狼疮性肾炎患者外周血单个核细胞自噬相关蛋白表达上调且与肾损害相关

目的 研究活动性系统性红斑狼疮(SLE)患者狼疮肾炎活动性与自噬及炎症的关系。方法 采用Western blot法检测狼疮肾炎组与非狼疮肾炎组SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62的表达,ELISA检测SLE患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的水平。采用Pearson法分析LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与SLE疾病活动度评分(SLEDAI)、尿蛋白、 TNF-α及IFN-γ水平的相关性。结果 SLE患者PBMC的LC3表达增加、 P62表达减少。与不伴肾脏损害的SLE患者相比,伴肾脏损害的SLE患者组自噬水平增加更明显。SLE患者血清TNF-α和IFN-γ水平增加。LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与SLEDAI(r=0.4560)、 24 h尿蛋白(r=0.3753)、 IFN-γ(r=0.5685)水平正相关,与TNF-α水平(r=0.04 683)无相关性。结论 SLE患者PBMC存在自噬,自噬水平与狼疮肾炎患者肾损害及炎症有一定相关性。

宫腔灌注自体外周血单个核细胞改善反复种植失败患者的妊娠结局

目的:观察胚胎移植前不同时间行宫腔灌注自体外周血单个核细胞(PBMCs)用于反复种植失败(RIF)患者冻融胚胎解冻移植的临床效果。方法:收集2021年1月至2022年10月在中国人民解放军联勤保障部队第980医院生殖医学科行冻融胚胎解冻移植的RIF患者195例。宫腔灌注自体外周血单个核细胞的患者为观察组(105例),分为3个亚组,胚胎移植前72h宫腔灌注PBMCs为Ⅰ组(35例),胚胎移植前48h行宫腔灌注PBMCs为Ⅱ组(37例),胚胎移植前24h宫腔灌注PBMCs为Ⅲ组(33例);胚胎移植前未行宫腔灌注的RIF患者为对照组(90例)。比较观察组和对照组及观察组各亚组间患者的一般情况、胚胎移植情况、胚胎种植率、临床妊娠率、早期流产率、异位妊娠率及活产率。结果:观察组与对照组患者的一般情况及胚胎移植情况比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。观察组的临床妊娠率(28.9%)、胚胎种植率(21.1%)及活产率(23.3%)高于对照组(44.8%,31.9%,38.1%),差异有统计学意义(P<0.05)。观察组与对照组的早期流产率(15.4%vs 10.6%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组各亚组之间一般情况、胚胎移植情况、临床妊娠率、胚胎种植率、活产率及早期流产率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:宫腔灌注自体外周血单个核细胞能改善RIF患者的妊娠结局,胚胎移植前24~72h行宫腔灌注临床结局无差别。

不同重悬细胞法在洗涤过程中对水牛外周血单个核细胞活率的影响

为了探讨在离心洗涤水牛外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)过程中以移液器吹打法和晃动离心管法重悬细胞对其活率的影响。对经密度梯度离心后初步收集到的PBMC,分别用移液器吹打和晃动离心管2种方法重悬细胞,离心洗涤后对细胞活率进行计数。结果发现,移液器吹打法得到的细胞活率为(74.9±2.6)%,而晃动离心管法使细胞活率达到(98.5±0.5)%,差异极显著(P<0.01)。说明在洗涤PBMC时,晃动离心管法重悬细胞能大大提高细胞活率,可为那些对细胞活率要求高的试验提供一个较为有效的方法。

长期维持性血液透析患者外周血单个核细胞中MMP-9mRNA表达及其意义

为探讨慢性肾功能衰竭长期维持性血液透析患者外周血单个核细胞 (PBMC)基质金属蛋白酶 - 9(MMP- 9)的 m RNA表达情况及其临床意义。采用半定量 RT- PCR法检测了 18例正常人 (对照组 )、2 0例慢性肾功能衰竭非透析患者 (非透析组 )、2 1例慢性肾功能衰竭长期维持性血液透析患者 (透析组 ) PBMC中 MMP- 9的m RNA表达。结果透析组 MMP- 9m RNA表达比对照组和非透析组显著增加。认为长期维持性血液透析患者PBMC中 MMP- 9的 m RNA表达水平显著增加 ,提示 MMP- 9增高与透析患者动脉硬化的形成和高血压血管重塑有关。

