HeLa和SiHa细胞中Skp2、p27和C-myc的表达

目的:检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)、C-myc、p27在宫颈癌HeLa及SiHa细胞系中的表达,明确这些指标在宫颈癌细胞系表达的意义。方法:通过细胞免疫组化、Westernblot、RT-PCR技术分析Skp2、p27和C-myc在蛋白和mRNA水平表达的差异。结果:免疫组化显示:He-La细胞中Skp2和C-myc表达强度高于SiHa细胞(P=0.032和P=0.026),而HeLa细胞中p27蛋白表达弱于SiHa细胞(P=0.035)。Westernblot显示:在HeLa细胞中Skp2和C-myc蛋白表达分别是SiHa细胞表达量的2.8倍和1.5倍;而SiHa细胞中的p27蛋白的表达水平是HeLa细胞中表达的2.7倍。RT-PCR结果显示:HeLa细胞中内源Skp2和C-myc的mRNA表达水平高于SiHa细胞(P=0.034和P=0.028),而SiHa细胞中的p27的mRNA表达水平高于HeLa细胞的表达水平(P=0.002)。结论:Skp2及C-myc在HeLa细胞中的表达水平高于SiHa细胞中的表达水平,而p27在HeLa细胞中的表达水平低于SiHa细胞中的表达水平。

miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探讨miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:对宫颈癌细胞株SiHa和HeLa中miR-224进行过表达或沉默,采用qRT-PCR法检测miR-224的转染效果,转染成功后采用CCK-8法、FCM检验、Transwell试验检测各组细胞增殖、凋亡及迁移情况。结果:与正常293T细胞相比,宫颈癌细胞SiHa、HeLa中miR-224表达量均升高,差异具有统计学意义(P<0.01);转染成功后CCK-8法检测SiHa和HeLa细胞增殖情况,与阴性对照组和空白组比较,miR-224 mimic组细胞增殖能力增强,miR-224 inhibitor组细胞增殖能力减弱,差异具有统计学意义(P<0.01);流式细胞仪检测SiHa和HeLa细胞凋亡情况,miR-224 mimic组细胞凋亡百分比明显低于阴性对照组(P<0.01),miR-224 inhibitor组细胞凋亡百分比明显高于阴性对照组(P<0.01);划痕试验检测SiHa和HeLa细胞迁移能力,48 h时miR-224 mimic组细胞愈合速率明显较阴性对照组和空白组快,差异有统计学意义(P<0.01),miR-224 inhibitor组细胞愈合速率明显较阴性对照组慢,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:宫颈癌细胞中miR-224过表达可促进细胞增殖和迁移并抑制凋亡,沉默miR-224可抑制细胞增殖和迁移并促进凋亡。

中药药用成分β-谷甾醇的预测及其对辐照宫颈癌细胞增殖与迁移的影响

目的预测宫颈癌差异基因的靶向中药关键药用成分,并分析其对辐照宫颈癌细胞增殖与迁移的影响。方法通过Coremine Medical、TCMSP、Uniprot以及Cytoscape数据库查找宫颈癌差异基因靶向中药及其药用成分和对应靶点,并筛选出核心靶点和关键药用成分。通过STRING数据库分析关键药用成分对应靶点基因与宫颈癌差异基因的蛋白互作。采用MTT、细胞划痕实验和Western blotting实验检测关键药用成分对辐照前后宫颈癌HeLa、Siha细胞增殖、迁移和DNA断裂水平的影响。结果共预测出宫颈癌差异基因的有效靶向中药9种。共得到96种药用成分和252个靶点基因,其中关键药用成分为β-谷甾醇,并筛选出其对应的核心靶点基因10个。β-谷甾醇的相关核心靶点基因与宫颈癌差异基因表达蛋白存在互作。β-谷甾醇抑制辐照前后宫颈癌细胞的增殖与迁移,促进宫颈癌HeLa细胞以及Siha细胞的DNA断裂水平。结论预测宫颈癌差异基因的靶向中药关键药用成分为β-谷甾醇,其可抑制辐照宫颈癌细胞的增殖与迁移。

