原代培养人喉鳞癌细胞中SIX1、TGF-β、VEGF-C表达的相关性

目的探讨原代人喉鳞癌细胞中SIX1、TGF-β、VEGF-C表达相关性。方法取新鲜人喉鳞状细胞癌组织,进行原代细胞培养,利用基因干扰技术,制备SIX1、TGF-β及SIX1+TGF-β靶向si RNA转染至人喉鳞癌细胞,转染成功后将实验细胞分为5组:A组(未转染组)、B组(转染空载体组)、C组(SIX1-si RNA组)、D组(TGFβ-si RNA组)、E组(SIX1+TGF-β-si RNA组)。Western blot及细胞爬片免疫荧光检测各组细胞SIX1、TGF-β及VEGF-C蛋白的表达。RT-PCR检测各组细胞SIX1、TGF-β及VEGF-C m RNA的表达。结果 SIX1、TGF-β、VEGF-C蛋白及其m RNA的表达在未转染组、转染空载体组中差异无统计学意义。同未转染组相比,SIX1蛋白及其m RNA的表达在SIX1-si RNA组降低的同时出现了VEGF-C表达的降低;TGF-β蛋白及其m RNA的表达在TGFβ-si RNA组降低的同时也出现了VEGF-C表达的降低,差异均有统计学意义。同SIX1-si RNA组、TGFβ-si RNA组相比,VEGF-C蛋白及其m RNA的表达在SIX1+TGF-β-si RNA组未出现进一步降低。结论 SIX1和TGF-β能够共同作用促进VEGF-C蛋白及其m RNA的表达,进而促进人喉鳞癌的淋巴转移。SIX1、TGF-β的变化可能成为临床抑制人喉鳞癌淋巴结转移的潜在靶点。

100例人喉上神经内支解剖分布研究

目的分析人喉上神经内支喉内分支分布情况，探讨其在喉嗓音生理学方面的意义。方法采用显微神经解剖及组织学银染法对１００例正常新鲜人半喉的喉上神经内支各级分支的走行及分布范围进行分析。结果喉上神经内支整个行程可分为三段，在其第一段上没有发出分支，在第二及第三段上开始发出分支，大多数情况下，分为三个主支———内上支、中间支及后下支。会厌两面、声带后２／３段及杓间区分别为内上支、中间支及后下支支配。后下支一个亚支参与形成嘎氏（Ｇａｌｅｎ）神经吻合支。结论喉上神经内支在穿入甲舌膜前没有分支，其在喉内发出分支的类型与数目变异较大，对杓间肌的分支性质应为感觉支。

人参皂苷Rg3对原代人喉鳞癌细胞SIX1、TGF-β、VEGF-C表达的影响

目的:探讨人参皂苷Rg3对原代培养人喉鳞癌细胞中SIX1、TGF-β、VEGF-C表达的影响。方法:培养原代人喉鳞癌细胞,待细胞稳定传代后将其分为3组:A组(正常对照组)、B组(顺铂对照组)、C组(Rg3处理组)。Westernblot及细胞爬片免疫荧光检测各组细胞SIX1、TGF-β及VEGF-C蛋白的表达。RT-PCR检测各组细胞SIX1、TGF-β及VEGF-C mRNA的表达。结果:正常对照组细胞SIX1、TGF-β及VEGF-C蛋白及其mRNA表达均呈现强阳性。同正常对照组相比,顺铂对照组及Rg3处理组细胞TGF-β表达无明显变化,SIX1及VEGF-C蛋白及其mRNA表达下调,差异有统计学意义;同顺铂对照组相比,Rg3处理组细胞TGF-β表达无明显变化,SIX1及VEGF-C蛋白及mRNA表达出现了明显下调,差异有统计学意义。结论:Rg3能够通过降低人喉鳞癌细胞SIX1表达下调VEGF-C蛋白表达,进一步抑制喉鳞癌淋巴转移。同时提示,Rg3有比顺铂更强的抑制喉鳞癌淋巴转移的作用。

