人回盲肠癌荷瘤裸鼠模型的建立和氟尿嘧啶的治疗作用观察

目的:探讨化疗药物氟尿嘧啶在人回盲肠癌裸鼠肿瘤治疗中的作用。方法:将人回盲肠癌细胞HCT-8接种到BALB/C雌性裸小鼠腹部皮下,按预期方案用氟尿嘧啶进行化疗。采用免疫组化SP法对瘤组织进行检测。结果:成功建立荷瘤小鼠模型。治疗后肿瘤体积无明显变化,而对照组肿瘤增长明显,且瘤组织中突变型P53蛋白的阳性率有明显下降。结论:化疗药物氟尿嘧啶对人回盲肠癌裸鼠肿瘤的治疗有一定效果,可为人肠道肿瘤的治疗提供依据。

氟尿嘧啶与高能聚焦超声刀的结合在人回盲肠癌裸鼠肿瘤治疗中的作用

目的探讨化疗和物理治疗的结合在人回盲肠癌裸鼠肿瘤治疗中的作用。方法人回盲肠癌细胞HCT-8接种到BALB/C雌性裸小鼠腹部皮下,按预期方案进行氟尿嘧啶+高能聚焦超声刀治疗。采用免疫组织化学SP法对瘤组织进行检测。结果成功建立荷瘤小鼠模型。治疗后肿瘤体积无显著变化,局部组织出现焦化,而对照组肿瘤增长明显,无任何外观变化;且治疗后瘤组织中突变型p53蛋白的阳性率有明显下降。结论化疗药物氟尿嘧啶与物理治疗高能聚焦超声刀的有效结合对人回盲肠癌裸鼠肿瘤的治疗有一定效果。

基于CRISPR/Cas9技术的HCT-8细胞基因编辑系统构建

【目的】构建人回盲肠癌(human ileocecal adenocarcinoma,HCT-8)细胞系的CRISPR/Cas9基因编辑系统,实现对目的基因的高效编辑。【方法】采用慢病毒感染的方式,将慢病毒载体质粒LentiCas9-Blast与包装质粒pSPAX2和pMD2.G共转染至人胚胎肾(human embryonic kidney 293T,HEK293T)细胞系获得高滴度的重组慢病毒液,并感染HCT-8细胞系,以未感染组为阴性对照,用杀稻瘟菌素进行抗性筛选,直至阴性对照组全部死亡;采用有限稀释法对阳性细胞进行单克隆筛选,对筛选得到的单克隆细胞系进行扩大培养,并采用PCR及Western Blot试验验证Cas9基因及其蛋白表达情况,而后对阳性单克隆细胞系进行基因编辑效率及细胞系活性验证。【结果】得到能成功表达Cas9蛋白的6株HCT-8-Cas9单克隆细胞系。其中HCT-8-Cas9_2和HCT-8-Cas9_4细胞系蛋白量表达较高;对所筛选单克隆细胞系进行基因编辑效率检测,pXPR_011慢病毒表达报告基因载体系统检测结果表明,HCT-8-Cas9_4单克隆细胞系Cas9基因编辑效率为48.82%,显著高于其他HCT-8-Cas9单克隆细胞系;单克隆细胞系活性检测结果表明,HCT-8-Cas9_2和HCT-8-Cas9_4单克隆细胞系细胞活性与HCT-8细胞系相比均无显著差异。【结论】HCT-8-Cas9_4细胞系能够稳定表达Cas9蛋白,具有良好的编辑效率,可用于后续靶标基因的高效编辑。