人嗜T淋巴细胞病毒-1感染细胞瘤变的病毒表达抑制机制

本专辑接续上期 ,继续就慢性炎症、病毒引发癌症的分子机制问题展开阐述 ,载文 3篇 ,至此本专辑全部刊完。文章选自《医学のあゆみ》2 0 0 2年第 2 0 3卷第 2期及《医学のあゆみ》2 0 0 2年第2 0 3卷第 4期两特集。本专辑由哈尔滨医科大学姚桢教授主译、主审。

RNA干扰Tax基因表达对人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病／热带痉挛性瘫痪患者细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰Tax基因表达对人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病／热带痉挛性瘫痪（HAM／TSP）患者细胞凋亡的影响。方法运用RNAi技术特异性干扰Tax基因的表达，流式细胞技术和westernblot法鉴定Tax蛋白的表达情况，并运用流式细胞技术对干扰后的T淋巴细胞（TLC）凋亡情况及凋亡相关因子Fas、Bcl-2、肿瘤坏死因子α（TNF-α）进行检测。结果重组质粒psiTax／U6转染T细胞（9．84±3．32）％后，Tax蛋白的表达较未处理组（47．45±14．52）％和pSilencerl．O／U6转染组（45．98±10．66）％明显降低（t=9．51，14．93，均P〈0．01）；westernblot法显示重组质粒psiTax／U6转染TLC后，Tax表达较pSilencerl．0／U6转染组明显降低；RNAi干扰组的凋亡率（21．55±1．37）％较未处理组（47．80±3．36）％显著降低（t=24．17，P〈0．01）；RNAi干扰组Fas，TNF—α显著降低（t=17．83，16．85，均P〈0．01），而Bcl-2显著升高（t=5．21，P〈0．01）。结论运用RNA技术干扰Tax基因抑制Tax基因表达，可以有效抑制TLC细胞的凋亡。凋亡相关因子Fas，TNF—αandBcl-2在此过程中发挥重要作用。

Ku70对HTLV-1阳性T细胞中HTLV-1病毒蛋白表达的影响

目的:探讨Ku70对人嗜T淋巴细胞病毒1(HTLV-1)阳性T细胞中HTLV-1病毒蛋白表达的影响。方法:Western blot实验检测不同的HTLV-1阳性T细胞系中Ku70的表达水平;构建Ku70基因沉默siRNA并通过Western blot实验检测其敲减Ku70表达的效率;采用siRNA在HTLV-1阳性的T细胞中敲减Ku70表达后,通过real-time PCR和Western blot实验分别检测HTLV-1病毒蛋白在mRNA和蛋白水平上的表达量,并通过real-time PCR实验检测干扰素和促炎因子的表达量。结果:HTLV-1阳性T细胞系MT2、MT4及C8166中的Ku70均呈高表达;采用siRNA敲减Ku70的表达后,MT2细胞及MT4细胞中的HTLV-1病毒蛋白表达量上升;采用siRNA敲减Ku70的表达后,MT2细胞及MT4细胞中干扰素α、干扰素γ及肿瘤坏死因子α的表达下降。结论:Ku70在HTLV-1阳性T细胞中高表达;在HTLV-1阳性T细胞中,Ku70促进干扰素和促炎因子的表达,抑制HTLV-1病毒蛋白的表达。

中国东北地区HTLV-1的前病毒DNA测定及其意义

目的了解我国东北的HTLV-1的流行情况及病毒特征。方法从2002年起在东北地区共采取了941份标本,用免疫荧光法进行了血清抗体的检测,经PCR扩增及Southern杂交鉴定。结果发现3例HTLV-1阳性感染病人,阳性率0.3%,没有发现HTLV-2阳性感染病人;在37例淋巴细胞白血病患者中检出2例,检出率5.4%。并对其中1例阳性感染病人的外周血单个核细胞(PBMCs)中的前病毒DNA的env基因的gp21、gp46两个碱基对核甘酸序列进行了PCR扩增,并将其克隆到T-Vector上进行DNA的核甘酸序列测定,与日本原型(ATX)病毒DNA链的相应区域的线性比较显示了很高的同源性(98.9%-100.%),没有发现碱基的插入、删除和其他显著性的变化。结论东北地区为HTLV-1的非流行区,于淋巴细胞白血病病人检出率(5.4%)较高,说明东北地区的淋巴细胞白血病与HTLV-1感染有一定的关系。