尼美舒利对人喉鳞癌Hep-2细胞祼鼠移植瘤CD44和MMP-7表达的影响

目的探讨尼美舒利对喉鳞状细胞癌裸鼠皮下移植模型的抑瘤作用及机制。方法建立人喉鳞癌Hep-2细胞株裸鼠移植瘤模型,应用尼美舒利处理裸鼠,观察肿瘤生长情况并绘制生长曲线,免疫组织化学技术检测移植瘤组织中COX-2、CD44和MMP-7蛋白表达,RT-PCR技术检测移植瘤组织中COX-2、CD44和MMP-7 mRNA表达情况。结果与对照组相比,治疗组肿瘤体积增长较对照组缓慢,体积抑瘤率为63.36%,重量抑瘤率达51.81%,肿瘤体积和重量均明显低于对照组(P均<0.05)。实验组和对照组治疗前后裸鼠体重增长值差异无统计学意义(P>0.05)。实验组COX-2、CD44和MMP-7蛋白及mRNA表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论尼美舒利可有效抑制人喉鳞癌细胞系Hep-2裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制COX-2、CD44及MMP-7表达有关。

SIX1和TGF-β对原代人喉鳞癌细胞上皮—间质转化的影响

目的探讨原代培养的人喉鳞癌细胞中SIX1和转化生长因子-β(TGF-β)共同作用对上皮—间质转化(EMT)的影响及相关机制。方法收集2016年1月—2018年1月于河北医科大学第一医院耳鼻咽喉科行喉鳞癌手术患者21例,均留存切除组织,并对其进行人喉鳞癌原代细胞培养,制备SIX1、TGF-β及SIX1+TGF-β靶向siRNA,并转染至原代人喉鳞癌细胞,成功转染后分5组,即未转染组、空转组、SIX1转染组、TGF-β转染组及SIX1+TGF-β转染组。应用免疫组化荧光法及蛋白印记Western-blot法检测细胞中SIX1、TGF-β及上皮标志物E-cadherin的蛋白表达。PCR方法检测各组细胞中SIX1、TGF-β及E-cadherin mRNA表达。结果与未转染组比较,空转组细胞中SIX1、TGF-β、E-cadherin mRNA及蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05),SIX1转染组、TGF-β转染组及SIX1+TGF-β转染组E-cadherin蛋白及mRNA表达均上调,差异均有统计学意义(F/P=6.846/0.006、13.396/0.000、9.673/0.000)。SIX1转染组、TGF-β转染组及SIX1+TGF-β转染组3组比较,E-cadherin mRNA及其蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论人喉鳞癌细胞上皮—间质转化呈SIX1及TGF-β依赖性。SIX1和TGF-β共同作用可能是人喉鳞癌细胞上皮—间质转化的关键;SIX1和TGF-β是人喉鳞癌细胞转移潜能的重要标志。

N-myc下游调控基因2蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达及对人喉表皮样癌细胞生物学特性的影响

目的检测N-myc下游调控基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其人类上皮细胞2型((Human Epithelial cells of type 2)对人喉表皮样癌细胞(Hep-2细胞)侵袭的影响。方法收集西安交通大学第一附属医院2014年1月1日至2017年12月31日接受喉部分切除术的病人,共计41例喉鳞状细胞癌组织及癌旁组织。采用免疫组织化学检测喉鳞状细胞癌组织中NDRG2的表达,χ^2检验分析不同临床病理特征分组中NDRG2阳性率的差异;实时定量聚合酶链式反应及蛋白质印迹法检测喉鳞状细胞癌Hep-2细胞中NDRG2的表达水平;Transwell检测NDRG2对Hep-2细胞侵袭及转移的影响。结果41例喉鳞状细胞癌组织中NDRG2的阳性率明显低于癌旁组织,(χ^2=30.781,P<0.05)TNM III期和IV期及淋巴结转移的喉鳞状细胞癌病人中NDRG2的阳性率低于TNM I期和II期及未发生转移的病人(TNM I和TNM II NDRG2阳性率:37.500%,TNM III和IV NDRG2阳性率:5.882%,χ^2=5.394,P<0.05;无淋巴结转移病人NDRG2阳性率:55.556%,有淋巴结转移病人NDRG2阳性率:15.625,χ^2=6.073,P<0.05)。此外,Hep-2细胞中NDRG2的表达也明显低于正常鼻咽上皮NP-69细胞[Hep-2(1.193±0.053),NP-69(0.238±0.072),t=3.536,P<0.05]。上调Hep-2细胞中NDRG2的表达后,转移[Lv-control(141.328±23.424)个,Lv-NDRG2(54.925±16.825)个,t=4.413,P<0.05]及侵袭[Lv-control(71.782±18.675)个,LvNDRG2(25.931±9.729)个,t=3.757,P<0.05]细胞数目显著降低。结论NDRG2在喉鳞状细胞癌组织及细胞中低表达,并可作为抑癌基因抑制Hep-2细胞增殖、侵袭及转移。