异甘草素脂质体的制备及其对宫颈癌细胞体外增殖的抑制作用

目的:研究异甘草素(ISL)脂质体对宫颈癌细胞体外增殖的影响.方法:采用超声波薄膜分散法制备ISL脂质体;葡聚糖凝胶层析法分离含药脂质体与游离药物并测定包封率;离心加速试验考察其稳定性;活细胞计数法测定生长曲线;MTT法测定细胞增殖.结果:ISL脂质体的平均粒径为233.1 nm,跨距为0.74,包封率为(70.8±2.5)%,稳定性好;ISL脂质体(5～80 μmol·L-1)浓度依赖性地抑制宫颈癌细胞HeLa和SiHa细胞增殖,并呈时间依赖性,于d 3达高峰,其抑制率最高分别为83.44%和96.14%;浓度依赖性(5～80μmo1·L-1)抑制HeLa和SiHa增殖,IC50分别为34.24和29.82μmol·L-1(ISL的IC50分别为75.39和69.33 μmol·L-1).结论:该制备工艺与处方可行,所制备的ISL脂质体对人宫颈癌细胞体外增殖有明显的抑制作用,且作用明显强于ISL.

膜联蛋白A5与宫颈黏膜上皮细胞癌变的关系

目的：确定在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞中是否有膜联蛋白A5(anxA5)的表达,为研究anxA5的功能及其与宫颈癌的关系奠定基础。方法：培养Hela细胞和SiHa细胞。TRIzol法提取细胞总RNA,RT- PCR法检测anxA5在mRNA水平的表达并将其基因片段连接于T载体,测序仪测序；Western印迹法和免疫细胞化学ABC法检测anxA5的表达。结果：两种宫颈癌细胞的RT-PCR结果和Western印迹法均显示目的条带；免疫细胞化学染色可见胞质和核膜被染成棕黄色；测序并经NCBI的BLAST进行比对,显示为人anxA5。结论：anxA5在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞的mRNA水平和蛋白质水平均有表达。

Gal-1单抗增强γδT细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用

目的:探讨γδT细胞联合半乳糖凝集素1(galectin-1,Gal-1)单抗对人宫颈癌细胞的杀伤作用。方法:从人宫颈癌组织中分离肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs),并通过固相单抗包被法在体外扩增获得γδT细胞,流式细胞术检测其纯度;Western blotting和ELISA法检测宫颈癌SiHa、HeLa细胞及其上清中Gal-1的表达,乳酸脱氢酶(lactate de-hydrogenase,LDH)释放实验检测γδT细胞联合Gal-1单抗对宫颈癌SiHa、HeLa细胞的杀伤作用。皮下注射SiHa细胞制备荷瘤小鼠模型,随机分为对照组、同型对照组(IgG1组)、γδT细胞组(γδT组)、Gal-1单抗组(Gal-1mAb组)及γδT细胞联合Gal-1单抗组(γδT+Gal-1 mAb组),观察各组荷瘤小鼠移植瘤生长的情况。结果:固相单抗包被法体外扩增后TCRγδ阳性γδT细胞比例达(91.2±1.2)%,SiHa、HeLa细胞及其上清中Gal-1高表达。与对照组相比,Gal-1 mAb组能够增强γδT细胞体外杀伤SiHa细胞[(68.1±3.0)%vs(48.7±3.8)%,P<0.05]和HeLa细胞[(79.4±5.6)%vs(48.3±6.5)%,P<0.05]的效率。裸鼠荷瘤30 d,γδT+Gal-1 mAb组的移植瘤体积明显小于Gal-1单抗组[(31.3±9.1)vs(199.6±41.2)mm3,P<0.01]和γδT细胞组[(31.3±9.1)vs(85.6±45.1)mm3,P<0.05]。结论:Gal-1单抗能增强γδT细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用。