孕酮在人正常早期妊娠及自然流产中对外周血单个核细胞(PBMC)产生INF-γ、IL-4的作用

目的 探讨孕酮 (P)在人正常早期妊娠及自然流产中 ,对外周血单个核细胞 (PBMC)产生IFN -γ、IL - 4的作用及意义。方法 2 1例早期不明原因自然流产患者和 2 6例正常早孕者的外周血单个核细胞(PBMC) ,经植物血凝素 (PHA)在有或无孕酮诱导培养后 ,用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定培养上清液中的γ干扰素 (IFN -γ)和白介素 4 (IL - 4 )的水平。结果 1 PBMC经PHA诱导 (无孕酮刺激 )培养后 ,流产组IL - 4含量显著低于正常早孕组 (P <0 0 1 ) ;IFN -γ含量两组间差异无显著性。 2 流产组PBMC经PHA和P刺激培养后的IFN -γ含量显著低于无孕激素刺激组 (P <0 0 1 ) ,而IL - 4含量两组间差异无显著性 ;正常早孕组PBMC经PHA和P刺激培养后及的IFN -γ含量显著低于无孕激素刺激组 (P <0 0 1 ) ,而IL - 4含量两组间差异无显著性。结论 正常早期妊娠免疫以Th2反应为主 ;孕酮对人妊娠早期PBMC产生Th1型细胞因子IFN

链球菌抗原刺激的银屑病外周血单个核细胞培养上清液对角质形成细胞的作用

目的了解链球菌抗原刺激的银屑病外周血单个核细胞(PBMCs)培养上清液对角质形成细胞的作用以探讨链球菌感染后的银屑病的发病机制。方法3H-TdR掺入法检测PBMCs培养上清液对角质形成细胞DNA合成的影响;免疫组织化学方法检测细胞间黏附因子1(ICAM-1)和人类白细胞抗原DR分子(HLA-DR)表达。结果银屑病患者链球菌抗原刺激的PBMCs培养上清液对角质形成细胞的促增殖作用较对照组显著增强,并能诱导角质形成细胞表达HLA-DR和ICAM-1分子。结论受链球菌抗原刺激的银屑病PBMCs培养上清液可促进角质形成细胞增殖和活化,可能是链球菌感染之后银屑病发病的重要原因。

胃癌细胞FoxP3的表达及其与外周血单个核细胞(PBMCs)的相互作用

目的检测叉头样蛋白3(forkhead box protein 3,FoxP3)在胃癌细胞中的表达分布,并探讨其在外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)和胃癌细胞共培养过程中的作用。方法应用免疫荧光技术检测FoxP3蛋白的表达定位;建立胃癌细胞和PBMCs的体外共培养体系,然后用CCK-8法检测共培养后胃癌细胞的生长抑制情况;通过Real-time PCR技术检测共培养后胃癌细胞和PBMCs中FoxP3mRNA表达情况;并采用流式细胞技术和Western blot技术检测共培养后两种细胞中FoxP3蛋白表达情况。结果 FoxP3表达于胃癌细胞的胞质和胞核。胃癌细胞与PBMCs共培养时能明显抑制胃癌细胞的增殖。直接和间接共培养后MKN28胃癌细胞的FoxP3蛋白的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)均增加(P=0.031;P=0.015);与单培养相比,来源于胃癌患者和健康对照组的淋巴细胞与胃癌细胞共培养后其FoxP3 MFI均明显增加(P=0.016;P=0.034),且IL-2能促进间接培养条件下PBMCs的FoxP3表达(P=0.024),而对直接共培养影响不大。共培养后胃癌细胞的FoxP3mRNA和蛋白表达均增加,直接共培养较间接共培养增加更明显(P=0.035)。结论胃癌细胞与PBMCs的相互作用主要依赖细胞间的直接接触方式,FoxP3的表达变化在这一过程中发挥了重要作用,这可能跟肿瘤免疫逃逸有关。

