雷公藤红素对人多发性骨髓瘤H929细胞凋亡的诱导作用及分子机制研究

目的:观察雷公藤红素诱导人多发性骨髓瘤H929细胞凋亡的效果,并分析诱导凋亡的分子机制。方法:取培养48 h后处于平台期的H929细胞,按照1.0×10^(9)/L细胞密度接种于6孔细胞培养板中,分为对照组、雷公藤红素组(0.5 mg/L、1.0 mg/L和5.0 mg/L),各浓度雷公藤红素组分别加入对应浓度的雷公藤红素,对照组加入等体积二甲亚砜(DMSO)溶液。比较不同浓度雷公藤红素组H929细胞活力抑制率,比较各组H929细胞凋亡率及H929细胞培养物中P53、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、剪切型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(cleaved PARP-1)、bax、bcl-2表达水平。结果:H929细胞活力抑制率随着雷公藤红素处理浓度升高而升高,不同浓度雷公藤红素组H929细胞活力抑制率两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,不同浓度雷公藤红素组H929细胞凋亡率均较高(P<0.05)。H929细胞凋亡率随着雷公藤红素处理浓度增加而增加,不同浓度雷公藤红素组H929细胞凋亡率两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,不同浓度雷公藤红素组H929细胞培养物中P53、cleaved caspase-3、cleaved PARP-1、bax表达水平均较高(P<0.05),bcl-2表达水平均较低(P<0.05)。H929细胞培养物中P53、cleaved caspase-3、cleaved PARP-1、bax表达水平随着雷公藤红素处理浓度升高而升高,bcl-2表达水平随着雷公藤红素处理浓度升高而降低,不同浓度雷公藤红素组H929细胞培养物中P53、cleaved caspase-3、cleaved PARP-1、bax、bcl-2表达水平两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:雷公藤红素对人多发性骨髓瘤H929细胞具有活力抑制和凋亡诱导作用,且有一定的剂量效应,这一作用可能与线粒体凋亡途径有关。

人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266对TRAIL耐药的机制探讨

目的探讨人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266对TRAIL耐药的机制。方法将人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226及U266进行培养、传代,分别加入终质量浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/ml的TRAIL分别作用12、24和48h后收集细胞。通过倒置显微镜观察TRAIL作用前后RPMI8226及U266细胞形态学变化检测细胞凋亡情况,通过半定量RT-PCR方法检测TRAIL受体mRNA水平。结果随着药物浓度的增加及药物作用时间的延长,RPMI8226细胞凋亡的数量增加,而U266细胞形态并无明显变化。TRAIL受体DR5 mRNA在RPMI8226中的表达水平高于U266,而DcR1 mRNA在U266中的表达水平高于RPMI8226(P均<0.05)。结论 TRAIL可通过DR5受体诱导的凋亡途径诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞凋亡,而U266细胞则可通过DcR1受体干扰凋亡信号传导,从而对TRAIL耐药。

TIP30基因表达对人多发性骨髓瘤细胞生物学功能的影响

目的研究TIP30基因表达对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖、凋亡等生物学功能的影响,以期为多发性骨髓瘤临床防治及药物研制提供新的靶点。方法人多发性骨髓瘤U266细胞中TIP30基因过表达采用腺病毒转染法,使用实时定量PCR和Western blotting验证TIP30过表达的效果,分别采用MTT法、划痕试验检测细胞增殖、迁移情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blotting分析p53、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 TIP30过表达腺病毒转染后,过表达组中U266细胞TIP30基因m RNA和蛋白表达水平均显著上升。与对照组比较,TIP30过表达后,细胞增殖、体外迁移能力均显著减弱(P<0.05);TIP30过表达后U266细胞凋亡率较对照组显著增大,TIP30过表达促进U266细胞凋亡与上调p53、Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平相关。结论 TIP30基因过表达可抑制人多发性骨髓瘤U266细胞增殖活性与体外迁移能力,并促进多发性骨髓瘤细胞凋亡。

