MTERF1基因真核表达载体的构建及其在C-33A细胞中的表达研究

采用PCR技术从pGEM-MTERF1重组克隆载体中扩增出人MTERF1基因cDNA的开放阅读框序列,经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后,以pcDNA3.1(+)为真核表达载体,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-MTERF1;通过PCR、双酶切和DNA测序方法对重组子进行鉴定;将重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-MTERF1转染C-33A细胞,利用免疫印迹法检测MTERF1蛋白的表达。结果显示,重组质粒pcDNA3.1(+)-MTERF1经双酶切鉴定和菌落PCR鉴定均获得大小为1 200 bp的目的条带,DNA测序结果表明该序列与GenBank中人MTERF1基因序列完全相同,插入基因的大小和方向正确;免疫印迹结果表明,MTERF1蛋白的表达水平在转染pcDNA3.1(+)-MTERF1的C-33A细胞中表达高于转染pcDNA3.1(+)的C-33A细胞。通过对人MTERF1基因的真核表达载体的构建,为进一步研究人MTERF1基因的功能奠定了基础。

5-ALA光动力对人子宫颈癌Hela细胞的杀伤作用及剂量研究

目的研究不同剂量氨基酮戊酸(5-ALA)光动力对人宫颈癌Hela细胞的杀伤作用,为宫颈癌的治疗提供有价值的参考。方法对人宫颈癌细胞株Hela培养、传代后分为两组,观察组给予不同剂量5-ALA光动力,对照组不给予5-ALA光动力,比较两组细胞增殖抑制率、Her-2/neu表达、凋亡率情况。结果观察组早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率均高于对照组(P<0.05)。随着5-ALA光敏剂浓度增加,早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率也随之增加(P<0.05)。观察组Her-2/neu阳性表达率为12.5%,明显低于对照组(P<0.05)。光动力能量密度5、10、20 J/cm2细胞增殖抑制率明显大于1 J/cm2;10、20 J/cm2细胞增殖抑制率明显大于5 J/cm2;光敏剂浓度1、4 mmol/L细胞增殖抑制率明显大于0.1 mmol/L(P<0.05)。光动力能量密度10、20 J/cm2细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05);光敏剂浓度1、4 mmol/L细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 5-ALA光动力对人宫颈癌Hela细胞具有明显的抑制作用,还可诱导细胞凋亡,5-ALA浓度为1 mmol/L,光动力能量密度10 J/cm2是最佳杀伤剂量。

4-乙氧基-2-羟基-6-甲基苯甲酸体外抗肿瘤作用及与顺铂联合作用研究

目的研究4-乙氧基-2-羟基-6-甲基苯甲酸(以下简称D6B2)对多株人体肿瘤细胞体外抗肿瘤作用的剂量-效应和时间-效应关系,发现敏感的肿瘤细胞株,观察该化合物与临床抗癌药物是否具有体外联合抗肿瘤作用,以及作用形式和强度.方法采用体外抗肿瘤实验,研究不同浓度的D6B2对人鼻咽癌细胞株CNE、人肝癌细胞株Hep G2、人子宫颈癌细胞株HeLa、人胆管癌细胞株QBC939和人白血病细胞株K562的体外抑制作用的剂量-效应关系,进一步观察该化合物对HeLa细胞体外抑制作用的时间-效应关系,以及其与顺铂是否具有联合抗肿瘤作用.结果 D6B2在浓度为25μM、50μM、100μM、150μM、200μM时对CNE细胞的抑制率分别为24.94%、42.11%、65.74%、70.22%、73.11%,IC50为66.9μM;对Hep G2细胞的抑制率分别为23.15%、54.56%、62.95%、70.14%、75.18%,IC50为60.98μM;对HeLa细胞的抑制率分别为31.34%、60.76%、78.43%、85.78%、90.75%,IC50为40.7μM;对QBC939细胞的抑制率分别为5.97%、12.05%、28.44%、35.28%、51.31%,IC50为197.07μM;对K562细胞的抑制率分别为18.20%、35.48%、46.76%、58.44%、57.32%,IC50为120.06μM.D6B2对HeLa细胞的24 h抑制率分别为7.96%、9.56%、10.98%、14.00%、17.33%,48 h抑制率分别为10.62%、25.96%、47.63%、48.24%、49.03%,72 h抑制率分别为18.08%、53.68%、85.55%、87.86%、82.07%.D6B2在25μM、50μM、100μM剂量下与10μM的DDP联合用药,3组的CDI值分别为0.039、0.019和0.014.结论 D6B2对CNE、Hep G2、HeLa、QBC939和K562细胞均有显著的体外抗肿瘤作用,存在明显的剂量-效应关系,人子宫颈癌细胞株HeLa对其最为敏感.D6B2对HeLa的体外抑制作用具有时间-效应关系.D6B2与临床抗癌药物顺铂具有显著的体外协同抗肿瘤作用.

益母草提取物抗癌研究

目的:观察益母草提取物的体内外抗肿瘤活性。方法:采用MTT法观察益母草水提物及醇提物对人子宫颈癌的作用,并观察两者对小鼠体内S180肉瘤的抑制作用。结果:108、180和300μg/mL的益母草水提物及益母草醇提物可显著抑制人子宫颈癌HeLa细胞的增殖,250及750mg/kg的益母草水提物及益母草醇提物对S180小鼠肉瘤的生长无抑制作用。结论:益母草水提物及益母草醇提物对人子宫颈癌具有一定的体外抗肿瘤活性。

Effects of trichostatin A(TSA)on growth and gene expression in HeLa cells

Objective： To investigate the expressions of p53, RB1, Fas, c-fos, Ras, EGFR mRNA in human cervical cancer （HeLa） cell in response to the trichostatin A （TSA）. Methods： We took count of HeLa cells in different incubation times with TSA （0.2μm/L）. The result indicated that HeLa cells changed evidently when HeLa cells were incubated for 36 h. Then, we investigated the genes expression （mRNA levels） of HeLa cells after treatment for 36 h using SYBR green real-time PCR. Results： We demonstrated that trichostatin A （TSA） could make human cervical cancer （HeLa） cell morphological change and induce HeLa cell apoptosis. Furthermore, the data suggest that TSA-induced down-regulation of p53, RB1, Fas, but upregulated c-fos gene expression after treatment for 36 h, and Ras, EGFR did not show obvious response to TSA treatments. Conclusion： TSA has different effects on gene expression.