MAB225对人唾液腺腺样囊性癌细胞放射敏感性的影响

目的:研究表皮生长因子受体单克隆抗体(MAB225)对人唾液腺腺样囊性癌(ACC)细胞放射敏感性的影响。方法:通过双荧光染色法、四氮唑还原法(MTT)、流式细胞仪观察经MAB225处理后的ACC-2细胞放射后凋亡的变化,以评价MAB225对ACC-2细胞放射敏感性的影响。采用SPSS11.0软件包的单因素方差分析对数据进行统计学处理。结果:经MTT检测、双荧光染色和流式细胞仪检测,经MAB225和放射联合处理后的ACC-2细胞,其细胞凋亡比例较未处理组上升3倍;而单纯放射处理的ACC-2细胞,其细胞凋亡比例只增加1倍。结论:MAB225可以提高放射线对ACC-2细胞的杀伤作用,降低ACC-2细胞的放射后生存率。

人唾液腺腺样囊性癌细胞合成Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白的研究

目的细胞外基质成分与腺样囊性癌(Adenoidcysticcarcinoma,ACC)特殊病理学结构的形成和侵袭等生物学表型关系密切。本研究观察来源于人腺样囊性癌的细胞株ACC2合成细胞外基质成分I、II型胶原蛋白的过程,并探讨其与ACC囊腔形成的关系。方法应用间接免疫荧光组织化学方法观察蛋白质的动态合成过程,并以RT-PCR法检测相应mRNA的表达。结果ACC2有I型胶原mRNA表达,免疫荧光观察到I型胶原合成和分泌的动态过程。同时在基因和蛋白水平ACC2都无II型胶原的合成。结论I型胶原是ACC基质的重要成分,与其囊腔形成关系密切。II型胶原不参与囊腔的形成。

不同放疗剂量对人唾液腺腺样囊性癌细胞生物学行为的影响

目的 :探讨不同放疗剂量对人唾液腺腺样囊性癌(SACC-83、SACC-LM)细胞生物学行为的影响。方法 :采用不同放疗剂量(0、2、4、6、8、10 Gy)作用SACC-83、SACC-LM细胞并继续培养48 h,CCK-8检测细胞存活,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,细胞划痕实验观察细胞迁移能力变化。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:放疗对SACC-LM细胞的细胞存活率、细胞凋亡率、异倍体、细胞迁移力的影响较SACC-83显著(P<0.05);与其他放疗剂量相比,SACC-83细胞在6 Gy剂量照射下细胞存活率最低,细胞凋亡比例及异倍体比例最高,细胞迁移能力最弱。结论:SACC-LM细胞放疗敏感性较SACC-83更高,SACC-83细胞对6 Gy剂量放疗最为敏感。

p120连环蛋白对人唾液腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨p120ctn-shRNA对人唾液腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,以及p120ctn-shRNA对E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白表达的影响。方法 选取人唾液腺腺样囊性癌细胞SACC-83细胞系进行培养,p120ctn-shRNA慢病毒表达载体转染SACC-83,同时转染空载体NC shRNA作为对照组,嘌呤霉素筛选稳定表达p120ctn-shRNA的细胞系。通过RT-PCR和Western Blot检测敲低效果。分别通过CCK8、划痕实验、迁移实验和侵袭实验观察p120连环蛋白基因敲低对人唾液腺腺样囊性癌细胞SACC-83增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为的影响。通过RT-PCR和Western Blot检测p120连环蛋白基因敲低对E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白表达的影响。结果 与对照组相比,实验组p120连环蛋白的基因表达量和蛋白表达量都大幅度降低。与对照组相比,实验组的增殖能力明显降低(P<0.05),与对照组相比,实验组的迁移能力明显降低。与对照组相比,实验组的侵袭能力明显降低(P<0.01)。E-钙粘蛋白表达略微下降,N-钙粘蛋白表达显著下降。结论 抑制p120连环蛋白的表达可以抑制人唾液腺腺样囊性癌SACC-83的增殖、迁移及侵袭的能力,同时可以较大程度下调N-cad的表达,较小程度下调E-cad的表达。