熊果酸对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究熊果酸(Ursolic Acid,UA)对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:体外培养并取对数生长期的人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞分为空白对照组、UA(12.5、25、50μmol/L)组和顺铂(6μmol/L)组,每组设10个复孔。药物干预24h后,采用MTT比色法测定增值抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期、观察细胞凋亡状况并计算凋亡率,逆转录-PCR(RT-PCR)法检测bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值,Western blotting法检测caspase-3蛋白表达。结果:UA(25、50μg/m L)组和顺铂组Hep-2细胞增殖抑制率较空白对照组显著升高,G_0/G_1期显著增长、G_2/M期显著缩短,细胞凋亡率显著升高,细胞中bcl-2 mRNA表达显著下调且Bax mRNA显著上调、Bax/bcl-2表达比值显著升高,caspase-3蛋白表达显著上调,上述差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:UA具有抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制可能与UA能够改变细胞周期以及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。

人参皂甙Rg3对人喉鳞癌细胞中SIX1和TGF-β诱导上皮-间质转化的作用研究

目的探讨中药单体人参皂甙Rg3对原代培养人喉鳞癌细胞上皮-间质转化的影响及SIX1和TGF-β在上皮-间质转化中的作用。方法术中留存人喉鳞状细胞癌组织,常规处理后,体外进行人喉鳞癌原代细胞培养,待细胞传代稳定后分为对照组、顺铂组、Rg3组。顺铂组加入顺铂,使其终浓度为3μg/mL;Rg3组加入Rg3,使其终浓度为300μg/mL。处理后继续培养细胞24 h,免疫组化及Western blot检测3组细胞中SIX1、TGF-β及上皮标志物E-cadherin蛋白表达情况,RT-PCR法检测各组原代细胞中SIX1 mRNA、TGF-βmRNA及E-cadherin mRNA表达情况。结果免疫组化染色显示对照组SIX1、TGF-β蛋白强阳性表达,E-cadherin蛋白弱阳性表达;顺铂组SIX1和E-cadherin蛋白阳性表达,TGF-β蛋白强阳性表达;Rg3组SIX1蛋白弱阳性表达,E-cadherin和TGF-β蛋白强阳性表达。顺铂组及Rg3组SIX1蛋白及mRNA表达水平均明显低于对照组(P均<0.05),且Rg3组均明显低于顺铂组(P均<0.05);顺铂组及Rg3组E-cadherin蛋白及mRNA表达水平均明显高于对照组(P均<0.05),且Rg3组明显高于顺铂组(P均<0.05);3组间TGF-β蛋白及mRNA表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论Rg3能够通过下调SIX1表达起到抑制人喉鳞癌细胞上皮-间质转化的作用,且其作用强于顺铂。

熊果酸抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖的功能和机制研究

目的研究熊果酸(UA)对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法分别以不同浓度UA(12.5、25、50μmol·L^(-1))和顺铂(6μmol·L^(-1))处理对数生长期人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,药物干预24 h后,采用Hoechst染色法观察Hep-2细胞生长状况,MTT法测定细胞增殖抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期、观察细胞凋亡状况并计算凋亡率,RT-PCR法检测bcl-2 m RNA和Bax mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值,Western blot法检测降解型caspase-3蛋白表达。结果 UA各组和顺铂组Hep-2细胞较空白对照组出现明显损伤,以UA 50μmol·L^(-1)组最为显著;UA(25、50μmol·L^(-1))组和顺铂组Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡率显著升高,细胞中bcl-2 m RNA表达显著下调且Bax mRNA显著上调、Bax/bcl-2表达比值显著升高,降解型caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论 UA能够抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖并促进其凋亡,提示UA对Hep-2细胞生长具有抑制作用,其作用机制可能与UA能够改变细胞周期以及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。