索拉非尼对宫颈癌细胞的增殖抑制作用及对PCNA、Survivin表达的影响

目的探讨索拉非尼对宫颈癌细胞株增殖和凋亡的影响。方法体外培养宫颈癌He La、Si Ha细胞株,实验分为空白对照组、阴性对照组(DMSO)和索拉非尼(0、2.5、5、10、20μmol/L)处理组。光学显微镜观察各组细胞形态学改变;Hoechst荧光染色观察凋亡细胞核的形态学变化;采用MTS法检测索拉非尼对He La和Si Ha细胞的增殖抑制作用;免疫细胞化学法检测索拉非尼(10μmol/L)处理He La、Si Ha细胞48 h后Survivin蛋白的表达;Western blotting检测索拉非尼对宫颈癌He La、Si Ha细胞PCNA、Survivin蛋白表达的影响。结果不同浓度索拉非尼作用48 h后,He La、Si Ha细胞出现了凋亡形态学改变;Hoechst染色显示,He La、Si Ha细胞的胞核变小、固缩,荧光明显增强。MTS检测显示,索拉非尼可抑制宫颈癌He La、Si Ha细胞增殖,并呈浓度依赖性(P<0.05)。免疫细胞化学法检测显示,阴性对照组Survivin在He La和Si Ha细胞中的平均光密度值分别为0.19±0.05和0.17±0.07,与索拉非尼处理组的0.13±0.01和0.13±0.03比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting检测显示,索拉非尼在蛋白水平上能够降低PCNA、Survivin表达,且这种下调作用具有浓度依赖性。结论索拉非尼能诱导He La、Si Ha细胞凋亡,抑制其增殖且呈浓度依赖性,其机制可能与下调癌基因PCNA、Survivin表达有关。

lncRNA MEG3通过miR-9-5p/SOCS5轴对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨lncRNA母源性印记基因3(maternal imprinting gene 3,MEG3)通过miR-9-5p/SOCS5轴对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调控作用。方法:收集2017年1月至2019年6月重庆市中医院手术切除的20例宫颈癌患者的癌及癌旁组织标本;利用脂质体转染技术分别将pcDNA3.1-MEG3、si-MEG3、miR-9-5p mimics、miR-9-5p inhibitor及其对照质粒等转染进宫颈癌HeLa和SiHa细胞,构建过表达和沉默细胞模型。用qPCR检测宫颈癌组织及细胞模型中MEG3、miR-9-5p和SOCS5表达水平,用CCK-8法、Transwell小室法检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,用细胞免疫荧光实验检测细胞中E-cadherin和vimentin表达水平。通过在线生物信息学TargetScan数据库预测靶基因,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-9-5p分别与MEG3和SOCS5的靶向关系。结果:分别与癌旁组织和宫颈上皮HcerEpic细胞比较,宫颈癌组织和细胞系中MEG3和SOCS5表达显著下调、miR-9-5p表达显著上调(均P<0.01)。TargetScan数据库分析和双荧光素酶报告基因实验证实miR-9-5p与MEG3或SOCS5存在靶向关系。MEG3和SOCS5显著抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移与侵袭能力(均P<0.01),miR-9-5p显著提高细胞的增殖、迁移与侵袭能力(均P<0.01)。MEG3和SOCS5促进E-cadherin表达、抑制vimentin表达;miR-9-5p抑制E-cadherin表达、促进vimentin表达(P<0.05或P<0.01)。结论:lncRNA MEG3通过miR-9-5p/SOCS5分子轴调控宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭与EMT进程。