蛇床子素诱导人多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞凋亡及其机制研究

目的:研究蛇床子素(Osthole)的抗骨髓瘤作用,并探讨其抗骨髓瘤的作用机制。方法:处于对数增殖期人多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226随机分为空白对照组及10、20、40、80、120、160和200μmol/L Osthole组,用MTT法检测细胞增殖率,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白表达量。结果:细胞培养24、48和72h后,不同浓度Osthole组细胞增殖数显著低于空白对照组,且作用呈剂量依赖性。不同浓度Osthole组细胞凋亡相关蛋白PARP被切割明显高于对照组,p53蛋白的表达量明显高于对照组,抗凋亡蛋白Mcl-1表达明显下降。结论:Osthole能明显抑制人多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞增殖,分子机制可能是诱导其细胞凋亡,其诱导凋亡的机制有待于进一步深入研究。

山核桃叶总黄酮诱导人多发性骨髓瘤U266细胞株凋亡作用研究

目的研究山核桃叶总黄酮诱导人多发性骨髓瘤(U266)细胞株凋亡的作用及其作用机制。方法体外培养U266细胞,CCK-8比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术定量分析细胞凋亡程度,Western Blot分析不同浓度总黄酮对U266细胞蛋白激酶B(Akt)和p-Akt蛋白表达的影响。结果山核桃叶总黄酮以浓度依赖性方式显著诱导U266细胞株凋亡并抑制p-Akt蛋白的表达。结论山核桃叶总黄酮诱导U266细胞凋亡的作用与其抑制Akt磷酸化相关。

氟化钠对人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226的毒性作用

目的研究人多发性骨髓细胞系RPMI8226暴露于不同浓度氟化钠时细胞增殖、凋亡和周期的变化。方法采用CCK-8法检测不同剂量的氟化钠对RPMI8226细胞存活率的影响;采用Annexin V/PI流式细胞仪定量检测凋亡测定细胞周期和凋亡。结果氟化钠浓度为5、10、20、40、80和160μmol/L时细胞存活率均高于空白对照组,氟化钠浓度在320、640、1280和2560μmol/L时细胞存活率低于空白对照组,氟化钠浓度为10、20、40、80、160、320、640、1280和2560μmol/L时所测反映细胞增殖的吸光度(A)值差异均有统计学意义(P<0.05);细胞周期实验结果显示在不同剂量(5、40、320和2560μmol/L)时,随着氟化钠浓度的增加,G2期细胞相对数量减少,G1期细胞相对数量增多,就整个细胞周期而言,S期细胞相对数量比G1期、G2期均高,其中对照组与染毒组的相对细胞数量差异有统计学意义;细胞凋亡实验显示氟化钠浓度为320和2560μmol/L时均诱导细胞凋亡,其中细胞凋亡率在对照组与染毒组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论氟化钠浓度为5、10、20、40、80和160μmol/L时促进RPMI8226细胞的增殖。氟化钠浓度在320、640、1280和2560μmol/L时抑制RPMI8226细胞的增殖。细胞周期和细胞凋亡实验显示DNA损伤程度与S期细胞相对数量一致,氟化钠对RPMI8226细胞造成的DNA损伤可能是细胞滞留在S期的一个重要原因。

硫酸长春地辛对B细胞免疫抑制作用的体外实验研究

目的研究硫酸长春地辛对B淋巴细胞增殖及免疫功能的抑制作用。方法用CCK-8法检测不同浓度硫酸长春地辛(0、1、10、100、200、400ng/ml)作用于体外培养的多发性骨髓瘤XG-7细胞24 h后细胞活力的变化;同时用ELISA法检测细胞培养上清IgG水平及人B细胞活化因子(BAFF)水平;检测不同浓度硫酸长春地辛作用24 h后细胞的存活度。结果 (1)硫酸长春地辛作用24 h后,对XG-7细胞增殖有抑制作用,细胞活力随药物浓度增加逐渐降低,药物浓度为100、200、400 ng/ml时对细胞活力抑制作用明显,与空白对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05);(2)当硫酸长春地辛浓度为100、200、400 ng/ml时细胞培养上清中IgG含量明显减少,与空白对照组相比差异有统计学意义(P均<0.05);(3)当硫酸长春地辛浓度为200、400 ng/ml时细胞培养上清中BAFF含量明显降低,与空白对照比较差异有统计学意义(P均<0.05);(4)不同浓度硫酸长春地辛对XG-7细胞的存活度均无明显影响(P均>0.05)。结论硫酸长春地辛能抑制XG-7细胞增殖,抑制其分泌IgG及BAFF,可能为免疫性疾病治疗提供一种新的途径。