稳定感染HPV-16 E6-E7的人喉咽鳞癌FaDu细胞生物学特性观察

目的:观察稳定感染HPV-16 E6-E7对Fa Du细胞生物学行为的影响和调控。方法:全基因合成HPV-16E6-E7基因,将其与慢病毒载体p LV-EGFP-C在T4连接酶作用下连接。制备重组HPV-16 E6-E7慢病毒并感染Fa Du细胞。将细胞分3组:实验组(重组HPV-16 E6-E7慢病毒稳定感染的Fa Du细胞)、载体对照组(慢病毒空载体稳定感染的Fa Du细胞)和空白对照组(未感染慢病毒的Fa Du细胞)。分别用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞的体外侵袭能力。结果:获得稳定感染重组HPV-16 E6-E7慢病毒的Fa Du细胞,荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光蛋白EGFP表达。整合HPV-16 E6-E7基因的Fa Du细胞增殖能力和侵袭力均增强,细胞凋亡率降低,S期和G_2/M期细胞增加,G_0/G_1期细胞减少(P<0.05)。结论:成功建立了HPV-16 E6-E7基因整合的Fa Du细胞。

人喉盖仑神经吻合支新解剖分类研究

目的 进一步研究人喉盖仑（Ｇａｌｅｎ）神经吻合支的解剖构成及分类。方法 用显微神经解剖方法对１００例新鲜人半喉及其喉神经进行系统地研究，对其结果进行统计学分析。结果 人喉盖仑神经吻合支分为上、下两个解剖部分，上部来源于喉上神经内支的末梢支，下部来源于喉返神经后支的末梢支。在此基础上，将其解剖类型分为三型，并认为其出现率既非３０％亦非６０％，而是９１％。结论 来源于喉返神经后支的喉内与喉上神经内支的吻合支才是盖仑神经吻合支，按其解剖构成分三型，Ⅰ型占 ７５％，Ⅱ型占 ２０％，Ⅲ型占 ５％，年龄因素不影响其出现率，左、右侧出现率无显著性差异。盖仑神经吻合支在喉神经感觉传导通路上所发挥的作用，仍有待进一步研究。

肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默CD24^-CD44^+人喉鳞癌干细胞生物学特性的改变

背景:肿瘤坏死因子受体相关蛋白1的异常表达与多种肿瘤的发生、发展密切相关。因此靶向抑制肿瘤坏死因子受体相关蛋白1的表达成为治疗或干预肿瘤生长的重要靶点。目的:观察肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默对人喉鳞癌干细胞生长及凋亡的影响。方法:采用流式细胞技术特异性分离出CD24-CD44+喉鳞癌干细胞。设计及合成肿瘤坏死因子受体相关蛋白1的si RNA序列,脂质体TM2000转染CD24-CD44+喉鳞癌干细胞。流式细胞仪、MTT实验、细胞克隆形成实验、TUNEL凋亡实验评价沉默肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因对CD24-CD44+喉鳞癌干细胞增殖、凋亡的影响。结果与结论:(1)相关因子表达:相比于CD24+CD44-的人喉鳞癌细胞,CD24-CD44+人喉鳞癌干细胞内干性基因OCT4,SOX2,NANOG,肿瘤坏死因子受体相关蛋白1的表达均上调(P<0.05)。RNA干扰后,肿瘤坏死因子受体相关蛋白1的表达显著降低(P<0.05);(2)细胞周期及增殖:肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默后人喉鳞癌干细胞的生长速度明显减慢(P<0.05),细胞停滞在G0/G1期,在S期细胞数减少(P<0.05),M期细胞无明显变化。肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默后人喉鳞癌干细胞的增殖受到明显的抑制(P<0.05);(3)细胞克隆形成能力:相比于未经转染的人喉鳞癌干细胞,肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默后人喉鳞癌干细胞克隆形成能力显著下调(P<0.05);(4)细胞凋亡:相比于未经转染的人喉鳞癌干细胞,肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默后人喉鳞癌干细胞的凋亡基因BAD及BAX表达上调(P<0.05);(5)结果表明,特异性干扰肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因表达可抑制人喉鳞癌干细胞增殖并促进其凋亡。