环状RNA_000926通过靶向miR-411-5p调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨环状RNA_000926(circ_000926)对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:收集2019年5月至2020年9月河北医科大学第一医院手术切除的30例宫颈癌患者的癌及癌旁组织标本,以及人宫颈癌细胞HeLa、SiHa和正常宫颈细胞Ect1/E6E7,用qPCR法检测组织和细胞中circ_000926和miR-411-5p的表达水平。将circ_000926过表达质粒及空白质粒、circ_000926小干扰RNA及阴性对照寡核苷酸、miR-411-5p mimic和阴性对照质粒分别转染HeLa和SiHa细胞,分为pc-circ_000926组、pc-NC组、si-circ_000926组、si-NC组、miR-411-5p mimic组和miR-NC组。通过CCK-8法检测转染细胞的增殖活力,TUNEL法检测细胞的凋亡水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证circ_000926与miR-411-5p之间的靶向关系,WB法检测细胞中Ki67、BAX、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达。结果:与癌旁组织和Ect1/E6E7细胞相比,宫颈癌组织和He La、SiHa细胞中circ_000926表达显著升高、miR-411-5p表达显著降低(均P<0.01)。与pc-NC组相比,pc-circ_000926组细胞增殖活力显著增强、细胞凋亡率显著降低(均P<0.01),细胞中miR-411-5p表达显著降低、Ki67蛋白表达显著升高,BAX、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达显著降低(均P<0.01)。与si-NC组相比,si-circ_000926组细胞增殖活力显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.01),细胞中miR-411-5p表达显著升高、Ki67蛋白表达显著降低,BAX、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达显著升高(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果证实circ_000926靶向负向调控miR-411-5p表达,过表达miR-411-5p可逆转过表达circ_000926对宫颈癌细胞增殖和凋亡的作用。结论:circ_000926通过靶向吸附miR-411-5p促进宫颈癌细胞的增殖,并抑制细胞凋亡。

维药异常黑胆质成熟剂总酚对宫颈癌细胞体外生长的影响

目的:探讨维药异常黑胆质成熟剂总酚治疗人宫颈癌的可行性。方法:分别用不同浓度的异常黑胆质成熟剂总酚作用于人宫颈癌Hela细胞及SiHa细胞,于作用后24、48、72、96 h,用倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT比色法测定各组细胞的抑制率和半数抑制浓度(IC50)。结果:在25～125μg/mL浓度区间,总酚对Hela细胞的增殖有明显的抑制作用;在75～175μg/mL浓度区间,总酚对SiHa细胞的增殖有明显的抑制作用,且对2种细胞的抑制作用都呈明显的量效关系和时效关系(P<0.01);总酚作用于Hela细胞后48 h的IC50=(125.26±16.15)μg/mL,而作用于SiHa细胞后48 h的IC50=(134.51±2.55)μg/mL。两者比较差异无统计学意义(P>0.05);两种细胞经总酚作用后均出现明显的凋亡特征,且随着药物浓度增高及作用时间延长细胞形态学变化更明显。结论:异常黑胆质成熟剂总酚能抑制宫颈癌Hela细胞及SiHa细胞体外生长,且对两种宫颈癌细胞的抑制作用基本相同。故异常黑胆质成熟剂总酚可作为临床治疗宫颈癌的药物进一步深入研究。

膜联蛋白A5在宫颈癌细胞系中的表达

目的:检测膜联蛋白A5(ANXA5)在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞中的表达,为研究ANXA5在宫颈癌中的作用奠定基础。方法:采用Western blot和ABC免疫组化法在蛋白水平检测ANXA5的表达。结果:在Hela细胞和SiHa细胞中均检测到了ANXA5的表达,阳性产物位于细胞浆,少数细胞在胞膜和胞核上也有表达。结论:ANXA5在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞中均有表达。