体外沉默ICMT基因对人唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprene cysteine carboxymethyl transferase,ICMT)基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞迁移和侵袭的影响及相关机制,为SACC的分子靶向治疗提供实验依据。方法 体外培养腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83,采用脂质体载体瞬时转染的方法,将ICMT siRNA转染至人SACC-LM和SACC-83细胞中(实验组),并分别设置空白对照组和阴性对照组(转染NC-siRNA)。通过qRT-PCR检测转染后各组细胞中ICMT和RhoA的m RNA表达并明确沉默效率;Western blot检测各组的ICMT、膜RhoA、总RhoA、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rho associations contain curly helical binding protein kinase 1,ROCK1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达;通过CCK-8实验检测SACC细胞的增殖能力;通过比较细胞划痕实验的相对愈合面积和Transwell实验细胞穿膜数目,分别检测SACC细胞的迁移和侵袭能力。结果 SACC-LM和SACC-83细胞转染ICMT-siRNA后,实验组相较于空白对照组和阴性对照组,ICMT mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05),但RhoA mRNA和RhoA总蛋白表达均无显著性差异(P>0.05);膜RhoA、ROCK1、MMP-2、MMP-9的蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞增殖能力明显下降(P<0.05),迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论 体外沉默ICMT基因可有效抑制人SACC-LM和SACC-83细胞迁移及侵袭能力,其机制可能与RhoA-ROCK信号通路有关。

Genistein对唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用

目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein(4',5,7-三羟基异黄酮)对人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用及其对细胞增殖周期的影响。方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用MTT检测法计算细胞存活率,显微照相记录细胞生长状态及形态学的改变,流式细胞仪测定细胞周期,AnnexinⅤ/PI法定量检测细胞凋亡,采用SPSS11.5统计软件对结果进行统计方差分析。结果:Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间、达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;细胞形态发生改变,体积缩小,悬浮细胞逐渐增多;SACC-83细胞经220μmol/LGenistein作用3d,其生长受到明显抑制,阻断细胞生长于G2/M期,并明显诱导细胞凋亡(P<0.01)。结论:Genistein可以显著抑制人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的生长,阻断细胞周期于G2/M期,并诱导细胞凋亡;提示酪氨酸蛋白激酶在唾液腺腺样囊性癌的发生、发展中起着重要作用。

苦参碱对唾液腺腺样囊性癌细胞黏附侵袭抑制的影响及机制探讨

目的:研究苦参碱对唾液腺腺样囊性癌ACC-M细胞黏附侵袭能力的影响并初步探讨其机制。方法:体外培养ACC-M细胞系,MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,应用黏附试验和Matrigel侵袭实验,研究苦参碱注射液及其不同浓度对ACC-M细胞黏附及侵袭能力的影响,采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果:苦参碱注射液浓度在0.25、0.50、0.75、1.00 mg/mL时,对ACC-M细胞均有一定增殖抑制作用,且呈明显的量效和时效关系。不同浓度苦参碱注射液处理ACC-M细胞24h后,其体外黏附和侵袭能力呈剂量依赖性下降。经苦参碱(0.75 mg/mL)作用后,ACC-M细胞的E钙黏素(E-cad蛋白)表达明显增强,与对照组有显著差异。结论:一定浓度的苦参碱可以抑制唾液腺腺样囊性癌细胞生长,降低细胞黏附和侵袭能力,其机制可能与上调E-cad蛋白表达有关。

唾液腺腺样囊性癌细胞系中5个抑癌基因甲基化及其表达

目的:探讨唾液腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)细胞系中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH-1、MyoD1基因的甲基化及其与mRNA表达之间的关系。方法:甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC-M中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH-1、MyoD1基因的甲基化;RT-PCR及荧光实时定量PCR对存在甲基化的基因进行mRNA水平的检测。结果:3个细胞系中均存在CDH13、RASSF2A、TFPI-2基因的甲基化和未甲基化,只存在MyoD1基因的甲基化和hMLH-1基因的未甲基化;ACC-2中CDH13基因mRNA水平的表达显著高于ACC-M,ACC-3中RASSF2A的表达显著高于ACC-2、ACC-M,3个细胞系中均未检测到MyoD1基因的表达。结论:ACC细胞系中,CDH13、RASSF2A、TFPI-2、MyoD1基因的甲基化为常见事件,甲基化可能为MyoD1基因失活的主要机制,CDH13基因的表达可能与ACC的转移相关。