不同ACD与全血的体积比对供者外周血单个核细胞采集前后血液、离子及安全性的影响

目的:观察COM.TEC型血细胞分离机AutoMNC程序采集外周血单个核细胞时ACD与全血不同体积比对供者采血前后血液、离子及安全性的影响.方法:应用COM.TEC型血细胞分离机采集经粒细胞刺激因子动员的供者外周血单个核细胞45例,根据ACD与全血的体积比按1∶10、1∶12、1∶14分成3组,循环血量9000~12000 mL,血流速40~60 mL/min,观察3种不同ACD与全血体积比对采集前后血红蛋白及血小板、电解质Ca^2+、K^+、Na^+、Cl^-差异及采集过程中的变化.结果:采集前后血红蛋白质量浓度与Na^+、Cl^-浓度下降不显著,不同组间均无统计学差异(P>0.05);血小板与Ca 2+、K+下降有统计学差异(P<0.05),不同组间Ca^2+浓度下降、1∶10组低钙反应发生较其他两组明显,均有统计学差异(P<0.05);而血小板与K+浓度下降不同组间均无统计学差异(P>0.05).1∶14组出现2例供者采集管流出口小血栓形成.结论:采集前后血小板、Ca^2+、K^+浓度下降有显著差异,不同组间Ca^2+浓度下降有差异,而血红蛋白质量浓度、Na^+、Cl^-浓度采集前后无明显变化,组间无显著差异;ACD与全血体积比为1∶12时低钙反应发生较低且较安全.

Ficoll密度梯度离心法分离猪外周血单个核细胞条件的探讨

目的探讨猪外周血单个核细胞(PBMC)最佳分离条件,为寄生虫免疫学研究提供有效的方法。方法使用猪淋巴细胞分离液,在不同离心转速和时间条件下分离猪PBMC,观察所得云雾状PBMC层的厚度,计算细胞得率及细胞活力,以确定猪淋巴细胞分离液分离猪PBMC的最佳实验条件。同时采用文献报道的人淋巴细胞分离液分离猪PBMC的分离条件(1500r/min,30min)分离猪PBMC,比较两者分离PBMC效果。结果使用猪淋巴细胞分离液(密度1.110ng/L),在20～25℃室温下以1500r/min(半径15cm)离心30min,接着低温(4℃)1500r/min离心10min,洗涤2次,这样获得的猪PBMC效果最好。同样条件下,用人的淋巴细胞分离液分离猪PBMC,不仅所得细胞沉淀中混杂细胞如红细胞及其他细胞碎片较多,而且PBMC细胞得率及活力也不好。结论本实验提出了获得大量有活力的猪PBMC的方法和条件。

HBV感染的外周血单个核细胞在母婴传播中的载体作用

目的:探讨HBV感染的外周血单个核细胞(PBMC)在母婴传播中的载体作用. 方法:选择血清HBV DNA(-)、PBMC HBV DNA(+)孕妇分娩新生儿25例作为实验组,乙肝标志物均为阴性孕妇分娩新生儿10例作为对照.采用巢式PCR检测2组新生儿血清及PBMC HBV DNA;ELISA检测血清HBsAg;SP法检测PBMC中HBsAg. 结果:实验组血清HBsAg均阴性,HBV DNA(+)4例; PBMC HBsAg(+)6例,HBV DNA(+)6例,其中有2例血清和PBMCHBV DNA均为阳性,4例仅PBMCHBV DNA (+),2例仅血清HBV DNA(+).对照组血清及PBMC HBV DNA和HBsAg均阴性.