核因子E2相关因子1过表达抑制宫颈癌细胞增殖及迁移

目的:初步探究核因子E2相关因子1(nuclear factor erythroid 2-related factor 1,Nrf1)在宫颈癌组织中的表达及其过表达对宫颈癌细胞增殖以及迁移的影响。方法:通过TCGA数据分析Nrf1在人宫颈癌及正常宫颈组织中的表达水平差异;检索OncoLnc网站,比较Nrf1高表达与低表达宫颈癌患者的生存率;采用qRT-PCR检测11对宫颈癌及癌旁组织中Nrf1 mRNA的表达水平。通过慢病毒转染方式构建Nrf1过表达宫颈癌HeLa、SiHa细胞株,以及对应的空载体细胞株;采用qRT-PCR及蛋白免疫印迹实验分别检测细胞株内Nrf1的mRNA和蛋白表达水平;采用EdU细胞增殖实验、细胞克隆形成实验、Transwell细胞迁移实验以及细胞划痕愈合实验检测宫颈癌细胞的增殖和迁移。结果:TCGA数据分析显示,宫颈癌组织中Nrf1 mRNA表达水平明显低于正常宫颈组织(P<0.01);OncoLnc网站分析显示,Nrf1高表达组患者生存率明显高于Nrf1低表达组(P<0.05);qRT-PCR结果显示,Nrf1 mRNA在宫颈癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。qRT-PCR及蛋白免疫印迹实验结果显示,在宫颈癌HeLa、SiHa细胞株中,Nrf1过表达组Nrf1 mRNA及蛋白水平较空载体对照组明显升高(P<0.05);与空载体对照组相比,Nrf1过表达组EdU标记的细胞占比、克隆细胞数及细胞迁移数均明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论:Nrf1在宫颈癌组织中呈低表达;外源性过表达Nrf1可显著抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力。

顺铂耐药宫颈癌细胞中沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1的表达及其对细胞增殖的影响

目的探讨顺铂(DDP)耐药宫颈癌细胞中沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)的表达及其对细胞增殖的影响。方法将宫颈癌HeLa和SiHa细胞分别分为耐药组和敏感组。敏感组细胞不做任何处理;耐药组细胞在培养过程中逐步增加培养液中顺铂的浓度,建立对对顺铂耐药的HeLa/DDP和SiHa/DDP细胞系。再将HeLa/DDP和SiHa/DDP细胞系分为HeLa/DDP-NC组、HeLa/DDP-siRNA组以及SiHa/DDP-NC组、SiHa/DDP-siRNA组,并分别转染相应的siRNA。检测耐药组和敏感组细胞SIRT1蛋白及mRNA表达水平;检测DDP-NC组与DDP-siRNA组细胞SIRT1蛋白及mRNA表达水平及增殖情况。结果耐药组HeLa及SiHa细胞SIRT1蛋白及mRNA表达水平均高于敏感组(均P<0.05)。DDP-NC组HeLa及SiHa细胞增殖水平高于DDP-siRNA组(均P<0.05)。结论顺铂耐药宫颈癌细胞SIRT1表达水平升高,抑制SIRT1表达可以抑制耐药细胞的增殖。

敲低YTH结构域N^6甲基腺嘌呤(m^6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)抑制宫颈癌细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨敲低YTH结构域N^6甲基腺嘌呤(m^6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)对人宫颈癌细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法利用人蛋白图谱(Human Protein Atlas)数据库分析YTHDF2在宫颈癌中表达及与生存时间的关系。收集宫颈癌和正常宫颈组织各31例,采用免疫组织化学法检测YTHDF2的蛋白表达差异;利用敲低YTHDF2的短发夹RNA(shRNA)及空载质粒包装慢病毒,并感染至宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞,实时荧光定量PCR及Western blot法检测YTHDF2的mRNA及蛋白水平,敲低YTHDF2后,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,集落形成实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果检测数据库发现YTHDF2在宫颈癌中表达越高生存时间越短,与正常宫颈组织相比,YTHDF2在宫颈癌组织高表达。敲低YTHDF2后,抑制宫颈癌细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞阻滞于S期。结论YTHDF2在宫颈癌组织中高表达,敲低后抑制宫颈癌细胞增殖并促进其凋亡。