辛伐他汀对唾液腺腺样囊性癌细胞生长及survivin表达的影响

目的 :探讨辛伐他汀(simvastatin)对人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞增殖、凋亡及survivin蛋白表达的影响。方法:体外培养SACC-83细胞,用不同浓度的辛伐他汀(0、10、20、30、40、50μmol/L)对体外培养的SACC-83细胞进行不同时间的干预,CCK-8法检测药物对细胞增殖能力的影响;结晶紫染色观察辛伐他汀对细胞集落形成的影响;Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测不同浓度辛伐他汀作用于SACC-83细胞48 h后凋亡细胞的百分率;Western蛋白印迹检测survivin蛋白表达的变化。采用SPSS13.0软件包对数据进行单因素方差分析和q检验。结果 :用不同浓度的辛伐他汀处理细胞不同时间后,SACC-83的生长受到明显抑制,并具有时间、浓度梯度依赖性;结晶紫染色观察到细胞集落形成也受到抑制(P<0.05);药物处理48 h后,细胞凋亡率随药物浓度增加而升高(从8.60%到67.97%);同时,SACC-83细胞survivin蛋白的表达量显著降低(P<0.05)。结论 :辛伐他汀能抑制SACC-83细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与survivin蛋白的表达下调有关。

唾液腺腺样囊性癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞外泌体差异表达miRNAs的筛选及验证

目的:探讨唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)微环境中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)外泌体miRNAs表达特征,分析其在SACC进展中的作用。方法:将SACC细胞与巨噬细胞共培养,获得SACC相关TAMs。应用超速离心法分别提取以上细胞外泌体,采用透射电镜、Western免疫印迹、外泌体纳米微粒追踪检测进行验证。对TAMs外泌体与对照组巨噬细胞外泌体进行RNA-seq测序,分析差异表达的miRNAs。利用miRanda和RNAhybrid软件对差异miRNAs进行靶基因预测,再对差异miRNAs作用的靶基因的集合分别进行GO和KEGG富集分析。利用qRT-PCR、CCK-8、细胞划痕实验、Transwell实验验证TAMs外泌体miRNAs表达及功能。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:筛选出1595个差异表达的miRNAs,其中15个miRNAs表达差异变化具有统计学意义(P<0.05)。差异miRNAs作用靶基因富集分析发现,TAMs外泌体miRNAs靶基因参与调控癌症相关信号通路。qRT-PCR结果显示,TAMs外泌体has-miR-21-5p表达上调最显著。CCK-8、细胞划痕实验和Transwell实验发现,TAMs外泌体hsa-miR-21-5p促进SACC细胞增殖、迁移与侵袭能力。结论:TAMs外泌体hsa-miR-21-5p促进SACC细胞恶性进展。TAMs外泌体miRNAs可能在SACC进展中发挥重要作用,有望为SACC的诊治提供新的策略。

BDNF对唾液腺腺样囊性癌细胞株抗失巢凋亡能力和转移的影响

目的:观察脑源性神经营养因子(BDNF)对唾液腺腺样囊性癌细胞系抗失巢凋亡能力和转移的影响,揭示BDNF与唾液腺腺样囊性癌高转移特性的关系。方法:以唾液腺腺样囊性癌(SACC)高、低转移细胞系ACC-2和ACC-M为研究对象,利用MTT、悬浮培养、流式细胞仪、软琼脂克隆形成实验观察BDNF对SACC细胞系体外培养过程中增殖和抗失巢凋亡的影响。以SPSS10.0软件对实验结果进行配对t检验。结果:ACC-2和ACC-M在体外培养过程中均具有一定的抗失巢凋亡能力,且ACC-M高于ACC-2(P<0.01)。25、50、100ng/mlBDNF对ACC-2和ACC-M增值均无显著影响(P>0.05)。50ng/mlBDNF可以显著提高ACC-2的抗失巢凋亡能力(P<0.01)和克隆形成(P<0.01)。结论:SACC的转移特性与抗失巢凋亡能力相关,适合浓度的BDNF可以提高SACC的抗失巢凋亡能力。