RNA干扰Tax基因表达及其对HTLV-Ⅰ在TLC中转录的影响

目的探讨RNA干扰Tax基因表达对人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型(HTLV-Ⅰ)在T淋巴细胞(TLC)中表达的影响。方法运用RNAi技术特异性干扰Tax基因的表达,流式细胞技术和western blot法鉴定Tax蛋白的表达情况,并通过p27特异性蛋白的检测反映HTLV-Ⅰ在TLC中表达。结果重组质粒psiTax/U6转染T细胞组Tax蛋白的表达(9.84±3.32)%较未处理组(47.45±14.52)%和pSilencer1.0/U6转染组(45.98±10.66)%明显降低;western blot法显示重组质粒psiTax/U6转染TLC后。Tax以及p27蛋白表达较pSilencer1.0/U6转染组明显降低。结论运用RNA技术干扰Tax基因表达可以有效的阻止HTLV-Ⅰ在TLC中的转录。

HTLV-Ⅰ相关性HAM/TSP患者血浆及脑脊液sFas、sFasL的测定及意义

目的探讨人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病/热带痉挛性瘫痪(humanT-lymphotropicvirustypeⅠassociatedmyelopathy/tropicalspasticparaparesis,HAM/TSP)患者血浆及中可溶性Fas(sFas)和Fas配体(sFasL)表达水平及其与HAM/TSP病发病机制的关系。方法应用ELISA方法检测HAM/TSP患者血浆及脑脊液(CSF)中sFas和sFasL水平。结果HAM/TSP患者血浆sFas表达水平[(1.08±0.26)ng/mL]与其他神经系统疾病(otherinflammatoryneurologicdiseases,OIND)[(0.29±0.05)ng/mL]及正常对照组[(0.18±0.07)ng/mL]相比显著增高(P<0.05),血浆sFasL表达水平[(0.26±0.11)ng/mL]与OIND组[(0.22±0.04)ng/mL]及正常对照组[(0.21±0.05)ng/mL]比较差异无显著性(P>0.05);CSFsFas与sFasL表达水平[(0.19±0.07)ng/mL与(0.24±0.08)ng/mL]均高于OIND组[(0.11±0.06)ng/mL与(0.01±0.01)ng/mL](P<0.05)。结论sFas、sFasL蛋白可能在HAM/TSP发病机制中起重要作用。

人类免疫缺陷病毒感染者致癌性病毒感染情况分析

【目的】调查人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者与自愿咨询检测(VCT)门诊中HIV检测阴性人群的致癌性病毒感染现状,分析流行病学特征,为建立更有针对性的疾病防治策略提供科学依据。【方法】选取2014—2017年确诊HIV感染者224例和同期VCT门诊HIV检测结果为阴性的求询者480例,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测2类人群血清中EB病毒(EBV)、人类疱疹病毒8型(HHV‐8)和人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型(HTLV-Ⅰ)的抗体,比较2组感染率与合并感染情况,系统分析病毒共同感染之间的关联性以及与高危性行为的关系。【结果】224例HIV感染者中,EBV抗体阳性79例,感染率为35.27%;HHV‐8抗体阳性151例,感染率为67.41%;HTLV‐Ⅰ阳性95例,感染率为42.41%。VCT门诊HIV阴性人群,总共检测480例,EBV抗体阳性7例,感染率1.46%;HHV‐8抗体阳性26例,感染率为5.42%;HTLV‐Ⅰ抗体阳性9例,感染率为1.88%。HIV感染者3种致癌性病毒的感染率均比VCT门诊HIV阴性人群高,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】HIV感染者3种高致癌性病毒感染率高,同时合并感染情况较严重,须提高对HIV感染者和感染高风险人群安全性行为的宣教,从而控制艾滋病和其他传染性疾病流行。

FQ-PCR同步检测HTLV-Ⅰ及HTLV-Ⅱ方法的建立及临床应用

目的:建立可同时检测HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ的双重荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,并对所建体系进行方法学评价。方法:根据HTLV-Ⅰpol基因和HTLV-Ⅱtax基因的保守序列设计引物及TaqMan-LNA探针,构建重组质粒作为荧光定量PCR的标准品。优化荧光定量PCR反应条件,建立起可同时检测HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ的双重荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法。结果:结果显示该方法对HTLV-Ⅰ及HTLV-Ⅱ的线性范围分别为108-102 copy/μl和107-10copy/μl;检测灵敏度分别为102copy/μl和10copy/μl。对阳性标本检测均呈阳性,对非目标菌检测均呈阴性。应用该方法对175例临床标本进行考核,有HTLV-Ⅰ阳性6例,HTLV-Ⅱ阳性3例,其中HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ双阳性2例。结论:本研究建立的双重FQ-PCR方法特异、快速、灵敏,对HTLV的血液筛查有重要意义。