IFN-α2b对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞内HBV-DNA阴转和对CD25的诱导作用

目的探讨IFNα2b对慢性乙型肝炎患者HBVDNA的治疗效果及对CD25的诱导作用。方法将患者分为A(66例)、B(44例)两组,分别采用IFNα2b和常规治疗,PCR法动态检测患者外周血单个核细胞(PBMC)内和血清中HBVDNA,生物素链霉亲和素(BSA)法检测CD25表达水平,实时(realtime)PCR法检测CD25mRNA含量,动态检测抗IFNIgG水平。结果IFNα2b治疗24、48周后,患者PBMC内、血清中HBVDNA和HBeAg阴转率分别为36.36%、39.39%、40.91%和42.42%、51.52%、53.03%,与常规组相比差异有显著性(P<0.05～P<0.01);干扰素治疗后,ALT、AST、ALT/AST水平分别为(33.4±12.6)U/ml、(34.3±10.7)U/ml、(0.9±0.2)U/ml,与常规组相比差异有显著性(P<0.01);慢性乙型肝炎患者静息态和诱导态CD25水平均降低,干扰素治疗后,静息态和诱导态CD25水平显著升高,其CD25mRNA含量亦同步升高,与常规组相比差异有显著性(P<0.01);IFNα2b治疗48周抗IFNIgG阳性率仅6.06%,与常规组相比差异无显著性(P>0.05)。结论IFNα2b对PBMC、血清HBVDNA和HBeAg均有较好阴转效果,阴转率明显高于常规疗法;IFNα2b可诱导慢性乙型肝炎患者表达CD25,促进T细胞活化发挥抗病毒作用;IFNα2b自身免疫原性较弱,治疗过程中诱导机体产生低水平的抗IFNIgG,对IFNα2b的抑制作用较弱。

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞NF-κB活性测定及其临床意义

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的NF-κB活化情况并探讨其临床意义。方法采用凝胶阻滞电泳(EMSA)检测NF-κB活性,抗dsDNA抗体及IgG测定使用ELISA方法。结果SLE患者和正常对照组均有一定量的NF-κB活化,但SLE患者NF-κB活性明显高于正常对照组,且活动期又明显高于非活动期。SLE患者NF-κB活化量与SLEDAI及PBMC培养上清液dsDNA、IgG分泌量呈正相关。结论SLE患者体内NF-κB处于高表达状态,NF-κB活化量与疾病活动程度及自身抗体的产生密切相关,阻抑NF-κB过度活化可能有利于SLE的治疗。

牦牛外周血单个核细胞抑制消减cDNA文库的构建及部分差异表达分子的克隆分析

为筛选牦牛外周血单核细胞(PBMC)差异性基因,以刀豆素A(ConA)和脂多糖(LPS)联合刺激的PBMC cDNA为实验组,未经诱导刺激的PBMC cDNA为驱动组,利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了丝裂原诱导刺激PBMC的消减文库并对其部分阳性克隆进行了EST序列分析。从消减文库中随机挑取16个阳性克隆,进行PCR鉴定,显示克隆的重组率大于93%,插入片段大小大部分集中在200bp～1000bp之间。随机挑取100个克隆进行测序及同源性分析,初步获得27条差异表达基因片段,其中24个为已知基因,3个为新ESTs序列;随机选择非重复的6个差异表达的序列设计引物,以半定量PCR方法验证其消减效率。结果显示,均从构建的消减文库中扩增到目的片段,其中5个为诱导性差异表达分子,1个为诱导特异性表达分子,说明该文库有较高的质量。本研究应用抑制消减杂交技术构建了牦牛PBMC的差异表达cDNA文库,并高通量克隆鉴定了相关功能基因片段,表明该技术手段有助于快速发现牦牛新功能基因。