埃索美拉唑诱导宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡作用及机制

目的探讨埃索美拉唑(ESO)对人宫颈癌细胞SiHa和HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用及可能机制。方法人宫颈癌细胞SiHa和HeLa及正常宫颈细胞H8分别用ESO 0(细胞对照组),60,80和100 mg·L^(-1)处理24,48和72 h,CCK-8实验检测细胞存活率。SiHa和HeLa细胞用ESO 0,60,80和100 mg·L^(-1)处理24和48 h,通过细胞划痕实验检测细胞迁移率;用ESO 0,60,80和100 mg·L^(-1)处理48 h,通过Transwell实验检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western印迹法检测细胞内Bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达水平及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平。结果与细胞对照组相比,SiHa和HeLa细胞经ESO 80和100 mg·L^(-1)处理48和72 h后细胞存活率显著降低(P<0.01),H8细胞存活率无明显变化。与细胞对照组相比,SiHa和HeLa细胞经ESO 60,80和100 mg·L^(-1)处理24和48 h后细胞迁移率显著降低(P<0.01);经ESO 60,80和100 mg·L^(-1)处理48 h后侵袭细胞数显著降低(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.05,P<0.01),胱天蛋白酶3表达升高(P<0.01),Bcl-2表达降低(P<0.01),PI3K和Akt磷酸化水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论ESO可抑制SiHa和HeLa细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路相关。

抑制SLP-2对宫颈癌细胞迁移及侵袭能力的影响

目的探讨抑制stomatin样蛋白2(SLP-2)对宫颈癌细胞的迁移及侵袭能力的影响。方法将人宫颈腺癌Hela细胞和鳞癌Siha细胞分别分为siRNA阴性对照组(siRNA-CON)和SLP2-siRNA组。采用western blot检测转染后各组细胞SLP-2蛋白表达水平;Transwell小室试验检测细胞侵袭能力;细胞划痕试验检测细胞迁移能力;western blot检测侵袭相关蛋白Rac1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9表达水平。采用独立样本t检验进行统计学分析。结果Western blot检测结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞中SLP-2蛋白水平均低于siRNA-CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell小室试验结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞侵袭能力低于siRNA-CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕试验结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞24h和36h迁移能力低于siRNA-CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞中Rac1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均低于siRNA-CON组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论干扰SLP-2表达后宫颈腺癌Hela细胞和鳞癌Siha细胞的侵袭能力和迁移能力明显下降,提示SLP-2在宫颈癌进展中有着重要作用,可能是潜在的转移预测标志物和治疗靶点。

奈达铂对宫颈癌Hela及Siha细胞的作用

目的:比较奈达铂(NDP)体外对人宫颈腺癌细胞Hela细胞及鳞癌细胞Siha的抑制作用并探讨其作用机制。方法:以2.5～40μg/ml NDP分别作用于Hela及Siha细胞24 h,48 h,72 h,MTT法检测抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);利用流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡率及周期变化;半定量PCR法分析基因半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3,Caspase 9)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达变化。结果:NDP对宫颈癌Hela细胞及Siha细胞均有抑制作用,呈时间-剂量依赖性,NDP对Hela细胞的抑制率大于Siha细胞;FCM显示,随时间、浓度增加,Hela及Siha细胞凋亡率增加,相同浓度和作用时间下,Hela细胞的凋亡率大于Siha细胞(P<0.05),S期细胞的比例增加,G0/G1期比例减少,G2/M期比例变化不明显;与对照组相比,Caspase 3,Caspase 9表达增加,MMP-2表达减少。结论:NDP可抑制宫颈腺癌细胞Hela及鳞癌细胞Si-ha的增殖,NDP体外对Hela细胞的抑制作用更强。NDP的作用机制与诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞、上调Caspase3和Caspase9的表达有关;下调MMP-2的表达可能有利于降低宫颈癌细胞的侵袭力。

