人基质细胞衍生因子-1对骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:探索人基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对间充质干细胞(MSC)增殖的影响.方法:采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞仪分析其表面标记(CD133,CD34,CD90,CD105)等鉴定MSC特征;以P3-MSC为实验材料,采用H3-TdR参入法分析SDF-1对MSC增殖的影响.以50 nmol/L渥曼青霉素,10mmol/L LY294002,50 mmol/L PD98059,0.1g/L AMD3100等分别处理P3-MSC,观察SDF-1影响MSC增殖的信号机制.结果:培养的MSC呈现出CXCR4,CD90和CD105强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;含有100 mg/L SDF-1的20mL/L促进了MSC增殖,而含有100 mg/L SDF-1的150 mL/LFBS抑制了MSC增殖.SDF-1抑制MSC增殖的效应与其使MSC停滞在G1/S期有关.促分裂原活化蛋白激酶P38MAPK阻断剂SB203580和CXCR4阻断剂AMD3100取消了SDF-1抑制MSC增殖的效应,而细胞外信号调节激酶阻断剂PD98059加强了SDF-1抑制MSC增殖的效应.结论:SDF-1/CXCR4介导的抑制MSC增殖的效应与促分裂原活化蛋白激酶和细胞外信号调节激酶等信号分子有关.

腺病毒介导的人基质细胞衍生因子-1对心肌梗死大鼠心室重构的影响

目的探索腺病毒介导的人基质细胞衍生因子-1对心肌梗死心室重构的影响。方法利用细菌内同源重组快速构建重组腺病毒质粒和制备hSDF-1α重组腺病毒(AdV-EGFP-hSDF-1α,Ad-SDF-1)。采用成年SD大鼠,经左冠状动脉前降支结扎建立急性心肌梗死模型。术后1h,将1×1010PFU AdV-SDF-1分6个点注射到心肌梗死部位及其周边区域。移植后4周测定心脏功能,随后取材、连续冰冻切片,观察心肌组织形态学、心肌梗死部位胶原含量的变化以及心室壁厚度的变化。结果AdV-SDF-1组心室壁明显增厚,胶原含量明显减少,心室膨胀程度明显降低,心脏功能改善。结论SDF-1过表达通过抑制心肌梗死部位胶原的合成与沉积,延缓心室重构,达到改善心脏功能的目的。

腺病毒介导的人基质细胞衍生因子-1基因转移促进间充质干细胞的迁移

目的初步探索在活体状态下基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在骨髓源间充质干细胞(MSC)迁移中的作用及其信号转导机制。方法以MSC为实验材料,将纯化的hSDF-1α重组腺病毒100!l加入单个散在分布的MSC培养基中,分别于转染后1,2,3d观察MSC迁移的变化。随后于hSDF-1α重组腺病毒转染MSC后12h,以50"nmol/L渥曼青霉素,10#mol/LLY294002,50$mol/LPD98059,10%mol/LU73122,0.1g/LAMD3100以及50nmol/L维拉帕米等分别处理MSC,观察转染SDF-1的MSC迁移的信号机制。结果转染SDF-1重组腺病毒的MSC呈聚集的集落样生长,渥曼青霉素、LY294002、PD98059、U70312、AMD3100、维拉帕米等处理后,MSC聚集的集落样生长趋势明显降低,尤以U73122、AMD3100对其阻断效应最为显著。结论SDF-1促进了MSC的迁移,其作用与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)和蛋白激酶C(PKC)等信号分子有关。

