清毒栓提取物对人子宫颈鳞癌细胞免疫逃逸的影响

目的 研究清毒栓提取物对人子宫颈鳞癌细胞(SiHa细胞)免疫逃逸的影响,探讨清毒栓提取物治疗宫颈人乳头瘤病毒感染的免疫机制。方法 选择均匀成团生长的jurkat细胞,使用SiHa上清液培养jurkat细胞48小时,采用染色质免疫沉淀技术检测SiHa细胞上清液处理后jurkat细胞中叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Forkhead boxP3,Foxp3)含量。取Foxp3高表达的T细胞模型,用血清药理学方法制备的清毒栓含药血清和对照血清进行干预,采用染色质免疫沉淀技术、实时荧光定量PCR法、流式细胞术分别检测jurkat细胞中Foxp3蛋白表达水平、Foxp3转录水平,以及Foxp3阳性细胞比例。结果 SiHa上清液可以显著增加jurkat细胞中Foxp3含量(P<0.05),且处理48小时效果最为显著;jurkat细胞经清毒栓含药血清处理后,细胞中的Foxp3蛋白表达显著下调(P<0.05);在含药血清浓度为15%和20%时,Foxp3的蛋白表达量最低,但两者无明显差别(P>0.05);清毒栓含药血清可以显著降低jurkat细胞模型中Foxp3转录和蛋白水平以及Foxp3阳性细胞数(P<0.05)。结论 清毒栓含药血清通过抑制jurkat T细胞中的Foxp3转录和蛋白表达,降低Foxp3阳性细胞数及Treg细胞比例,从而抑制宫颈SiHa细胞的免疫逃逸,增加机体对宫颈SiHa细胞的免疫反应性。

高表达p27基因对子宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的构建抑癌基因p27高表达细胞株,研究其对子宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法运用RT-PCR技术从HeLaRNA中扩增p27 cDNA,连接酶连接至真核表达载体pcDNA3.1(+),所得的重组质粒pcDNA3.1(+)-p27用脂质体法转染子宫颈癌HeLa细胞,使用RT-PCR以及Western blot法筛选p27基因高表达的细胞株。MTT法和流式细胞术检测p27基因高表达对细胞增殖的影响。结果成功获得p27高表达的HeLa细胞株。细胞增殖分析和流式细胞术结果显示,p27基因高表达对细胞增殖有抑制作用,并明显增加G1期的细胞数(由44.4%增加到59%,P<0.05)。结论 p27基因在HeLa细胞中高表达能通过抑制细胞G1/S转换从而抑制细胞增殖,提示p27基因可能成为子宫颈癌基因治疗的靶基因。

黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用

目的:探讨黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用及可能机制。方法:采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测黄芩素对HeLa细胞生长的抑制作用;Hoechst33258荧光染色法观察黄芩素对HeLa细胞凋亡的诱导作用;比色法测定黄芩素对HeLa细胞内caspase-3活性的影响。结果:不同浓度黄芩素作用24、36、48h后均可抑制HeLa细胞生长(P<0.05～P<0.01);黄芩素作用24h后,HeLa细胞凋亡率增加(P<0.01),细胞内caspase-3活性增强(P<0.05～P<0.01)。结论:黄芩素能抑制HeLa细胞生长,其机制可能与诱导细胞凋亡及增强caspase-3活性有关。