青蒿素联合^(60)Co γ射线对HeLa和SiHa细胞所致DNA损伤的研究

目的探讨青蒿素联合^(60)Coγ射线照射后对人宫颈癌HeLa和SiHa细胞的DNA损伤。方法采用甲基四唑蓝(MTT)法检测不同浓度青蒿素对人宫颈癌HeLa和SiHa细胞的抑制效应,确定青蒿素的最适实验浓度;采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测照射后HeLa和SiHa细胞DNA的损伤情况。结果青蒿素对HeLa和SiHa细胞的抑制率存在剂量-效应关系;SCGE结果显示:两种细胞的单药组与对照组的彗星细胞检测指标(拖尾率、尾长、OLIVE尾矩和彗尾DNA%)无明显差异(P>0.05);在相同照射剂量下,青蒿素加照射组的HeLa细胞的彗星细胞检测指标高于单纯照射组(P<0.05),而SiHa细胞差异无统计学意义(P>0.05)。结论青蒿素本身不能引起He-La和SiHa细胞DNA损伤,但辐照后可致HeLa细胞DNA损伤加重,增加了HeLa细胞的辐射敏感性,而对SiHa细胞没有辐射增敏作用。

卤代二甲氧基查尔酮的合成及体外抗宫颈癌活性研究

目的合成3种4-卤代-2′,4′-二甲氧基查尔酮,研究其体外抗宫颈癌活性。方法以4-氟苯甲醛、4-氯苯甲醛、4-溴苯甲醛和2,4-二甲氧基苯乙酮为原料,采用EtOH/KOH法制备3种4-卤代-2′,4′-二甲氧基查尔酮,以HeLa和SiHa细胞建立为体外模型,采用MTT法测定其对人子宫癌细胞增殖的抑制活性。结果按以上方法合成得到4-氟-2′,4′-二甲氧基查尔酮(化合物Ⅰ,产率85.35%),4-氯-2′,4′-二甲氧基查尔酮(化合物Ⅱ,产率78.42%)和4-溴-2′,4′-二甲氧基查尔酮(化合物Ⅲ,产率77.88%)。3个化合物作为试药,当药物浓度在50~100μg/mL时,抑制活性在11.34%~94.17%。其中化合物I对HeLa和SiHa细胞作用48h的抑制率分别达到85.87%、93.58%。结论 3种4-卤代-2′,4′-二甲氧基查尔酮对HeLa和SiHa细胞增殖均有较强的抑制活性,其中氟代查尔酮的活性最强,并具有浓度和时间依赖性特点。

Gli1与FoxM1在子宫颈癌组织和细胞中的表达及意义

目的:了解宫颈癌组织和细胞中Gli1及FoxM1的表达及意义,并探究这二者的相关性,进而明确FoxM1是否为Gli1在Hh信号通路中的下游靶基因,从而为宫颈癌的分子靶向治疗提供依据。方法:通过免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测70例宫颈癌组织和10例正常宫颈组织中Gli1及FoxM1的表达;体外培养宫颈癌细胞系Hela、Siha,将两株细胞分别分为5组,分别下调和上调Gli1基因的表达后,应用逆转录(RT)-PCR法检测各组细胞中Gli1及FoxM1的mRNA表达量,并分析二者的相关性。结果:Gli1和FoxM1蛋白表达水平在宫颈癌组织中明显高于正常宫颈组织(P<0.05)。Gli1的表达在分化程度低的宫颈癌组织中较高(P=0.022),与宫颈癌的侵袭程度有关(P=0.005),在有淋巴结转移中更高(P=0.017);FoxM1的表达与宫颈癌的侵袭程度有关(P=0.011),与年龄相关(P=0.033)。Spearman秩相关检验提示,Gli1与FoxM1相关系数r=0.405(P<0.001),呈显著正相关;分别下调Hela细胞和Siha细胞中Gli1表达后,两细胞系中FoxM1mRNA表达量均明显降低,均呈现正显著相关(r=0.613,r=0.729,P<0.05);分别将Gli1过表达质粒导入Hela细胞和Siha细胞中,两细胞系中FoxM1mRNA表达量均明显增高,均呈现正显著相关(r=0.593,r=0.660,P<0.05)。结论:Gli1和FoxM1在宫颈癌组织中均高表达,且Gli1可调控宫颈癌细胞系Hela、Siha中FoxM1的表达,进而促进宫颈癌的发生发展。