人基质细胞衍生因子1α和hVEGF_(165)基因转染成肌细胞的实验研究

目的探索转染hVEGF165基因、人基质细胞衍生因子1α(human stromal cell-derived factor 1α,hSDF-1α)基因的大鼠成肌细胞在体外mRNA和蛋白表达,为进一步检测这两种基因对血管生成的协同效应奠定基础。方法取新生1日龄雄性SD大鼠,采用胰蛋白酶消化法体外分离培养、纯化成肌细胞,并采用结蛋白免疫细胞化学染色鉴定。将质粒增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)-hVEGF165和EGFP-hSDF-1α转染第3代成肌细胞(转染组),以未转染质粒的细胞作为对照组。体外培养后各时间点行RT-PCR、Western blot、ELISA法检测两种质粒mRNA及蛋白的表达。结果培养的细胞经鉴定确定为成肌细胞。荧光显微镜观察示成功转染hSDF-1α和hVEGF165进入成肌细胞,可见绿色荧光表达。RT-PCR检测示转染组转染后2、4、6、8 d均可见hVEGF165和hSDF-1αmRNA的表达,Western blot检测示转染组转染后2、4、6、8 d成肌细胞内均有hVEGF165和hSDF-1α蛋白表达,对照组均无相关表达。ELISA检测示对照组hSDF-1α和hVEGF165均稳定表达,呈较低水平。转染组转染2 d时hSDF-1α和hVEGF165表达均达较高水平,之后呈逐渐下降趋势;转染后各时间点间hSDF-1α和hVEGF165表达比较差异均有统计学意义(P<0.05)。转染组转染后各时间点与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论转染hSDF-1α和hVEGF165进入大鼠成肌细胞后在体外均有表达,为下一步研究体内是否表达提供了实验依据。

删除C末端结构域的基质细胞衍生因子-1重组内质网定位片段的真核表达载体构建及其活性作用

目的:构建人基质细胞衍生因子(SDF-1)C末端α螺旋结构域缺失及嵌合内质网定位片段的SDF-1α/54/KDEL重组真核表达载体,并考察其对Molt-4细胞的影响。方法:用PCR法扩增SDF-1α/54并将其亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1构建成真核重组表达载体pcDNA3.1/SDF-1α/54/KDEL。脂质体法转染Cos-7细胞后用Western blot检测SDF-1α/54/KDEL的表达。电穿孔法瞬时转染Molt-4细胞,并用流式细胞仪检测CXCR4含量以及其对细胞趋化性的影响。结果:经DNA测序验证目的片段插入方向和碱基组成顺序均准确无误,Western blot证实融合蛋白能在Cos-7细胞表达。SDF-1α/54/KDEL可以显著降低胞膜表面CXCR4表达量并抑制细胞的趋化作用。结论:SDF-1α/54/KDEL可从胞内抑制Molt-4细胞CXCR4的表达,C末端α螺旋结构域的缺失并不影响其抑制作用,推测其是决定细胞趋化作用的主要结构域。

腺病毒介导的基质细胞衍生因子-1对心肌梗死大鼠心脏功能的影响

目的:探索腺病毒介导的基质细胞衍生因子-1对心肌梗死心脏功能的影响.方法:采用成年SD大鼠,经左冠状动脉前降支结扎建立急性心肌梗死模型.术后1h,将1×1010PFUAdv-SDF-1分6个点注射到心肌梗死部位及其周边区域.移植后4wk测定心脏功能,随后取材、连续冰冻切片,观察CD133和CD31的表达以及心肌组织形态学.结果:注射在心肌梗死部位的Adv-SDF-1高表达,促进了CD133和CD31阳性细胞迁移到心肌梗死部位,增加了心肌梗死部位毛细血管的密度(Ad-SDF-1组与模型组和Ad-LacZ组相比:32±4vs15±2,16±3,P<0.05),保护并促进了心肌再生,从而缩小梗死区域面积,心室壁的厚度和弹性增加;心室胶原含量减少[Ad-SDF-1组与模型组和Ad-LacZ组相比:(41±3)%vs(78±8)%,(76±7)%,P<0.05],延缓心室重构而改善心脏的收缩和舒张功能.结论:SDF-1过表达通过促进血管新生改善心肌的血供,达到改善心脏功能的目的.

细胞内趋化因子重组突变体SDF-1α/54/KDEL的构建及其对CXCR4受体在细胞膜表面表达的抑制作用

构建人基质细胞衍生因子(SDF-1)突变体SDF-1α/54/KDEL重组真核表达质粒,并考察其对T细胞性白血病细胞株Molt-4细胞表面受体CXCR4表达的影响,为尝试表型敲除肿瘤细胞CXCR4以抑制肿瘤的转移提供理论和实验依据。以SDF-WT-Gly×4-Dec/PET30a(+)质粒为模板,用PCR法扩增出SDF-1α/54并将其亚克隆至真核表达质粒pEGFP-C3构建成真核表达载体pEGFP-C3/SDF-1α/54/KDEL。经酶切及测序验证后,脂质体介导转染入COS-7细胞,通过Western blot检测SDF-1α/54/KDEL的表达。电穿孔法将重组载体瞬时转染CXCR4高表达的Molt-4,并用流式细胞仪检测CXCR4含量的变化。DNA测序证明:读码框完全正确,重组真核表达载体含有SDF-1α/54基因和编码4肽KDEL的基因,Western blot证明融合蛋白能在COS-7细胞表达。电穿孔转染Molt-4细胞后发现,SDF-1α/54/KDEL可以显著降低胞膜表面CXCR4表达量。由此提示:KDEL介导的SDF-1α/54对Molt-4细胞CXCR4具有表型敲除作用,且此效应不受SDF-1αC端α螺旋缺失的影响。