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV cccDNA预测拉米夫定的治疗效果

目的:探讨慢性乙型肝炎拉米夫定治疗结束时,外周血单个核细胞(PBMC)中HBV cccDNA(乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA)检测对拉米夫定持续应答的预测作用. 方法:对慢性乙型肝炎患者17例进行拉米夫定治疗48 wk,获得完全或部分疗效(血清HBV DNA转阴, ALT复常,伴或不伴HBeAg血清转换),48 wk治疗结束时检测PBMC中HBV cccDNA,并对患者进行1 a的血清HBVDNA监测. 结果:治疗结束时PBMC中HBV cccDNA为阳性9例, 阴性8例.在PBMC中HBV cccDNA阳性者,停止治疗的1 a内所有患者的血清HBVDNA阳转.而PBMC中HBV cccDNA阴性者,1例血清HBVDNA阳转. 结论:拉米夫定治疗结束时PBMC中HBV cccDNA的检测可能对拉米夫定治疗能否获得持续应答具有预测价值.

慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞ICOS/ICOSL水平升高并与病情相关

目的检测慢性乙型肝炎(CHB)患者不同阶段外周血单个核细胞(PBMC)中诱导性共刺激分子(ICOS)及诱导性共刺激分子配体(ICOSL)mRNA的水平,并探索其临床意义。方法收集80例CHB患者以及20例健康对照者(HC)的外周血,检测血清中的丙氨酸转氨酶(ALT)、HBV血清标志物乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)、乙型肝炎病毒e抗原(HBe Ag)和HBV DNA定量;采用实时荧光定量PCR检测PBMC中的ICOS、ICOSL mRNA的水平。结果与正常对照相比,HBeAg^+和HBeAg^-患者ICOS、ICOSL的mRNA水平均明显升高,但HBe Ag+和HBe Ag-患者间无显著差异。根据其血清ALT、HBsAg、HBeAg和HBV DNA定量结果将CHB患者其分为免疫耐受期、免疫活跃期、免疫低复制期、HBe Ag阴性慢性肝炎期,分析其结果发现免疫活跃期ICOS和ICOSL的mRNA水平较其他各期明显增加。结论 CHB患者PBMC中ICOS和ICOSL的mRNA水平升高,且与疾病活动度和病程相关。

乙型肝炎外周血单个核细胞内和血清中HBV DNA的检测

目的:探讨不同类型乙型肝炎(乙肝)患者外周血单个核细胞(PBMC)内和血清中HBVDNA表达量的关系。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测77例不同类型乙肝患者PBMC内和血清中HBVDNA含量。结果:患者血清中和PBMC内HBVDNA总阳性率分别为48.05%(37/77)和57.14%(44/77)。其中两者中阴性和阳性检测结果一致的患者占77.92%(60/77),检测结果不一致的患者占22.08%(17/77),血清中和PBMC内HBVDNA阳性率差别无统计学意义(χ2=2.11,P>0.05)。肝硬化(LC)组患者PBMC内HBVDNA阳性率高于急性乙型肝炎(AHB)和慢性乙型肝炎(CHB)组(P<0.05)。不同血清标志物组中虽然PBMC内HBVDNA阳性而血清中阴性的患者之间差异无统计学意义(P>0.05),但抗-HBe(+)组中有增高趋势。结论:PBMC内HBVDNA的检测是对血清中HBVDNA检测的重要补充。另外,HBeAg阴性也不能排除体内有HBV的存在与复制。

乙肝患者外周血单个核细胞中乙肝病毒复制中间体RNA与乙肝病毒DNA相关性的研究

采用逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)技术检测乙肝患者外周血单个核细胞 (PBMCs)乙肝病毒复制中间体RNA(HBVRNA) ,6 0例乙肝患者 5例PBMCs中HBVRNA阳性 ,2 6例PBMCs中HBVDNA阳性 ,2 7例血清HBVDNA阳性 ;PBMCsHBVDNA阳性患者中有 4例PBMCsHBVRNA阳性 ,血清HBVDNA阳性患者中有3例PBMCsHBVRNA阳性 ;17例血清HBeAg阳性患者中有 4例PBMCsHBVRNA阳性。血清HBeAg、HBVDNA及PBMCs中HBVDNA阴性患者 ,其PBMCsHBVRNA仍可能阳性 。