DNMT1干扰对唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M E-cadherin表达的影响

目的:建立DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达稳定抑制的唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M,探讨DNMT1表达抑制对ACC-M细胞E-cadherin表达的影响。方法:设计靶向干扰DNMT1的shRNA序列,构建携带该序列的慢病毒载体并转导ACC-M细胞,对筛选出的抗性克隆采用RT-PCR、荧光定量PCR、免疫印迹方法分别检测DNMT1mRNA、蛋白质水平,筛选获得DNMT1表达稳定抑制的ACC-M细胞,并通过甲基化特异性PCR检测E-cadherin基因启动子的甲基化状态,荧光定量PCR检测E-cadherin的表达情况。采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果:筛选获得DNMT1稳定表达抑制的ACC-M细胞,其mRNA、蛋白相对表达水平(0.156±0.008,0.163±0.013)显著低于空白对照组和空载对照组。进一步检测发现,E-cadherin基因启动子甲基化水平明显降低,E-cadherinmRNA表达水平显著增高,P<0.05。结论:shRNA慢病毒载体介导的RNA干扰能够有效、稳定地抑制ACC-M细胞DNMT1的表达,并降低ACC-M细胞E-cadherin基因启动子的甲基化水平,从而使E-cadherin基因表达增强。

PRRX1对唾液腺腺样囊性癌细胞自噬的影响

目的:探讨配对相关同源框1(paired related homeobox1,PRRX1)对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞自噬的影响。方法:用PRRX1过表达慢病毒载体及PRRX1慢病毒空载体转染SACC细胞后,应用Western蛋白免疫印迹法检测转染效果。利用透射电子显微镜观察自噬小体,通过细胞免疫荧光和蛋白免疫印迹法检测自噬标志物(LC3-Ⅱ/Beclin1)水平。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与未转染的空白对照组和阴性空病毒载体转染组相比,PRRX1过表达组的PRRX1表达量升高,自噬小体减少,自噬标志物水平降低(P<0.05)。结论:PRRX1对SACC细胞的自噬有抑制作用。

蛋白激酶D抑制剂CRT0066101对唾液腺腺样囊性癌细胞迁移能力的影响

目的观察蛋白激酶D(PKD)的抑制剂CRT0066101对唾液腺腺样囊性癌(SACC)细胞迁移能力的影响,并探讨其相关机制,为SACC治疗提供新策略。方法将不同浓度的CRT0066101作用于SACC-LM细胞,通过蛋白质印迹(Western blot)和细胞免疫荧光染色检测CRT0066101对细胞PKD磷酸化活化的作用;Transwell实验检测CRT0066101对细胞迁移能力的影响;利用Western blot、细胞免疫荧光染色和实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测药物对上皮间充质转化(EMT)相关指标蛋白的影响;用蛋白酶体抑制剂处理CRT0066101作用后的细胞和对照细胞,Western blot检测锌指转录因子(Snail)蛋白的表达。结果CRT0066101能抑制PMA诱导的SACC-LM细胞PKD磷酸化;降低细胞迁移数。CRT0066101能降低N-钙黏着蛋白和Snail蛋白表达量,增加E-钙黏着蛋白和CDH1基因的表达。CRT0066101能调控蛋白酶体介导的Snail蛋白降解。结论CRT0066101抑制SACC-LM细胞迁移能力,调节EMT相关蛋白和基因表达,机制可能与蛋白酶体介导的Snail蛋白降解有关。