玻璃体腔注射雷珠单抗对增殖性糖尿病性视网膜病变患者视力及血清GAS6、SDF-1及VEGF的影响

目的 探讨增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)给予玻璃体腔注射雷珠单抗药物对患者视力以及血清人生长停滞特异性蛋白(GAS6)、人基质细胞衍生因子1(SDF-1)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)影响。方法 纳入2022年1月至12月收治的PDR患者82例,按照随机数字表法分为观察组和对照组,每组41例。对照组采用玻璃体切割术(PPV)治疗,观察组采用联合玻璃体切割术(PPV)术前经玻璃体腔注射雷珠单抗治疗。对比2组的治疗效果,2组患者术前与术后1周的视力以及眼压水平,2组患者术前与术后1周血清GAS6、SDF-1、VEGF水平变化,2组术后并发症发生情况。结果 观察组治疗总有效率为95.12%高于对照组的78.05%(P<0.05)。2组患者术后1周的眼压、血清GAS6、SDF-1、VEGF水平均较术前降低,且观察组术后1周的上述指标水平低于对照组(P<0.05)。2组术后1周视力较术前升高,且观察组视力水平高于对照组(P<0.05)。观察组患者术后并发症总发生率为4.88%低于对照组的24.39%(P<0.05)。结论 应用玻璃体腔注射雷珠单抗辅助PPV治疗PDR,效果满意,可显著提高患者视力,降低眼压,降低血清GAS6、SDF-1、VEGF水平,且术后并发症发生率低,值得推广。

细菌内同源重组法构建pAd-EGFP-hSDF-1α腺病毒质粒

目的:利用细菌内同源重组法构建和制备含人基质细胞源衍生因子-1α(hSDF-1α)重组腺病毒质粒。方法:设计5'端分别具有EcoR V/Xho I酶切位点的扩增hSDF-1αcDNA片段上下游引物,聚合酶链反应法(PCR)从pORF-hSDF-1α质粒中扩增hSDF-1α的cDNA,插入pGEM-T Easy载体中,构建pGEM-T-hSDF-1α质粒,EcoR V/Xho I双酶切后回收279 bp片段,与经过相同酶切的8.8 kb pShuttle-IRES-hrGFP-2进行连接,连接产物转化感受态DH5α,挑选克隆,重组质粒pShuttle-EGFP-hSDF-1α用EcoR V/Xho I酶切鉴定。pShuttle-EGFP-hSDF-1α经Pm e I酶切线性化后,转化含pAdeasy-1的超感受态B J5183,采用细菌内同源重组法构建腺病毒质粒pAd-EGFP-hSDF-1α;pAd-EGFP-hSDF-1α质粒经PacⅠ酶切鉴定和PCR鉴定。结果:线性化的pShuttle-EGFP-hSDF-1α转化含pAdeasy-1的超感受态B J5183,重组质粒经酶切获得一大于23 kb的大片段和4.5 kb的片段,PCR反应扩增出了279 bp的片段。结论:用细菌内同源重组成功地构建了含hSDF-1αcDNA的重组腺病毒质粒,为进行表达hSDF-1α的重组腺病毒的制备及hSDF-1α在骨髓源干细胞动员迁移中的作用研究奠定了基础。

雷珠单抗联合玻璃体切割术对PDR患者血清VEGF-A和SDF-1表达的影响

目的:探讨雷珠单抗联合玻璃体切割术(VT)对PDR患者血清VEGF-A、人基质细胞衍生因子1(SDF-1)表达的影响。方法:选取2017-01/2018-01本院收治的PDR患者120例,依据随机数字表法分为A组和B组,每组60例,A组给予VT治疗,B组在此基础上给予玻璃体腔注射雷珠单抗治疗,比较两组VT手术情况、并发症及VEGF-A、SDF-1、BCVA、CMT。结果:两组术后血清VEGF-A、SDF-1水平明显低于术前,且B组明显低于A组(P<0.05);B组VT手术时间、电凝止血、术中出血及并发症发生率明显低于A组(P<0.05);两组术后1d, 3mo BCVA、CMT明显低于术前,且B组明显低于A组(P<0.05)。结论:雷珠单抗联合VT可有效降低PDR患者血清VEGF-A、SDF-1水平,减少VT创伤及并发症,且可有效改善患者BCVA、CMT。