感染人乳头状瘤病毒的人喉咽鳞癌FaDu细胞系的建立

目的建立稳定感染人乳头状瘤病毒(HPV)阳性的人喉咽鳞癌FaDu细胞系,为体外研究下咽鳞癌提供理想的实验模型。方法重组HPV-16 E6-E7慢病毒,并用其感染人喉咽鳞癌FaDu细胞。RT-PCR和Western blot检测慢病毒稳定感染的FaDu细胞E6、E7m RNA和蛋白表达情况。结果获得稳定感染重组HPV-16 E6-E7慢病毒的FaDu细胞。结论成功建立人乳头状瘤病毒感染的人喉咽鳞癌FaDu细胞系。

miR-21对人喉鳞癌Hep2细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨miR-21对人喉鳞癌Hep2细胞增殖与凋亡的影响。方法脂质体LipofectamineTM2000将miR-21inhibitor和miR-21阴性对照(NC)转入Hela细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,克隆实验及Hoechst染色分别检测细胞增殖与凋亡情况,Western blot检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、程序化死亡蛋白4基因(PDCD4)、Bax、Bcl-2表达及蛋白激酶B(AKT)磷酸化水平。结果与miR-21NC比较,miR-21inhibitor能显著抑制细胞活力[(0.728±0.045)vs.(0.393±0.018),P<0.01],降低细胞克隆数目[(158.38±14.47)vs.(65.52±6.86),P<0.01],提高细胞凋亡率[(8.45±0.67)%vs.(40.23±3.46)%,P<0.01],并上调PTEN、PDCD4、Bax表达,下调Bcl-2表达及降低AKT磷酸化水平(P<0.01)。结论 miR-21inhibitor通过PTEN/AKT信号通路抑制人喉鳞癌Hep2细胞增殖和诱导凋亡,并调节细胞凋亡相关蛋白的表达。

白藜芦醇诱导Hep-2人喉表皮样癌细胞自噬作用

目的:观察白藜芦醇对Hep-2细胞形态学的影响及诱导其自噬的可能机制。方法:40μM浓度白藜芦醇复合培养液作用于Hep-2细胞后,MDC染色和透射电镜分别检测自噬小体和自噬泡;Hoechest33258染色检测凋亡细胞;western blot分别分析自噬基因蛋白水平。结果:白藜芦醇增加LC3Ⅱ与LC3Ⅰ的比率,促进beclin1蛋白和mRNA的表达,细胞内的自噬泡和自噬小体数量也显著增加。用3MA和CQ抑制自噬则白藜芦醇对Hep-2细胞的促凋亡作用显著减弱。结论:白藜芦醇能够促进Hep-2细胞自噬;白藜芦醇诱导Hep-2细胞自噬的机制可能与促进LC3Ⅱ与LC3Ⅰ的表达、增强自噬基因beclin1蛋白的表达有关。

人喉鳞癌裸鼠移植瘤株建立及初步鉴定

人喉鳞癌裸鼠移植瘤株建立及初步鉴定叶京英，李晓丹，王久莉，肖占荣，申玉山（哈尔滨医科大学附属二院耳鼻咽喉科）史历黑龙江省肿瘤研究所董春梅黑龙江省电力局医院张颖，陈光义哈尔滨医科大学附属二院病理科长期以来，国内、外学者对恶性肿瘤的异种移植进行了许多研究...

