低氧微环境促进人嗅黏膜间充质干细胞的增殖及其机制

背景:人嗅黏膜间充质干细胞不仅具有一般间充质干细胞的基本特征,因其来源于外胚层,还能更多地向神经元方向分化,是一种用于神经损伤修复与再生的理想种子细胞。常规细胞体外培养的氧气体积分数约为21%,而人体正常组织和组织间隙中的氧气体积分数为3%-9%。低氧对人嗅黏膜间充质干细胞增殖及活性的影响尚未见报道。目的:探讨低氧微环境对人嗅黏膜间充质干细胞增殖、活性的影响及其相关机制。方法:分离培养人嗅黏膜间充质干细胞,应用流式细胞学和免疫荧光方法分别进行鉴定;实验将第4代人嗅黏膜间充质干细胞分成3组:体积分数为21%O2组(常氧组)、体积分数为3%O2组(低氧组)、体积分数为3%O2+20μmol/L YC-1(HIF-1α抑制剂)组(抑制剂组),干预72 h后采用流式细胞技术检测各组细胞的细胞周期和细胞凋亡情况;采用Western blot方法检测增殖细胞核抗原的蛋白表达;采用Q-PCR及Western Blot分别检测HIF-1α和TWIST的m RNA及蛋白表达。结果与结论:(1)分离培养出了人嗅黏膜间充质干细胞,第4代人嗅黏膜间充质干细胞的纯度达97%以上;(2)低氧组比常氧组的增殖系数大(P<0.05),且两组间的存活细胞及总体的凋亡细胞(机械死亡+早期凋亡+晚期凋亡)比例差异无显著性意义(P>0.05);(3)低氧组的增殖细胞核抗原蛋白表达显著增高,与常氧组和抑制剂组比较差异有显著性意义(P<0.05);(4)低氧组中HIF-1α和TWIST m RNA和蛋白表达显著上调,与常氧组和抑制剂组比较差异有显著性意义(P<0.05);(5)低氧微环境能促进人嗅黏膜间充质干细胞的增殖而对其细胞活性无明显影响,且此过程与人嗅黏膜间充质干细胞内HIF-TWIST信号通路被激活有关。

人嗅黏膜细胞色素P4502A表达的免疫印迹和免疫组化分析

目的 研究人类细胞色素P4 5 0 (cytochromeP 4 5 0 ,CYP 4 5 0 ) 2A(CYP2A)在鼻黏膜中的表达特点和意义。方法 应用免疫印迹方法分别检测 36例鼻腔鼻窦疾病患者和孕 96、119、16 0、182、185d的 5例胎儿不同部位鼻组织中CYP2A的表达水平 ,并用免疫组化方法检测CYP2A在嗅区黏膜中分布特点。结果 成人标本中 10块嗅区黏膜标本中 8例免疫印迹阳性 ,而 37块呼吸区黏膜标本均为阴性。胎儿嗅区黏膜标本免疫印迹均为阳性 ,其表达水平随胎龄有增加的趋势 ,仅 1例呼吸区黏膜检测到CYP2A。免疫印迹定量分析显示 ,成人嗅区鼻黏膜微粒体CYP2A蛋白质水平在0 1～ 1 1pmol/mg之间 ,胎儿的鼻微粒体蛋白质含量在 0 8～ 5 3pmol/mg之间 ,胎儿一般高于成人。免疫组化结果显示 ,CYP2A免疫活性存在于嗅黏膜的支持细胞和Bowman腺。结论 CYP2A存在于嗅黏膜提示 :嗅黏膜是吸入性外源性物质生物转化的靶位 ,CYP2A还与嗅觉感受有关 。

成人鼻腔嗅黏膜嗅鞘细胞的分离、培养与纯化

目的 自成人鼻腔嗅黏膜中培养纯化嗅鞘细胞,并进行免疫细胞化学鉴定,探讨嗅黏膜中嗅鞘细胞的培养方法。方法 取成人嗅黏膜,采用差速贴壁法获得较高纯度的嗅鞘细胞,并采用免疫细胞化学法进行形态学观察。结果 通过纯化,可获得纯度约为75%的嗅鞘细胞,并表达P75NGFr,光镜下细胞形态以带有细长突起的双极细胞及三极细胞为主,有少量的扁平“煎蛋样”细胞。结论 自成人鼻腔嗅黏膜可成功分离培养出嗅鞘细胞,为开展自体嗅黏膜嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤提供了技术与方法。