23G微创玻璃体切割术联合雷珠单抗治疗增殖期糖尿病视网膜病变

目的探讨23G微创玻璃体切割术联合雷珠单抗治疗增殖期糖尿病视网膜病变(PDR)的临床疗效及其对患者血清人基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、色素上皮衍生因子(PEDF)及血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。方法选取2019年5月至2021年1月在我院手术治疗的100例PDR患者为研究对象,按随机数字表法分为两组,各50例。观察组行23G微创玻璃体切割术联合雷珠单抗治疗,对照组仅行23G微创玻璃体切割术。记录并比较两组手术时间、术中出血量、手术前后视力及眼压变化、并发症发生情况,比较两组患者临床疗效及治疗前后患者血清SDF-1、PEDF及VEGF水平。结果两组患者均顺利完成手术治疗。与对照组比较,观察组患者术中出血量更少,术后6个月总有效率更高,差异均有统计学意义(P<0.05);而两组手术时间比较无统计学差异(P>0.05)。术后3个月两组患者较术前视力均提高,眼压下降,血清SDF-1、VEGF水平明显降低,PEDF水平显著升高(P<0.05),且组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组并发症3例,其中医源性视网膜裂孔、玻璃体再积血及黄斑水肿各1例;对照组并发症共5例,包括术中大出血1例,医源性视网膜裂孔2例,玻璃体再积血1例;观察组并发症发生率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论23G微创玻璃体切割术联合雷珠单抗治疗PDR效果显著,可提高视力,降低眼压,改善血清SDF-1、PEDF及VEGF水平,安全性高,值得临床推荐。

细菌内同源重组快速构建和制备表达hSDF-1α的重组腺病毒

目的:利用细菌内同源重组快速构建携带hSDF-1αcDNA重组腺病毒质粒和制备表达hSDF-1α重组腺病毒.方法:制备感受态BJ5183,将pAdEasy-1转化BJ5183,制备含pAdEasy-1的BJ5183感受态,将线性化的pShuttle-EGFP-hS-DF-1α转化含pAdEasy-1的BJ5183感受态菌.采用细菌中同源重组法构建重组腺病毒质粒pAd-EGFP-hSDF-1α.pAd-EG-FP-hSDF-1α用PacI线性化后,再用LipoVec介导其转染至AD293细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒,采用CsCl密度梯度离心法纯化重组腺病毒Ad-EGFP-hSDF-1α.采用荧光显微镜下观察LipoVec介导的重组腺病毒质粒的转染效果及病毒包装情况.结果:pShuttle-EGFP-hSDF-1α成功地转化了含pAdEasy-1的BJ5183,并在其内发生了同源重组.荧光显微镜下观察证实了pAd-EGFP-hSDF-1α转染AD293后,产生了重组腺病毒Ad-EGFP-hSDF-1α.病毒滴度为4.1×1015pfu/L.结论:用细菌内同源重组法可快速、高效制备表达hSDF-1α的高滴度重组腺病毒.为研究hSDF-1α在动员骨髓源干细胞迁移到组织损伤部位修复组织损伤的研究奠定了基础.

康柏西普联合玻璃体切割术对糖尿病性黄斑水肿患者房水VEGF、SDF-1的影响

目的:探讨康柏西普联合玻璃体切割术(VT)对糖尿病性黄斑水肿(DME)患者房水血管内皮生长因子(VEGF)、人基质细胞衍生因子1(SDF-1)的影响。方法:选取2015年3月至2018年3月南方医科大学附属小榄医院眼科收治的DME患者100例(100眼),依据随机数字表法分为VT组和西普组,每组50例,VT组给予VT治疗,西普组在此基础上给予康柏西普玻璃体腔注射治疗,比较两组房水VEGF、SDF-1及并发症、黄斑中心视网膜厚度(CMT)、最佳纠正视力(BCVA)。结果:VT组并发症发生率明显低于西普组,差异有统计学意义(P<0.05);VT组和西普组术后房水VEGF、SDF-1明显低于术前,且VT组明显低于西普组,差异有统计学意义(P<0.05);VT组和西普组术后1 d、1个月、3个月CMT、BCVA明显低于术前,且VT组明显低于西普组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:康柏西普联合VT可有效改善DME患者房水VEGF、SDF-1,有利于减少并发症,且可有效改善患者BCVA、CMT,值得临床作进一步推广。

