RNA干扰Tax基因表达对人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病／热带痉挛性瘫痪患者细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰Tax基因表达对人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病／热带痉挛性瘫痪（HAM／TSP）患者细胞凋亡的影响。方法运用RNAi技术特异性干扰Tax基因的表达，流式细胞技术和westernblot法鉴定Tax蛋白的表达情况，并运用流式细胞技术对干扰后的T淋巴细胞（TLC）凋亡情况及凋亡相关因子Fas、Bcl-2、肿瘤坏死因子α（TNF-α）进行检测。结果重组质粒psiTax／U6转染T细胞（9．84±3．32）％后，Tax蛋白的表达较未处理组（47．45±14．52）％和pSilencerl．O／U6转染组（45．98±10．66）％明显降低（t=9．51，14．93，均P〈0．01）；westernblot法显示重组质粒psiTax／U6转染TLC后，Tax表达较pSilencerl．0／U6转染组明显降低；RNAi干扰组的凋亡率（21．55±1．37）％较未处理组（47．80±3．36）％显著降低（t=24．17，P〈0．01）；RNAi干扰组Fas，TNF—α显著降低（t=17．83，16．85，均P〈0．01），而Bcl-2显著升高（t=5．21，P〈0．01）。结论运用RNA技术干扰Tax基因抑制Tax基因表达，可以有效抑制TLC细胞的凋亡。凋亡相关因子Fas，TNF—αandBcl-2在此过程中发挥重要作用。

人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病/热带痉挛性截瘫患者血清和脑脊液中细胞凋亡及凋亡相关因子的表达

目的 研究人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病/热带痉挛性截瘫(HAM/TSP)患者外周血淋巴细胞凋亡情况、HAM/TSP患者血清及脑脊液中sFas和sFasL表达水平及外周血Fas、肿瘤坏死引子α(TNF- α)和Bcl -2蛋白在HAM/TSP发生发展中的作用。方法 应用单细胞电泳检测HAM/TSP患者外周血淋巴细胞的凋亡情况,应用ELISA检测8例HAM/TSP患者血清和脑脊液中sFas、sFasL的水平,并用流式细胞术对患者外周血淋巴细胞上Fas、TNF -α和Bcl -2蛋白进行定量检测,并与健康对照组及其他神经系统疾病组(OIND)进行对比分析。结果 ( 1 )HAM/TSP患者外周血淋巴细胞凋亡率为13 .63%±0 .48%,与健康对照组(1 .63% ±0 .57% )比较显著增高(P<0 .05)。(2)患者血清sFas表达水平为(1 .08±0 .26)ng/ml,与OIND组[ (0 .29±0 .05)ng/ml]及健康对照组[ (0 .18±0 .07)ng/ml]比较显著增高(P<0 .05 );血清sFasL表达水平[ ( 0 .26±0 .11 )ng/ml]高于OIND组[ (0 .22±0 .04 )ng/ml]及健康对照组[ ( 0. 21±0 .05 )ng/ml],但差异无统计学意义(P>0 .05);脑脊液sFas和sFasL表达水平分别为( 0. 19±0 .07 )ng/ml和( 0. 24±0 .08 )ng/ml,显著高于OIND组[ (0 .11±0 .06)ng/ml、(0 .01±0 .01)ng/ml,P<0 .05]。(3)外周血淋巴细胞中Fas、TNF -α表达?

HTLV-Ⅰ相关性HAM/TSP患者血浆及脑脊液sFas、sFasL的测定及意义

目的探讨人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病/热带痉挛性瘫痪(humanT-lymphotropicvirustypeⅠassociatedmyelopathy/tropicalspasticparaparesis,HAM/TSP)患者血浆及中可溶性Fas(sFas)和Fas配体(sFasL)表达水平及其与HAM/TSP病发病机制的关系。方法应用ELISA方法检测HAM/TSP患者血浆及脑脊液(CSF)中sFas和sFasL水平。结果HAM/TSP患者血浆sFas表达水平[(1.08±0.26)ng/mL]与其他神经系统疾病(otherinflammatoryneurologicdiseases,OIND)[(0.29±0.05)ng/mL]及正常对照组[(0.18±0.07)ng/mL]相比显著增高(P<0.05),血浆sFasL表达水平[(0.26±0.11)ng/mL]与OIND组[(0.22±0.04)ng/mL]及正常对照组[(0.21±0.05)ng/mL]比较差异无显著性(P>0.05);CSFsFas与sFasL表达水平[(0.19±0.07)ng/mL与(0.24±0.08)ng/mL]均高于OIND组[(0.11±0.06)ng/mL与(0.01±0.01)ng/mL](P<0.05)。结论sFas、sFasL蛋白可能在HAM/TSP发病机制中起重要作用。

HTLV-1感染者的眼部临床表现

人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ型(HTLV-1)感染比较少见,主要流行于日本、加勒比海地区、中非和南美洲。已知感染者主要眼部表现包括成人T细胞白血病(ATL)患者的眼部恶性浸润、视网膜变性、眼部神经病变,HTLV-1相关性脊髓病/热带痉挛性瘫痪(HAM/TSP)患者的干燥性角结膜炎及HTLV-1葡萄膜炎(HU)等。HTLV-1相关性眼部病变的范围正在扩大,病程中可能出现免疫调节失常引起的眼部病变或眼部肿瘤,遗传和环境因素可能在不同人群中HTLV-1患者的眼部表现起一定作用。本文就HTLV-1相关眼部表现及最新进展作一综述。

FQ-PCR同步检测HTLV-Ⅰ及HTLV-Ⅱ方法的建立及临床应用

目的:建立可同时检测HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ的双重荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,并对所建体系进行方法学评价。方法:根据HTLV-Ⅰpol基因和HTLV-Ⅱtax基因的保守序列设计引物及TaqMan-LNA探针,构建重组质粒作为荧光定量PCR的标准品。优化荧光定量PCR反应条件,建立起可同时检测HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ的双重荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法。结果:结果显示该方法对HTLV-Ⅰ及HTLV-Ⅱ的线性范围分别为108-102 copy/μl和107-10copy/μl;检测灵敏度分别为102copy/μl和10copy/μl。对阳性标本检测均呈阳性,对非目标菌检测均呈阴性。应用该方法对175例临床标本进行考核,有HTLV-Ⅰ阳性6例,HTLV-Ⅱ阳性3例,其中HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ双阳性2例。结论:本研究建立的双重FQ-PCR方法特异、快速、灵敏,对HTLV的血液筛查有重要意义。