沉默PGGT1B对唾液腺腺样囊性癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨GGTase-I在唾液腺腺样囊性癌SACC-LM和SACC-83细胞增殖和凋亡方面的作用及其相关机制。方法:根据编码GGTase-I的PGGT1B基因序列,应用慢病毒介导的基因沉默技术,稳定敲低SACC-LM和SACC-83细胞中PGGT1B基因的表达。将细胞分为实验组(沉默目的 基因PGGT1B的细胞)、阴性对照组(未沉默目的基因PGGT1B的细胞)和空白对照组(只包含空载体的细胞)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞PGGT1B和RhoA的mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GGTase-I、RhoA、RhoA膜蛋白、CyclinD1及p21的蛋白表达;采用CCK-8实验分析细胞的增殖行为;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡能力变化;通过裸鼠皮下成瘤实验观察PGGT1B编码的GGTase-I蛋白对SACC细胞成瘤能力的影响。采用SPSS 25.0软件包对数据进行统计学分析。结果:qRT-PCR检测结果显示,慢病毒感染SACC-LM和SACC-83细胞后,PGGT1B和RhoA的相对表达量降低(P<0.05);Western免疫印迹检测结果显示,RhoA相对表达量无显著改变(P>0.05),GGTase-I、RhoA膜蛋白的相对表达量下降(P<0.05),CyclinD1的相对表达量降低,p21的相对表达量增高(P<0.05);SACC-LM和SACC-83细胞增殖活性下降、凋亡能力增加(P<0.05);裸鼠皮下肿瘤体积、质量下降,生长速度减慢。结论:通过沉默编码GGTase-I蛋白的PGGT1B基因,可降低RhoA蛋白活性,促进细胞凋亡、抑制细胞增殖,表明GGTase-I蛋白可对SACC-LM和SACC-83细胞的增殖行为和凋亡能力产生影响,有望成为SACC基因治疗的新靶点。

MUC1通过调控EGFR/ERK信号通路促进唾液腺腺样囊性癌细胞增殖和侵袭的研究

目的:研究黏蛋白1(MUC1)对唾液腺腺样囊性癌(ACC)细胞生物学功能的影响及其分子机制。方法:首先通过慢病毒(shMUC1)转染对ACC细胞系中MUC1基因进行敲减,通过Real-time PCR和Western blot检测敲减效果;CCK-8实验检测细胞的增殖能力;平板克隆形成实验评价细胞的克隆形成能力;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;采用转录组测序筛选MUC1调控的相关信号通路,并通过Wesern blot验证分析。结果:转染MUC1慢病毒后,ACC细胞中MUC1 mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05);MUC1敲减后ACC细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05);转录组测序分析和Western blot结果表明MUC1主要通过调控EGFR/ERK磷酸化水平影响ACC细胞的生物学功能。结论:MUC1可通过调控EGFR/ERK磷酸化水平促进ACC细胞的增殖、平板克隆、迁移和侵袭,提示MUC1在ACC进展中可能发挥重要作用。

人正常唾液腺上皮细胞摄取腺样囊性癌细胞来源的外泌体的实验研究

目的:研究腺样囊性癌ACC-2细胞来源的外泌体能否靶向正常唾液腺上皮细胞(SGECs),为进一步研究ACC来源的外泌体在ACC侵袭和转移中的调节作用奠定基础。方法:通过组织块法原代培养人SGECs,应用免疫细胞化学染色对其来源进行鉴定;将ACC-2细胞来源的外泌体用荧光染料PKH67标记后与SGECs共培养,用扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察SGECs对ACC-2来源的外泌体的摄取情况。结果:原代培养的SGECs高表达角蛋白CK19,不表达α-MSA,说明其来源可能为腺泡上皮或导管上皮细胞,而非间质和肌上皮细胞。在LSCM下观察到携带PKH67标记的外泌体可以进入SGECs内,主要分布于核周的胞质中。结论:SGECs可摄取ACC-2细胞来源的外泌体,提示可能为ACC来源外泌体的靶细胞之一。