通脉睛明汤联合康柏西普玻璃体腔注射治疗视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿的疗效及对房水VEGF、bFGF、SDF-1的影响

目的:观察通脉睛明汤联合康柏西普玻璃体腔注射治疗视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿的疗效,及对患者房水血管内皮生长因子(VEGF)、碱性纤维母细胞生长因子(bFGF)、人基质细胞衍生因子-1(SDF-1)水平的影响。方法:125例视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿患者随机分为研究组75例和对照组50例。对照组给予康柏西普眼用注射液0.05 ml玻璃体腔内注射,每月1次,连续用药3个月;研究组在对照组基础上加用通脉睛明汤治疗,每日1剂,bid,共治疗3周。比较两组患者治疗前后房水VEGF、bFGF、SDF-1水平和血清IL-6、IL-8水平,以及眼部最佳矫正视力(BCVA)、黄斑中心凹厚度(CMT)变化情况,观察两组疗效与并发症发生情况。结果:研究组总有效率为98.67%,高于对照组的88.00%(P<0.05)。治疗后,两组患者的房水VEGF、SDF-1水平和血清IL-6、IL-8水平及眼部BCVA、CMT水平均较治疗前显著下降(P<0.05),且研究组上述指标均明显低于对照组(P<0.05)。研究组并发症发生率为4.00%,显著低于对照组的16.00%(P<0.05)。结论:通脉睛明汤联合康柏西普玻璃体腔注射治疗视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿疗效较好,可降低患者房水VEGF、SDF-1水平和血清IL-6、IL-8水平,且安全性较高,值得临床推广。

玻璃体腔注射雷珠单抗对增殖性糖尿病性视网膜病变患者视力及血清GAS6、SDF-1与VEGF的影响

目的:考察玻璃体腔注射雷珠单抗对增殖性糖尿病性视网膜病变(PDR)患者视力及血清中人生长停滞特异性蛋白6(GAS6)、人基质细胞衍生因子1(SDF-1)与血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响。方法:回顾性分析2012年3月-2014年3月在我院诊断为PDR的56例患者资料,分为单侧眼组29例和双侧眼组27例。所有患者均行单次玻璃体腔注射雷珠单抗注射液,在治疗前及治疗后1、4、8周对患者血清中GAS6、SDF-1与VEGF水平进行检测,在治疗前及治疗后1周对患者视力进行检查。结果:治疗后1、4、8周,单侧眼组与双侧眼组患者的GAS6、SDF-1、VEGF水平与治疗前比较均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后1周,单侧眼组与双侧眼组患者的最佳矫正视力(BCVA)看到的字母数与治疗前比较明显增多,差异有统计学意义(P<0.05),但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PDR患者玻璃体腔注射雷珠单抗后能有效提高视力水平。

康柏西普联合小梁切除术对新生血管性青光眼患者房水VEGF、SDF-1的影响

探讨康柏西普联合小梁切除术治疗对新生血管性青光眼患者房水VEGF、SDF-1的影响。选取2015年4月~2018年12月该院眼科收治的新生血管性青光眼患者170例,根据不同治疗方法分为试验组(n=88)和对照组(n=82),对照组患者采取小梁切除术,试验组患者则在对照组的基础上于术前加用玻璃体腔注射康柏西曼。比较两组患者治疗后视力、眼压和房水VEGF、SDF-1水平的变化及并发症发生情况。术后6个月,试验组患者视力恢复情况优于对照组患者(P <0. 05);术后1 w及1、3、6个月两组患者眼压均较治疗前明显下降,且试验组眼压明显低于对照组患者(P <0. 05);术后6个月两组患者房水VEGF、SDF-1水平均明显下降,且试验组房水VEGF、SDF-1水平明显低于对照组(P <0. 05);试验组术后并发症发生率为10. 23%(9/88),对照组为24. 39%(20/82),组间比较差异具有统计学意义(P <0. 05)。康柏西普联合小梁切除术治疗新生血管性青光眼可有效改善视力,降低眼压,同时可降低患者房水VEGF、SDF-1水平,并发症少,安全性高。