热疗增强顺铂对子宫颈癌细胞化疗作用的体外实验研究

目的探讨热疗增强顺铂（ＤＤＰ）对子宫颈癌细胞的作用。方法以体外培养的子宫颈癌Ｈｅｌａ细胞株为研究对象，采用组内分组设计方法，以恒温水浴热疗，藉ＭＴＴ法观测不同热疗温度、时间、序贯对ＤＤＰ化疗增效作用。结果（１）Ｈｅｌａ细胞在３７℃下与０．１ｍｇ·Ｌ－１ＤＤＰ作用２４ｈ，细胞毒指数（ＣＩ）为０．０８，辅以４３℃热疗３０ｍｉｎ，ＣＩ值提高８．５倍；而ＤＤＰ浓度提高１０００倍时，ＣＩ值仅提高１０倍。４３℃热疗组与４１℃以下热疗组间的ＣＩ值差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。（２）热疗时间１５ｍｉｎ以上组与７．５ｍｉｎ组之间的ＣＩ值差异有显著性（Ｐ＜０．０１），而１５ｍｉｎ以上各组间ＣＩ值差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。（３）热疗与ＤＤＰ同时应用者细胞毒性作用最强。结论热疗增强ＤＤＰ对Ｈｅｌａ细胞的毒性作用，以４３℃１５ｍｉｎ以上热疗与ＤＤＰ同时应用效果最佳。

黄芩素诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:探讨黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:MTT法测定黄芩素作用后人子宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率;Hoechst 33258荧光染色法和Annexin-V/PI双染流式细胞术检测黄芩素诱导HeLa细胞凋亡的作用;Westernblot观察黄芩素对HeLa细胞bcl-2、Bax、caspase 3及p53表达的影响。结果:(1)不同浓度黄芩素作用24h后均可抑制HeLa细胞生长(P<0.05);(2)黄芩素作用24h后,HeLa细胞呈典型的凋亡形态学改变,凋亡率亦显著增加(P<0.01);(3)细胞内Bax、p53和caspase 3表达显著上调,bcl-2表达明显下调(P<0.05)。结论:黄芩素通过调控凋亡相关基因的表达,诱导HeLa细胞凋亡。

分析Tim-4促进子宫颈癌细胞侵袭与迁移及其相关机制

目的:分析Tim-4促进子宫颈癌细胞侵袭与迁移及其相关机制。方法:使用实时荧光定量PCR法检测子宫颈上皮永生化细胞系H8和子宫颈癌细胞系Siha中Tim-4的表达水平,用Tim-4的慢病毒载体感染低表达Tim-4的Siha细胞系,观察癌细胞感染后的Tim-4表达水平,进行细胞迁移侵袭试验检测Tim-4对子宫颈癌细胞系Siha的侵袭与迁移能力的影响,最后使用蛋白质印迹法检测子宫颈癌细胞系Siha中Tim-4和上皮细胞-间充质转化蛋白的表达。结果:Siha细胞系中Tim-4mRNA表达水平(1.63±0.03)>H8细胞系(0.97±0.06),P<0.05;Tim-4过表达的Siha细胞的穿模数为(102.14±5.14)>空载体(56.34±10.21),P<0.05;蛋白质印迹法结果显示Tim-4增强了EMT蛋白的表达。结论:Tim-4能够促进子宫颈癌细胞侵袭与迁移能力,其机制为Tim-4促进了癌细胞中的上皮细胞-间充质转化(EMT)。

高温对人宫颈癌细胞系（Hela）生物学和生物化学作用的实验研究

探讨了高温或（及）辐射对Ｈｅｌａ细胞的作用，并测定其在不同实验条件下的生物学指标（生长曲线、集落形成率、分裂指数）和生化指标（核ＤＮＡ和培养液中Ｋ＋浓度）的动态变化。结果显示，高温组中４３．５℃和４５．５℃对Ｈｅｌａ细胞有明显的杀伤效应，呈对数杀伤效应；４２．５℃与４３．５℃分别于９０ｍｉｎ和１８０ｍｉｎ出现了热耐受，而４５．５℃未出现；其分裂指数呈抑制－回升－再抑制－再回升的曲线。推测是细胞同步化或再分布的结果。高温抑制细胞的有丝分裂比辐射强，而且恢复得慢，但相应的杀伤能力却低于辐射。对核ＤＮＡ定量测定结果显示，高温抑制了核ＤＮＡ的合成，且与温度呈正相关；辐射亦抑制ＤＮＡ的合成，二者联用具有协同作用，这种作用是可逆的，二者联用有降低其可逆性的作用。各实验处理组培养液中Ｋ＋浓度均有不同程度增高，以二者联用组最高。