基于加权共表达网络和机器学习筛选唾液腺腺样囊性癌疾病特征性基因

目的:确定唾液腺腺样囊性癌潜在的生物标志物,以进一步了解腺样囊性癌潜在的发病机制。方法:从NCBI GEO数据库下载2个微阵列数据集(GSE59701、GSE88804),用LIMMA软件包筛选SACC差异表达基因。WGCNA寻找与SACC最相关的重要模块基因,以LASSO、SVM-RFE 2种机器学习算法识别hub基因。随后生成用于预测SACC的ROC曲线,判断诊断效果。采用R4.2.1软件进行统计学分析。结果:鉴定出3个hub基因(GABBR1、EN1和LINC01296),并用其建立一个预测性能较高的ROC曲线(AUC,1.000~1.000)。结论:采用WGCNA、LASSO和SVM-RFE获得3个枢纽基因(GABBR1、EN1和LINC01296)作为SACC的潜在生物标志物,为未来对SACC潜在关键基因的研究提供基础,为SACC的早期诊断和治疗提供依据。

沉默Ras同源物家族成员C对唾液腺腺样囊性癌增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨沉默Ras同源物家族成员C(RhoC)对唾液腺腺样囊性癌(SACC)增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法选择2019年1月1日—2024年3月1日于青岛市市立医院手术切除的SACC病灶和正常唾液腺组织各27例,通过蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学法检测RhoC的表达水平。针对RhoC基因序列设计3条小干扰RNA(siRNA),转染至SACC-LM和SACC-83细胞系中并评估转染效率。通过Western blot比较RhoC、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、扭曲家族bHLH转录因子1(TWIST1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。CCK-8实验、流式细胞术、Transwell侵袭实验、伤口愈合实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的差异。生物信息学方法预测RhoC可能的上游微小RNA(miRNA)及其在SACC中的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证二者的结合位点。结果RhoC在SACC中的表达显著上升(P<0.05)。沉默RhoC后,实验组ROCK1、p-p38MAPK、TWIST1、N-cadherin、Vimentin的表达显著下降,E-cadherin的表达显著上升(P<0.05);p38MAPK的表达无明显差异(P>0.05);细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降,凋亡率显著上升(P<0.05)。miR-138-5p在SACC中低表达,miR-138-5p micmic可以显著下调转染RhoC野生型质粒后293T细胞的荧光素酶活性(P<0.05)。结论RhoC在SACC中高表达,沉默RhoC可能靶向下游ROCK1/p38MAPK/TWIST1信号通路从而抑制SACC的增殖、侵袭、迁移和EMT,同时促进其凋亡。miR-138-5p在SACC中低表达,是RhoC潜在的上游基因,二者可能存在结合位点。

miR-21对唾液腺腺样囊性癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 :探讨miR-21对人唾液腺腺样囊性癌细胞株(SACC-LM)增殖、凋亡的影响及其相关作用机制。方法 :将SACC-LM细胞分为3组,采用Lipofectamine ^(TM)2000做瞬时转染。干扰组转染miR-21 inhibitor,阴性对照组转染无关核苷酸序列,空白对照组不转染。采用实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-21和PDCD4、Bcl-2 mRNA的表达水平。以CCK8法检测转染24、48、72、96 h后细胞的增殖活性,Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,Western免疫印迹检测转染后靶蛋白PDCD4、Bcl-2的表达量。采用SPSS 16.0软件包对所得数据进行统计学分析。结果:转染miR-21 inhibitor的细胞中miR-21、Bcl-2表达下调(P<0.01),而PDCD4基因表达上调(P<0.05)。CCK8检测结果表明,miR-21表达下调可以明显抑制SACC-LM细胞的增殖活性,并呈时间依赖性(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明,干扰组细胞凋亡率显著高于阴性对照组和空白组(P<0.05);Western免疫印迹结果显示,PDCD4蛋白的表达较对照组显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:下调miR-21的表达可抑制SACC-LM细胞的增殖活性,诱导细胞凋亡,其机制可能与细胞内PDCD4表达上调,Bcl-2表达下调有关。