邻体蛋白基因，测序和序列比对并与GenBank上人腺病毒的六邻体蛋白进行同源性比对；对其主要的抗原区进行克隆、表达和纯化，表达产物免疫动物，ELISA和Western blot实验对表达产物的抗原性和免疫原性及其交叉反应进行分析。结果国内首次报道1株人4型腺病毒的六邻体基因序列，与GenBank中的NHRC3分离株核酸及氨基酸的同源性均大于99％；3种腺病毒包含全部高变区的六邻体部分区段在大肠杆菌中成功表达并纯化，重组蛋白可以被不同型别的人腺病毒免疫血清识别，重组蛋白免疫小鼠血清可以识别不同型别的人腺病毒，而型间反应有显著差异，预测了3种腺病毒六邻体型、型间特异性表位。结论成功表达人3型、4型、7型腺病毒六邻体蛋白主要抗原区，重组表达产物有强免疫原性，包含型间、型特异性抗原表位。

2018—2019年昆明市发热呼吸道综合征患者人呼吸道腺病毒的初步基因分型及流行特征分析

目的了解2018—2019年云南省昆明市人呼吸道腺病毒(human adenovirus, HAdV)流行病学特征及其基因分型特征,为下一步防控工作提供科学依据。方法对云南省2018年1月1日—2019年12月31日昆明市6家哨点医院收集的650份发热呼吸道综合征监测病例标本进行实时逆转录-聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction, real-time RT-PCR)并筛选腺病毒阳性样本,使用Hep-2细胞对阳性标本进行病毒分离,用SPSS 20.0软件对数据进行统计学分析。对成功分离的腺病毒毒株进行hexon基因片段测序,使用MEGA5.0进行序列分析。结果 650份发热呼吸道综合征病例样本中共检测出50份腺病毒阳性,阳性检出率为7.69%(50/650)。经分离培养成功获得24株腺病毒毒株,分离率为48.00%(24/50)。其中1型占8.33%(2/24),2型占16.67%(4/24),3型占33.33%(8/24),5型占8.33%(2/24),7型占29.17%(7/24),未分型占4.17%(1/24)。男性腺病毒阳性检出率为8.27%(31/375),女性腺病毒阳性检出率为6.91%(19/275),不同性别阳性检出率差异无统计学意义(χ^(2)=0.412,P=0.554);鼻咽拭子腺病毒阳性检出率为7.13%(41/575),支气管肺泡灌洗液、痰液阳性检出率为12.00%(9/75),不同样本类型阳性检出率差异无统计学意义(χ^(2)=2.216,P=0.163);各年龄组阳性检出率差异有统计学意义(χ^(2)=12.347,P=0.006),最高的为<5岁年龄组(10.26%,35/341);9种不同职业间阳性检出率差异有统计学意义(χ^(2)=17.896,P=0.022),最高的职业类型是幼托儿童(13.10%,22/168);不同类型医院阳性检出率差异有统计学意义(χ^(2)=20.467,P<0.01),非综合医院(13.28%,36/271)高于综合医院(3.69%,14/379);不同发病月份阳性检出率差异有统计学意义(χ^(2)=7.872,P=0.049),夏季最高(13.19%,12/91),其次是秋季(9.66%,17/176)。结论 2018—2019年云南省昆明市腺病毒感染人群主要以5岁以下幼托儿童为主,随着年龄的上升,阳性检出率降低,检出高峰在夏季,非综合医院阳性检出率高于综合医院。