用电镜观察气功外气效应──体外培养的人体子宫颈癌细胞经气功外气施功的效应

结合细胞培养技术，用电子显微镜，从细胞生物学的角度研究了气功效应。对体外培养的ＨｅＬａ细胞经气功外气施功后的生物效应作了仔细的超微结构观察。

Grim-19对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性及衰老的影响

目的重组质粒转染HeLa细胞以探讨Grim-19表达水平的变化对HeLa细胞中端粒酶活性的影响。方法将重组质粒p3×flag-myc-cmv-24-Grim-19(简写Grim-19)通过脂质体转染至HeLa细胞,48 h后通过Western blot检测Grim-19、htert、P16、P21的表达情况,同时检测HeLa细胞衰老和端粒酶活性。结果转染后可见flag的表达及htert的表达降低及P16、P21的表达升高,细胞衰老增加,增殖减弱及端粒酶活性的降低。结论在子宫颈癌细胞株HeLa中Grim-19具有调控端粒酶活性和细胞衰老的作用。

顺铂、5-氟尿嘧啶对人宫颈肿瘤细胞(Hela细胞)的相互作用

目的：观察顺铂、5-氟尿嘧啶及甲氨喋呤在体外对人宫颈肿瘤细胞（Hela细胞）的作用。并观察顺铂、5-氟尿嘧啶配伍对Hela细胞的相互作用。方法：采用MTT测定法观察顺铂、5-氟尿嘧啶及甲氨喋呤单用及合用对Hela细胞的影响，流式细胞仪观察凋亡及细胞周期的变化。并利用中效原理判定顺铂和5-氟尿嘧啶合用的效果。结果：顺铂和5-氟尿嘧啶单独应用时随着药物剂量增加，其抑制作用也增加，两药大剂量（大于中效剂量）合用时可产生拮抗作用（CI>1），小剂量（小于中效剂量）合用时可产生协同作用（CI<1）。甲氨喋呤在本实验条件下未见明显抑瘤作用。结论：顺铂和5-氟尿嘧啶合用小剂量产生协同作用，大剂量产生拮抗作用。

宫颈癌、卵巢癌患者白细胞和癌细胞体外抗癌药物敏感性相关性探讨

目的：探讨宫颈癌、卵巢癌患者白细胞和癌细胞体外抗癌药物敏感性的相关性。方法：用ＭＴＴ法，体外测定了宫颈癌（１７例）和卵巢癌（１８例）患者白细胞和癌细胞抗癌药物敏感性。结果：卵巢癌患者白细胞和癌细胞的药敏率没有显著差异、相关性好。结论：宫颈癌患者白细胞对５ＦＵ、ＤＤＰ、ＰＹＭ、ＣＴＸ、ＭＴＸ、ＶＣＲ药敏率均低于癌细胞，有非常显著的差异（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。

17-β雌二醇对宫颈癌Hela细胞环氧合酶-2和增殖细胞核抗原表达的影响

目的:探讨17-β雌二醇(E2)对宫颈癌Hela细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。方法:Hela细胞分别用0.1%乙醇(对照组)、E2(E2组)、E2+依托昔布(E2+依托昔布组)作用24 h后,采用免疫细胞化学、Western blot及RT-PCR方法检测COX-2和PCNA的表达。结果:E2组COX-2和PCNA蛋白及mRNA水平较对照组明显升高(P<0.01);而E2+依托昔布组PCNA水平较E2组显著降低(P<0.01),但依然高于对照组。结论:E2可促进Hela细胞COX-2表达,并进一步上调PCNA水平。