SIX1和TGF-β在人喉鳞癌上皮-间质转化中的作用

目的检测人喉鳞状细胞癌组织中同源异形框基因(sine oculis homeobox homolog 1,SIX1)、转化生长生子-β(TGF-β)以及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,探讨SIX1和TGF-β共同作用对人喉鳞癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及相关作用机制。方法收集术后病理学确诊的人喉鳞癌组织标本96例,瘤体周围正常喉黏膜组织标本32例。应用免疫组织化学方法和蛋白印记Western Blot法检测人喉鳞癌组织及瘤体周围正常喉黏膜组织中SIX1、TGF-β以及E-cadherin蛋白的表达情况,PCR方法检测组织细胞中SIX1、TGF-β以及E-cadherin mRNA表达。分析人喉鳞癌患者临床特征同组织SIX1、TGF-β及E-cadherin蛋白及mRNA表达的关系。结果免疫组化、western Blot、PCR检测均发现,喉鳞状细胞癌SIX1、TGF-β阳性表达率和表达水平均高于癌旁正常黏膜,E-cadherin低于癌旁正常黏膜,差异均有统计学意义(P<0.05)。在低分化、有淋巴结转移的喉鳞癌患者组织中E-cadherin蛋白及其mRNA的阳性表达率较低(P<0.05);在低分化、有淋巴结转移的喉鳞癌患者组织中SIX1蛋白及其mRNA表达率较高(P<0.05);在有淋巴结转移的喉鳞癌患者组织中TGF-β蛋白及其mRNA表达率较高(P<0.05);相关性分析结果显示,人喉鳞癌组织中E-cadherin蛋白及其mRNA的表达与SIX1蛋白及其mRNA表达呈负相关(P<0.05);E-cadherin蛋白及其mRNA与TGF-β蛋白及其mRNA表达呈负相关(P<0.05)。结论SIX1及TGF-β可能是调节人喉鳞状细胞癌上皮-间质转化的重要影响因子,二者的高表达可能共同促进了喉鳞癌的上皮-间质转化,联合检测IX1、TGF-β及E-cadherin对判断人喉鳞癌的转移及预后有重要临床意义。

人喉鳞癌细胞增殖及其放射敏感性异质性的实验研究

目的:探讨人喉鳞癌细胞增殖速度的异质性和放射敏感性的异质性。方法:体外长期传代的人喉鳞癌细胞系Hep-2经0、2、4、8、12Gy剂量前后照射3次的存活后代体外培养20代,测定其群体倍增时间(PDT)和放射敏感性参数SF2。结果:Hep-2细胞系相对高剂量(12Gy组)照射存活后代的PDT延长(P<0.05),相对低剂量(2、4、8Gy组)照射存活后代PDT无明显变化(P>0.05)。Hep-2细胞系随着受照剂量的增加,其放射存活后代的SF2逐渐升高(P<0.05),且存活后代的SF2与PDT具有一定的正相关关系(r=0.798,P<0.01)。结论:体外长期传代的Hep-2细胞系具有增殖速度和放射敏感性方面的异质性,且它们之间具有较好的对应关系。

miR-21对人喉鳞癌细胞Hep2迁移侵袭能力的影响

目的探讨微小RNA-21(miR-21)对人喉鳞癌细胞Hep2迁移、侵袭能力的影响。方法用脂质体LipofectamineTM2000将miR-21抑制剂和miR-21NC转入人喉鳞癌细胞Hep2中,48h后,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)的激活情况,以及基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9与伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)的表达。结果与miR-21NC比较,miR-21抑制剂能明显降低Hep2细胞活力[(0.688±0.043)vs.(0.375±0.012)],抑制细胞迁移能力[(6.57±0.02)μmvs.(20.49±2.18)μm]及细胞侵袭能力[(100.7±10.2)vs.(46.8±4.3)],差异均有统计学意义(P<0.01);同时miR-21抑制剂能明显下调PI3K、MMP2及MMP9的表达(P<0.01),降低Akt的磷酸化水平(P<0.01),并上调PTEN及RECK的表达(P<0.01)。结论 miR-21抑制剂能明显抑制人喉鳞癌细胞Hep2的迁移、侵袭能力,可能与PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。