EB病毒感染与子宫颈鳞状细胞癌相关性的研究

目的 探讨EB病毒 (epstein -barrvirus ,EBV)潜伏感染与子宫颈鳞状细胞癌 (cervicalsqua mouscellcarcinoma,CSCC)的关系。方法 采用免疫组织化学S -P法对 6例子宫颈上皮内瘤病变 (cervicalin traepithelialneoplasia,CIN)、 4 1例子宫颈鳞状细胞癌 (cervicalsquamouscellcarcinoma ,CSCC) (2 2例深圳 ,19例武汉 )和 1例子宫颈腺鳞癌进行单克隆抗体潜伏膜蛋白 1(latentmembraneprotein 1,LMP1)、EB病毒核抗原 2 (ep stein -barrviralnuclearantigen 2 ,EBNA2 )和EB病毒早期反式激活蛋白 (ZEBreplicationactivatorprotein ,ZEBRA)标记。对 36例CSCC组织进行EBERs原位杂交 (ISH)检测。结果 LMP1阳性部位位于癌细胞的胞核中。对照组阳性率 6 3% (1/ 16 ) ,CIN阳性率 33 3% (4/ 18) ,CSCC阳性表达率为 5 4 8% (2 3/ 4 2 ) ,三组间比较差异有显著性 (P =0 0 0 )。EBNA2仅在个别CSCC组织中有表达 ,余均为阴性。在所有研究标本中均未见ZEBRA表达。E BERsISH检测 36例CSCC阳性率为 38 9% (14 / 36 ) ,CSCCⅠ期阳性率为 4 0 0 % (2 / 5 ) ,CSCCⅡ期 (40 9% )与CSCCⅢ期 (2 7 3% )EBERsISH阳性率比较差异无显著性意义 (P =0 74 )。EBERs阳性信号均为散在灶状或单个癌细胞胞核阳性。结论 本文结果表明EB?

米非司酮对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用

目的 :探讨米非司酮对人子宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法 :采用MTT测定 ,观察不同浓度米非司酮 (10 ,5 ,2 .5 μmol/L)对Hela细胞增殖的抑制作用 ;通过ABC免疫组化法 ,检测用药后Hela细胞Ki 6 7抗原表达的变化。结果 :3个浓度的米非司酮对Hela细胞增殖均有抑制作用 ,并呈剂量依赖性 ,其中以 10 μmol/L浓度抑制作用最强 ,抑制率达 5 7.6 9% ;2 .5 μmol/L米非司酮可使Ki 6 7抗原表达明显减少。 结论 :米非司酮体外对PR阳性的人宫颈癌细胞有明显的抑制作用 ,通过降低细胞Ki 6 7抗原的表达而抑制其增殖。

怎样看子宫颈细胞学涂片检查报告单和病理检验单?

在子宫颈疾病的日常诊疗工作中,除肉眼观察及妇科检查外,还需借助病理学诊断。基层医务人员常遇到患者在院外作各种有关检查后,携带病理检验单前来询问病情,以期得到正确的诊断和治疗。为此,基层医务人员应对病理检验结果及疾病的转归和预后做到心中有数,以便能够回答患者所提出的问题,并在治疗上给以正确的指导。所谓病理学诊断方法,是利用病人身上的一部分病变组织,或病人的体液、排泄物,或刮取物等。

双抗可促进子宫颈细胞天然防御反应——DEFA1和DEFB

为了研究抗生素对子宫颈细胞天然防御(防御素)的影响,试验使用1%青霉素和1%链霉素处理Hela细胞,检测DEFA1和DEFB1的表达;使用不同浓度的双抗处理Hela细胞,检测DEFA1和DEFB1的表达;使用无双抗培养液培养Hela细胞,在不同时间检测DEFA1和DEFB1的表达。结果表明:双抗能促进Hela细胞防御素的表达,随着双抗浓度从1%增加到5%,DEFA1和DEFB1表达量显著升高(P<0.05)。在抗生素刺激消失的72 h内,mRNA水平、DEFA1和DEFB1表达量显著下降(P<0.05),蛋白水平DEFA1表达量不变(P>0.05)。说明青霉素和链霉素这两种抗生素能促进Hela细胞产生防御素DEFB1;抗生素除了有直接杀菌作用外,还通过刺激子宫颈细胞产生防御素间接杀菌。

ERK2-siRNA质粒的构建及其诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:合成、克隆、筛选ERK2-siRNA干扰片段,构建含有ERK2-siRNA的骨架质粒。明确其抑制基因ERK2在HeLa细胞中表达及诱导HeLa细胞凋亡。方法:利用RNA干扰方法构建真核表达载体pGenesil1.1-ERK2-siRNA。体外培养人宫颈癌HeLa细胞,利用脂质体法将该质粒转染HeLa细胞。利用western blot法检测该质粒转染后ERK2基因的表达,筛选最佳干扰质粒。通过TUNEL法HeLa细胞凋亡染色及HeLa细胞Caspase-3表达的免疫组化染色检测其诱导HeLa细胞的凋亡。结果:成功构建及筛选出ERK2-siRNA质粒。该质粒在体外能够有效诱导HeLa细胞凋亡。结论:干扰ERK2基因的表达能够诱导HeLa细胞的凋亡,应用该方法可以为宫颈癌的治疗提供新思路。

蛞蝓粗提物对Hela细胞的抑制作用及其活性成分的研究

目的 :研究蛞蝓粗提物对体外培养的人子宫颈癌细胞Hela的抑制作用 ,并进一步探讨蛞蝓抗癌有效成分。方法 :用盐析法分离蛞蝓粗提物 ,用MTT法、倒置显微镜观察蛞蝓粗提物对体外培养的Hela细胞的抑制作用。结果 :MTT法证实蛞蝓粗提物以及盐析所得各组分对Hela有明显的抑制作用。结论 :初步推测蛞蝓抗癌有效成分不是蛋白 ,可能是多糖类。

维甲酸对HeLa细胞间隙连接蛋白基因cx43表达的调节作用

目的 :探讨分化诱导剂维甲酸对肿瘤抑制基因———细胞间隙连接蛋白基因cx43在人子宫颈癌细胞系HeLa中表达的调节作用。方法 :应用核酸原位杂交、流式细胞仪、Westenblot及LuciferYellow划痕标记荧光传输技术 ,研究维甲酸作用对HeLa细胞cx43mRNA及其蛋白表达 ,以及对HeLa细胞生长和通讯功能的调节作用。结果 :HeLa细胞经维甲酸处理后 ,原位杂交显示 ,HeLa细胞cx43mRNA水平上调 ;流式细胞仪分析 ,Cx43蛋白荧光强度增强 ,阳性细胞计数率由 1.9%上升至 2 6 .3 % ;Westerblot检测到分子量约 43KDa的Cx43蛋白表达 ;HeLa细胞生长明显受抑 ;细胞间隙连接通讯功能有所恢复。结论 :维甲酸可通过上调肿瘤抑制基因cx43及其蛋白在HeLa细胞中的表达 ,实现对宫颈癌细胞恶性表型的逆转作用 ,这可能是维甲酸肿瘤抑制作用的重要机制之一。

关键基因的表观遗传化缺失或会改变癌细胞的获能方式

一项刊登在国际杂志JCI Insight上的研究报告中,来自巴塞罗那大学的科学家们通过研究在人类肿瘤中发现了一种表观遗传学损伤,其会改变通路从而使得癌细胞获取能量。研究者Esteller表示,我们通过对头、颈、食道和子宫颈进行研究发现,鳞状上皮肿瘤(squamous tumors)中SVIP基因的活性会缺失,SVIP基因会抑制对细胞平衡非常重要的蛋白质退化,而SVIP基因功能的错误会诱发细胞代谢机体的破坏,这就会让葡萄糖的生理途径以一种可控的方式来获取能量,最终其会被一种“快餐”分子所替代,这种分子能为肿瘤提供廉价的能量。